هنا نحن تقرير الأساليب الشائعة لتحليل الدالة متجولة مورين البلاعم السنخية وإزالة البكتيريا من الرئة. دراسة هذه الأساليب البلعمه في المختبر من fluorescein isothiocyanate الخرز والمجراه في البلعمه من "بروتين فلوري أخضر" الزائفة الزّنجاريّة . كما يصف لنا طريقة لمسح P. الزّنجاريّة في الفئران.
يتطلب اشتراك JoVE لعرض هذا المحتوى. تسجيل الدخول أو ابدأ نسخة تجريبية مجانية
مقالة منهجية
البلعمه البلاعم السنخية وإزالة البكتيريا في الفئران
في هذه المقالة
ملخص
الملخص
البلاعم السنخية (هيئة علماء المسلمين) حراسة الفضاء التهاب في الرئة. البلعمه بمقياس الدعم الكلي تلعب دوراً حاسما في الدفاع ضد غزو العوامل الممرضة، وإزالة الخلايا الميتة أو الجسيمات الأجنبية، وفي القرار الردود الملتهبة والأنسجة يعيد البناء، العمليات التي هي توسط المستقبلات السطحية المختلفة من هيئة علماء المسلمين. هنا، نحن التقرير أساليب لتحليل الدالة متجولة لمقياس الدعم الكلي باستخدام استراتيجيات تجريبية وفحوصات في المختبر والمجراه في التفريق بين نمط الاعتراف مستقبلات-وتكملة مستقبلات-، ونادي غاما بوساطة مستقبلات البلعمه. وأخيراً، نحن نناقش أسلوب لإنشاء ووصف نموذج P. الزّنجاريّة الالتهاب رئوي في الفئران لإزالة البكتيريا الحية في تقييم. هذه الاختبارات تمثل الأساليب الأكثر شيوعاً لتقييم وظائف صباحا ويمكن استخدامها أيضا لدراسة وظيفة بلعم وإزالة البكتيريا في الأجهزة الأخرى.
المقدمة
هيئة علماء المسلمين هي البالعات المقيم الرئيسي في الحويصلات الهوائية في مرحلة استراحة وواحدة من اللاعبين الرئيسيين من الاستجابات المناعية الفطرية من خلال الاعتراف واستيعاب استنشاق الجراثيم والجسيمات الأجنبية1،2. وذكر أن هيئة علماء المسلمين تعتبر أساسية للتخليص السريع من العديد من مسببات الأمراض الرئوية مثل P. الزّنجاريّة و الالتهاب الرئوي الكلبسيله3،4، حيث غالباً ما يؤدي نقص في البلعمه صباحا في الجهاز التنفسي التهابات، مثل الالتهاب الرئوي الحاد، مما يتسبب في ارتفاع معدلات الوفيات والاعتلال.
هيئة علماء المسل....
الوصول مقيد. يرجى تسجيل الدخول أو بدء فترة تجريبية لعرض هذا المحتوى.
البروتوكول
هذا البروتوكول يتبع المبادئ التوجيهية "رعاية الحيوان المؤسسية" واستخدام اللجنة (إياكوك) من مدرسة الطب في فيرجينيا الشرقية.
1. فلوري الخرز البلعمه
- Euthanize الماوس (C57BL/6J، 6 أسابيع من العمر، أنثى) CO2 خنقاً وفقا لبروتوكولات IACUC للقتل الرحيم الأخلاقية للحيوانات ب.
- وضع الفأرة أعلى البطن على لوحة تشريح مغطاة بالمناشف الورقية. دبوس الكفوف باستمرار مع أطرافه في سبريديجلي وربط سلسلة تحت الأسنان الأمامية لسحب رأسه إلى الوراء حيث أن القصبة الهوائية هي في وضع مستقيم ومستوى.
- ويت الحلق والصدر والبطن مع الإيثانول 70% لتطهير ومنع الفراء من التمسك الأدوات الماوس.
- استخدام الملقط العادية، سحب ما يصل إل....
الوصول مقيد. يرجى تسجيل الدخول أو بدء فترة تجريبية لعرض هذا المحتوى.
النتائج
أجرينا أول تجربة لتحليل البلعمه بالماوس مقياس الدعم الكلي الأساسي. طوال جميع التحليلات، قارنا AMs المعزولة من الفئران WT و TRIM72كو . كما هو مبين في الشكل 1ألف، كشف الفحص المجهري الأسفار أن البلعمه من حبات الزجاج فيتك بالماوس مقياس الدعم الكلي الأساسي يحدث بعد ح 1 من الحضانة. الشكل 1 ب يبين تحليل البلعمه بالتدفق الخلوي. التحديد الكمي البلعمه تقاس بالفحص المجهري ويمثل التدفق الخلوي في <.......
الوصول مقيد. يرجى تسجيل الدخول أو بدء فترة تجريبية لعرض هذا المحتوى.
المناقشة
بينما تؤدي وظيفة تبادل غازات، يواجه الرئة إصرار الجسيمات الأجنبية ومسببات الأمراض والمواد المسببة للحساسية. مقياس الدعم الكلي توفر الخط الأول للدفاع بحكم وظيفتها الرئيسية، إلا وهي البلعمه. هيئة علماء المسلمين أيضا بتنسيق مع سائر الخلايا المناعية في تدمير مسببات الأمراض، وفي القرار من التهاب. هنا، يمكننا وصف أساليب تقييم البلعمه بمقياس الدعم الكلي المعزولة من الرئة الماوس على وجه التحديد. البروتوكول قدم في هذه المخطوطة يفسر دراسة مفصلة من البلعمه في الحية سواء في المختبر، التي يمكن استخدامها أيضا لدراسة وظيفة بلعم وإزالة .......
الوصول مقيد. يرجى تسجيل الدخول أو بدء فترة تجريبية لعرض هذا المحتوى.
الإفصاحات
الكتاب ليس لها علاقة بالكشف عن.
شكر وتقدير
ويدعم هذا العمل منحة R01HL116826 إلى X. Zhao.
....الوصول مقيد. يرجى تسجيل الدخول أو بدء فترة تجريبية لعرض هذا المحتوى.
المواد
| الاسم | الشركة | رقم فهرسي | التعليقات |
|---|---|---|---|
| 18-G إبرة | نيبرو الطبية | CI + 1832-2C | البيولوجيا الجزيئية الصف |
| 2،7-ديامينوفلورين (DAF) | سيجما ألدريتش | D17106 | علم الأحياء الجزيئي |
| الصف 70٪ الإيثانول | ديكون لابس إنك. | 18C27B | الصف التحليلي |
| 96 بئر | لوحة Corning | 3603 | بيولوجيا الخلية الصف |
| ACK تحلل عازلة | Life Technologies | A10492 | درجة البيولوجيا الجزيئية |
| Alexa fluor-488 Zymosan-A-bioparticle | Thermofisher Scientific | Z23373 | البيولوجيا الجزيئية الصف |
| C5 مصل نقص | سيجما ألدريتش | C1163 | كاشف |
| حيوي جهاز طرد مركزي | Labnet International | C0160-R | |
| Cytospin 4 جهاز طرد مركزي خلوي | Thermofisher A78300101 العلمي | العدد 11 | |
| DMEM Cell Culture Media | Gibco | 11995-065 | درجة بيولوجيا الخلية |
| FBS | Atlanta Biologicals | S11550 | تدفق درجة بيولوجيا الخلية |
| مقياس الخلوي | BD Biosciences | FACSCalibur | |
| Flow Jo Software | FlowJo، LLC | ||
| ملقط | دومون | 0508-SS / 45-PS-1 | مناسب لتشريح المختبر |
| حبات اللاتكس ذات الكربوكسيل FITC | Sigma-Aldrich | L4530 | درجة بيولوجيا الخلية |
| GFP-P. aeruginosa< / em> | ATCC | 101045GFP | مناسب ل فحوصات عدوى الخلية |
| القاع الزجاجي | MatTek Corp. | P35G-0.170-14-C | حقنة بيولوجيا الخلية |
| عالية الضغط | بنسلفانيا القرن | FMJ-250 | مناسبة للاستخدام في المختبر |
| الخالط | أومني إنترناشيونال | TH-01 | |
| بيروكسيد الهيدروجين | سيجما ألدريتش | H1009 | |
| مجهر مضان مقلوب | التحليلية أوليمبوس | IX73 | |
| كيتامين هيدروكلوريد | Hospira | CA-2904 | الصيدلانية |
| Shandon Kwik-Diff Stains | Thermofisher Scientific | 9990700 | Cell Biology الصف |
| LB Agar | Fisher Scientific | BP1425 | علم الأحياء الجزيئي درجة |
| LB مرق | فيشر Scientific | BP1427 | البيولوجيا الجزيئية الصف |
| MicroSspray Aerosolizer | Penn-Century | IA-1C | مناسبة للاستخدام في المختبر |
| Paraformaldehyde | Sigma-Aldrich | P6148 | كاشف |
| الصف PBS | Gibco | 20012-027 | أرنب من فئة بيولوجيا الخلية |
| مضاد ل SRBC-IgG & nbsp ؛ | MP Biomedicals | 55806 | مناسبة للمقايسات |
| المناعية للأرانب المضادة ل SRBC-IgM & nbsp ؛ | مختبرات سيدارلاين | CL9000-M | مناسبة لمقص المقايسات المناعية |
| Miltex | 5-2 | مناسب لتشريح المختبر | |
| منظار الحنجرة الحيواني | الصغير Penn-Century | LS-2 | مناسب للاستخدام في المختبر |
| كبريتات دوديسيل الصوديوم (SDS) | BioRad | 1610301 | من الدرجة التحليلية |
| (Med) | أدوات العلوم الدقيقة | 15012-12 | مناسب لتشريح المختبر |
| مقص زنبركي (صغير) | أدوات العلوم الدقيقة | 91500-09 | مناسبة لتشريح |
| المختبر خلايا الدم الحمراء للأغنام (SRBCs) ؛ | MP Biomedicals | 55876 | مغسولة ، محفوظة SRBCs |
| اليوريا | سيجما-ألدريتش | U5378 | درجة البيولوجيا الجزيئية |
| Xylazine ؛ | أكورن لصحة | 59399-110-20 | الصيدلانية |
المراجع
- Hussell, T., Bell, T. J. Alveolar macrophages: plasticity in a tissue-specific context. Nature Reviews Immunology. 14, 81-93 (2014).
- Belchamber, K. B. R., Donnelly, L. E. Macrophage Dysfunction in Respiratory Disease. Results and Problems in Cell Different....
الوصول مقيد. يرجى تسجيل الدخول أو بدء فترة تجريبية لعرض هذا المحتوى.
إعادة الطباعة والأذونات
