في فيفو نماذج الثدييات من تشوهات العظام الحرجة الحجم ضرورية للباحثين دراسة آليات الشفاء والعلاجات العظام. نقدم لك هنا، على بروتوكول لإنشاء عيوب استنساخه، القطاعي، فخذي في الفئران التي استقرت باستخدام التثبيت الخارجي.
يتطلب اشتراك JoVE لعرض هذا المحتوى. تسجيل الدخول أو ابدأ نسخة تجريبية مجانية
مقالة منهجية
في فيفو نماذج الثدييات من تشوهات العظام الحرجة الحجم ضرورية للباحثين دراسة آليات الشفاء والعلاجات العظام. نقدم لك هنا، على بروتوكول لإنشاء عيوب استنساخه، القطاعي، فخذي في الفئران التي استقرت باستخدام التثبيت الخارجي.
أبحاث العظام تعتمد اعتماداً كبيرا على نماذج حيوانية لدراسة آليات للعظام شفاء في فيفو ، فضلا عن التحقيق في أساليب علاج جديدة. عيوب قطعي الحجم الحرجة تمثل تحديا لعلاج سريرياً، وجهود البحث يمكن أن تستفيد من نموذج حيوانات صغيرة موثوقة والاسعافية لعيب فخذي المجزأ. في هذه الدراسة، نقدم بروتوكولا جراحي أمثل لخلق عيب 5 مم جدلي حاسم متسقة واستنساخه في عظم الفخذ الفئران استقرت مع التبعي خارجية. الذي قد استقرت بجهاز تكييف التبعي خارجية أوستيكتومي جدلي أجرى باستخدام رقصة مخصصة لوضع 4 بيكورتيكالي أسلاك كيرشنر،. منشار العظام تتأرجح تم استخدامه لإنشاء هذا العيب. أما اسفنجة الكولاجين وحدها أو اسفنجة الكولاجين غارقة في رهبمب-2 كان مزروع في العيب، وشفاء العظام تم رصد أكثر من 12 أسبوعا باستخدام الصور الشعاعية. بعد 12 أسبوعا، كانت التضحية بالفئران، والتحليل النسيجي تم إجراؤها على عنصر التحكم قصت وتعامل قصبة. تشوهات العظام التي تحتوي على فقط الكولاجين الأسفنج أدت إلى غير الأعضاء في الاتحاد، بينما العلاج رهبمب-2 أسفرت عن تشكيل إعادة عرض العظم القاسي وجديدة بيريوستيل. الحيوانات تعافي تماما بعد زرع، والخارجية تثبيت أثبتت نجاحها في تحقيق استقرار العيوب فخذي ما يزيد على 12 أسبوعا. يمكن تطبيق هذا النموذج المبسط الجراحية سهولة دراسة شفاء العظام واختبار الحيوية العظام الجديدة والعلاجات التجدد في فيفو.
جراحة العظام من الصدمات النفسية تركز على علاج طائفة واسعة من الكسور المعقدة. العظام المجزأ جدلي الحرجة أثبتت العيوب يصعب علاجه طبيا بسبب انخفاض قدرة التجدد في العضلات المحيطة بها والسمحاق، فضلا عن عدم ترجمة الأوعية1. تقنيات المعالجة الحديثة تشمل التثبيت المنطوق مع تطعيم العظم، وتأخر تطعيم العظم (ماسكويليت)، ونقل العظام، والانصهار، أو البتر2،،من34. في معظم المرضى الذين لديهم المتنقلة الدالة الاحتفاظ بعد الصدمات التي مر بها مع أطرافه القاصي يعمل بشكل جيد، وهو إنقاذ أطرافهم وضوح أفضل خيار علاج5. غالباً ما تتطلب علاجات إنقاذ هذه التدخلات الجراحية نظموا خلال دورة علاج طويل. قد اقترح بعض الكتاب أن التثبيت الخارجي أعلى بالمقارنة مع التثبيت الداخلي لهذه التطبيقات بسبب تلف الأنسجة انخفض خلال غرس، انخفض مزروع المساحة السطحية، وزيادة قابلية ضبط بعد العملية الجراحية التبعي6. ومع ذلك، معشاة المحتملين تجري حاليا لمساعدة في توضيح هذا الجدل الداخلية مقابل الخارجية التثبيت في كسور مفتوحة شديدة في الساق7. للأسف، تستمر معدلات المضاعفات وفشل كبير مع العلاج أما المحدد،8،9. أما طريقة العلاج، فيما يتعلق بفقدان العظام القطاعي، الجراح يجب أن يتعامل مع العيوب جدلي قطعي أن تحديات كبيرة. تصحيح العيوب قطعي يجب تحقيق أقصى قدر من الاستقرار العظام وفي نفس الوقت تعزيز10،عملية أوستيوجينيك11.
نظراً لأهمية سريرية، بعد انخفاض حجم، عيوب المجزأ جدلي حاسم الحجم، طراز حيوانية فعالة، واستنساخه أمرا ضروريا لتمكين فرق البحث للنهوض بأساليب العلاج وتحسين النتائج السريرية في نهاية المطاف. يحتاج الباحثون لدراسة في فيفو الفسيولوجية آليات الشفاء في نموذج حيوانات الثديية. على الرغم من وجود هذه نماذج تثبيت الخارجي الفعل12،13،،من1415، ونأمل أن توفر أسلوباً أكثر موثوقية لنقابات العمال في الحيوانات غير المعالجة، وانخفاض التكاليف من خلال اختيار مواد التبعي بأسعار معقولة، ومخطط بروتوكول جراحية واضحة للتطبيق السهل للدراسات المستقبلية. والهدف الأساسي من هذا البروتوكول إنشاء نموذج يمكن الاعتماد عليها واستنساخه لعيب جدلي حاسم في الفئران. وجرى تقييم الإجراء بتقييم الاستقرار والعظام شفاء في قصبة الفئران أكثر من 12 أسبوعا. الأهداف الثانوية التي شملت: صنع نموذج أسعار معقولة كتكلفة فعالة قدر الإمكان، تبسيط النهج الجراحية وتحقيق الاستقرار، وضمان الأخلاقية رعاية الحيوانات. فريق البحوث والمؤلفين أجروا تجارب أولية مع مجموعة من المواد الحيوية المختلفة والعلاجات التجدد المحتملة لتحسين الشفاء في هذا العيب المجزأ.
الوصول مقيد. يرجى تسجيل الدخول أو بدء فترة تجريبية لعرض هذا المحتوى.
على الفئران المستخدمة في هذه الدراسة وتلقى الرعاية اليومية وفقا "المبادئ التوجيهية وبرايتون" "القتل الرحيم للحيوانات": 2013 الطبعة16. رعاية الحيوان المؤسسية واستخدام اللجنة في جامعة ويسكونسن-ماديسون تقييمها والموافقة عليها هذا البروتوكول التجريبي قبل بدء المشروع.
1-الحيوانات
2-الإعداد لعظم Morphogenetic البروتين-2 (رهبمب-2) غارقة السقالات الأسفنج
ملاحظة: إعداد سقالة يجب أن تحدث قبل غرس في عظم الفخذ (راجع الخطوة 6.14).
3-إعداد جهاز تثبيت خارجي مخصص
ملاحظة: انظر الشكل 1A لقائمة أكثر اكتمالا من الأبعاد.
4-الإجراء التخدير والتسكين
5-إعداد العقيم والمضادات الحيوية بريفينتاتيفيس
6-الجراحة
ملاحظة: جعل تضافر الجهود المبذولة للحفاظ على حقل العقيمة ومساحة العمل واتباع أسلوب تعقيم في جميع أرجاء القضية بأكملها.
7-إعداد مرناً الرصاصية والتصوير بالإضاءة الحيوية
ملاحظة: ينبغي إجراء تعداء مع مجمعات مرناً أثناء جراحة يوم واحد قبل تصوير التﻷلؤ. استخدام تقنيات عقيمة عند التعامل مع مرناً.
8-تصوير البروتوكول
9-النسيجي الداخلي
الوصول مقيد. يرجى تسجيل الدخول أو بدء فترة تجريبية لعرض هذا المحتوى.
تم إجراء عملية جراحية في ساعة واحدة تقريبا بجراح واحد مع مساعدة مساعد واحد. بعد التحسين الجراحية، داخلها، ومضاعفات ما بعد الجراحة تم التقليل إلى حد كبير واستخدام جهاز الرقصة ضمان حجم ثابت (5 × 3 × 3 مم) والتعريب من عيوب فخذي. الفئران الإسعافية الانتعاش التالية مباشرة من التخدير ولا يبدو أن يكون أي تغيير الأنماط السلوكية؛ مشيه ما لم يكن أنتالجيك، وأنهم لا يبدو أن انزعاج التبعي الخارجية.
أسلاك ك عدم ترابط اختيرت لدبوس الدانية أكثر...
الوصول مقيد. يرجى تسجيل الدخول أو بدء فترة تجريبية لعرض هذا المحتوى.
نماذج حيوانية صغيرة من إصابات العظام مثل الكسور العظمية كاملة تمكين البحث أن يستكشف آليات تكون العظم، وتقييم إمكانيات العلاجية الحيوية20. تطرح هذه الدراسة الفئران نموذج عيب المجزأ استقرت بالتبعي خارجية مخصصة بسهولة يمكنك استخراج فريق المختبر والهندسة الطبية لإجراء مزيد من الدراسات لإصلاح العظام أوستيوسينثيتيك الحاملة.
الدراسات السابقة استخدام العيوب الحجم الحرج في نماذج الفئران عادة تعتمد على التثبيت الداخلية لوحات21،...
الوصول مقيد. يرجى تسجيل الدخول أو بدء فترة تجريبية لعرض هذا المحتوى.
الكتاب يعلن لا تضارب مصالح مالية أو منافع. وهناك فوائد لا تلقاها المؤلف من هذه المادة مباشرة أو غير مباشرة.
وأيد هذا العمل "منحة معدات المعاهد الوطنية للصحة" 1S10OD023676-01 مع الدعم الإضافي المقدم من خلال جامعة ويسكونسن في الإدارات لجراحة العظام وإعادة التأهيل ومدرسة الطب والصحة العامة. نود أن نعترف كاربوني مركز السرطان دعم المنح P30 CA014520 UW واستخدام "مرفق التصوير الحيوانات الصغيرة"، فضلا عن "منحة التدريب في المعاهد الوطنية للصحة" 5T35OD011078-08 للدعم من مارتن H.. ونشكر أيضا مايكل وماري سو شانون لدعمهم "الشراكة التجدد العضلي الهيكلي".
الوصول مقيد. يرجى تسجيل الدخول أو بدء فترة تجريبية لعرض هذا المحتوى.
| الاسم | الشركة | رقم فهرسي | التعليقات |
|---|---|---|---|
| 0.9٪ محلول ملحي معقم | باكستر | 2F7124 | يستخدم لري الجرح وإعادة الترطيب |
| 10٪ 1215016 اليود / بوفيدون | Carefusion | يستخدم لتحضير الجلد | |
| 10٪ فورمالين | VWR | مخزن 89370094 | يستخدم كمثبت |
| 1 مم سلك كيرشنر غير مترابط | DePuy Synthes | VW1003.15 | معقم ، يستخدم لأكثر الدبوس |
| القريب1 مم سلك kirschner الخيوط | DePuy Synthes | VW1005.15 | معقم ، يستخدم في 3 فتحات دبوس بعيدة |
| 2 × 2 شاش | Covidien | 4006130 | معقم ، يستخدم لتحضير الجلد وامتصاص الدم |
| 4-0 Vicryl Suture | Ethicon 4015304 | يستخدم لإغلاق طبقات العضلات والجلد | |
| 4-40 × 0.25 بوصة ، 18-8 مسامير غطاء رأس زر من الفولاذ المقاوم | للصدأ مثبت | خارجي عام التجميع | |
| 4200 سائق لاسلكي | سترايكر | OR-S-4200 | يستخدم لحفر أسلاك كيرشنر |
| 4 × 4 | كوفيدين | 1219158 | معقم ، يستخدم لامتصاص الدم |
| 70٪ إيثانول | يستخدم لتحضير الجلد | ||
| Baytril | Bayer Healthcare LLC ، قسم صحة | 312.10010.3 | يضاف إلى الماء كمضاد حيوي |
| سيفازولين | حكمة المستحضرات الصيدلانية | 8917156 | المضاد الحيوي قبل |
| العملية CleanCap Gaussia Luciferase mRNA (5moU) | TriLink Biotechnologies | L-7205 | ترميز mRNA المعدل ل Gaussia Luciferase ، حافظ على الجليد أثناء الاستخدام |
| Coelenterazine الأصلي | NanoLight Technology | 303 | Substrate ل Guassia Luciferase ، تستخدم لتقييم نشاط لوسيفيراز في الجسم |
| الحي مرهم مضاد حيوي مزدوج | جونسون آند ؛ جونسون للمستهلكين | 8975432 | يتم تطبيقه على مواقع الدبوس بعد العملية كعناية بالجروح |
| Dual Cut Microblade | Stryker | 5400-003-410 | يستخدم لإنشاء عيب 5 مم في عظم الفخذ |
| حمض الإيثيلين ديامين رباعي الأسيتيك (EDTA) | فيشر | BP120-500 | يستخدم لإزالة الكلس من العظام للتحضير لعلم الأنسجة |
| بوبرينورفين ZooPharm | الممتد المفعول يستخدم كتخفيف للألم لمدة 3 أيام | ||
| ستائر | 3M | 1204025 | تستخدم لإنشاء |
| سلك قبضة حقل معقم ل TPS | Stryker | OR-S-5100-4N | تستخدم لإنشاء عيب 5 مم في وسادة تسخين عظم الفخذ |
| K & H Pet Products | 121239 | صيانة درجة حرارة الجسم الفئران | |
| مفك براغي سداسي | الرأس Wiha | 263/1/16 " X 50 | مثبت خارجي تشديد |
| غرفة الحث التخدير | العام | للفئران | |
| غرس إسفنجة الكولاجين مع بروتين مورفوجينيك البشري المؤتلف | Medtronic | 7510200 | العلاج ذي الصلة سريريا يستخدم كتحكم إيجابي |
| Isoflurane | Clipper | 10250 | التخدير للفئران |
| IVIS | Perkin Elmer | 124262 | طريقة التصوير التلألؤ الحيوي |
| Jig | مخصص | يستخدم لوضع دبابيس ثنائية | |
| Lipofectamine MessengerMAX | Fisher Scientific | LMRNA003 | عامل تعقيد mRNA الذي يمكن من توصيل mRNA |
| Sensorcaine-MPF (Bupivicane (0.25٪) و Epinephrine (1: 200،000)) | APP Pharmaceuticals، LLC | NDC 63323-468-37 | تطبق على الموقع الجراحي لتخفيف الآلام وتضيق |
| الأوعية المياه المعقمة | Hospira | 8904653 | تستخدم كمذيب لمسحوق السيفازولين |
| لوحات التثبيت الخارجية من التيتانيوم | معدة حسب الطلب | في المنزل مع خردة التيتانيوم وآلة الطحن | |
| الكلي (TPS) وحدة التحكم | Stryker | OR-S-5100-1 | تستخدم لإنشاء عيب 5 مم في عظم الفخذ |
| TPS MicroSaggital Saw | Stryker | OR-S-5100-34 | تستخدم لإنشاء عيب 5 مم في عظم الفخذ |
| Ultrafocus Faxitron مع DXA | Faxitron | طريقة التصوير الشعاعي عالية الدقة | |
| Uniprim النظام الغذائي للفئران | Envigo | TD.06596 | النظام الغذائي للفئران |
| مفتاح يدوي عالمي ل TPS | Stryker | OR-S-5100-9 | يستخدم لإنشاء 5 مم عيب في لاصق أنسجة عظم الفخذ |
| Vetbond | 3M | 1469 | إغلاق الجلد |
الوصول مقيد. يرجى تسجيل الدخول أو بدء فترة تجريبية لعرض هذا المحتوى.