Method Article

طريقة التكليك الكهربائي لتسجيل الغشاء المحتمل من شريان دماغي متوسط كانولاتيد

DOI:

10.3791/59072

⸱

July 2nd, 2019

 ,  , 
1Department of Pharmacology and Toxicology, University of Mississippi Medical Center

In This Article

Summary

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

الهدف الأساسي من هذه المقالة هو تقديم تفاصيل عنكيفية تسجيل الغشاء المحتملة (V م) من الشريان الدماغي الأوسط باستخدام طريقة الإمتصاسيم microelectrode. الشريان الدماغي الأوسط المُكَنَّد مُكَدَّد للحصول على نغمة مُجَرّة، وجدار الوعاء مُنَطَط باستخدام الأقطاب الدقيقة عالية المقاومة.

Abstract

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

الغشاء المحتمل(V م) من خلايا العضلات الملساء الوعائية يحدد لهجة الوعاء وبالتالي تدفق الدم إلى عضو. التغيرات في التعبير ووظيفة القنوات الأييون والمضخات الكهربائية التي تنظمV M في حالات المرض يمكن أن يغير من المحتمل Vم,لهجة الأوعية الدموية, وتدفق الدم. وهكذا، فهم أساسي للوظائف الفسجية الكهربائية والأساليب اللازمة لتسجيل بدقةV M في حالات صحية ومريضة ضرورية. هذا الأسلوب سوف يسمح تعديلV M باستخدام عوامل دوائية مختلفة لاستعادةV م. على الرغم من أن هناك عدة طرق، كل مع مزاياه وعيوبه، وتوفر هذه المادة بروتوكولات لتسجيلV M من السفن المقاومة cannulated مثل الشريان الدماغي الأوسط باستخدام طريقة impalement microelectrode. يسمح للشرايين الدماغية الوسطى للحصول على لهجة myogenic في غرفة myograph، ويتم اختراق جدار السفينة باستخدام microelectrodes عالية المقاومة. يتم جمع إشارةV m من خلال مقياس كهربائي، رقمنة، وتحليلها. توفر هذه الطريقة قراءة دقيقة لـ Vm لجدار السفينة دون الإضرار بالخلايا ودون تغيير مقاومة الغشاء.

Introduction

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

يشير احتمال الغشاء (Vm)من الخلية إلى الفرق النسبي للتهمة الأيونية عبر غشاء البلازما ونفاذية الغشاء النسبي لهذه الأيونات. يتم إنشاءV m عن طريق التوزيع التفاضلي للأيونات ويتم الحفاظ عليها بواسطة قنوات أيون والمضخات. قنوات ايون مثل K+، Na+، و Cl- المساهمة بشكل كبير في استراحةV م. الأوعية الدموية الخلايا العضلية الملساء (VSMCs) تعبر عن أكثر من أربعة أنواع مختلفة من K+ قنوات1, نوعين من الجهد بوابة Ca2 + قنوات (VGCC)2, أكثر من نوعين من Cl- قنوات3, 4 ,

Access restricted. Please log in or start a trial to view this content.

Protocol

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

وقد تم إيواء الجرذان الذكور في مرفق رعاية الحيوانات في UMMC، الذي وافقت عليه جمعية تقييم واعتماد العناية بالحيوانات المختبرية (AAALAC). وكان للالحيوانات حرية الحصول على الغذاء والماء طوال الدراسة. تم الحفاظ على الحيوانات في بيئة خاضعة للرقابة مع درجة حرارة 24 ± 2 درجة مئوية، ومستويات الرطوبة من 60-80٪ و 12 دورة ضوء / الظلام. وقد وافقت لجنة رعاية الحيوانات واستخدامها في الاتحاد على جميع البروتوكولات.

1. إعداد المعدات

  1. وضع مزدوج قناة التفاضلية الكهربائي مكبر للصوت (انظر جدول المواد) على مقربة منغرفة السفينة وفي الموقع المطلوب.
  2. قم بتوصيل إخراج قناة مكبر الصوت A أو B بمدخل القناة من جهاز التحويل الرقمي مع كاب....

Access restricted. Please log in or start a trial to view this content.

Results

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

يمكن استخدام الطريقة المقدمة بشكل موثوق لتسجيلV m في السفن cannulated. يتم عرض إجراء موجز يصف كيفية عزل MCA من الدماغ في الشكل 1A. بعد فصل الدماغ عن الجمجمة، تم تشريح MCA ووضعها في طبق بيتري الذي يحتوي على PSS منخفضة الكالسيوم. كما تم تشريح جزء من النسيج الضام الذي تم إرفاقه جنبا إلى جنب مع MCA باستخدام مقص الربيع وملقط لمنع الأضرار التي لحقت MCA أثناء العزلة. بعناية، تمت إزالة النسيج الضام أيضا، وMCA تشريح كان على استعداد لنقل إلى myograph. تم ترك.......

Access restricted. Please log in or start a trial to view this content.

Discussion

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

توفر هذه المقالة الخطوات اللازمة حول كيفية استخدام طريقة حادة للتخميد ميكروالقطب لتسجيلV m من إعداد وعاء cannulated. ويستخدم هذا الأسلوب على نطاق واسع، ويقدم عالية الجودة، وتسجيلات متسقة منV m التي تجيب على مجموعة واسعة من الأسئلة التجريبية.

يتم وصف بعض الاعتبارات الهامة و خطوات استكشاف الأخطاء وإصلاحها هنا لضمان نجاح الأسلوب. نوعية الميكروتكترود (حدته والمقاومة) وعملية الخلوية التي تخترق تأثير الاستقرار والدقة منV م. إذا كانت الإشارة تنجرف باستمرار أو أعلى أو .......

Access restricted. Please log in or start a trial to view this content.

Disclosures

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

وليس لدى أصحاب البلاغ ما يكشفون عنه.

Acknowledgements

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

وقد تم دعم هذا العمل جزئيا من خلال المنح المقدمة من برنامج أبحاث الدعم الداخلي (IRSP) من UMMC، AHA منحة تطوير العلماء (13SDG1400006) التي منحت لمليكارجونا ر. بابيدي.

....

Access restricted. Please log in or start a trial to view this content.

Materials

List of materials used in this article
NameCompanyCatalog NumberComments
<أدوات تشريح قوية> < / قوي>
مبخر متحمدباركلاندV3000PK
مجهر تشريحشركة نيكون إنسترومنتس ، نيويورككسوف Ti-S
كلاين مقصلة من النوع 7575جهاز هارفارد ، ماساتشوستس73-198
Littauer Bone Cutterأدوات العلومالدقيقة16152-15
Moria MC40 ملقط فائق الدقةأدوات العلوم الدقيقة11370-40
مقص جراحي أدواتالعلوم الدقيقةالحادة 14008-14
خياطةجهاز هارفارد72-3287
Vannas Spring مقصالعلوم الدقيقة15018-10
أدوات الفيزيولوجيا الكهربية < قوي>
كاميرا جهاز مقترنة بالشحنQimaging, , BCRetiga 2000R
مضخم كهربائي تفاضليWPIFD223A
محول ضغط في الخطهارفارد الأجهزة,MA1 72-4496
Micromanipulatorمختبرات ثورPCS-5400
الأقطاب الكهربائية الدقيقةوارنر إنسترومنتز ذ.م.م, CTG200-6 ،
Micro Fil (حقنة من الألياف الدقيقة)WPIMF28G67-5
حامل قطب كهربائي دقيقWPIMEH1SF
أجهزة أنظمة المعيشة Myograph، VTCH-1-SH
PullerSutter Instrument ، San Rafael ، CAP-97
طاولة خالية من الاهتزازTMC3435-14
< قوي> البرمجيات< / قوي>
Clampex 10الأجهزة
p المشبك 10الأجهزة
برامج التصويرنيكون ، نيويوركNIS-elements
Chemicals< / strong>
NaClSigmaS7653
KClسيجماP4504
MgSO4سيجماM7506
CaCl2 < / sub>SigmaC3881
HEPESSigmaH7006
GlucoseSigmaG7021
NaH2PO4SigmaS0751
NaHCO3سيجماS5761
علمي الحادة أدوات الجزيئيةالجزيئية

References

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,
  1. Nelson, M. T., Quayle, J. M. Physiological roles and properties of potassium channels in arterial smooth muscle. American Journal of Physiology. 268, C799-C822 (1995).
  2. Hughes, A. D. Calcium channels in vascular smooth muscle cells. Journal of Va....

Access restricted. Please log in or start a trial to view this content.

Reprints and Permissions

Request permission to reuse the text or figures of this JoVE article

Request Permission

Tags

Membrane PotentialMicroelectrode ImpalementMiddle Cerebral ArteryVascular Smooth MuscleElectrophysiology RecordingMyograph ChamberBorosilicate MicroelectrodesPotassium Chloride FillingElectrometer AmplifierCannulated Vessel Preparation

Related Articles