يتطلب اشتراك JoVE لعرض هذا المحتوى. تسجيل الدخول أو ابدأ نسخة تجريبية مجانية

مقالة منهجية

عزل ماليجنانت وعدم ماليجنانت ب الخلايا من lck:eGFP الزرد

6.8K مشاهدات

⸱

DOI:

10.3791/59191

⸱

فبراير 22, 2019

 ,  ,  ,  , 
1Section of Pediatric Hematology-Oncology, Department of Pediatrics, University of Oklahoma Health Sciences Center

* These authors contributed equally

في هذه المقالة

ملخص

الزرد المعدلة وراثيا lck:eGFP التعبير عن بروتينات فلورية خضراء عالية في الخلايا اللمفية تي، وقد استخدمت لدراسة التنمية الخلية T، وسرطان الدم الليمفاوي الحاد. يمكن استخدام هذا الخط للدراسة ب الخلايا، التي تعبر عن لك في المستويات الدنيا. ويصف هذا البروتوكول تنقية الخلايا ب الخبيثة وغير الخبيثة من الزرد lck:eGFP .

الملخص

الزرد (دانيو rerio) نموذج قوي لدراسة التنمية اللمفاويات. مثل الثدييات، تمتلك ريريو دال- المناعي التكيفي يشمل الخلايا الليمفاوية B و T. دراسات ليمفوبويسيس الزرد صعبة لأن الأجسام المضادة للاعتراف بعلامات سطح خلية ريريو دال- لا تتوافر عموما، تعقيد عزل وتوصيف للسكان اللمفاويات مختلفة، بما في ذلك النسب ب الخلايا. وكثيراً ما تستخدم خطوط المحورة وراثيا مع التعبير فلوروفوري الخاصة بالنسب للتحايل على هذا التحدي. السطر المعدلة وراثيا lck:eGFP قد استخدمت لدراسة التنمية الخلية تي ريريو دال ، وقد استخدمت أيضا لنموذج التنمية الخلية T وسرطان الدم الليمفاوي الحاد (T-الكل). على الرغم من أن الأسماك lck:eGFP قد استخدمت على نطاق واسع لتحليل T-النسب، فلا قد استخدمت لدراسة الخلايا باء. في الآونة الأخيرة، اكتشفنا أن العديد من الزرد ب الخلايا أيضا التعبير عن لك، أن كان ذلك في المستويات الدنيا. ونتيجة لذلك، وبالمثل الخلايا lck:eGFP ب التعبير عن المستويات المنخفضة للتجارة والنقل. وبناء على هذا الاستنتاج، قمنا بتطوير بروتوكول لتنقية الخلايا ب-النسب من الزرد lck:eGFP ، الذي يقدم لنا هنا. لدينا طريقة توضح كيفية الاستفادة خلية تنشيط الفلورسنت فارز (نظام مراقبة الأصول الميدانية) لتنقية الخلايا ب من أسماك lck:eGFP أو خطوط ذات الصلة، مثل rag2:hMYCمن المعدلة وراثيا مزدوجة؛ سمكة lck:eGFP . في هذه الأسطر، ب الخلايا، خلايا ب خاصة غير ناضجة، التعبير عن التجارة والنقل على مستويات منخفضة ولكن يمكن كشفها، السماح لهم بأن تميز من خلايا تي، التي تعبر عن بروتينات فلورية خضراء عالية. يمكن أن تكون الخلايا ب المعزولة من نخاع الغدة الصعترية، والطحال، والدم أو الأنسجة الأخرى. هذا البروتوكول يوفر طريقة جديدة لتنقية الخلايا ب ريريو دال ، تمكين الدراسات ركزت على مواضيع مثل التنمية الخلية ب وب اللمفاويات الأورام الخبيثة.

المقدمة

وتقدم الزرد سمات قوية، مثل مانيبولابيليتي الجينية والخصوبة العالية والشفافية الضوئية والتنمية السريعة التي تسهل التنمية الفقاريات دراسة استخدام النهج الوراثية. هذه المزايا، جنبا إلى جنب مع الميزات المشتركة من هيماتوبويسيس تيليوست والثدييات، جعل ريريو دال- مثالية للتحليلات المجراة في الدالة ليمفوبويسيس واللمفاويات، من مظهرها أقرب في اليرقات طوال مرحلة البلوغ. يعتمد وضع الدم في الزرد مصانة جيدا العمليات الجينية المشتركة مع الثدييات، وهذه تشمل المناعي التكيفي. بالإضافة إلى ذلك، يحافظ الآليات الجزيئية التي تحكم التنمية اللمفاوية هي ملحوظ بين الزرد والثدييات1.

على مدى العقدين الماضيين، المعدلة وراثيا ريريو دال- خطوط الأنساب الدم محددة تسمية هذا وتم إنشاء خطوط المسخ ناقص في هذه الأنساب2،3،،من45. واحدة من هذه، السطر المعدلة وراثيا lck:eGFP ، يستخدم الزرد اللمفاويات بروتين تيروزين كيناز (لك) المروج لمحرك بروتينات فلورية خضراء التعبير6. ويسمح هذا الجين، التي يعبر عنها درجة عالية من السلائف تي-النسب والخلايا الليمفاوية T الناضجة، المجراة في تتبع التنمية الغدة الصعترية T الخلية والسابقين فيفو تنقية خلايا T-النسب بنظام مراقبة الأصول الميدانية7. سابقا، استخدمنا هذا الخط في شاشة ENU الطفرات وراثية إلى الأمام لتحديد طفرات germline المعرضة إلى T-جميع ودراسة الأحداث الوراثية المكتسبة سوماتيكالي مرتبطة بخلية T أونكوجينيسيس8،9.

في الآونة الأخيرة، تمديد مختبرنا فائدة الزرد lck:eGFP . في المعدلة وراثيا مزدوج rag2:hMYC (حركة البشرية)، ريريو دال lck:eGFP المعروفة بتطوير جميع تي 10، اكتشفنا أن النسب ب كل ما يحدث أيضا11. على عكس جميع تي في هذا النموذج الذي فلوريس الزاهية بسبب ارتفاع بروتينات فلورية خضراء التعبير، ب-جميع الخافتة فلوري بسبب انخفاض مستويات التجارة والنقل، مما يتيح الأسماك مع الجميع ب ينبغي تمييز صارخ من تلك مع تي للجميع مجهر فلوري. هذا التعبير بروتينات فلورية خضراء التفاضلية كما يسمح الفصل بين التجارة والنقل، لو ب-جميع الخلايا من بروتينات فلورية خضراءمرحبا تي-جميع الخلايا باستخدام نظام مراقبة الأصول الميدانية11. وعلاوة على ذلك، التعبير منخفضة لك ليست فريدة من نوعها الزرد ب للجميع، الإنسان ب-جميع أيضا التعبير عن تدني مستويات لك11،12. وبالمثل، أعرب الخلايا ب-النسب الطبيعية ريريو دال، والفئران والبشر أيضا مستويات منخفضة من لك/لك/لك، مع خلايا ب غير ناضجة بعد11،التعبير أعلى13. على أساس كل خلية، أعرب الخلايا ب-النسب في خطوط الزرد أو مشتقات لكيجفب 1-10 ٪ قدر بروتينات فلورية خضراء كالخلايا اللمفية تي. هذه التجارة والنقللو خلايا مميزة صراحة مرناس بالخليه مثل pax5، cd79b، بلنك، btk، إيغم، إيغز، وغيرهم، ويمكن تنقيته من نخاع الغدة الصعترية, الطحال أو الطرفية 11من الدم. ولذلك، كلا ب-و T-النسب يمكن أن تكون الخلايا المعزولة من الزرد لكيجفب ، وفي حالة rag2hMYC، لكيجفب الحيوانات، والخلايا ب-T جميع وكذلك11.

هنا، نقدم لدينا بروتوكول لكفاءة تنقية نظام مراقبة الأصول الميدانية غير-ب الخلايا الخبيثة من الزرد lck:eGFP ، والخلايا ب غير خبيث أو خبيث من rag2hMYC؛ lck:eGFP الأسماك، باستخدام أنسجة مصدر مختلفة. وبالمثل يمكن قياس هذه الخلايا بالتدفق الخلوي دون عزل نظام مراقبة الأصول الميدانية، إذا رغبت في ذلك. اكتشاف انخفاض لك التعبير-ونتيجة لذلك، منخفضة تعبير بروتينات فلورية خضراء-ب الخلايا يفتح أبواباً جديدة من الاحتمالات التجريبية لكيجفب الزرد، مثل الخلية في فيفو ب الدراسات الإنمائية. وهكذا، قد هذا الخط المحورة وراثيا، ذكرت أول مرة في عام 2004، حياة جديدة ونحن نسعى إلى الاستفادة منها استخلاص أفكار جديدة بشأن الحصانة التكيفية الزرد.

الوصول مقيد. يرجى تسجيل الدخول أو بدء فترة تجريبية لعرض هذا المحتوى.

البروتوكول

بموافقة جميع الإجراءات التي تنطوي على الزرد "رعاية الحيوان المؤسسية" واستخدام اللجنة (إياكوك) في مركز العلوم الصحية في جامعة أوكلاهوما.

1-عزل ب عدم الخبيثة والخلايا الليمفاوية T من المعدلة وراثيا lck:eGFP الأسماك

  1. تخدير الأسماك استخدام تريكيني 0.02% (MS-222) في الأسماك نظام المياه.
  2. فحص الأسماك 2-6 شهرا الفلورسنت تيمي، التي تقع في الجانب دورسوميديال في تجويف التطور الزرد وغيرها اريوكروماس14. استخدام مجهر ابيفلوريسسينسي (470/40 الطول الموجي الإثارة وتصفية الانبعاثات 525/50) للكشف عن التجارة والنقل.
  3. إعداد مقدما 50 مل من تصفية تعقيم 1 × روزويل بارك التذكاري المعهد المتوسط (ربمي) التي تحتوي على 1% الجنين البقري المصل و 1% البنسلين-ستربتوميسين (الفرز وسائل الإعلام). ويمكن تخزين وسائط غير مستخدمة الفرز عند 4 درجة مئوية لمدة تصل إلى شهرين.
  4. Euthanize السمك بوضعه في كوب يحتوي على 0.2% تريكيني لمدة حوالي 5 دقائق، تليها الغمر حمام الثلج. تأكيد وفاة بوقف حركة أوبيركولار (جيل).
  5. ضع السمك يوثانيزيد في طبق بتري وتشريح الأجهزة اللمفاوية للفائدة، باستخدام مجهر فلوري تشريح تيمي بروتينات فلورية خضراء+ 14، وإعدادات الحقل مشرق الفحص المجهري تشريح النخاع والطحال الكلي15. وتحققت النتائج المعروضة هنا باستخدام 3 أشهر الأسماك. نسب اللمفاويات والأرقام المطلقة تختلف حسب العمر والتركيب الوراثي (انظر مناقشة لمزيد من التفاصيل).
  6. ضع كل جهاز تشريح في أنبوب 1.5 مل تحتوي على 500 ميليلتر من البرد الفرز وسائط الإعلام.
  7. مجانسة الأنسجة على استخدام الخالطون الصغرى-أنبوب مدقة الجليد.
  8. يمر النسيج المتجانس عامل تصفية شبكة 35 ميكرون لتوليد تعليق خلية مفردة. تبقى الخلايا على الجليد حتى التحليل.

2-عزل الخلايا الليمفاوية الخبيثة من المعدلة وراثيا مزدوج rag2:hMYC؛ lck:eGFP الزرد

  1. ابتداء من 2-4 أشهر، مجهريا الشاشة rag2:hMYC؛ lck:eGFP الأسماك لأنماط التجارة والنقل غير طبيعي.
    ملاحظة:     ب الخلايا هي التجارة والنقل، لو في الخلفية lck:eGFP ، حيث ب للجميع يتطلب ممارسة الاعتراف؛ T-جميع من الواضح، نظراً لأن خلايا تي التجارة والنقلمرحبا. ونتيجة لذلك، rag2:hMYC، lck:eGFP الخط المزدوج وراثيا قد تعمل اثنين: الزاهية فلوري تي-جميع، التي عادة ما تنشأ من الغدة الصعترية وتمتد إلى الجسم، والخافتة فلوري ب-جميع.
    1. استخدام مجهر فلوري، الشاشة الأسماك باستخدام إعدادات "التعرض المنخفضة" (200 مرض التصلب العصبي المتعدد، كسب 2.4 x) لتحديد مشرق تي للجميع (الشكل 1A) و "عالية التعرض" (1.5 s، كسب 3.4 x) لتحديد خافت للجميع ب (الشكل 1A). وقد يتحكم بالوزن والسمك ليوكيميك قبل بروتينات فلورية خضراء المترجمة فقط في الغدة الصعترية (الشكل 1B).
  2. تخدير وفحص الأسماك كما هو موضح في الخطوات 1، 1، 1-2.
  3. تصنيف الأسماك استناداً إلى مدى fluorescence التجارة والنقل، باستخدام نظام ثلاث من فئة بسيطة:
    ملاحظة: مستوى 1: Fluorescence يظهر ورم الغدة الصعترية مع انتشار المحلية محدودة فقط.
    مستوى 2: يظهر الأسفار خارج الغدة الصعترية، التي تشمل < 50% الجسم.
    مستوى 3: Fluorescence تتجاوز 50% الجسم.
  4. فصل الأسماك مع كل من تلك دون السرطان. رصد الأسماك ليوكيميك مسبقاً (أي، الأسماك دون أورام بروتينات فلورية خضراء+ ) مرة واحدة شهريا لوضع كل جديد. ~ 9 أشهر، كل rag2:hMYC، وضع الأسماك lck:eGFP تي للجميع، كل ب، أو كليهما.
  5. T أو ب كل خلية العزلة، حدد مستوى 3 الأسماك (التي تشمل جميع > 50% الجسم)، مما يسفر عن أكثر من 2 × 106 كافة الخلايا، وعادة الكثير.
  6. Euthanize الأسماك كما في الخطوة 1، 4.
    ملاحظة: هناك طريقتان للحصول على كافة الخلايا: الجسم كله التجانس و تقنية غسيل البريتوني16. تختلف الطرق في العدد المطلق للخلايا التي يتم جمعها للفرز، وهكذا، الكميات من نظام مراقبة الأصول الميدانية الوقت المطلوب والتكاليف (انظر مناقشة لمزيد من التفاصيل).
  7. أما الأسلوب، أولاً ضع الأسماك يوثانيزيد في طبق بتري واستخدام شفرة حلاقة، إزالة الرأس بما في ذلك منطقة الغدة الصعترية. وهذا يمكن معالجته بشكل منفصل، إذا رغبت، أو تستخدم لتلطيخ نسيجية.
  8. طريقة الغسيل البريتوني
    1. استخدام ماصة P1000، يغسل التجويف الصفاقى الأسماك مع 500 ميليلتر من البرد الفرز وسائط الإعلام، وجمع الخلايا ووسائط الإعلام في أنبوب 5 مل.
    2. استخدام تلميح ماصة طازجة، حقن ميليلتر إضافية 200-300 من وسائل الإعلام الفرز الباردة في تجويف الجسم. ثم قم باستخدام تلميح الماصة، تطبيق ضغط لطيف على الجسم الأسماك لقذف الخلايا خارج تجويف الجسم. جمع هذه الوسائط، وإضافة إلى الأنبوب 5 مل.
    3. كرر الخطوة 2.8.2 2 – 3 مرات. تبقى الخلايا التي تم جمعها في فرز وسائل الإعلام على الجليد.
    4. تصفية تعليق خلية على الرغم من 35 ميكرون تصفية قبل التدفق الخلوي/نظام مراقبة الأصول الميدانية وإبقاء الخلايا على الجليد حتى التحليل.
  9. تجانس الجسم كله
    1. بعد إزالة رأس السمك، ضع الجسم في أنبوب 1.5 مل تحتوي على 200 ميليلتر لفرز وسائل الإعلام.
    2. مجانسة نص باستخدام الخالطون الصغرى-أنبوب مدقة.
    3. إضافة ميليلتر 300 إضافية من البرد الفرز وسائط الإعلام. تصفية تعليق الخلية على الرغم من أن عامل تصفية شبكة 35 ميكرون. إضافة وسائط الفرز حسب الحاجة لغسل كافة الخلايا عن طريق التصفية، حتى تبقى فقط الأنسجة الحطام على التصفية. تبقى الخلايا على الجليد حتى التحليل.

3-سيتوميتريك تحليل الخلايا الليمفاوية ب العادي أو خبيثة

  1. تعيين تحليل تدفق سيتوميتريك و/أو معلمات نظام مراقبة الأصول الميدانية وفقا للدليل الخاص بالشركة المصنعة.
  2. الحصول على العدد المطلوب من الأحداث في البداية وصف العينة. تحليل 1 × 104 إلى 5 × 104 الأحداث قبل الفرز لتحديد منافذ محددة لخطوات الفرز اللاحقة.
    1. تحديد بوابات: تعريف بوابات الخلية اللمفاويات والسلف باستخدام مبعثر إلى الأمام (FSC) ومعلمات مبعثر (SSC) الجانب، باستثناء الحطام الخلوية (الشكل 2 أ-ج)17. منتدى التعاون الأمني، والتعاون بين بلدان الجنوب تتوافق مع حجم الخلية/القطر والتفاصيل، على التوالي.
      ملاحظة: –التجارة والنقل والتجارة والنقل، لووبروتينات فلورية خضراءمرحبا خلايا تختلف 10-إلى-100-إضعاف من حيث قوتها fluorescence بروتينات فلورية خضراء، مما يجعل الفصل بين هؤلاء السكان مباشرة (الأرقام 2-5). ويمكن تقييم التمييز الميت يعيش في هذه المرحلة باستخدام اليود propidium (PI) أو 7-أمينواكتينوميسين د (7-اعتبر) صلاحية تلطيخ. عادة ما تثبت التجارب السابقة مع بي > صلاحية 95% من التجارة والنقل+ الخلايا بعد نظام مراقبة الأصول الميدانية.
    2. استبعاد دوبليتس الخلية، وفقا لمعلمات نظام مراقبة الأصول الميدانية الجهاز قيد الاستخدام.
    3. ضمن أبواب اللمفاوية و/أو السلائف، تحديد العدد والنسبة المئوية للخلايا بروتينات فلورية خضراء+ .
  3. استخدام فيكوريثرين (PE) وكثافة التجارة والنقل، وتعريف بوابة للتجارة والنقل– مقابل بروتينات فلورية خضراءلو مقابل بروتينات فلورية خضراءمرحبا الخلايا.
    ملاحظة: يحمل الخلايا ب الفلورية بروتينات فلورية خضراء قاتمة وإظهار خلايا تي بروتينات فلورية خضراء مشرقة في خطوط lck:eGFP . تحتوي العديد من الأجهزة اللمفاوية أو عينات الورم كل السكان التجارة والنقل+ . ب-النسب هي خلايا/ب-جميع بروتينات فلورية خضراءلو تي-النسب خلايا/تي-جميع وبروتينات فلورية خضراءمرحبا. تعريف البوابات للتمييز بين التجارة والنقل–والتجارة والنقل، لو، والتجارة والنقلمرحبا الخلايا، وجمع هؤلاء السكان بشكل منفصل (الشكل 2 أ-جو الشكل 3 ألف-ج، الشكل 4A و الشكل 5A).
  4. فرز كل سكان الخلية إلى أنابيب البولي بروبلين مختلفة 15 مل يحتوي على 2 مل من فرز وسائل الإعلام أو مباشرة إلى أنابيب مختلفة 1.5 مل يحتوي على مخزن مؤقت مناسب لإجراء تحاليل إضافية (مثلاً، الجيش الملكي النيبالي، والحمض النووي، أو استخراج البروتين، في زرع الو، إلخ.).
  5. تبقى الخلايا المنقي على الجليد قبل مزيد من التحليلات.

الوصول مقيد. يرجى تسجيل الدخول أو بدء فترة تجريبية لعرض هذا المحتوى.

النتائج

قمنا باستخدام التدفق الخلوي لتحليل ونظام مراقبة الأصول الميدانية لعزل بروتينات فلورية خضراءلو وبروتينات فلورية خضراءمرحبا خلايا من الغدة الصعترية ونخاع الكلي والطحال من الزرد lck:eGFP المعدلة وراثيا. وكشف تحليل الأسماك عمره 3 أشهر الغدة الصعترية الوارد معظمها بروتينات فلورية خضراء+ لمفاوية. بروتينات فلورية خضراء+ الخلايا اقتصرت إلى حد كبير على بوابة اللمفاوية الموصوفة سابقا Traver et al.17. ويمكن ملاحظ...

الوصول مقيد. يرجى تسجيل الدخول أو بدء فترة تجريبية لعرض هذا المحتوى.

المناقشة

نحن البلدان المتقدمة النمو ويوفر بروتوكول لعزل الخلايا ب من lck:eGFP المعدلة وراثيا الزرد، إضافة إلى نماذج أخرى ريريو دال- ب-النسب التسميات3،4هذا. بعض الشيء المثير للدهشة، ذهبت دون أن يلاحظها أحد تحديد بروتينات فلورية خضراءلو ب الخلايا في هذا الخط منذ الوصف الخاص به في عام 2004. يعتبر عموما، لك أن تي خلية على حدة6، ولكن الدراسات الأخيرة وجدت التعبير غير متوقعة لك قبل القاتل الطبيعي والنقوي الخ...

الوصول مقيد. يرجى تسجيل الدخول أو بدء فترة تجريبية لعرض هذا المحتوى.

الإفصاحات

الكتاب يعلن لا تضارب في المصالح.

شكر وتقدير

نود أن نشكر ميغان مالون-بيريز للرعاية الزرد، ولب أووهسك التدفق الخلوي. وأيد هذا العمل منح مقدمة من شركة هيونداي الأمل على عجلات، مركز أوكلاهوما للنهوض بالعلم والتكنولوجيا (HRP-067)، جائزة مشروع تجريبي "إينبري" المعاهد الوطنية للصحة/نيجمس (P20 GM103447). جكف يحمل إيل & ثلما جايلورد هبت الرئاسة في طب أمراض الدم-علم الأورام مؤسسة مستشفى للأطفال.

الوصول مقيد. يرجى تسجيل الدخول أو بدء فترة تجريبية لعرض هذا المحتوى.

المواد

قائمة المواد المستخدمة في هذه المقالة
الاسمالشركةرقم فهرسيالتعليقات
35 & الميكرو; m meshتكنولوجيا مرشح سيفار7050-1220-000-13
5 مل أنبوب دائري من البوليسترين مع غطاء مصفاة خليةFalcon Corning العلامة التجارية352235
50 مل أنبوب مخروطيVWR الدولي525-0448
AZ APO 100 مجهر فلورينيكون
CytoflexBeckman Coulter
DS-Qi1MC كامارانيكون
إيثيل 3-أمينوبنزوات ميثان سلفونات. MS-222SigmaE-10521
FACSJazzBD Biosciences
مصل الأبقار الجنينيThermo Fisher10437028
FlowJo v10.2FlowJo, LLC
lck:eGFPانظر Langeneu et al., 2004
NIS Elements softwareNikonالإصدار 4.13
Penicilin-StreptomycinSigmaP4333
مجانسات الأنابيب الدقيقة المدقةعلوم المجهر الإلكتروني64788-20
نقاطات
البلاستيك rag2: hMYC< / em>-ERانظر Gutierrez et al. ، 2011
RPMI Media 1640 1xLife Technologies11835-030
نقل

المراجع

  1. Paik, E. J., Zon, L. I. Hematopoietic development in the zebrafish. International Journal of Developmental Biology. 54 (6-7), 1127-1137 (2010).
  2. Kasheta, M., et al. Identification and characterization of T reg-like cells in zebrafish. Journal of Experimental Medicine. 214 (12), 3519-3530 (2017).
  3. Liu, X., et al. Zebrafish B Cell Development without a Pre-B Cell Stage, Revealed by CD79 Fluorescence Reporter Transgenes. Journal of Immunology. 199 (5), 1706-1715 (2017).
  4. Page, D. M., et al. An evolutionarily conserved program of B-cell development and activation in zebrafish. Blood. 122 (8), e1-e11 (2013).
  5. Schorpp, M., et al. Conserved functions of Ikaros in vertebrate lymphocyte development: genetic evidence for distinct larval and adult phases of T cell development and two lineages of B cells in zebrafish. Journal of Immunology. 177 (4), 2463-2476 (2006).
  6. Langenau, D. M., et al. In vivo tracking of T cell development, ablation, and engraftment in transgenic zebrafish. Proceedings of National Academy of Sciences U S A. 101 (19), 7369-7374 (2004).
  7. Trede, N. S., Langenau, D. M., Traver, D., Look, A. T., Zon, L. I. The use of zebrafish to understand immunity. Immunity. 20 (4), 367-379 (2004).
  8. Frazer, J. K., et al. Heritable T-cell malignancy models established in a zebrafish phenotypic screen. Leukemia. 23 (10), 1825-1835 (2009).
  9. Rudner, L. A., et al. Shared acquired genomic changes in zebrafish and human T-ALL. Oncogene. 30 (41), 4289-4296 (2011).
  10. Gutierrez, A., et al. Pten mediates Myc oncogene dependence in a conditional zebrafish model of T cell acute lymphoblastic leukemia. Journal of Experimental Medicine. 208 (8), 1595-1603 (2011).
  11. Borga, C., et al. Simultaneous B and T cell acute lymphoblastic leukemias in zebrafish driven by transgenic MYC: implications for oncogenesis and lymphopoiesis. Leukemia. , (2018).
  12. Haferlach, T., et al. Clinical utility of microarray-based gene expression profiling in the diagnosis and subclassification of leukemia: report from the International Microarray Innovations in Leukemia Study Group. Journal of Clinical Oncology. 28 (15), 2529-2537 (2010).
  13. Novershtern, N., et al. Densely interconnected transcriptional circuits control cell states in human hematopoiesis. Cell. 144 (2), 296-309 (2011).
  14. Menke, A. L., Spitsbergen, J. M., Wolterbeek, A. P., Woutersen, R. A. Normal anatomy and histology of the adult zebrafish. Toxicology Pathology. 39 (5), 759-775 (2011).
  15. Gupta, T., Mullins, M. C. Dissection of organs from the adult zebrafish. Journal of Visualized Experiments. , (2010).
  16. Pruitt, M. M., Marin, W., Waarts, M. R., de Jong, J. L. O. Isolation of the Side Population in Myc-induced T-cell Acute Lymphoblastic Leukemia in Zebrafish. Journal of Visualized Experiments. (37), (2017).
  17. Traver, D., et al. Transplantation and in vivo imaging of multilineage engraftment in zebrafish bloodless mutants. Nature Immunology. 4 (12), 1238-1246 (2003).
  18. Carmona, S. J., et al. Single-cell transcriptome analysis of fish immune cells provides insight into the evolution of vertebrate immune cell types. Genome Research. 27 (3), 451-461 (2017).
  19. Tang, Q., et al. Dissecting hematopoietic and renal cell heterogeneity in adult zebrafish at single-cell resolution using RNA sequencing. Journal of Experimental Medicine. 214 (10), 2875-2887 (2017).

الوصول مقيد. يرجى تسجيل الدخول أو بدء فترة تجريبية لعرض هذا المحتوى.

إعادة الطباعة والأذونات

الوسوم

FACS GFP GFP
عزل ماليجنانت وعدم ماليجنانت ب الخلايا من lck:eGFP الزرد
اتصل بنا
أوصِ بها للمكتبة

الخصوصية

شروط الاستخدام

السياسات

2026 © حقوق الطبع والنشر MyJoVE Corporation. جميع الحقوق محفوظة.