مقالة منهجية

التقاط الاتصالات جزيء صغير بين الأنسجة والخلايا باستخدام التصوير الكتلي

DOI:

10.3791/59490

⸱

أبريل 3, 2019

 ,  ,  , 
1Department of Medicinal Chemistry and Pharmacognosy, University of Illinois at Chicago, 2Department of Animal Science, University of Illinois at Urbana-Champaign

في هذه المقالة

ملخص

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

تم وضع طريقة جديدة لإعداد نموذج لاستيعاب كوكولتوري الخلايا والأنسجة للكشف عن تبادل جزيء صغير باستخدام التصوير الطيف الكتلي.

الملخص

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

التصوير الطيف الكتلي (IMS) قد طبق بشكل روتيني إلى ثلاثة أنواع من العينات: مقاطع الأنسجة والماغنيسيوم والمستعمرات الميكروبية. أنواع هذه العينة قد تم تحليلها باستخدام الليزر ساعد مصفوفة الامتزاز/التأين وقت الطيران الطيف الكتلي (TOF استخدام MS) لتصور توزيع البروتينات، والدهون، ونواتج الأيض عبر العينة البيولوجية لمصلحة. لقد قمنا بتطوير أسلوب إعداد نموذج رواية يجمع بين نقاط قوة التطبيقات السابقة الثلاث لمعالجة نهج مستقصاة تحديد الاتصالات الكيميائية في السرطان، ببذر الثقافات الخلية الثديية إلى [اغروس] في كوكولتوري مع الأنسجة السليمة التي تتبعها جفاف العينة. خلايا وأنسجة الثدييات هي كوكولتوريد على مقربة من السماح للاتصالات الكيميائية عن طريق نشرها بين الأنسجة والخلايا. عند نقطة زمنية معينة، هي تجفف العينة على أساس [اغروس] بنفس الطريقة كالمستعمرات الميكروبية التي أعدت لتحليل نظام الرصد الدولي. تم تطوير أسلوبنا لنموذج الاتصال بين الدرجة العالية المستمدة من قناة فالوب كما يتفاعل مع المبيض خلال ورم خبيث سرطان المبيض المصلي. الأمثل لإعداد نموذج أسفرت عن تحديد لإفراز كمكون كيميائية رئيسية في المكروية المبيض. يمكن تطبيق هذه الطريقة المطورة حديثا للنظم البيولوجية الأخرى التي تحتاج إلى فهم للاتصالات الكيميائية بين الخلايا المتجاورة أو الأنسجة.

المقدمة

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

تم تصوير الطيف الكتلي (IMS) الأمثل لتميز التوزيع المكاني للسمات الجزيئية في التطبيقات المستخدمة على نطاق واسع ثلاثة: شرائح الأنسجة، والماغنيسيوم، والمستعمرات الميكروبية1،،من23. يمكن استخدام شرائح الأنسجة لتقييم التعريب من نواتج الأيض في سياق الظروف البيولوجية في مضيف، أما المستهدفة أو غير المستهدفة داخل مجموعة أسلحة معينة. ومع ذلك، الاختلافات بين السمات الجزيئية هي الأكثر كبيرة وواضحة عندما تتم مقارنة أنسجة سليمة إلى حالة مريضة، على سبيل المثال، ورم. هذا النهج نظام الرصد الدولي لا سيما تكييفها للكشف عن المرض المؤشرات الحيوية، ومع ذلك، الحصول على عينات الأنسجة في مراحل متميزة في تطور المرض (مثل درجات الورم) يحول دون تحديد الإشارات التي يمكن أن تكون هامة للبدء المرض. تبادل المعلومات عبر الفضاء ميزة في كل مكان من العديد من النظم البيولوجية، وشرائح الأنسجة لا يمكن التقاط هذه التقوية الكيميائية الحيوية. هو أسلوب واحد قادر على تصور التبادل الكيميائي ونشر نظام الرصد الدولي للمستعمرات الميكروبية التي نمت على لوحات أجار؛ جزيئات صغيرة قادرة على منتشر عبر واجار ويمكن الحصول عليها عن طريق الليزر ساعد مصفوفة الامتزاز/التأين (استخدام-TOF) الكتلي4. هذا الإعداد النمو يمكن استخدامها لتحديد الجزيئات المتبادلة بين الكيانات البيولوجية منفصلة (المستعمرات)، ويمكن أيضا تحديد اتجاه الإنتاج المستقلب. منصة مصممة أصلاً للنمو الميكروبي مستعمرة تم تكييفها لاستكشاف استقلاب الأنسجة explants نمت مع خلايا الثدييات الأولية، وتم استخدام نظام الرصد الدولي لتقييم تبادل المواد الكيميائية الحيوية في نظام الثدييات في المختبر.

في السنوات القليلة الماضية، أصبح من الواضح أن ارتفاع درجة سرطان المبيض المصلي (هجسوك) غالباً ما ينشأ في ظهارة قناة فالوب (FTE) ومستطير ثم إلى المبيض خلال بداية المرض التنمية5،6، 7 , 8-والسبب في أن الخلايا الورمية FTE تنتشر في المبيض، حيث تشكل الأورام الكبيرة في نهاية المطاف والسرطاني كذلك، ليس من الواضح حاليا. وقد ركزت البحوث السابقة حول دور البروتينات المبيض في الابتدائي ورم خبيث على المبيض؛ ومع ذلك، مؤخرا أثبتت أن الانتقال من صحية إلى أنسجة الورمية ينتج الجهوري الأيض الخلوية ويغير إنتاج الجزيئات الصغيرة9،،من1011. ولذلك، افترضنا أن الجزيئات الصغيرة وتبادل بين FTE والمبيض قد تكون مسؤولة جزئيا عن ورم خبيث الأولية من هجسوك.

استخدام لدينا إجراء نظام الرصد الدولي وضعت حديثا، قررنا أن كوكولتوري FTE الورمية وأنسجة المبيض صحية يستحث إنتاج إفراز من المبيض. ومع ذلك، أنواع الخلايا أو الخلايا FTE الطبيعية الأخرى لم تثر هذا التأثير. ميزة غير عادية من هذا الأسلوب هو أنه يمكن تصور إنتاج الجزيئية وتبادل الإشارات التي تمثل الجزيئات الحقيقية، بل وحتى في كوكولتوري فمن الممكن تحديد مصدر إشارة. هذه ميزة على تحليل العينات المتجانس، حيث يتم فقدان كافة المعلومات المكانية. في النظام النموذجي، كنا قادرين على وضوح تعيين إنتاج إفراز المبيض. ارتبط إفراز لورم خبيث وتشيموريسيستانسي من سرطان المبيض، ولدينا اكتشاف هذا الجزيء صادق أن أسلوب IMS رواية يمكن الكشف عن الصلة بيولوجيا الجزيئات12،13، 14-التحقق من الصحة هذا يتيح لنا أن يقترح أن هذا الطلب الجديد لنظام الرصد الدولي يمكن أن يكون مفيداً بشكل خاص البحوث الجماعات التي تسعى لتحديد الجزيئات الصغيرة في البيئات كوكولتوري وفهم الأحداث المبكرة التي تؤثر على تحول الخلايا وورم خبيث. والهدف العام لهذا الأسلوب توضيح هوية والتوزيع المكاني للجزيئات الصغيرة من خلال التبادل بين الأنسجة والأعضاء، ممثلة في المختبر الثقافات الخلية 3D أو السابقين فيفو الأنسجة.

الوصول مقيد. يرجى تسجيل الدخول أو بدء فترة تجريبية لعرض هذا المحتوى.

البروتوكول

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

جميع الإجراءات الحيوان كانت وفقا للمبادئ "التوجيهية الوطنية للمعاهد الصحية" لرعاية واستخدام الحيوانات المختبرية، والتي أقرتها اللجنة "المؤسسية استخدام الحيوان" والرعاية (إياكوك) في جامعة إلينوي في شيكاغو.

1-إعداد الكواشف

  1. الحفاظ على خلايا ظهارة أوفيدوكتال موريني (وزارة التربية والتعليم) في 37 درجة مئوية مع 5% CO2 في حاضنة هوميديفيد في الوسائط الحد الأدنى الأساسية المتوسطة (αMEM) ألفا وتستكمل مع 10% مصل بقرى الجنين (FBS)، 2 مم ل الجلوتامين، الأنسولين 10 ملغ/مل، ترانسفيرين، السيلنيوم (البحث عن) ، 1.8 عامل نمو البشرة من نانوغرام/مليلتر (لو)، 100 يو/مليلتر البنسلين-ستربتوميسين ومع الجنتامايسين 1 ملغ/مل 18.2 نانوغرام/مليلتر استراديول-17β. تمر الخلايا كل 3 – 4 أيام، وضمان وجود ما يكفي من خلايا في نفس اليوم سيتم التضحية الفئران.
  2. إعداد 2% [اغروس] عن طريق خلط 1 غ من ذوبان منخفضة [اغروس] مع 50 مل ماء المقطر. اﻷوتوكﻻف [اغروس]، السماح لتبرد، وأنابيب قاسمة ثم (1 مل) في 2 مل (انظر الجدول للمواد) قبل أن يتصلب [اغروس]. ويمكن تخزين [اغروس] في-20 درجة مئوية إلى أجل غير مسمى.
  3. إعداد على الأقل 2 مل من المتوسطة (دميم) وسائل الإعلام "تعديل النسر" دولبيكو س 1 ل.
  4. للمصفوفة لاستخدام TOF مرض التصلب العصبي المتعدد، وإعداد 10 مل من 5 ملغ/مل حمض ألفا-سينو-4-هيروكسيسيناميك 1:1 (شكا): حمض ديهيدروكسيبينزويك (المجالس الصحية المحلية) (انظر الجدول للمواد) في 90:10 ACN:H2س + 0.1% حامض trifluoroacetic (تفا). Sonicate الحل حتى يذوب المصفوفة.

2-الفأر مستعمرة وإزالة المبيض

  1. الحفاظ على أزواج تربية فئران CD-1 استخدام إجراءات الإسكان القياسية. قرب يوم الولادة، تحقق الفئران يوميا حيث أن سن الجراء المعروف.
  2. Euthanize الجراء في الأيام 16-18 من العمر باستنشاق أول أكسيد الكربون2 كل المبادئ التوجيهية للمعاهد الوطنية للصحة. تسليم أول أكسيد الكربون2 (100%) في تدفق غرفة التخزين في الدقيقة معدل من 10 – 20% وتستمر لمدة دقيقتين بعد أن توقف عن التنفس. تأكيد القتل الرحيم بخلع عنق الرحم.
  3. تطهير جميع المعدات الجراحية التي غمر في الإيثانول 70%. الحارة L-15 الوسائط في ليبوفيتش مع البنسلين-ستربتوميسين 1 x إلى 37 درجة مئوية.
  4. الرطب على سطح البطن مع الإيثانول 70% لتطهير المنطقة والتقليل من التلوث مع الشعر. فهم الجلد الذي يغطي جدار البطن باستخدام كليلة الملقط واستخدام مقص جراحي جعل كبير الشكل الخامس قطع عن طريق الجلد وجدار البطن، تعريض الأجهزة الداخلية.
  5. نقل الأجهزة الداخلية إلى جانب استخدام الملقط. منفردة الاستيلاء على كل القرن الرحم مع الملقط غرامة ورفع قليلاً.
  6. قم بتحديد موقع المبيض، التي ستكون في نهاية القرن الرحم، مباشرة أسفل الكلي. استخدم المقص الجراحي لتشريح المبيض خالية من النسيج الضام. بعد ذلك، قص القرن المبيض في النصف.
  7. نقل المبيض وقناة، ونحو واحد النصف من كل القرن الرحم ب L-15 وسائل الإعلام حرارة قبل ليبوفيتش.
  8. تحت مجهر تشريح الانتقال بعناية كل المبيض من الجراب المحيطة، تخليصه من قناة وبورصة وأي الأنسجة الدهنية. نقل كل المبيض إلى طبق جديد من الوسائط L-15 ليبوفيتش.
  9. قص كل المبيض في نصف محوريا. الاحتفاظ بالقطع المبيض (تسمى الآن اكسبلانتس) أبقى على 37 درجة مئوية حتى الطلاء من [اغروس].

3-إعداد وتفرخ الشريحة تعامل إيتو كوكولتوريس

  1. كوكولتوريس غير مجزأة
    1. التسييل [اغروس] في 70 درجة مئوية على طبق ساخن.
    2. ضع فاصل 8-جيدا على رأس تينوكسيدي الإنديوم (إيتو)-شريحة المعالجة (الشكل 1A). الإيدز أسفل المطاط على الحد الفاصل في الالتصاق للشريحة، ولكن تأكد من أن تطبيق الضغط النزولي لطيف المستمر أثناء الطلاء [اغروس] لضمان لا تسرب أو خلط بين الآبار.
    3. جمع الخلايا في أنبوب مخروطي 15 مل، أجهزة الطرد المركزي (5 دقائق 800 لفة في الدقيقة)، وريسوسبيند إلى 50 ك الخلايا الواحدة 150 ميليلتر في وسائل الإعلام x DMEM 1. إذا كانت كثافة خلية مختلفة الأمثل، تأكد من أن تعليق خلية في هذه الخطوة هو 2 x الكثافة النهائية المطلوبة (مثلاً، لتركيز خلايا 50,000 في 300 ميليلتر، كثافة الخلية في هذه الخطوة نهائية خلايا 50,000 في 150 ميليلتر).
    4. إضافة explant المبيض قبل طلاء الخلية والثقافة، إلى مركز للبئر (الشكل 1B).
    5. إضافة [اغروس] لكل ثقافة الخلية في أنابيب فردية 2 مل فقط قبل الطلاء. لكل بئر، ضم 200 ميليلتر من تعليق خلية و 200 ميليلتر من [اغروس] السائل في أنبوب 2 مل. على سبيل المثال، لأربعة آبار، الجمع بين 800 ميليلتر من تعليق خلية و 800 ميليلتر من 2% [اغروس]. بعض الخليط سوف يكون خلفها، ولكن مما يجعل قليلاً أكثر من اللازم تجنب فقاعات الهواء أثناء بيبيتينج.
      1. إضافة [اغروس] إلى الثقافات الخلية الفردية قبل طلاء تلك الثقافة الخلية مباشرة. وسوف بارد في أقل من دقيقة [اغروس]، حتى تكون مستعدة للوحة بسرعة.
    6. فور إضافة 300 ميليلتر من الخليط خلية/[اغروس] لكل بئر (الشكل 1). ويبين الشكل 1 ثلاثة ظروف الخلية وحالة واحدة من وسائل الإعلام، وبعضها مطلي مع أو بدون مبيض.
    7. احتضان شريحة في 37 درجة مئوية و 5% CO2 في حاضنة هوميديفيد.
  2. كوكولتوريس المقسمة.
    1. قطع فواصل من البلاستيك رقيقة، ناعمة (الشكل 2A).
      ملاحظة: يستخدم هذه التجربة على جانبي حوض العقيمة الوسائط القابل للصرف لأنها مسطحة ورقيقة. قطع منها مجرد واسعة بما يكفي تناسب بشكل مريح في وتر البئر (~ 13 مم).
    2. التسييل [اغروس] في 70 درجة مئوية على طبق ساخن.
    3. ضع فاصل 8-جيدا على رأس الشريحة تعامل إيتو (الشكل 2). الإيدز أسفل المطاط على الحد الفاصل في الالتصاق للشريحة، ولكن تأكد من أن تطبيق الضغط النزولي لطيف المستمر أثناء الطلاء [اغروس] لضمان لا تسرب أو خلط بين الآبار.
    4. جمع الخلايا في أنبوب مخروطي 15 مل، أجهزة الطرد المركزي (5 دقائق 800 لفة في الدقيقة)، وريسوسبيند إلى 50 ك الخلايا الواحدة 150 ميليلتر في وسائل الإعلام x DMEM 1. إذا كانت كثافة خلية مختلفة الأمثل، تأكد من أن تعليق خلية في هذه الخطوة هو 2 × كثافة النهائي المطلوب (مثلاً لتركيز نهائي من الخلايا 50,000 في 300 ميليلتر، كثافة الخلية في هذه الخطوة هو الخلايا 50,000 في 150 ميليلتر).
    5. إدراج فواصل بلاستيكية قطرياً في الآبار (الشكل 2).
    6. إضافة [اغروس] لكل تعليق خلية واحدة في وقت واحد فقط قبل الطلاء. لكل بئر، الجمع بين 100 ميليلتر من تعليق خلية و 100 ميليلتر من [اغروس] السائل في أنبوب 2 مل. على سبيل المثال، لأربعة آبار، الجمع بين 400 ميليلتر من ثقافة الخلية و 400 ميليلتر من 2% [اغروس]. سوف يكون خلفها بعض الخليط خلية/[اغروس] ولكن صنع قليلاً أكثر من اللازم تجنب فقاعات الهواء أثناء بيبيتينج.
      1. إضافة [اغروس] إلى الثقافات الخلية الفردية قبل طلاء تلك الثقافة الخلية مباشرة. وسوف بارد في أقل من دقيقة [اغروس]، حتى تكون مستعدة للوحة بسرعة.
    7. على جانب واحد من المفرق، لوحة 150 ميليلتر من الخليط خلية/[اغروس]. يسمح [اغروس] بارد وترسيخ (حوالي دقيقة واحدة) ثم قم بإزالة الفاصل (الشكل 2D).
    8. ضع explant المبيض في وسط النصف الفارغ من البئر. مكان 150 ميليلتر وسائل الإعلام/[اغروس] خليط عبر أعلى المبيض، وفقط في الجانب الصحيح من البئر (الشكل 2E).
    9. احتضان شريحة في 37 درجة مئوية و 5% CO2 في حاضنة هوميديفيد.

4-تجفيف الشريحة والتحضير لاستخدام TOF مرض التصلب العصبي المتعدد

  1. بعد أربعة أيام (أو أي نقطة الوقت المفضل)، إزالة الفاصل الدائرة من المقابس [اغروس] والشريحة (الشكل 1). فصل الجانبين من [اغروس] من الدائرة برفق بملعقة مسطحة واجذب الدائرة إلى الأعلى، مع الحرص على عدم تحريك أي المقابس [اغروس]. إذا تحركت، بلطف موضعها حتى أن أنهم لا لمس بعضها البعض.
  2. ضع الشريحة في فرن 37 درجة مئوية لحوالي 4 ح، تدوير 90° كل ح.
    ملاحظة: تناوب الشريحة مهم لضمان توزيع الحرارة حتى في جميع أنحاء العينة.
  3. وبمجرد جفاف، إزالة الشريحة من الفرن (الشكل 1E).
  4. تطبيق الحل مصفوفة باستخدام البخاخ (الشكل 1F)، مع المعلمات التالية: درجة الحرارة = 30 درجة مئوية، ومعدل التدفق = 0.2 مل/دقيقة، عدد تصاريح الدخول = 8، الاتجاه = CC، وفوهة المسافة = 40 مم.
    ملاحظة: يمكن استخدام بخاخة فنية لتطبيق مصفوفة السائل عوضاً عن بخاخ مصفوفة،. يمكن استخدام نفس الحل مصفوفة للرش، ولكن تقريبا ضعفي الحل المطلوب. مع الشريحة فرضت ذلك لأنها معلقة عمودياً، رذاذ الشريحة من زاوية 90 درجة من ما يقرب من قدم واحدة بعيداً (مواءمة من هوفمان15) حتى المصفوفة طبقة مرئية.
  5. أضف 1 ميليلتر من كاليبرانت (الفوسفور الأحمر لأهداف < 500 دا، خليط ببتيد (انظر الجدول للمواد) لأهداف < دا 5,000) إلى تركيز واضح على الشريحة. الفوسفور الأحمر يتطلب لا خلط مع المصفوفة، ولكن يتطلب الخليط الببتيد الخليط 1:1 مع مصفوفة المعونة التأين. انتظر كاليبرانت لتجف.
  6. رسم علامة X باستخدام علامة دائمة في كل زاوية الشريحة وتأخذ صورة ضوئية باستخدام كاميرا أو ماسح ضوئي على 1,200 نقطة في البوصة.

5-تصوير الطيف الكتلي اقتناء البيانات

  1. فتح تسلسل جديد في برنامج تحليل بيانات نظام الرصد الدولي (انظر الجدول للمواد). تعيين العرض النقطية إلى القرار المكاني المطلوب، على الأقل 50 ميكرومتر.
  2. تحميل الصورة الضوئية للشريحة لبرمجيات التحليل وتعليم تعيين ثلاث نقاط باستخدام التقاطعات في العاشر في كل زاوية.
  3. تعيين المناطق ذات الاهتمام للتصوير في اقتناء البرمجيات واسم لها تبعاً لذلك.
  4. معايرة هذا الصك باستخدام البرمجيات اقتناء البيانات (انظر الجدول للمواد) داخل خطأ 5 جزء في المليون.
  5. حفظ الأسلوب الأمثل وبدء التشغيل. هذه التجربة الأمثل المعلمات التالية: الأقطاب = إيجابية وكاشف = ريفليكترون، حجم الليزر = 2، طاقة الليزر = 50%، مكسب للكشف عن وضع عاكس = 3 x.

6-تجهيز بيانات نظام الرصد الدولي

  1. استيراد ملف.mis في البرامج الإحصائية (انظر الجدول للمواد) لتحليل أهمية.

الوصول مقيد. يرجى تسجيل الدخول أو بدء فترة تجريبية لعرض هذا المحتوى.

النتائج

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

سيؤدي إلى شريحة إيتو مجففة على النحو الأمثل في عينة يهتمان مسطحة مع الحد الأدنى للا التجاعيد عبر السطح [اغروس] و [اغروس] القطع التي تحافظ على الفصل المكاني على الشريحة (الشكل 3). ويبين الشكل 3 ألف التجفيف المثلى، بينما يبين الشكل 3B التجاعيد التي ينبغي تجنبها. هذا التحسين يتطلب حذراً من رصد للشريحة في الفرن، كما يمكن أن تختلف أوقات الضبط استناداً إلى الرطوبة النسبية. بينما التجاعيد يمكن أن تؤثر قليلا...

الوصول مقيد. يرجى تسجيل الدخول أو بدء فترة تجريبية لعرض هذا المحتوى.

المناقشة

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

وهناك مجموعة متزايدة من الأدلة التي تورط الدور في إفراز هجسوك12،،من1718، وقد أسهم هذا التقنية المعلومات آليا إلى أكثر. مع الظروف البيولوجية على الأقل ثمانية موجودة على الشريحة نفسها، يمكن أن تمثل الأسلوب لعناصر بيولوجية مثل الجينات وخصوصية الخلية، فضلا عن ضوابط وسائل الإعلام في IMS واحد تشغيل. في حين كان الأسلوب الأمثل لتقييم وتبادل الجزيئات الصغيرة في نموذج لورم خبيث الابتدائية في هجسوك، أي خلية أو نوع الأنسجة التي يمكن وضعها ف...

الوصول مقيد. يرجى تسجيل الدخول أو بدء فترة تجريبية لعرض هذا المحتوى.

الإفصاحات

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

الكتاب لا تمت بصلة إلى الكشف عن

شكر وتقدير

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

تم تمويل الكونسورتيوم شيكاغو الطبية بدعم من "أموال سيرل" في "شيكاغو المجتمع الأمانة" (C-076) (L.M.S.)؛ وتمول جامعة إلينوي في شيكاغو بدء التشغيل (L.M.S.)؛ منح 543296 من التحالف صندوق أبحاث سرطان المبيض (دكتوراه في الطب)؛ و UG3 ES029073 (J.E.B.)، والمركز الوطني للنهوض متعدية العلوم، المعهد الوطني للصحة، من خلال منحة UL1TR002003 (جيب & سكاي لأب المذكورة).

الوصول مقيد. يرجى تسجيل الدخول أو بدء فترة تجريبية لعرض هذا المحتوى.

المواد

قائمة المواد المستخدمة في هذه المقالة
الاسمالشركةرقم فهرسيالتعليقات
15 مل أنابيب الصقر DenvilleC1017-Oلجمع الخلايا
غرفة 8 آبار (غرفة Millipore EZ-slide)MilliporePEZGS0816إعادة توجيهها من Millipore Millicell EZ-slide غرفة
شريحة AcetonitrileSigma-Aldrich34998-4Lمذيب لرش المصفوفة
ألفا الحد الأدنى من الوسط الأساسي (& ألفا ؛ MEM)Fisher10-022-CVوسائط ثقافة الخلية
سرعة Autoflex MALDI-TOF LRFBrukerلتحليل بيانات IMS
جهاز طرد مركزيEppendorf5810 Rلجمع الخلايا وإزالة
مصفوفة CHCAالطافية Bruker Daltonic8201344Matrix التي تم رشها على شريحة مجففة
DHB MatrixBruker Daltonic8201346Matrix تم رشها على الشريحة المجففة
المشارط المتاحفيشر22-079-707لإزالة المبايض
تشريح مقصفيشر13-804-6لإزالة المبايض
DMEM MediaGibco11995-065وسائل الإعلام ممزوجة بعامل
نمو البشرةالاغاروز Peprotech Inc.100-15مكمل وسائط زراعة الخلايا
أنابيب EppendorfGenesee Scientific22-282لأغاز الآغاروز
Estradiol-17 & beta ؛Simga-AldrichE2758مكمل وسائط زراعة الخلايا
مصل الأبقار الجنينيDenvillefb5001ملحق وسائط زراعة الخلايا
FlexControl 3.4Bruker DaltonicIMS
FlexImaging 4.1برنامج تحليل بياناتBruker Daltonic
ملقط (جيد)Fsiher22-327379لإزالة المبايض
GentamycinCellgro30-005-CRمكمل وسائط زراعة الخلايا
الأنسولين ، ترانسفيرين ، السيلينيوم (ITS)Sigma-Aldrich11074547001مكمل وسائط زراعة الخلايا
الشريحة المطلية ب ITOمنصة Bruker8237001للحضانة المشتركة
Leibovitz's L-15 MediumGibco11415064Media المستخدمة أثناء الأنسجة تشريح
L-glutamineGibco25030-081ملحق وسائط زراعة الخلايا
الاغاروز منخفض الذوبانSigma-AldrichA9414-10Gممزوج بوسائط للطلاء
حوض الوسائطCorning4870يستخدم لقطع الفواصل البلاستيكية للغرف المقسمة
Penicillin-StreptomycinGibco15140-122مكمل
وسائط زراعة الخلايامعايرة الببتيد القياسيةبروكر دالتونيك8206195عيار لنطاق الكتلة المتوسطة
Phophorus redSigma-Aldrich343-242-5GCaliberrant لنطاق الكتلة المنخفض
SCiLS Lab 2015Bruker DaltonicIMS التحليل الإحصائي لبيانات
الملقط الجراحي (حاد)فيشر08-875-8Bلإزالة المبايض
TFAفيشر تقنياتA116-50تمت إضافتها إلى حل المصفوفة
TM Ssprayتقنيات HTXلتطبيق المصفوفة
برنامج الحصول على بيانات IMS

المراجع

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,
  1. Paine, M. R., et al. Whole Reproductive System Non-Negative Matrix Factorization Mass Spectrometry Imaging of an Early-Stage Ovarian Cancer Mouse Model. PLoS One. 11 (5), e0154837(2016).
  2. Yang, Y. L., Xu, Y., Straight, P., Dorrestein, P. C. Translating Metabolic Exchange with Imaging Mass Spectrometry. Nature Chemical Biology. 5 (12), 885-887 (2009).
  3. Li, H., Hummon, A. B. Imaging Mass Spectrometry of Three-Dimensional Cell Culture Systems. Analytical Chemistry. 83 (22), 8794-8801 (2011).
  4. Yang, J. Y., et al. Primer on Agar-Based Microbial Imaging Mass Spectrometry. Journal of Bacteriology. 194 (22), 6023-6028 (2012).
  5. Coscia, F., et al. Integrative Proteomic Profiling of Ovarian Cancer Cell Lines Reveals Precursor Cell Associated Proteins and Functional Status. Nature Communications. 7, 12645(2016).
  6. Labidi-Galy, S. I., et al. High Grade Serous Ovarian Carcinomas Originate in the Fallopian Tube. Nature Communications. 8 (1), (2018).
  7. Klinkebiel, D., Zhang, W., Akers, S. N., Odunsi, K., Karpf, A. R. DNA Methylome Analyses Implicate Fallopian Tube Epithelia as the Origin for High-Grade Serous Ovarian Cancer. Molecular Cancer Research. 14 (9), 787-794 (2016).
  8. Falconer, H., Yin, L., Gronberg, H., Altman, D. Ovarian Cancer Risk After Salpingectomy: A Nationwide Population-Based Study. JNCI Journal of the National Cancer Institute. 107 (2), dju410(2015).
  9. Dean, M., Davis, D. A., Burdette, J. E. Activin A Stimulates Migration of the Fallopian Tube Epithelium, an Origin of High-Grade Serous Ovarian Cancer, through Non-Canonical Signaling. Cancer Letters. 391, 114-124 (2017).
  10. King, S. M., Burdette, J. E. Evaluating the Progenitor Cells of Ovarian Cancer: Analysis of Current Animal Models. BMB Reports. 44 (7), 435(2011).
  11. Reznik, E., et al. Landscape of Metabolic Variation across Tumor Types. Cell Systems. 6 (3), 301-313 (2018).
  12. Watkins, J. L., et al. Clinical Impact of Selective and Nonselective Beta-Blockers on Survival in Patients with Ovarian Cancer: Beta-Blockers and Ovarian Cancer Survival. Cancer. 121 (19), 3444-3451 (2015).
  13. Lutgendorf, S. K., et al. Stress-Related Mediators Stimulate Vascular Endothelial Growth Factor Secretion by Two Ovarian Cancer Cell Lines. Clinical Cancer Research. 9 (12), 4514-4521 (2003).
  14. Sood, A. K. Stress Hormone-Mediated Invasion of Ovarian Cancer Cells. Clinical Cancer Research. 12 (2), 369-375 (2006).
  15. Hoffmann, T., Dorrestein, P. C. Homogeneous Matrix Deposition on Dried Agar for MALDI Imaging Mass Spectrometry of Microbial Cultures. Journal of The American Society for Mass Spectrometry. 26 (11), 1959-1962 (2015).
  16. Zink, K. E., Dean, M., Burdette, J. E., Sanchez, L. M. Imaging Mass Spectrometry Reveals Crosstalk between the Fallopian Tube and the Ovary That Drives Primary Metastasis of Ovarian Cancer. ACS Central Science. 4 (10), 1360-1370 (2018).
  17. Armaiz-Pena, G. N., et al. Src Activation by β-Adrenoreceptors Is a Key Switch for Tumour Metastasis. Nature Communications. 4, 1403(2013).
  18. Choi, M. J., et al. HTERT Mediates Norepinephrine-Induced Slug Expression and Ovarian Cancer Aggressiveness. Oncogene. 34 (26), 3402(2015).

الوصول مقيد. يرجى تسجيل الدخول أو بدء فترة تجريبية لعرض هذا المحتوى.

إعادة الطباعة والأذونات

طلب إذن لإعادة استخدام النص أو الأشكال في مقالة JoVE هذه

طلب إذن

الوسوم

Imaging Mass SpectrometryMALDI TOF MSSmall Molecule CommunicationOvarian Cancer MetastasisAgarose CocultureTissue Cell CocultureSample Preparation MethodDesiccation ProcessSpatial IntegrityLabel Free Analysis

مقالات ذات صلة