يتطلب اشتراك JoVE لعرض هذا المحتوى. تسجيل الدخول أو ابدأ نسخة تجريبية مجانية

مقالة منهجية

تنقية الكسر الدندي الغنية فيلبوديا

4.9K مشاهدة

⸱

DOI:

10.3791/59292

⸱

مايو 2, 2019

 , 
1Laboratory for Neurobiology of Synapse, RIKEN Brain Science Institute, 2Liver Cancer Prevention Research Unit, RIKEN Center for Integrative Medical Sciences, 3Laboratory for Systems Molecular Ethology, RIKEN Center for Brain Science

في هذه المقالة

ملخص

في هذا البروتوكول، نقدم طريقة لتنقية الكسر الغنية بالفيلوبوديا الدرورية من بنية البروز الشبيهة بالأكواب الفاغوية على الخلايا العصبية الفرسامة المستزرعة من خلال الاستفادة من التقارب المحدد والقوي بين الفيلوبودي الدندرية جزيء التصاق، TLCN، وجزيء مصفوفة خارج الخلية، فيتورينيكستين.

الملخص

فيلبوديا الددرية رقيقة وطويلة على أساس خيوط الأكتين، وأنها تمتد وتتراجع كما لو كان البحث عن محور الهدف. عندما ينشئ الفيلبوديا الددرية الاتصال مع محور الهدف، فإنها تبدأ في النضج في العمود الفقري، مما يؤدي إلى تشكيل متشابك. يتم توطين Telencephalin (TLCN) بوفرة في فيلوبوديا الددرية ويتم استبعاده تدريجيا من العمود الفقري. الإفراط في التعبير عن TLCN في الخلايا العصبية فرس النهر المستزرعة يحفز تشكيل فيلبوديا dendritic. أظهرنا أن التيلجيزين يرتبط بقوة بجزيء مصفوفة خارج الخلية، فيتورينيكستين. فيترونيكستين المغلفة microbeads الناجمة عن تشكيل كأس phagocytic على dendrites الخلايا العصبية. في الكأس phagocytic، TLCN، TLCN ملزمة البروتينات مثل الفسفوريلاتيد إزرين / راديكسين / موسين (فوسفو-ERM)، وF-أكتين تتراكم، مما يشير إلى أن مكونات الكأس phagocytic مماثلة لتلك التي من filopodia dendritic. وهكذا، قمنا بتطوير طريقة لتنقية الكأس phagocytic بدلا من فيلبوديا dendritic. كانت مغلفة الخرز البوليسترين المغناطيسي مع فيتوريتكن، الذي هو موجود بوفرة في وسط الثقافة من الخلايا العصبية فرس النهر والتي تحفز تشكيل كأس phagocytic على dendrites الخلايا العصبية. بعد 24 ساعة من الحضانة، كانت الكؤوس phagocytic الذوبان أقل ما يقال مع المنظفات وجمعها باستخدام فاصل المغناطيس. بعد غسل الخرز، تم تلطخ البروتينات الملزمة وتحليلها من قبل تلطيخ الفضة والنشاف الغربية. في الكسر ملزمة, [تلكن] و [أكتين] كان بوفرة حاضرة. وبالإضافة إلى ذلك، تم توطين العديد من البروتينات التي تم تحديدها من الكسر إلى فيلوبوديا الدندية. وهكذا، أطلقنا على الكسر الملزم كجزء غني بالفيلوبوديا الدندية. توضح هذه المقالة تفاصيل فيما يتعلق بطريقة تنقية للكسر الغنية بالفيلوبوديا dendritic.

المقدمة

ويعتقد أن فيلبوديا الددرية هي سلائف العمود الفقري. خيوط أكتين في فيلوبوديا dendritic تنظيمتمديدها والتراجع 1،2،3. بعد الاتصال مع محور، فيلوبوديا dendritic مختارة تبدأ نضجها في العمود الفقري، ويتم تشكيل متشابك4،5. وقد تم تحديد مكونات العمود الفقري من التحليل الشامل للكسور الكثافة المشاركات6،7، في حين أن مكونات filopodia dendritic لا تزال غير معروفة إلى حد كبير. وقد تبين أن telencephalin (TLCN)، ERM، SynGAP، راس، PI3 كيناز، Akt، mTOR، البولو مثل كيناز 2، CaMKII، syndecan-2، paralemin-1، ARF6، وEphB تنظيم تشكيل فيلبوديا dendritic5،8،9 ،10،11، في حين لم يتم تطوير طريقة للتحليل الشامل للجزيئات الموجودة في فيلبوديا dendritic.

يتم التعبير عن TLCN (ICAM-5) على وجه التحديد من قبل الخلايا العصبية الشائكة في الجزء الدماغ الأكثر rostral, وtelencephalon12. TLCN لديها 9 مجالات مثل Ig في منطقتها خارج الخلية، ومنطقة عبر الغشاء، والذيل السيتوبلازمي13. TLCN يربط إلى فيتورينيكستين (VN) وLFA-1 integrin في منطقتها خارج الخلية، إلى presenilin في منطقتها عبر الغشاء، وphospho-ERM وα-actinin في منطقتها السيتوبلازمية5،8،14،15 ،16. TLCN يربط إلى الهيكل السيتوني الأكتين من خلال PHOSPHo-ERM في نصائح من فيلبوديا dendritic وα-actinin في العمود الفقري ومهاوي dendritic8،16.

أظهرنا أن الإفراط في التعبير عن TLCN تعزيز تشكيل فيلبوديا dendritic وحفزت على إعادة العمود الفقري إلى filopodia10. الشكل التأسيسي النشط من ezrin ملزمة لمنطقة السيتوبلازمية TLCN وتعزيز تشكيل فيلبوديا dendritic8. وهكذا، ينظم TLCN تشكيل فيلبوديا الدندرية من خلال البروتينات الملزمة للأكتين. وقد أثبت Esselens وآخرون أن الخرز الصغير الناجم عن تراكم TLCN على الخلايا العصبية المستزرعة17. أظهرنا أن هياكل كأس phagocytic تشكلت على dendrites الخلايا العصبية حول الخرز الصغير المغلفة VN بطريقة تعتمد على TLCN15. مكونات فيلبوديا dendritic مماثلة لتلك التي من كأس phagocytic. من الصعب جمع فيلبوديا dendritic، ولكن من الأسهل نسبيا لجمع الكأس phagocytic باستخدام microbeads المغناطيسي. وهكذا، قمنا بتطوير طريقة لتنقية الكأس phagocytic بدلا من فيلبوديا dendritic18. هنا، ونحن نصف طريقة تنقية للجزء الفيلوبوديا الدندي.

الوصول مقيد. يرجى تسجيل الدخول أو بدء فترة تجريبية لعرض هذا المحتوى.

البروتوكول

وقد تمت الموافقة على جميع الأساليب الموصوفة هنا من قبل اللجنة المؤسسية لرعاية الحيوانات واستخدامها من RIKEN واكو.

1. ثقافة الخلايا العصبية فرس النهر

  1. إعداد وسط الثقافة
    1. إعداد مزيج فيتامين 200x. حل 100 ملغ من حمض البانتوثيك ملح الهيميكالسيوم، 100 ملغ من كلوريد الكولين، 100 ملغ من حمض الفوليك، 180 ملغ من i-inositol، 100 ملغ من النياسيناميد، 100 ملغ من حمض الهيدروكلوريك البيريدوكسال، و 100 ملغ من حمض الهيدروكلوريك الثيامين في 500 مل من المياه النقية باستخدام النمام المغناطيسي. الحل لا يذوب تماما. يُمزج بعناية، ويُخلط في أنابيب 50 مل ويُخزن عند -20 درجة مئوية.
    2. إعداد محلول الريبوفلافين. حل 100 ملغ من الريبوفلافين في 500 مل من المياه فائقة النقية باستخدام النمام المغناطيسي. الحل لا يذوب تماما. يُمزج بعناية، ويُخلط في أنابيب 50 مل ويُخزن عند -20 درجة مئوية.
    3. إعداد 1 M CaCl2. حل 7.35 غرام من CaCl2·2H2O في 50 مل من المياه النقية باستخدام النمام المغناطيسي.
    4. إعداد الحد الأدنى من المتوسط الأساسي (MEM). حل 400 ملغ من كل شيء، 6800 ملغ من حمض الكلس، 2200 ملغ من NaHCO3،158 ملغ من NaH2PO4·2H2O، 7000 ملغ من D-الجلوكوز، و 200 ملغ من MgSO4-7H2O في 950 مل من المياه النقية باستخدام النمام المغناطيسي.
    5. Titrate 1.8 مل من 1 M CaCl2 إلى MEM بطريقة قطرة بقطرة باستخدام أنبوب 1 مل مع التحريض المستمر على النمام المغناطيسي. ضبط الوظيفة الهيدروجينية للMEM إلى pH 7.25 مع 1 مول / لتر حمض الهيدروكلوريك.
    6. إضافة 5 مل من مزيج فيتامين 200X و 200 ميكرولتر من محلول الريبوفلافين إلى MEM. ضبط حجم الحل إلى 1000 مل مع المياه فائقة النقاء. قم بتصفية الحل باستخدام نظام فلتر بمقدار 0.22 متر وتخزينه عند درجة حرارة 4 درجات مئوية.
    7. إعداد 10X DNase-I حلول الأسهم. حل 100 ملغ من DNase-I في 12.5 مل من حل الملح المتوازن هانكس (HBSS)، تصفية من خلال مرشح 0.22 ميكرومتر، aliquot في أنابيب 1.5 مل، وتخزين الأنابيب في -20 درجة مئوية.
    8. إعداد السيتوسين β-D-أرابينومورانوسيد (آرا-C) حل الأسهم. حل 25 ملغ من Ara-C في 8.93 مل من المياه فائقة النقاء (التركيز النهائي من 10 MM)، مرشح من خلال مرشح 0.22 ميكرومتر، aliquot في أنابيب 1.5 مل وتخزينها في -20 درجة مئوية
    9. إعداد وسط الطلاء. مزيج 1 مل من محلول الأحماض الأمينية MEM، 750 ميكرولتر من 1 م HEPES، 1 مل من B27، 125 ميكرولتر من 200 مل الجلوتامين، 250 ميكرولتر من البنسلين / العقديات، 2.5 مل من المصل البقري الجنيني (FBS)، و 44.375 مل من MEM في أنبوب 50 مل.
    10. إعداد وقف المتوسطة. مزيج 1 مل من حل الأحماض الأمينية MEM، 750 درجة مئوية من 1 م HEPES، 5 مل من FBS (النهائي 10٪)، و 43.25 مل من MEM في أنبوب 50 مل.
  2. إعداد الأطباق المغلفة بولي-L-يسين
    1. معطف 35 ملم أطباق زراعة الخلايا البلاستيكية مع 0.2 ملغ / مل من بولي-L-يسين هيدروبروميد لمدة يوم واحد في 25 درجة مئوية.
      ملاحظة: ولا ينبغي استخدام بروميد البولي -L-يسين بدلاً من بروميد مائي متعدد الليسين.
    2. اغسل الأطباق بـ 2 مل من الماء النقي 3 مرات. تحضن الأطباق مع 1.5 مل من إيقاف المتوسطة في 25 درجة مئوية حتى استخدامها.
  3. تشريح الخلايا العصبية الحصية من جنين الماوس
    1. مصدر أنسجة الخلايا العصبية الحصية. تشريح الحصين من الفئران من النوع البري وTLCN ناقص C57BL6/J في الأيام الجنينية 16-17 وفقا لطريقة لو وآخرون19.
    2. احتضان تشريح فرس النهر في 0.25٪ تريبسين و 1X DNaseI في HBSS تحتوي على 15 M HEPES، درجة الحموضة 7.2 لمدة 15 دقيقة في 37 درجة مئوية مع التحريض كل 3 دقائق. حضانة فرس النهر في 10 مل من وقف المتوسطة لتعطيل التربسين في 4 درجة مئوية لمدة 5 دقائق.
    3. نقل hippocampi إلى 10 مل من المتوسطة توقف الطازجة وحضانة في 4 درجة مئوية لمدة 5 دقائق. أنبوب مل. فصل فرس النهر في الخلايا العصبية المعزولة عن طريق الأنابيب 20 مرة باستخدام أنبوب 1 مل.
      ملاحظة: طرف الأنابيب 1 مل يمس قليلا الجزء السفلي من أنبوب 15 مل خلال تفكك فرس النهر.
    4. إضافة 9 مل من الطلاء المتوسطة، وتصفية من خلال مصفاة خلية 70 ميكرومتر في أنبوب 50 مل. عد عدد الخلايا باستخدام مقياس الهيموكيمتر وضبط إلى 3.5 × 104 خلايا / مل في الطلاء المتوسطة.
    5. أسطاب وقف المتوسطة من الأطباق المغلفة بولي-L-يسين. تُصفيح الخلايا على الأطباق المغلفة بالبولي-إل-ليسين في 7 × 104 خلايا/طبق (2 مل/طبق).
    6. بعد 60-64 ساعة من الحضانة تحت 5٪ CO2 في 37 درجة مئوية، إضافة 2 ميكرولتر من حل الأسهم Ara-C (النهائي 10 μM) إلى الخلايا العصبية، ويهز الطبق ببطء. الحفاظ على أطباق الثقافة في مربع رطب دون تغيير وسط الثقافة تحت 5٪ CO2 في 37 درجة مئوية.

2. تنقية الكسر الدندية الغنية فيلبوديا

  1. بعد 13 يوما في المختبر (DIV)، إضافة microbeads البوليسترين المغناطيسي (3 × 106 الجسيمات / طبق) إلى 20 أطباق تحتوي على الخلايا العصبية المستزرعة. بعد يوم واحد، وغسل الخلايا العصبية في 1 مل من PBS مع التحريض 3 مرات لإزالة microbeads المتوسطة وغير منضم. بعد إزالة PBS، lyse الخلايا العصبية مع 500 درجة مئوية / طبق من العازلة lysis (PBS تحتوي على 0.01٪ تريتون X-100، EDTA خالية من البروتياز كوكتيل المانع، وكوكتيل مثبطات الفوسفاتيز).
  2. جمع lysate مع مكشطة الخلية ونقل lysate إلى الأنابيب الدقيقة منخفضة البروتين ملزمة (10 أنابيب). تعيين الأنابيب على فاصل المغناطيس والانتظار لمدة 1 دقيقة.
  3. نقل الخرز إلى ميكروتوب جديدة منخفضة البروتين ملزمة، وضعت على فاصل المغناطيسي، وإزالة تماما supernatant. إضافة 500 درجة مئوية من العازلة lysis وغسل الخرز باستخدام خلاط دوامة لمدة 15 ق. تعيين الأنبوب على فاصل المغناطيس، والانتظار لمدة 1 دقيقة، وإزالة supernatant، وإضافة 500 درجة مئوية من العازلة lysis. كرر غسل الخرز 10 مرات وإزالة supernatant.
  4. البروتينات المنضمة إلى الخرز (الكسر المنضم) بإضافة 50 ميكرولتر من 1x SDS عينة العازلة (62.5 mM Tris HCl، ودرجة الحموضة 6.8، 2.5٪ SDS، و 10٪ الجلسرين) ويغلي الأنبوب في 98 درجة مئوية لمدة 5 دقائق. على فاصل مغناطيسي لمدة دقيقة واحدة.
    ملاحظة: يمكن إيقاف البروتوكول مؤقتاً هنا.
  5. قياس تركيزات البروتين من الكسور غير المنضمة والمقيدة عن طريق تحليل البروتين BCA. تصور حلول البروتين مع بروموفينول الأزرق وضبط التركيز إلى 5 نانوغرام / ميكرولتر لSDS-PAGE.

3. تلطيخ الفضة وتحليل وصمة عار الغربية

  1. افصل الكسور المنضمة وغير المنضمة (50 نانوغرام) بواسطة SDS-PAGE باستخدام جل متدرج بنسبة 5-20%. الفضة وصمة عار هلام.
  2. وصمة عار الغربية باستخدام المضادة لTLCN-C (1/3,000), مكافحة البقر فيترونيكستين (1/5,000), المضادة للأكتين (1/1,000), ومكافحة α-tubulin (1/1,000) كالأجسام المضادة الأولية وHRP-مترافق الماعز المضادة للأرنب IgG (1/5,000) كالأجسام المضادة الثانوية. تصور المستضدات باستخدام الكاشف الكشف عن النشاف الغربية chemiluminescent وصورة chemiluminescence.

الوصول مقيد. يرجى تسجيل الدخول أو بدء فترة تجريبية لعرض هذا المحتوى.

النتائج

في الخلايا العصبية فرس النهر المستزرعة، تم توطين TLCN بوفرة إلى فيلبوديا dendritic، رمح، وسوما وcolocalized مع F-actin (الشكل1A،B). عندما أضيفت microbeads البوليسترين إلى الخلايا العصبية فرس النهر المستزرعة، كانت مغلفة تلقائيا الخرز مع فيتورينيكستين (VN) المستمدة من مصل البقر الجنيني (FBS) في وسط الثقافة. كانت ملزمة أساسا إلى dendrites، وأنها دفعت تشكيل أكوابphagocytic (الشكل 1B-E). واستندت أكواب...

الوصول مقيد. يرجى تسجيل الدخول أو بدء فترة تجريبية لعرض هذا المحتوى.

المناقشة

قمنا بتطوير طريقة تنقية للجزء الغنية بالفيلوبوديا الددرية باستخدام التقارب بين جزيء التصاق الخلية TLCN وبروتين بروتين فيترونيكستين المصفوفة خارج الخلية. بالمقارنة مع كسر PSD، يمكن أن يكون من الممكن تحديد البروتينات متشابك تعمل على متشابك غير ناضجة من الكسر الفيلوبوديا الدندي الغنية. وهكذا، فإن مكونات الكسر الغنية بالفيلوبوديا الددرية تختلف عن تلك الموجودة في كسر PSD بنسبة 74٪. مختلفة عن كسر PSD، استخدمنا الخلايا العصبية فرس النهر المستزرعة لتشكيل بنشاط أكواب phagocytic، والخلايا تحتاج إلى أن تكون على قيد الحياة. لتشكيل ك...

الوصول مقيد. يرجى تسجيل الدخول أو بدء فترة تجريبية لعرض هذا المحتوى.

الإفصاحات

وليس لدى أصحاب البلاغ ما يكشفون عنه.

شكر وتقدير

نشكر شيجيو أوكابي وهيتومي ماتسونو على الثقافة المنخفضة الكثافة للخلايا العصبية في فرس النهر، وماسايوشي ميشينا للفئران التي تعاني من نقص في الـ TLCN، وساكيكو ميتسوي وموموكو شيوزاكي على المساعدة التقنية، وأعضاء مختبر يوشيهارا لإجراء مناقشات مفيدة . وقد حظي هذا العمل بدعم من اللجنة المشتركة بين الأفراد والرابطة. JP20700307, JP22700354, و JP24500392 وMEXT KAKENHI منحة Nos. JP23123525 إلى YF و JP20022046 و JP18H04683 و JP18H05146 إلى YY.

الوصول مقيد. يرجى تسجيل الدخول أو بدء فترة تجريبية لعرض هذا المحتوى.

المواد

قائمة المواد المستخدمة في هذه المقالة
الاسمالشركةرقم فهرسيالتعليقات
1 م هيبسجيبكو15630-080
1.7 مللي لتر منخفض الارتباط MCTسورنسون بيوساينس39640T
200 ملي مولار L-GlutamineGibco2530149
35 مم أطباق زراعة الخلايا البلاستيكيةCorning430165
Anti-ActinSigma-AldrichA-5060
Anti-alpha-ActininSigma-AldrichA-5044
مضاد لألفا توبولينسيجما ألدريتشT-9026
مضاد لإزرينسيجما-ألدريتشاستنساخ 3C12 ، SAB4200806
مضاد لألفاسانتاكروزSC-393
Anti-MAP2استنساخ كيميكونAP20 ، استنساخ MAB3418
مضاد لموسينسيجما ألدريتش38/87 ، M7060
Anti-PLCbeta1Santacuzsc-5291
Anti-PSD95MA2ABR
مضاد للطيف بيتاChemiconMAB1622
B27Gibco0080085SA
مجموعة فحص البروتين BCAThermo23227
Bromophenol blueMerck1.08122.0005
الكالسيوم كروليد ، مائيواكو038-19735
مكشطة الخليةFalcon353085
مصفاة الخليةFalcon352350
كلوريد الكولينSigma-AldrichC7527
كوكتيل مثبط البروتياز الخالي من EDTAكامل Roche11873580001
السيتوزين بيتا-D-arabinofuranosideSigma-AldrichC-6645
DNase-ISigma-AldrichDN-25
D-Pantothenic حمض الملح هيميكالسيومSigma-AldrichP5155
DynaMag-2Magnet Thermo12321D
ECL Prime Western Blotting Detecting RecodeGERPN2232
e-PAGEL 5-20٪ SDS-PAGE جل التدرجATTOE-T520L
حمض الفوليكSigma-AldrichF8758
HBSSGibco14175095
HRP المترافق المضاد للأرانب IgGJackson ImmunoResearch111-035-144
إينوزيتولسيجما ألدريتشI7508
LAS-1000 مصغرةفوجي فيلمLAS-1000 مصغرةللكشف عن التلألؤ من ميكروبيدات البوليسترين المغناطيسية غشاء WB
SperotechPM-20-10
MEM محلول الأحماض الأمينيةGibco11130-05130 ملي مولار L-Arginine hydrochloride ، 5 ملي مولار L-Cystine ، 10 ملي مولار L-Histidine hydrochloride-H2< / sub>O ، 20 ملي مولار L-Isoleucine ، 20 ملي L-Leucine ، 19.8 ملي L-Lysine هيدروكلوريد ، 5.1 ملي L-Methionine ، 10 ملي L-Phenylalanine ، 20 ملي L-Threonine ، 2.5 ملي L-Tryptophan ، 10 ملي مولار L-Tyrosine ، و 20 ملي مولار L-Valine
نظام الرحلان الكهربائي بحجم البلاطةالصغيرة ATTOAE-6530
نياسيناميدسيجما ألدريتشN0636
البنسلين / الستربتومايسينجيبكو15070063
كوكتيل مثبط الفوسفاتيزروش4906845001
بولي إل ليسين هيدروبروميدناكالي28360-14
بيريدوكسال هيدروكلوريكسيجما ألدريتشP6155
ريبوفلافينسيجما-ألدريتشR9504
صبغة فضية 2 مجموعة واكوواكو291-5031
ثيامين هيدروكلورايدسيجما-ألدريتشT1270
ترانس بلوت SD خلية نقل شبه جافةبيو راد1703940JA
ماء فائق النقاءMilliQلإنتاج مياه نقية للغاية

المراجع

  1. Fiala, J. C., Feinberg, M., Popov, V., Harris, K. M. Synaptogenesis via dendritic filopodia in developing hippocampal area CA1. Journal of Neuroscience. 18 (21), 8900-8911 (1998).
  2. Portera-Cailliau, C., Pan, D. T., Yuste, R. Activity-regulated dynamic behavior of early dendritic protrusions: evidence for different types of dendritic filopodia. Journal of Neuroscience. 23 (18), 7129-7142 (2003).
  3. Ziv, N. E., Smith, S. J. Evidence for a role of dendritic filopodia in synaptogenesis and spine formation. Neuron. 17 (1), 91-102 (1996).
  4. Lohmann, C., Bonhoeffer, T. A role for local calcium signaling in rapid synaptic partner selection by dendritic filopodia. Neuron. 59 (2), 253-260 (2008).
  5. Yoshihara, Y., De Roo, M., Muller, D. Dendritic spine formation and stabilization. Current Opinion in Neurobiology. 19 (2), 146-153 (2009).
  6. Bayes, A., et al. Comparative study of human and mouse postsynaptic proteomes finds high compositional conservation and abundance differences for key synaptic proteins. PLoS One. 7 (10), e46683(2012).
  7. Bayes, A., et al. Characterization of the proteome, diseases and evolution of the human postsynaptic density. Nature Neuroscience. 14 (1), 19-21 (2011).
  8. Furutani, Y., et al. Interaction between telencephalin and ERM family proteins mediates dendritic filopodia formation. Journal of Neuroscience. 27 (33), 8866-8876 (2007).
  9. Mao, Y. T., et al. Filopodia Conduct Target Selection in Cortical Neurons Using Differences in Signal Kinetics of a Single Kinase. Neuron. 98 (4), 767-782 (2018).
  10. Matsuno, H., et al. Telencephalin slows spine maturation. Journal of Neuroscience. 26 (6), 1776-1786 (2006).
  11. Raemaekers, T., et al. ARF6-mediated endosomal transport of Telencephalin affects dendritic filopodia-to-spine maturation. The EMBO Journal. 31 (15), 3252-3269 (2012).
  12. Mori, K., Fujita, S. C., Watanabe, Y., Obata, K., Hayaishi, O. Telencephalon-specific antigen identified by monoclonal antibody. Proceedings of the National Academy of Sciences of the United States of America. 84 (11), 3921-3925 (1987).
  13. Yoshihara, Y., Mori, K. Telencephalin: a neuronal area code molecule? Neuroscience Research. 21 (2), 119-124 (1994).
  14. Annaert, W. G., et al. Interaction with telencephalin and the amyloid precursor protein predicts a ring structure for presenilins. Neuron. 32 (4), 579-589 (2001).
  15. Furutani, Y., et al. Vitronectin induces phosphorylation of ezrin/radixin/moesin actin-binding proteins through binding to its novel neuronal receptor telencephalin. Journal of Biological Chemistry. 287 (46), 39041-39049 (2012).
  16. Nyman-Huttunen, H., Tian, L., Ning, L., Gahmberg, C. G. alpha-Actinin-dependent cytoskeletal anchorage is important for ICAM-5-mediated neuritic outgrowth. Journal of Cell Biology. 119 (Pt 15), 3057-3066 (2006).
  17. Esselens, C., et al. Presenilin 1 mediates the turnover of telencephalin in hippocampal neurons via an autophagic degradative pathway. Journal of Cell Biology. 166 (7), 1041-1054 (2004).
  18. Furutani, Y., Yoshihara, Y. Proteomic Analysis of Dendritic Filopodia-Rich Fraction Isolated by Telencephalin and Vitronectin Interaction. Frontiers in Synaptic Neuroscience. 10, 27(2018).
  19. Lu, Z., Piechowicz, M., Qiu, S. A Simplified Method for Ultra-Low Density, Long-Term Primary Hippocampal Neuron Culture. Journal of Visualized Experiments. (109), (2016).
  20. Okabe, S., Miwa, A., Okado, H. Alternative splicing of the C-terminal domain regulates cell surface expression of the NMDA receptor NR1 subunit. The Journal of Neuroscience. 19 (18), 7781-7792 (1999).
  21. Okabe, S., Vicario-Abejon, C., Segal, M., McKay, R. D. Survival and synaptogenesis of hippocampal neurons without NMDA receptor function in culture. European Journal of Neuroscience. 10 (6), 2192-2198 (1998).

الوصول مقيد. يرجى تسجيل الدخول أو بدء فترة تجريبية لعرض هذا المحتوى.

إعادة الطباعة والأذونات

استكشف المزيد من المقالات

الكأس البلعميحبيبات الفيترونكتينتيلينسيفالين TLCNالفصل المغناطيسياسترداد البروتينلطخة وسترنالتلوين الفضيالمزرعة العصبيةالعصبونات الحصينية
تنقية الكسر الدندي الغنية فيلبوديا
تواصل معنا
أوصِ به للمكتبة

الخصوصية

شروط الاستخدام

السياسات

حقوق الطبع والنشر © 2026 MyJoVE Corporation. جميع الحقوق محفوظة.