يصف البروتوكول الحالي طرق إنشاء نماذج xenograft (PDX) المستمدة من المريض وخطوط الخلايا السرطانية الأولية من عينات سرطان المعدة الجراحية. وتوفر هذه الأساليب أداة مفيدة لتطوير المخدرات وبحوث بيولوجيا السرطان.
يتطلب اشتراك JoVE لعرض هذا المحتوى. تسجيل الدخول أو ابدأ نسخة تجريبية مجانية
مقالة منهجية
إنشاء نماذج Xenograft المستمدة من سرطان المعدة وخطوط الخلايا الأولية
* These authors contributed equally
في هذه المقالة
ملخص
الملخص
استخدام نماذج ما قبل السريرية لتعزيز فهمنا لبيولوجيا الورم والتحقيق في فعالية العوامل العلاجية هو المفتاح لبحوث السرطان. على الرغم من أن هناك العديد من خطوط خلايا سرطان المعدة الراسخة والعديد من نماذج الماوس المعدلة وراثيا التقليدية للبحوث ما قبل السريرية، ومساوئ هذه في المختبر وفي نماذج الجسم الحي الحد من تطبيقاتها. لأن خصائص هذه النماذج قد تغيرت في الثقافة، فإنها لم تعد نموذج عدم تجانس الورم، واستجاباتها لم تكن قادرة على التنبؤ الاستجابات في البشر. وهكذا، يتم تطوير نماذج بديلة تمثل بشكل أفضل عدم تجانس الورم. تحافظ نماذج xenograft المستمدة من المريض (PDX) على المظهر الهيستولوجي للخلايا السرطانية، وتحافظ على عدم تجانس الورم، وتعكس بشكل أفضل المكونات البشرية ذات الصلة للبيئة الدقيقة للورم. ومع ذلك، عادة ما يستغرق 4-8 أشهر لتطوير نموذج PDX، وهو أطول من البقاء على قيد الحياة المتوقع من العديد من مرضى المعدة. ولهذا السبب، قد يكون إنشاء خطوط الخلايا السرطانية الأولية طريقة تكميلية فعالة لدراسات الاستجابة للأدوية. يصف البروتوكول الحالي طرق إنشاء نماذج PDX وخطوط الخلايا السرطانية الأولية من عينات سرطان المعدة الجراحية. وتوفر هذه الأساليب أداة مفيدة لتطوير المخدرات وبحوث بيولوجيا السرطان.
المقدمة
سرطان المعدة هو خامس أكثر أنواع السرطان شيوعًا في جميع أنحاء العالم وثالث سبب رئيسي للوفاة بالسرطان. في عام 2018، تم تشخيص أكثر من 1,000,000 حالة جديدة من سرطان المعدة على الصعيد العالمي، وقتل ما يقدر بـ 783,000 شخص بسبب هذا المرض1. لا يزال معدل الإصابة بسرطان المعدة والوفيات مرتفعة جداً في بلدان شمال شرق آسيا2و3. على الرغم من التقدم الكبير في مجال علاج السرطان، لا يزال تشخيص المرضى الذين يعانون من سرطان المعدة المتقدم ضعيفا، مع معدل البقاء على قيد الحياة لمدة خمس سنوات من حوالي 25٪4،5،6،<....
الوصول مقيد. يرجى تسجيل الدخول أو بدء فترة تجريبية لعرض هذا المحتوى.
البروتوكول
تمت الموافقة على هذه الدراسة البشرية من قبل مجلس مراجعة الأخلاقيات المؤسسية في مركز السرطان جامعة صن يات سين (SYSUCC، قوانغتشو، الصين). تمت الموافقة على الدراسة الحيوانية من قبل اللجنة المؤسسية لرعاية الحيوانات واستخدامها في جامعة صن يات سين. ملاحظة: أجريت جميع التجارب وفقاً للقوانين والمبادئ التوجيهية المؤسسية ذات الصلة، بما في ذلك المبادئ التوجيهية للحماية من التعرض المهني ضد مسببات الأمراض المنقولة بالدم.
1. إعداد عينة
- الحصول على أنسجة سرطان المعدة (P0 = مرور 0) مباشرة من العملية. يجب أن تكون عينة الورم أكبرمن 0.5 سم 3.
- إعداد 3-4 مل من محلول الأسهم: على سبيل المثال، RPMI-1640 المتوسطة (1X) تستكمل مع 10٪ مصل....
الوصول مقيد. يرجى تسجيل الدخول أو بدء فترة تجريبية لعرض هذا المحتوى.
النتائج
هنا، تم الحفاظ على أنسجة الورم من عملية في حل الأوراق المالية حتى الخطوة التالية. في غضون 4 ساعات، تم قطع أنسجة الورم إلى قطع صغيرة وزرعها في الأجنحة الظهرية من الفئران NSG التي تم تخديرها باستخدام القطن غارقة isoflurane. يمكن استئصال الأورام التي يزيد حجمها عن 1 سم3 لزرعها في فئران جديدة (الشكل1) أو تقطيعها بعناية والحفاظ عليها في النيتروجين السائل بعد البروتوكول. في هذه الدراسة، نمت أورام الجيل الأول ببطء أكثر من تلك التي في الأجيال اللاحقة، مع أخذ 3 أسابيع أو أكثر للوصول إلى ال.......
الوصول مقيد. يرجى تسجيل الدخول أو بدء فترة تجريبية لعرض هذا المحتوى.
المناقشة
سرطان المعدة هو مرض عدواني مع خيارات علاجية محدودة. وهكذا، أصبحت نماذج سرطان المعدة موردا حاسما لتمكين الدراسات البحثيةالوظيفية مع الترجمة المباشرة إلى العيادة 4،8،17. هنا، لقد وصفنا أساليب وبروتوكول إنشاء نماذج PDX سرطان المعدة وخطوط الخلايا الأولية. الأهم من ذلك، تم الاحتفاظ في الغالب كل من الخصائص المورفولوجية والبيولوجية لعينات سرطان المعدة في نماذج PDX.
هناك بعض النقاط الحرجة في البروتوكول لإنشاء.......
الوصول مقيد. يرجى تسجيل الدخول أو بدء فترة تجريبية لعرض هذا المحتوى.
الإفصاحات
وليس لدى أصحاب البلاغ ما يكشفون عنه.
شكر وتقدير
وقد دعمت هذا العمل المؤسسة الوطنية للعلوم الطبيعية في الصين (81572392)؛ البرنامج الوطني للبحث والتطوير الرئيسي في الصين (2016YFC1201704)؛ أفضل المواهب الشبابية العلمية والتقنية المبتكرة لبرنامج قوانغدونغ للدعم الخاص (2016TQ03R614).
ونحن نشكر على وجه التحديد قوانغتشو Sagene التكنولوجيا الحيوية المحدودة للمساعدة في إعداد الأرقام.
....الوصول مقيد. يرجى تسجيل الدخول أو بدء فترة تجريبية لعرض هذا المحتوى.
المواد
| الاسم | الشركة | رقم فهرسي | التعليقات |
|---|---|---|---|
| 40 و مو ؛ مصفاة الخلية m | Biologix ، شاندونغ ، الصين | 15-1040 | |
| مجهر بيولوجي | أوليمبوس ، طوكيو ، اليابان | أوليمبوس CKX41 | |
| جهاز طرد مركزي | Eppendorf ، Mittelsachsen ، ألمانيا. | 5427R | |
| CO2 حاضنة | ثيرمو فيشر العلمية ، كارلسباد ، كاليفورنيا ، الولايات المتحدة الأمريكية | HERACELL 150i | |
| DPBS | Basalmedia Technology ، شنغهاي ، الصين | L40601 | |
| خزانة مياه كهربائية ترموستاتيكية | Yiheng ، شنغهاي ، الصين | DK-8AXX | |
| مصل بقري للجنين | Wisent Biotechnology ، فانكوفر ، | كندا 86150040 | |
| Isoflurane | Baxter ، الصين | CN2L9100 | |
| مجموعة الأنسجة الحية Cryo Kit | Celliver Biotechnology ، شنغهاي ، الصين | LT2601 | |
| ذوبان الأنسجة الحية | Celliver Biotechnology ، شنغهاي ، الصين | LT2602 | |
| NSG | Biocytogen ، بكين ، الصين | B-CM-002-4-5W | |
| Penicilin & ستربتومايسين | ثيرمو فيشر العلمي ، كارلسباد ، كاليفورنيا ، الولايات المتحدة الأمريكية | 15140122 | |
| عازلة تحلل خلايا الدم الحمراء | Solarbio ، بكين ، الصين | R1010 | |
| RPMI-1640 متوسط | ثيرمو فيشر العلمي ، كارلسباد ، كاليفورنيا ، الولايات المتحدة الأمريكية | 8118367 | |
| إبر خياطة جراحية مع خيط | LingQiao ، نينغبو ، الصين | 3/8 قوس 4 مرات ؛ 10 | |
| قوالب وشفرات مساعدة معالجة بالأنسجة | Celliver Biotechnology ، شنغهاي ، الصين | LT2603 | |
| Trypsin-EDTA | Thermo Fisher Scientific ، كارلسباد ، كاليفورنيا ، الولايات المتحدة الأمريكية | 2003779 | |
| 1 كولاجيناز | ثيرمو فيشر العلمي ، كارلسباد ، كاليفورنيا ، الولايات المتحدة الأمريكية | 17100017 |
المراجع
- Bray, F., et al. Global cancer statistics 2018: GLOBOCAN estimates of incidence and mortality worldwide for 36 cancers in 185 countries. Ca-a Cancer Journal for Clinicians. 68 (6), 394-424 (2018).
- Sugano, K.
الوصول مقيد. يرجى تسجيل الدخول أو بدء فترة تجريبية لعرض هذا المحتوى.
إعادة الطباعة والأذونات
