يتطلب اشتراك JoVE لعرض هذا المحتوى. تسجيل الدخول أو ابدأ نسخة تجريبية مجانية

مقالة منهجية

إحداث إصابات الرئة الحادة في الفئران عن طريق التبيل المباشر للكيس الشحمي داخل الرغامى

26.8K مشاهدة

⸱

DOI:

10.3791/59999

⸱

يوليو 6, 2019

 ,  ,  , 
1Department of Anesthesiology and Intensive Care Medicine, University Hospital Bonn

* These authors contributed equally

في هذه المقالة

ملخص

يقدم هنا إجراء خطوة بخطوة للحث على إصابة الرئة الحادة في الفئران عن طريق مباشرة داخل الرغامى السكاريد ولإجراء تحليل FACS عينات الدم، والسائل القصبات الهوائية، وأنسجة الرئة. الحد الأدنى من التوغل، والتعامل البسيط، والقابلية للتكرار الجيد، ومعايرة شدة المرض هي مزايا هذا النهج.

الملخص

إدارة مجرى الهواء من السكاريد (LPS) هو وسيلة شائعة لدراسة التهاب رئوي وإصابة الرئة الحادة (ALI) في النماذج الحيوانية الصغيرة. وقد وصفت نُهج مختلفة، مثل استنشاق الهباء الجوي وغرس الأنف أو داخل الرغامى. يصف البروتوكول المقدم إجراءً مفصلاً خطوة بخطوة لحث ALI في الفئران عن طريق تهيئة LPS داخل الرغامى مباشرة وإجراء تحليل FACS لعينات الدم، وسوائل غسل القصبات (BAL)، وأنسجة الرئة. بعد التخدير داخل الحَرَب، يتم تعريض القصبة الهوائية وتدار الـ LPS بواسطة قسطرة وريديّة 22 G. يتم التسبب في رد فعل التهابي قوي وقابل للتكرار مع غزو الكريات البيض ، وupregulation من السيتوكينات proinflammatory ، وتعطيل حاجز الحويفين الشعري في غضون ساعات إلى أيام ، اعتمادا على جرعة LPS المستخدمة. يتم وصف جمع عينات الدم، والسائل BAL، وحصاد الرئة، فضلا عن معالجة لتحليل FACS، بالتفصيل في البروتوكول. على الرغم من أن استخدام LPS المعقمة ليست مناسبة لدراسة التدخلات الدوائية في الأمراض المعدية، فإن النهج الموصوف يقدم الحد الأدنى من التوغل، والتعامل البسيط، والقدرة على استنساخ جيدة للرد على الأسئلة المناعية الميكانيكية. وعلاوة على ذلك، فإن المعايرة بالتحليل الكيميائي للجرعة، فضلا عن استخدام الاستعدادات البديلة لـ LPS أو سلالات الماوس تسمح بتحوير الآثار السريرية، والتي يمكن أن تظهر درجات مختلفة من شدة ALI أو في وقت مبكر مقابل بداية متأخرة من أعراض المرض.

المقدمة

النماذج الحيوانية التجريبية لا غنى عنها في البحوث المناعية الأساسية. وقد استخدمت إدارة البكتيريا الكاملة أو المكونات الميكروبية في كثير من الأحيان في النماذج الحيوانية الصغيرة للحث على التهاب محلي أو نظامي1. Lipopolysaccharide (LPS، أو التوكسين البكتيري) هو مكون جدار الخلية ومستضد السطح من البكتيريا السالبة للجرام (على سبيل المثال، البكتيريا المعوية، الزائفة spp.، أو الفيلق spp.). يتكون الجزيء المستقرة بالحرارة والكبيرة (الوزن الجزيئي 1-4 × 106 kDa) من مويتي الدهون (الدهون A)، ومنطقة أساسية (oligosaccharide)، وO السكريات (أو مستضد). الدهون A، مع سلاسل الأحماض الدهنية المسعورة، يرسو الجزيء في غشاء بكتيري وتوسط (على تدهور البكتيريا) النشاط المناعي وسمية LPS. بعد الربط إلى البروتين ملزم LPS (LBP)، LPS: مجمع LBP ligate مجمع مستقبلات CD14/TLR4/MD2 تقع على سطح العديد من أنواع الخلايا، مما يؤدي إلى رد فعل proinflammatory قوي مع NF-κB نقل النووية وupregulation اللاحقة من السيتوكين التعبير2.

يتم تعريف إصابة الرئة الحادة (ALI) بأنها فشل الجهاز التنفسي الحاد مع وذمة رئوية ثنائية في غياب فشل القلب3. إدارة مجرى الهواء من LPS هو وسيلة شائعة للحث على التهاب رئوي وعلي4،5،6،7. على الرغم من أن المادة المعقمة ليست مناسبة لدراسة التدخلات الدوائية في الأمراض المعدية، يمكن الإجابة على الأسئلة المناعية الميكانيكية بدقة كافية. غرس LPS في القصبة الهوائية يحفز على رد فعل التهابي قوي مع غزو الكريات البيض، وupregulation من السيتوكينات proinflammatory، وتعطيل حاجز الحويفين الشعرية في غضون ساعات إلى أيام، اعتمادا على جرعة LPS3، 6,7.

يصف البروتوكول المقدم إجراءً مفصلاً خطوة بخطوة لحث ALI في الفئران عن طريق تبيل LPS داخل الرغامى. تم التحقق من صحة النموذج من خلال تقييم التعبير السيتوكين، غزو المحببة العدلية، وتسرب الألبومين داخل الحُقف كما سبق وصفه8.

الوصول مقيد. يرجى تسجيل الدخول أو بدء فترة تجريبية لعرض هذا المحتوى.

البروتوكول

وقد وافقت اللجنة المحلية لرعاية الحيوانات على هذا البروتوكول (LANUV، ريكلينغهاوزن، ألمانيا؛ البروتوكول رقم 84-02.04.2015) وتم تنفيذه وفقاً للمبادئ التوجيهية للمعاهد الوطنية للصحة لاستخدام الحيوانات الحية (نشرالمعاهد الوطنية للصحة) )١٠( رقم ٨٥-٢٣، المنقح ١٩٩٦.

1. علي التعريفي

  1. استخدام الكبار C57BL/6 الفئران في سن 10-12 أسابيع. تُقام الحيوانات في أقفاص ذات تهوية فردية مع إمكانية الوصول المجاني إلى المياه وحساء القوارض القياسي. ومع ذلك، فمن الممكن لأداء هذا النهج على الحيوانات الأصغر سنا ومع سلالات الفئران الأخرى.
  2. مخزن LPS (الإشريكية القولونية O111: B4) في الأليقوات في تركيزات 5 ملغ / مل في -20 درجة مئوية. وبالنسبة للغرس داخل الرغامى، تمييع الـ LPS في محلول ملحي معقم بفوسفات (PBS) إلى تركيز نهائي قدره 000 2 ميكروغرام/مل.
  3. وزن الماوس. حقن الكيتامين [120 ملغ/ كغ وزن الجسم بالفأر (BW)] وزيلازين (16 ملغ / كغ BW) داخل peritoneally (أقل ثلث البطن، paramedian)، والانتظار حتى بداية التخدير.
  4. تحقق من عمق التخدير عن طريق تحفيز اللمس. في حالة عدم كفاية التخدير، كرر الحقن مع الكيتامين (30 ملغ/كغ BW) وإكسيلازين (4 ملغم/كلغ BW).
  5. ضع الماوس في موضع عرضة على طاولة يتم التحكم في درجة حرارتها للحفاظ على درجة حرارة الجسم 37 درجة مئوية.
  6. تطبيق مواد التشحيم المعقمة في العين لمنع جفاف القرنية تحت التخدير.
  7. رفع القواطع الرأس والخطاف على شريط أفقي وضع ما يقرب من 5 سم فوق الجدول بينما لا تزال forepaws على اتصال وثيق مع الجدول. فائقة تمديد الرقبة في زاوية 90 درجة بالنسبة إلى الجدول (الشكل 1). عقد اللسان مع ملقط لتقويم الحلق لظروف التنبيب أسهل.
  8. قطع 22 قياس (G) القسطرة الوريدية إلى طول 20 ملم. ضع مصدر ًا للضوء البارد على الجلد فوق الحنجرة للمساعدة في تصور الحبال الصوتية واستهداف القصبة الهوائية. إذا حدثت مقاومة للحنجرة، قم بسحب القسطرة بضعة ملليمترات قبل التقدم مرة أخرى.
  9. أدخل القسطرة حوالي 10 مم في القصبة الهوائية. تأكد من أن الإدراج ليس عميقا ً جداً لأن ذلك سيؤدي إلى غرس السوائل من جانب واحد في القصبات الهوائية الرئيسية اليمنى أو اليسرى.
  10. حقن LPS (5 ميكروغرام / غرام BW) المخفف في PBS باستخدام ماصة [حجم حقن يعتمد على وزن جسم الماوس (على سبيل المثال، 20 غرام وزن الجسم → استخدام 50 μL من الحل LPS)].
    ملاحظة: عادة ما يستجيب الماوس مع السعال أو يلهث لغرس السائل السليم في القصبة الهوائية.
  11. توصيل حقنة وإضافة بولوس من 50 مل الهواء لضمان أن يتم توزيع حجم السائل الكامل في الرئتين. إزالة القسطرة ببطء.
  12. حافظ على الجزء العلوي من جسم الفأر في وضعية منتصبة لمدة 30 مرة لتجنب تسرب السائل من القصبة الهوائية.
  13. في الحيوانات التي تعمل بالصور، حقن 50 ميكرولتر من PBS المعقمة داخل الرغامى بدلا من LPS.
  14. حقن بوبرينورفين هيدروكلوريد 0.08 ملغ / كغ BW تحت الجلد في الجلد فضفاضة على الرقبة مباشرة بعد الحث علي وكل 12 ساعة بعد ذلك، خلال أول 48 ساعة.
  15. الحفاظ على درجة حرارة الجسم من 37 درجة مئوية حتى يتم استعادة الوعي الكامل عن طريق الحفاظ على الماوس على وسادة الاحترار.
  16. نقل الماوس في قفص التهوية بشكل فردي مع حرية الوصول إلى الطعام والماء. مراقبة الماوس بانتظام. انخفاض درجة حرارة الجسم والاكتئاب التنفسي يشير إلى الحث السليم من ALI.

2. أخذ عينات الدم، وغسيل القصبات، وحصاد الأعضاء

ملاحظة: يتوقف توقيت الإقلال على المسألة العلمية التي تم تناولها. عادة، يتم تنفيذ هات 12-72 بعدLPS 3،4،9،10. يمكن تحديد شدة ALI سريريا من خلال المراقبة المنتظمة لأعراض درجة حرارة الجسم واضطرابات الجهاز التنفسي11.

  1. حث التخدير عن طريق وضع الماوس في غرفة غمرت مع isoflurane. استخدم 3 فول٪ isoflurane مع تدفق الأكسجين من 1 لتر / دقيقة. في حالة عدم كفاية عمق التخدير، زيادة الايسوفلوران تصل إلى 5 المجلد٪.
  2. التضحية بالفأر ة بتخدير عميق عن طريق خلع الألانكو القذالي.
  3. إصلاح الماوس مع الشريط على طاولة عملية وتطهير قريبا الفراء على البطن مع 70٪ الإيثانول. فتح تجويف البطن بعناية في خط الوسط مع مقص وملاقط. إزالة أجزاء من الأمعاء لتحقيق الوصول إلى الوريد الكافا السفلي (IVC) الحق في العمود الفقري والشريان الأبهر البطني.
  4. حدد يُمكن وضع الأوردة الكلوية وأدخل قنينة 23 غ ملتصقة بحقنة 1 مل في الوريد الأوني مباشرة تحت التقاء الأوردة. يستنشق 250 ميكرولتر من الدم وينقل إلى أنبوب 1.5 مل مملوء ة بمحلول 0.5 ميكرولتر من حمض الإيثيلين ثنائي الإيثيلين رباعي الأستيك (EDTA). هز بلطف لتسهيل خلط EDTA ووضع الأنبوب على الجليد.
  5. للمف القصبات (BAL)، إعداد ثلاث حقن 1 مل مع 0.5 مل من PBS معقمة و0.1 مل من الهواء لكل منهما. تطهير الفراء من الحلق قريبا مع 70٪ الإيثانول وفضح بعناية القصبة الهوائية مع مقص وملاقط. تعبئة القصبة الهوائية والتفاف حول خياطة.
  6. أداء BAL: ثقب القصبة الهوائية باستخدام مقص اتصغر وأدخل 22 G قطع قثطار وريدي إلى طول 20 مم. استنشق السائل بعد 60 s. كرر الإجراء مع الحقنتين إضافية وجمع كله يستنشق في أنبوب 15 مل على الجليد.
  7. فتح بعناية الصدر مع مقص وملاقط لحصاد الرئتين. قطع الحجاب الحاجز على طول هامش costal وقطع من خلال الأضلاع مع اثنين من الشقوق الجانبية. تجنب ثقب الرئتين بعناية. رفع القص قحفيا وإصلاح أو إزالته.
  8. إعداد اثنين 10 مل المحاقن مع 37 درجة مئوية دافئ PBS (بدون الكالسيوم والمغنيسيوم). قم بإجراء شق صغير في البطين الأيسر. ثقب البطين الأيمن مع 26 G كانولا ومسح الدورة الدموية الرئوية مع PBS prewarmed. كن على علم بأن الرئتين تُنهي الشاحب أثناء العملية.
  9. إزالة الفص الأيمن من الرئتين وقطع إلى نصفين. تجميد هاهم في النيتروجين السائل، تليها تخزين طويل الأجل في -80 درجة مئوية لمزيد من التعبير الجيني وتحليل البروتين.
  10. إزالة الرئة اليسرى كلها وتجانس في لوحة بئر 48 عن طريق mincing الأنسجة مع مقص وملقط. احتضان الأنسجة في 2 مل من العازلة الهضم [RPMI 1640 مع 10٪ مصل العجل الجنين(FCS) و 0.1٪ NaN 3، كولاجيناز الأول (1 ملغ / مل)، وDNase II (7 ملغ / مل)] في 37 درجة مئوية لمدة 60 دقيقة. اسفل.

3. إعداد الأنسجة لتحليل FACS

  1. إعداد العازلة FACS الطازجة (الجدول1):دائما استخدام الكالسيوم والمغنيسيوم خالية PBS للحد من الالتصاق الكاتيون تعتمد على الخلية إلى الخلية ومنع التكتل. ملحق مع FCS (1٪ لحماية الخلايا من المبرمج، ومنع تلطيخ غير محددة، ومنع الخلايا من التمسك أنابيب FACS. قم بتضمين EDTA (0.5 mM) لمنع التصاق الخلايا إلى الخلية القائم على الcation عند العمل مع الخلايا اللزجة والتابعة مثل الضامة. إضافة azide الصوديوم (0.1٪)، كما أنه يمنع التلوث البكتيري وphotobleaching من الفلوروكروم وكتل سفك الأجسام المضادة.
  2. نقل عينات الدم (الخطوة 2.4) إلى 5 أنابيب FACS مل ومزج بلطف الدم مع 2 مل من العازلة خلايا الدم الحمراء. وضع الأنابيب على الجليد وإنهاء رد الفعل بعد 2 دقيقة عن طريق إضافة 2 مل من PBS الجليد الباردة. طرد مركزي عينات لمدة 5 دقيقة في 400 x ز وتجاهل supernatant. إعادة تعليق بيليه الخلية مع 60 μL من العازلة FACS وعملية لتلطيخ FACS اللاحقة وفقا للبروتوكولات وصفها سابقا12.
    ملاحظة: توقيت قتل الفئران يؤثر على عدد الكريات البيض كجزء من التهاب الجهازية. ولذلك، فمن المستحسن لضبط رقم الخلية إلى 1 X 106 الخلايا /60 ميكرولتر في هذه الخطوة لتحقيق أفضل نتائج تلطيخ لتحليل الخلايا تدفق.
  3. السائل BAL الطرد المركزي (الخطوة 2.6) لمدة 5 دقائق في 400 × ز. ازه الـ supernatant وتجمده في النيتروجين السائل، يليه تخزين طويل الأجل عند -80 درجة مئوية لمزيد من تحليل البروتين. إعادة تعليق بال خلية بيليه مع 2 مل من العازلة FACS الباردة، ثم نقل التعليق إلى أنبوب FACS 5 مل باستخدام مرشح شبكة 100 ميكروم لكبح جماح الشعر.
  4. مرة أخرى، والطرد المركزي العينة لمدة 5 دقيقة في 400 × ز. إعادة تعليق بيليه مع 60 μL من العازلة FACS وعملية لتلطيخ FACS اللاحقة وفقا للبروتوكولات وصفها سابقا12.
    ملاحظة: توقيت قتل الفئران يؤثر على عدد الكريات البيض في البال كجزء من الالتهاب. ولذلك، فمن المستحسن لضبط رقم الخلية إلى 1 X 106 الخلايا /60 ميكرولتر في هذه الخطوة لتحقيق أفضل نتائج تلطيخ لتحليل الخلايا تدفق.
  5. نقل أنسجة الرئة اليسرى المهضمة (الخطوة 2.10) إلى أنبوب FACS سعة 5 مل باستخدام فلتر شبكي سعة 100 ميكرولتر لاستخراج الكتل وإنهاء عملية الهضم عن طريق إضافة 2 مل من العازلة من نظام FACS البارد. جهاز طرد مركزي العينة لمدة 5 دقائق في 400 x ز. تجاهل supernatant وإعادة تعليق بيليه مع 60 μL من العازلة FACS وعملية لتلطيخ FACS اللاحقة وفقا للبروتوكولات وصفها سابقا12.
    ملاحظة: توقيت موت الفئران يؤثر على عدد الكريات البيض في أنسجة الرئة كجزء من الالتهاب. ولذلك، فمن المستحسن لضبط رقم الخلية إلى 1 X 106 خلايا /60 ميكرولتر لتحقيق أفضل نتائج تلطيخ لتحليل الخلايا تدفق.
  6. لتحليل FACS، تحضن الخلايا مع الأجسام المضادة CD16/CD32 في 4 درجة مئوية لمدة 15 دقيقة لمنع الربط غير محددة من الغلوبولين المناعي لمستقبلات Fc. إضافة 20 μL من الحل حجب إلى 1 X 106 خلايا في 60 ميكرولتر في أنبوب 5 مل.
  7. وفي الوقت نفسه، إعداد مزيج رئيسي مع العازلة FACS والأجسام المضادة كما هو موضح في الجدول 2.
  8. بعد حجب، لا تغسل الخلايا. أضف 20 ميكرولتر من مزيج الأجسام المضادة الرئيسي لكل عينة للحصول على حجم نهائي قدره 100 ميكرولتر.
  9. اغسل كل عينة بمل واحد من العازلة والطرد المركزي لـ 5 دقائق عند 400 ×غ. تخلص من الفوقاتان وإعادة تعليق بيليه مع العازلة FACS إلى تركيز الخلية المناسبة لقياسات FACS.
    ملاحظة: يقترح عدد خلايا 1 × 106 خلايا/500 ميكرولتر لتحقيق أفضل نتائج phenotyping المناعة في تحليل FACS مع هذا البروتوكول. ومع ذلك، فمن المستحسن أن الأجسام المضادة يجب أن تكون بتصنيفها بشكل فردي.
  10. إذا لزم الأمر، إضافة تلطيخ حية / ميتة قبلتلطيخ السطح باستخدام مجموعات محددة متاحة تجاريا 8.
  11. وأخيراً، أضف أعداداً ثابتة من حبات المعايرة المزودة بالفلوروكروم المتاحة تجارياً (3 x 105 حبات في 20 ميكرولتر من العازلة لـ FACS) إلى كل عينة لتحديد أرقام الخلايا المطلقة12. تظهر استراتيجية التخثر للدم، BAL، وخلايا الأنسجة في الشكل 2.

الوصول مقيد. يرجى تسجيل الدخول أو بدء فترة تجريبية لعرض هذا المحتوى.

النتائج

تم التحقق من صحة النهج الموصوف للحث على ALI في الفئران عن طريق تقييم التعبير السيتوكين، وتسلل المحببات العدلية، وتعطيل حاجز الحويفيو الشعري 24 ساعة و 72 ساعة بعد غرس LPS. وكانت الحيوانات التي يتم حقنها من قبل PBS بمثابة عنصر تحكم. وقد تسببت إدارة LPS داخل الرغامى في استجابة قوية للالتهابات الرئوية. وقد تم تنظيم التعبير عن TNF-α في أنسجة الرئة بشكل ملحوظ، حيث وصل إلى زيادة مستمرة وأكثر من 50 ضعف مقارنة بالحيوانات المسيطرة [TNF-α/18s)؛ و24 ح: 53.7 (SD = 11.6)؛ 72 h: 55.0 (SD = 20.6)؛ p < 0.05)] (الشكل

الوصول مقيد. يرجى تسجيل الدخول أو بدء فترة تجريبية لعرض هذا المحتوى.

المناقشة

الحد الأدنى من التوغل، والتعامل البسيط، وتكرار جيد هي السمات الرئيسية للنهج المقدم للحث على ALI في نموذج القوارض الصغيرة. استخدام LPS بدلا من البكتيريا كلها في النماذج الحيوانية له مزايا. وهو مركب مستقر ونقي ويمكن تخزينها في شكل الليوفيليز حتى الاستخدام. وهو منبه قوي للاستجابات المناعية الفطرية عبر مسار TLR4، ويمكن بسهولة قياس نشاطه البيولوجي، مما يسهل معايرة شدة المرض مع إمكانية استنساخ جيدة. وعلاوة على ذلك، فقد ثبت أن استخدام LPS بمثابة نموذج آمن للحث على التهاب الشعب الهوائية الحاد في المتطوعين الأصحاء الإنسان، وبالتا...

الوصول مقيد. يرجى تسجيل الدخول أو بدء فترة تجريبية لعرض هذا المحتوى.

الإفصاحات

وليس لدى أصحاب البلاغ ما يكشفون عنه.

شكر وتقدير

ويود المؤلفان أن يشكرا جان كلينر وسوزان شولتز على تقديم الدعم التقني. ويقر المؤلفون بالدعم الممتاز الذي يقدمه المرفق الأساسي للقياس الدفقي في كلية الطب بجامعة بون. ولم يتلق المؤلفون أي تمويل من أي منظمة خارجية.  وقد سبق أن عرض جزء من البيانات الواردة في قسم النتائج والمبينة في الشكل 3 في منشور سابقرقم 8.

الوصول مقيد. يرجى تسجيل الدخول أو بدء فترة تجريبية لعرض هذا المحتوى.

المواد

قائمة المواد المستخدمة في هذه المقالة
الاسمالشركةرقم فهرسيالتعليقات
1 مل محاقنBD ، فرانكلين ليكس ، نيوجيرسي ، الولايات المتحدة الأمريكية300013
10 مل محاقنBD ، فرانكلين ليكس ، نيوجيرسي ، الولايات المتحدة الأمريكية309110
Anti-CD115 (c-fms) APCThermo Fisher ، Waltham ، MA ، الولايات المتحدة الأمريكية17-1152-80
Anti-CD11b (M1 / 70) - FITCThermo Fisher ، Waltham ، MA ، الولايات المتحدة الأمريكية11-0112-81
Anti-CD45 (30-F11) - eF450Thermo Fisher ، والثام ، ماساتشوستس ، الولايات المتحدة الأمريكية48-0451-82
Anti-F4 / 80 (BM-8) - PE Cy7Thermo Fisher ، Waltham ، MA ، الولايات المتحدة الأمريكية25-4801-82
Anti-Gr1 (RB6-8C5) BDBiosciences ، Franklin Lakes ، نيوجيرسي ، الولايات المتحدة الأمريكية552093
Anti-Ly6C (HK1.4) PerCP-Cy5.5Thermo Fisher ، Waltham ، MA ، الولايات المتحدة الأمريكية45-5932-82
Anti-Ly6G (1A8) APC / Cy7Bio Legend ، سان دييغو ، كاليفورنيا127623
بوبرينورفين هيدروكلوريدإنديفيور المملكة المتحدة المحدودة ، بيركشاير ، المملكة المتحدة
C57BL / 6 فئران ، أنثى ، 10-12 أسبوعامن نهر تشارلز ريفر ، ويلمونغتون ، ماساتشوستس ، الولايات المتحدة الأمريكية
حبات CaliBRITE APC (6 & micro ؛ م)BD Biosciences ، فرانكلين ليكس ، نيوجيرسي ، الولايات المتحدة الأمريكية340487
Canula 23 مقياس 1 بوصةBD ، فرانكلين ليكس ، نيوجيرسي ، الولايات المتحدة الأمريكية300800
Canula 26 مقياس 1/2 بوصةBD ، فرانكلين ليكس ، نيوجيرسي ، الولايات المتحدة الأمريكية303800
مصفاة خلية 70 وميكرو ؛ مBD Biosciences ، فرانكلين ليكس ، نيوجيرسي ، الولايات المتحدة الأمريكية352350
كولاجيناز النوع الأولسيجما ألدريتش ، سانت لويس ، ميزوري ، الولايات المتحدة الأمريكية1148089
ديوكسيربونوكلياز IIسيجما ألدريتش ، سانت لويس ، ميزوري ، الولايات المتحدة الأمريكيةD8764   ؛
ملحي مخزن بالفوسفات من Dulbecco (PBS) ، معقمسيجما ألدريتش ، سانت لويس ، ميزوري ، الولايات المتحدة الأمريكيةD8662
Dulbecco ' s محلول ملحي مخزن بالفوسفات (PBS) ، بدون كلوريد الكالسيوم وكلوريد المغنيسيوم ، معقمسيجما ألدريتش ، سانت لويس ، ميزوري ، الولايات المتحدة الأمريكيةD8537
حمض الإيثيلين ديامين تترا أسيتيك (EDTA)سيجما ألدريتش ، سانت لويس ، ميزوري ، الولايات المتحدة الأمريكيةأنابيب E7889
FACS ، 5 ملSarstedt ، N & uuml ؛ mbrecht ، ألمانيا551579
مصل عجل الجنين (FCS)Sigma-Aldrich ، سانت لويس ، ميزوري ، الولايات المتحدة الأمريكيةF2442
FineTools ، هايدلبرغ ، ألمانيا11049-10
IsofluraneBaxter ، Unterschlei & szlig ؛ هايم ، ألمانيا
كيتامين هيدروكلوريدSerumwerk Bernburg ، برنبورغ ، ألمانيا
عديدات السكاريد الدهنية (LPS) من الإشريكية القولونية O111: B4Sigma-Aldrich ، سانت لويس ، ميزوري ، الولايات المتحدة الأمريكيةL2630
LIVE / DEAD Fixable Dead Cell Green KitThermo Fisher ، Waltham ، MA ، الولايات المتحدة الأمريكيةL23101
الفئران المنقاة المضادة للفأر CD16 / CD32 (Mouse BD Fc Block & trade ؛) ، استنساخ 2.4G2BD ، فرانكلين ليكس ، نيوجيرسي ، الولايات المتحدة الأمريكية553141
عازلة تحلل خلايا الدم الحمراءThermo Fisher ، Waltham ، MA ، الولايات المتحدة الأمريكية00-4333-57
RPMI-1640 ، مع L-glutamine وبيكربونات الصوديومSigma-Aldrich ، سانت لويس ، ميزوري ، الولايات المتحدة الأمريكيةR8758
أدوات العلوم الدقيقةللمقص ، هايدلبرغ ، ألمانيا14060-09
أزيد الصوديوم (NaN3)سيجما ألدريتش ، سانت. لويس ، ميزوري ، الولايات المتحدة الأمريكيةS2002
مقص زنبركيأدوات العلوم الدقيقة ، هايدلبرغ ، ألمانيا15018-10
ملقط الأنسجةأدوات العلوم الدقيقة ، هايدلبرغ ، ألمانيا11021-12
أنابيبإيبندورف ، هامبورغ ، ألمانيا30125150
القسطرة الوريدية ، 22 مقياسB.Braun ، Melsungen ، ألمانيا4268091B
Xylazine هيدروكلوريدSerumwerk Bernburg ، برنبورغ ، ألمانيا
محلول محلول Science

المراجع

  1. Fink, M. P. Animal models of sepsis. Virulence. 5 (1), 143-153 (2014).
  2. Lu, Y. -C., Yeh, W. -C., Ohashi, P. S. LPS/TLR4 signal transduction pathway. Cytokine. 42 (2), 145-151 (2008).
  3. Matute-Bello, G., Frevert, C. W., Martin, T. R. Animal models of acute lung injury. American Journal of Physiology - Lung Cellular and Molecular Physiology. 295 (3), 379-399 (2008).
  4. Rabelo, M. A. E., et al. Acute Lung Injury in Response to Intratracheal Instillation of Lipopolysaccharide in an Animal Model of Emphysema Induced by Elastase. Inflammation. 41 (1), 174-182 (2018).
  5. Liu, F., Li, W., Pauluhn, J., Trübel, H., Wang, C. Lipopolysaccharide-induced acute lung injury in rats: comparative assessment of intratracheal instillation and aerosol inhalation. Toxicology. 304, 158-166 (2013).
  6. Rittirsch, D., et al. Acute Lung Injury Induced by Lipopolysaccharide Is Independent of Complement Activation. Journal of Immunology. 180 (11), Baltimore, Md. 7664-7672 (2008).
  7. D'Alessio, F. R., et al. CD4+CD25+Foxp3+ Tregs resolve experimental lung injury in mice and are present in humans with acute lung injury. The Journal of Clinical Investigation. 119 (10), 2898-2913 (2009).
  8. Ehrentraut, H., Weisheit, C., Scheck, M., Frede, S., Hilbert, T. Experimental murine acute lung injury induces increase of pulmonary TIE2-expressing macrophages. Journal of Inflammation. 15, 12(2018).
  9. Szarka, R. J., Wang, N., Gordon, L., Nation, P. N., Smith, R. H. A murine model of pulmonary damage induced by lipopolysaccharide via intranasal instillation. Journal of Immunological Methods. 202 (1), 49-57 (1997).
  10. Reutershan, J., Basit, A., Galkina, E. V., Ley, K. Sequential recruitment of neutrophils into lung and bronchoalveolar lavage fluid in LPS-induced acute lung injury. American Journal of Physiology. Lung Cellular and Molecular Physiology. 289 (5), 807-815 (2005).
  11. Hoegl, S., et al. Capturing the multifactorial nature of ARDS - approach to model murine acute lung injury. Physiological Reports. 6 (6), (2018).
  12. Weisheit, C., et al. Ly6Clow and Not Ly6Chigh Macrophages Accumulate First in the Heart in a Model of Murine Pressure-Overload. PLoS ONE. 9 (11), (2014).
  13. Grommes, J., Soehnlein, O. Contribution of Neutrophils to Acute Lung Injury. Molecular Medicine. 17 (3-4), 293-307 (2011).
  14. Müller-Redetzky, H. C., Suttorp, N., Witzenrath, M. Dynamics of pulmonary endothelial barrier function in acute inflammation: mechanisms and therapeutic perspectives. Cell and Tissue Research. 355 (3), 657-673 (2014).
  15. Fujita, M., et al. Endothelial cell apoptosis in lipopolysaccharide-induced lung injury in mice. International Archives of Allergy and Immunology. 117 (3), 202-208 (1998).
  16. Doyen, V., et al. Inflammation induced by inhaled lipopolysaccharide depends on particle size in healthy volunteers. British Journal of Clinical Pharmacology. 82 (5), 1371-1381 (2016).
  17. Stephens, R. S., Johnston, L., Servinsky, L., Kim, B. S., Damarla, M. The tyrosine kinase inhibitor imatinib prevents lung injury and death after intravenous LPS in mice. Physiological Reports. 3 (11), (2015).
  18. Yu, Y., Jing, L., Zhang, X., Gao, C. Simvastatin Attenuates Acute Lung Injury via Regulating CDC42-PAK4 and Endothelial Microparticles. Shock. 47 (3), Augusta, Ga. 378-384 (2017).

الوصول مقيد. يرجى تسجيل الدخول أو بدء فترة تجريبية لعرض هذا المحتوى.

إعادة الطباعة والأذونات

استكشف المزيد من المقالات

غرس داخل الرغاميقياس التدفق الخلويغسل القصبات والأسناخ الرئويةتحليل عينات الدماستئصال أنسجة الرئةصبغ FACSنموذج الفأرجرعة LPS
إحداث إصابات الرئة الحادة في الفئران عن طريق التبيل المباشر للكيس الشحمي داخل الرغامى
تواصل معنا
أوصِ به للمكتبة

الخصوصية

شروط الاستخدام

السياسات

حقوق الطبع والنشر © 2026 MyJoVE Corporation. جميع الحقوق محفوظة.