والطيف الكتلي الترادفي (MS/MS) هو أسلوب طيفي للكتلة يستخدم علي نطاق واسع وينطوي علي عزل أيون السلائف والحث علي التجزؤ عن طريق استخدام طاقة التنشيط مثل التفكك المستحث بالاصطدام (CID)1. الطريقة التي تكون فيها شظايا الأيونات مرتبطة ارتباطا وثيقا ببنيتها الجزيئية. وغالبا ما تكون المنتجات الطبيعية بيوسينثيسيزيد كخليط من مركبات مماثله هيكليا بدلا من كماده كيميائية واحده فريدة من نوعها2. وعلي هذا النحو ، فان المركبات ذات الصلة الهيكلية التي تشكل جزءا من نفس الفئة الحيوية غالبا ما تشترك في خصائص تجزئه MS/MS الرئيسية ، بما في ذلك أيونات المنتجات المشتركة و/أو الخسائر المحايدة. القدرة علي فحص العينات المعقدة للمركبات التي تمتلك أيونات المنتجات الخاصة بالفئة و/أو الخسائر المحايدة هي استراتيجية قويه للكشف عن فئات كامله من المركبات ، مما قد يؤدي إلى اكتشاف المنتجات الطبيعية الجديدة3، 4 , 5 , 6-وعلي مدي عقود ، سمحت أساليب قياس الطيف الكتلي مثل المسح المحايد للخسارة والفحص بالسلائف الايونيه باستخدام أدوات منخفضه الاستبانة بالكشف عن الأيونات التي لها نفس الخسارة المحايدة أو أيونات المنتجات. ومع ذلك ، الأيونات المحددة أو التحولات اللازمة ليتم تعريفها قبل تنفيذ التجارب. ونظرا لان مقاييس الطيف الكتلي العالية الاستبانة أصبحت أكثر شيوعا في مختبرات البحوث ، فان العينات المعقدة تخضع الآن للفحص الشائع باستخدام أساليب الحيازة غير المستهدفة والمعتمدة علي البيانات (DDA). وعلي النقيض من الفقدان المحايد التقليدي والفحص الأيوني للسلائف ، يمكن تحديد المركبات المرتبطة هيكليا بتحليل ما بعد الاقتناء7. في هذا العمل ، ونحن نظهر استراتيجية وضعناها تسمي تصفيه التجزئة التشخيصية (قوات الأمر الأمر)5،6، نهج مستقيم إلى الامام وسهل الاستخدام للكشف عن فئات كامله من المركبات داخل المصفوفات المعقدة. وقد تم تنفيذ هذه الوحدة في قوات الأمر الجديد في منصة مفتوحة المصدر ، MZmine 2 والمتاحة عن طريق تحميل MZmine 2.38 أو أحدث الإصدارات. الأمر الذي يسمح للمستخدمين بفحص مجموعات بيانات DDA بكفاءة لأطياف MS/MS التي تحتوي علي أيونات المنتجات و/أو الخسارة المحايدة التي يتم تشخيصها لفئات كامله من المركبات. الحد من قوات الأمر الذي هو أيونات المنتج المميزة و/أو الخسائر المحايدة لفئة من المركبات يجب ان يحددها المحلل.
علي سبيل المثال ، كل واحد من أكثر من 60 المختلفة فومونوزين فطري المحددة8،9 تمتلك سلسله الجانب tricarballylic ، التي تولد m/z 157.0142 (C6H5س5-) أيون المنتج علي تجزؤ [م-ح]- أيون4. ولذلك ، يمكن الكشف عن جميع والفيومونسنات المفترضة في عينه باستخدام قوات الوضع الخاصة عن طريق فحص جميع أطياف ms/ms داخل مجموعه بيانات DDA التي تحتوي علي البارز m/z 157.0142 المنتج أيون. المثل ، يمكن الكشف عن المركبات الكبريت عن طريق فحص مجموعات بيانات DDA لأطياف MS/MS التي تحتوي علي فقدان محايد تشخيصي 79.9574 Da (SO3)3. وقد تم تطبيق هذا النهج أيضا بنجاح للكشف عن الببتيدات دوري جديد5 والمنتجات الطبيعية التي تحتوي علي بقايا التربتوفان أو فينيلالانين6.
لإظهار فعاليه قوات الأمر الأمر وسهوله استخدامها داخل منصة MZmine10، قمنا بتطبيق هذا النهج علي تحليل الميكرومثانه فئة من أكثر من 240 السموم ذات الصلة هيكليا التي تنتجها سيانوكوبالامين المياه العذبة11,12,13.
والأكثر شيوعا هو السميات المزرقة المبلغ عنها ، مع المتجانس MC-LR (ليوسين [L]/ارجينين [R]) الأكثر كثيرا دراسة (الشكل 1). الطحالب المجهرية الاحاديه غير الريبوميه غير المشبعة بالمكورات العنقودية ، بيوسينثيسيزيد من قبل البكتيريا الزرقاء المتعددة أجناس بما في ذلك microcystis ، انابينا ، nostoc ، و planktothrix12،13. وتتكون من خمسه بقايا مشتركه واثنين من المواقع المتغيرة التي تحتلها الأحماض الامينيه L. ما يقرب من جميع الاشراف علي المخدرات تمتلك السمة β-الأحماض الامينيه 3-الامينيه-9-ميثوكسي-2 ، 6 ، 8-تريميثيل-10-فينيلعشاري-4 ، 6-دايندييك حمض (إدا) بقايا في الموقف 511. ويرد وصف جيد لمسارات التجزئة ms/ms من الاشراف علي الاشراف14،15؛ بقايا إدا هي المسؤولة عن ms/ms المنتج البارز ، m/z 135.0803 + (C9H11O +) وكذلك أيونات المنتجات الأخرى بما في ذلك m/z 163.1114 + (c11H 15 O +) (الشكل 2). ويمكن فحص مجموعات بيانات DDA غير المستهدفة من مقتطفات Microcystis الزنجاريه الخلوية لجميع المجهريات الموجودة باستخدام هذه الأيونات التشخيصية ، والتي منحت ان الميكرومثانه لديها بقايا إدا.