نحن وصف طريقه في الحل لتطبيق القص موحده لمستقبلات سطح الصفائح الدموية باستخدام مخروط لوحه الرؤية. ويمكن أيضا استخدام هذه الطريقة علي نطاق أوسع لتطبيق القص علي أنواع الخلايا الأخرى وشظايا الخلايا ولا تحتاج إلى استهداف زوج محدد للمستقبلات.
يتطلب اشتراك JoVE لعرض هذا المحتوى. تسجيل الدخول أو ابدأ نسخة تجريبية مجانية
مقالة منهجية
فحص القص الموحد للصفيحات البشرية ومستقبلات سطح الخلية عبر اللوحة المخروطية
في هذه المقالة
ملخص
الملخص
العديد من الخلايا البيولوجية/الانسجه الشعور الخواص الميكانيكية للبيئات المحلية عن طريق المستقبلات اليه ، والبروتينات التي يمكن ان تستجيب لقوي مثل الضغط أو الاضطرابات الميكانيكية. المستقبلات الميكانيكية الكشف عن المحفزات ونقل الإشارات عبر تنوع كبير من أليات. بعض الأدوار الأكثر شيوعا للمستقبلات الميكانيكية هي في الاستجابات العصبية ، مثل اللمس والم ، أو خلايا الشعر التي تعمل في التوازن والسمع. الميكانيكية هي أيضا مهمة لأنواع الخلايا التي تتعرض بانتظام للإجهاد القص مثل الخلايا البطانية ، التي الاوعيه الدموية الخط ، أو خلايا الدم التي تواجه القص في الدورة الدموية العادية. عدادات الرؤية هي الاجهزه التي تكتشف لزوجه السوائل. كما يمكن استخدام مقاييس الرؤية التناوبية لتطبيق قوه قص معروفه علي السوائل. وقد استغلت قدره هذه الاداات علي إدخال القص الموحد علي السوائل لدراسة العديد من السوائل البيولوجية بما في ذلك الدم والبلازما. كما يمكن استخدام القياس البصري لتطبيق القص علي الخلايا في المحلول ، ولاختبار تاثيرات القص علي أزواج محدده من الحروف والمستقبلات. هنا ، ونحن نستخدم مخروط لوحه الرؤية لاختبار اثار المستويات المحلية من الإجهاد القص علي الصفائح الدموية التعامل مع الأجسام المضادة ضد الصفائح الدموية الميكانيكية مجمع مستقبلات GPIb التاسع.
المقدمة
المستقبلات اليه هي البروتينات التي تستجيب للمؤثرات الميكانيكية ، مثل الضغط أو الاضطراب الميكانيكي/التشوه. بالنسبة لبعض المستقبلات اليه ، فان استشعار هذه الاضطرابات الميكانيكية واضح لوظيفة أنواع الخلايا التي يتم التعبير عنها. تاخذ ، علي سبيل المثال ، مستقبلات تمتد في الخلايا العصبية مستقبلات البارونات. هذه القناات أيون الميكانيكية تنظيم ضغط الدم عن طريق استشعار الاوعيه الدموية "تمتد"1,2. في الاذن الداخلية ، وقناات أيون علي خلايا الشعر الكشف عن تشوات الميكانيكية الناجمة عن الموجات الصوتية3، والجلدية عتبه منخفضه الميكانيكية المستقبلات (ltmrs) تسهيل نقل المعلومات عن طريق اللمس
الوصول مقيد. يرجى تسجيل الدخول أو بدء فترة تجريبية لعرض هذا المحتوى.
البروتوكول
تمت الموافقة علي جميع الطرق التي تستخدم الصفائح الدموية المستمدة من المتبرعين الموصوفة هنا من قبل مجلس المراجعة المؤسسية لجامعه أموري/الرعاية الصحية للأطفال في أتلانتا.
1. سحب الدم وعزل الصفائح الدموية
- رسم الدم البشري من المتبرعين الكبار صحية بالتراضي عن طريق بزل في يوم التجربة إلى 3.8 ٪ سيترات الصوديوم. أنبوب واحد 4.5 mL من الدم يكفي لإنتاج ما يكفي من البلازما الغنية بالصفائح الدموية (PRP) لظروف 20-25 في الجهات المانحة التي تهم الصفائح الدموية قريبه من 250 x 103 لكل μl.
ملاحظه: تجنب رسم الدم عن طريق الابر مقياس ضيق (أصغر من 21 G). - اعداد PRP عن طريق طرد في 22 درجه مئوية و 140 x g لمده 12 دقيقه مع ا....
الوصول مقيد. يرجى تسجيل الدخول أو بدء فترة تجريبية لعرض هذا المحتوى.
النتائج
يوضح الشكل 1 كيف يمكن للنموذج المشغل لتنشيط GPIb-IX ، الذي تم إدخاله في البداية لشرح تنشيط المستقبلات التي تعتمد علي القص عند الارتكاز علي جدار الوعاء ، ان يدعم أيضا تنشيط الصفائح الدموية التي يتم ربطها بواسطة الاربطه متعددة التكافؤ. ويبين الشكل 2 عمليات القراءة لتنشيط الصفائح الدموية البشرية التي يعالجها جهازان من الأجسام المضادة التي تستهدف مجال N-Terminal من gpib-IX (6B4 و 11A8) ، والأجسام المضادة للتحكم (المفتش العادي) تحت ظروف الشبع والثابتة. في
الوصول مقيد. يرجى تسجيل الدخول أو بدء فترة تجريبية لعرض هذا المحتوى.
المناقشة
يسمح البروتوكول الموصوف في هذه المخطوطة باجراء تقييم سريع ومتعدد الاستعمالات لتاثير القص الصفي علي مستقبلات الصفائح الدموية وسطح الخلية. وتبرز النتائج التمثيلية المحددة المقدمة هنا كيف يمكن ان تتاثر اثار اللزوجة الثنائية أو الثنائية التكافؤ بتدفق القص. بالاضافه إلى هذا التطبيق ، والفحص القص موحده لديها تطبيقات واسعه في مراقبه الآثار التي تعتمد علي القص. في حاله عدم وجود زوج من الاربطه والمستقبلات المعروفة ، يمكن لفحص القص الموحد أيضا الكشف عن تاثيرات القص علي عوامل مثل شكل الخلية والإشارات ، خاصه عند اقترانها بتحليلات ال.......
الوصول مقيد. يرجى تسجيل الدخول أو بدء فترة تجريبية لعرض هذا المحتوى.
الإفصاحات
وليس لدي المؤلفين ما يفصحون عنه.
شكر وتقدير
وقد تم دعم العمل المتعلق بهذه الدراسة جزئيا من قبل المعاهد الوطنية للصحة والقلب والرئة ومعهد الدم منح HL082808 ، HL123984 (ار ال) ، و F31HL134241 (M.E.Q.). التمويل المقدم أيضا من المعهد الوطني للصحة القومية للعلوم الطبية العامة منحه T32GM008367 (M.E.Q.) ؛ وصناديق المنح التجريبية من الرعاية الصحية للأطفال من أتلانتا وأموري جامعه تدفق الأطفال الخلوية الاساسيه. ويود المؤلفون ان يشكروا الدكتور هانز ديميون لمشاركتهم الأجسام المضادة 6B4 ، ومركز بحوث الأطفال الخاص بالطفل الذي يقوم بالتدفق الخلوي الأساسي للدعم التقني.
....الوصول مقيد. يرجى تسجيل الدخول أو بدء فترة تجريبية لعرض هذا المحتوى.
المواد
| الاسم | الشركة | رقم فهرسي | التعليقات |
|---|---|---|---|
| APC مضاد للإنسان CD62P (P-Selectin) | BioLegend | 304910 | |
| Brookfield Cap 2000+ مقياس اللزوجة | |||
| Erythrina cristagalli lectin (ECL) | Vector Labs | FL-1141 | |
| Pooled Normal Plasma Human | Precision Biologic | CCN-10 | |
| Vacutainer أنبوب جمع الدم الأزرق الفاتح (سترات الصوديوم) | BD | 369714 | |
| مجموعة جمع الدم بالمكنسة الكهربائية ، 21G x ¾ ؛ " إبرة | BD 367287 |
المراجع
- Sullivan, M. J., et al. Non-voltage-gated Ca2+ influx through mechanosensitive ion channels in aortic baroreceptor neurons. Circulation Research. 80 (6), 861-867 (1997).
- Lansman, J. B., Hallam, T. J., Rink, T. J. Sing....
الوصول مقيد. يرجى تسجيل الدخول أو بدء فترة تجريبية لعرض هذا المحتوى.
إعادة الطباعة والأذونات
