Method Article

التقاط الاتصالات جزيء صغير بين الأنسجة والخلايا باستخدام التصوير الكتلي

DOI:

10.3791/59490

⸱

April 3rd, 2019

 ,  ,  , 
1Department of Medicinal Chemistry and Pharmacognosy, University of Illinois at Chicago, 2Department of Animal Science, University of Illinois at Urbana-Champaign

In This Article

Summary

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

تم وضع طريقة جديدة لإعداد نموذج لاستيعاب كوكولتوري الخلايا والأنسجة للكشف عن تبادل جزيء صغير باستخدام التصوير الطيف الكتلي.

Abstract

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

التصوير الطيف الكتلي (IMS) قد طبق بشكل روتيني إلى ثلاثة أنواع من العينات: مقاطع الأنسجة والماغنيسيوم والمستعمرات الميكروبية. أنواع هذه العينة قد تم تحليلها باستخدام الليزر ساعد مصفوفة الامتزاز/التأين وقت الطيران الطيف الكتلي (TOF استخدام MS) لتصور توزيع البروتينات، والدهون، ونواتج الأيض عبر العينة البيولوجية لمصلحة. لقد قمنا بتطوير أسلوب إعداد نموذج رواية يجمع بين نقاط قوة التطبيقات السابقة الثلاث لمعالجة نهج مستقصاة تحديد الاتصالات الكيميائية في السرطان، ببذر الثقافات الخلية الثديية إلى [اغروس] في كوكولتوري مع الأنسجة السليمة التي تتبعها جفاف العينة. خلايا وأنسجة الثدييات هي كوكولتوريد على مقربة من السماح للاتصالات الكيميائية عن طريق نشرها بين الأنسجة والخلايا. عند نقطة زمنية معينة، هي تجفف العينة على أساس [اغروس] بنفس الطريقة كالمستعمرات الميكروبية التي أعدت لتحليل نظام الرصد الدولي. تم تطوير أسلوبنا لنموذج الاتصال بين الدرجة العالية المستمدة من قناة فالوب كما يتفاعل مع المبيض خلال ورم خبيث سرطان المبيض المصلي. الأمثل لإعداد نموذج أسفرت عن تحديد لإفراز كمكون كيميائية رئيسية في المكروية المبيض. يمكن تطبيق هذه الطريقة المطورة حديثا للنظم البيولوجية الأخرى التي تحتاج إلى فهم للاتصالات الكيميائية بين الخلايا المتجاورة أو الأنسجة.

Introduction

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

تم تصوير الطيف الكتلي (IMS) الأمثل لتميز التوزيع المكاني للسمات الجزيئية في التطبيقات المستخدمة على نطاق واسع ثلاثة: شرائح الأنسجة، والماغنيسيوم، والمستعمرات الميكروبية1،،من23. يمكن استخدام شرائح الأنسجة لتقييم التعريب من نواتج الأيض في سياق الظروف البيولوجية في مضيف، أما المستهدفة أو غير المستهدفة داخل مجموعة أسلحة معينة. ومع ذلك، الاختلافات بين السمات الجزيئية هي الأكثر كبيرة وواضحة عندما تتم مقارنة أنسجة سليمة إلى حالة مريضة، على سبيل المثال، ورم. هذا النهج نظام الرصد الدولي لا سيما تكييفها للكشف عن المرض المؤشرات الحيوية، ومع ذلك، الحصول على عينات الأنسجة في مراحل متميزة ....

Access restricted. Please log in or start a trial to view this content.

Protocol

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

جميع الإجراءات الحيوان كانت وفقا للمبادئ "التوجيهية الوطنية للمعاهد الصحية" لرعاية واستخدام الحيوانات المختبرية، والتي أقرتها اللجنة "المؤسسية استخدام الحيوان" والرعاية (إياكوك) في جامعة إلينوي في شيكاغو.

1-إعداد الكواشف

  1. الحفاظ على خلايا ظهارة أوفيدوكتال موريني (وزارة التربية والتعليم) في 37 درجة مئوية مع 5% CO2 في حاضنة هوميديفيد في الوسائط الحد الأدنى الأساسية المتوسطة (αMEM) ألفا وتستكمل مع 10% مصل بقرى الجنين (FBS)، 2 مم ل الجلوتامين، الأنسولين 10 ملغ/مل، ترانسفيرين، السيلنيوم (البحث عن) ، 1.8 عامل نمو البشرة من نانوغرام/مليلتر (لو)، 100 يو/مليلتر البنسلين-ستربتوميسين ومع الجنتامايسين 1 ملغ/مل 18.2 نانوغرام/مليلتر ا....

Access restricted. Please log in or start a trial to view this content.

Results

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

سيؤدي إلى شريحة إيتو مجففة على النحو الأمثل في عينة يهتمان مسطحة مع الحد الأدنى للا التجاعيد عبر السطح [اغروس] و [اغروس] القطع التي تحافظ على الفصل المكاني على الشريحة (الشكل 3). ويبين الشكل 3 ألف التجفيف المثلى، بينما يبين الشكل 3B التجاعيد التي ينبغي تجنبها. هذا التحسين يتطلب حذراً من رصد للشريحة في الفرن، كما يمكن أن تختلف أوقات الضبط استناداً إلى الرطوبة النسبية. بينما التجاعيد يمكن أن تؤثر قليلا.......

Access restricted. Please log in or start a trial to view this content.

Discussion

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

وهناك مجموعة متزايدة من الأدلة التي تورط الدور في إفراز هجسوك12،،من1718، وقد أسهم هذا التقنية المعلومات آليا إلى أكثر. مع الظروف البيولوجية على الأقل ثمانية موجودة على الشريحة نفسها، يمكن أن تمثل الأسلوب لعناصر بيولوجية مثل الجينات وخصوصية الخلية، فضلا عن ضوابط وسائل الإعلام في IMS واحد تشغيل. في حين كان الأسلوب الأمثل لتقييم وتبادل الجزيئات الصغيرة في نموذج لورم خبيث الابتدائية في هجسوك، أي خلية أو نوع الأنسجة التي يمكن وضعها ف.......

Access restricted. Please log in or start a trial to view this content.

Disclosures

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

الكتاب لا تمت بصلة إلى الكشف عن

Acknowledgements

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

تم تمويل الكونسورتيوم شيكاغو الطبية بدعم من "أموال سيرل" في "شيكاغو المجتمع الأمانة" (C-076) (L.M.S.)؛ وتمول جامعة إلينوي في شيكاغو بدء التشغيل (L.M.S.)؛ منح 543296 من التحالف صندوق أبحاث سرطان المبيض (دكتوراه في الطب)؛ و UG3 ES029073 (J.E.B.)، والمركز الوطني للنهوض متعدية العلوم، المعهد الوطني للصحة، من خلال منحة UL1TR002003 (جيب & سكاي لأب المذكورة).

....

Access restricted. Please log in or start a trial to view this content.

Materials

List of materials used in this article
NameCompanyCatalog NumberComments
15 مل أنابيب الصقر DenvilleC1017-Oلجمع الخلايا
غرفة 8 آبار (غرفة Millipore EZ-slide)MilliporePEZGS0816إعادة توجيهها من Millipore Millicell EZ-slide غرفة
شريحة AcetonitrileSigma-Aldrich34998-4Lمذيب لرش المصفوفة
ألفا الحد الأدنى من الوسط الأساسي (& ألفا ؛ MEM)Fisher10-022-CVوسائط ثقافة الخلية
سرعة Autoflex MALDI-TOF LRFBrukerلتحليل بيانات IMS
جهاز طرد مركزيEppendorf5810 Rلجمع الخلايا وإزالة
مصفوفة CHCAالطافية Bruker Daltonic8201344Matrix التي تم رشها على شريحة مجففة
DHB MatrixBruker Daltonic8201346Matrix تم رشها على الشريحة المجففة
المشارط المتاحفيشر22-079-707لإزالة المبايض
تشريح مقصفيشر13-804-6لإزالة المبايض
DMEM MediaGibco11995-065وسائل الإعلام ممزوجة بعامل
نمو البشرةالاغاروز Peprotech Inc.100-15مكمل وسائط زراعة الخلايا
أنابيب EppendorfGenesee Scientific22-282لأغاز الآغاروز
Estradiol-17 & beta ؛Simga-AldrichE2758مكمل وسائط زراعة الخلايا
مصل الأبقار الجنينيDenvillefb5001ملحق وسائط زراعة الخلايا
FlexControl 3.4Bruker DaltonicIMS
FlexImaging 4.1برنامج تحليل بياناتBruker Daltonic
ملقط (جيد)Fsiher22-327379لإزالة المبايض
GentamycinCellgro30-005-CRمكمل وسائط زراعة الخلايا
الأنسولين ، ترانسفيرين ، السيلينيوم (ITS)Sigma-Aldrich11074547001مكمل وسائط زراعة الخلايا
الشريحة المطلية ب ITOمنصة Bruker8237001للحضانة المشتركة
Leibovitz's L-15 MediumGibco11415064Media المستخدمة أثناء الأنسجة تشريح
L-glutamineGibco25030-081ملحق وسائط زراعة الخلايا
الاغاروز منخفض الذوبانSigma-AldrichA9414-10Gممزوج بوسائط للطلاء
حوض الوسائطCorning4870يستخدم لقطع الفواصل البلاستيكية للغرف المقسمة
Penicillin-StreptomycinGibco15140-122مكمل
وسائط زراعة الخلايامعايرة الببتيد القياسيةبروكر دالتونيك8206195عيار لنطاق الكتلة المتوسطة
Phophorus redSigma-Aldrich343-242-5GCaliberrant لنطاق الكتلة المنخفض
SCiLS Lab 2015Bruker DaltonicIMS التحليل الإحصائي لبيانات
الملقط الجراحي (حاد)فيشر08-875-8Bلإزالة المبايض
TFAفيشر تقنياتA116-50تمت إضافتها إلى حل المصفوفة
TM Ssprayتقنيات HTXلتطبيق المصفوفة
برنامج الحصول على بيانات IMS

References

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,
  1. Paine, M. R., et al. Whole Reproductive System Non-Negative Matrix Factorization Mass Spectrometry Imaging of an Early-Stage Ovarian Cancer Mouse Model. PLoS One. 11 (5), e0154837(2016).
  2. Yang, Y. L., Xu, Y., Straight, P., Dorrestein, P. C.

Access restricted. Please log in or start a trial to view this content.

Reprints and Permissions

Request permission to reuse the text or figures of this JoVE article

Request Permission

Tags

Imaging Mass SpectrometryMALDI TOF MSSmall Molecule CommunicationOvarian Cancer MetastasisAgarose CocultureTissue Cell CocultureSample Preparation MethodDesiccation ProcessSpatial IntegrityLabel Free Analysis

Related Articles