يصف هذا البروتوكول طريقه جديده لقياس ألوان للكشف عن پريماكين المضادة للملاريا (PMQ) في القنفذ الاصطناعية والأمصال البشرية.
يتطلب اشتراك JoVE لعرض هذا المحتوى. تسجيل الدخول أو ابدأ نسخة تجريبية مجانية
مقالة منهجية
رد فعل Griess الأمثل للاشعه فوق البنفسجية-فيس وتحديد العين العارية لپريماكين المضادة للملاريا
* These authors contributed equally
في هذه المقالة
ملخص
الملخص
وقد أوصت منظمه الصحة العالمية پريماكين (pmq) ، وهو دواء هام لمكافحه الملاريا ، لعلاج التهابات التي تهدد الحياة الناجمة عن p. متصور واوفال. ومع ذلك, PMQ له اثار ضاره غير مرغوب فيها التي تؤدي إلى انحلال النصفي الحاد في المرضي الذين يعانون من نقص الجلوكوز-6-فوسفات (G6PD) عوز. هناك حاجه لتطوير أساليب بسيطه وموثوق بها لتحديد PMQ مع الغرض من رصد الجرعة. في وقت مبكر 2019 ، وقد أبلغنا عن الاشعه فوق البنفسجية والنهج القائم علي العين المجردة للقياس الكمي اللوني PMQ. واستند الكشف علي رد فعل مثل Griess بين PMQ وانانينس ، والتي يمكن ان تولد المنتجات azo الملونة. الحد الأقصى للكشف عن القياس المباشر لل PMQ في البول الاصطناعي هو في نطاق نانومولار. وعلاوة علي ذلك ، أظهرت هذه الطريقة إمكانات كبيره للقياس الكمي PMQ من عينات المصل البشري في تركيزات ذات الصلة سريريا. في هذا البروتوكول ، سوف نقوم بوصف التفاصيل الفنية المتعلقة بالتوليفات وتوصيف منتجات azo الملونة ، واعداد الكاشف ، وإجراءات تحديد PMQ.
المقدمة
Pmq هي واحده من أهم الادويه المضادة للملاريا ، وانها لا تعمل فقط كانسجه شيزونتوسيدي لمنع الانتكاس ولكن أيضا كجاميتوسيتوسيدي لمقاطعه انتقال المرض1،2،3،4. انحلال الاوعيه هو واحد من الآثار الجانبية المتعلقة PMQ ، والتي تصبح خطيره للغاية في تلك التي تعاني من نقص في G6PD. ومن المعروف ان الاضطراب الوراثي G6PD موزع في جميع انحاء العالم مع وجود تردد الجينات بين 3-30 ٪ في المناطق الموبوءة بالملاريا. شده ضعف pmq يعتمد علي درجه نقص G6PD فضلا عن الجرعة ومده التعرض pmq5,6. ولخفض المخاطر ، أوصت من....
الوصول مقيد. يرجى تسجيل الدخول أو بدء فترة تجريبية لعرض هذا المحتوى.
البروتوكول
1. توليف من Azos الملونة
- في قارورة القاع جولة 25 مل (RBF) ، تذوب الانيلين (0.1 ملليمول) و پريماكين بيفسفات (45.5 ملغ ، 0.1 ملليمول) إلى 10 مل من ح3بو4 الحل (5 ٪ v/v). وضع RBF علي حمام الجليد ، أضافه شريط ضجة مع الحجم المناسب في الحل ، ووضع RBF علي لوحه يحركها.
ملاحظه: لتوليف azo الجيل الثالث 3g (الشكل 2) ، استخدم 0.2 ملليمول من پريماكين بيفسفات. - تذوب نانو2 (6.9 ملغ ، 0.1 ملليمول) في 1 مل من المياه المبردة ومن ثم أضافه إلى خليط رد الفعل قطره. أزاله حمام الجليد ، والحفاظ علي خليط التفاعل اثار في درجه حرارة الغرفة.
- مراقبه رد الفعل مع هلام السي....
الوصول مقيد. يرجى تسجيل الدخول أو بدء فترة تجريبية لعرض هذا المحتوى.
النتائج
لتحسين ظروف التفاعل (الشكل 2) ، وقد استخدمت الانينات المختلفة للزوجين مع pmq من خلال رد فعل griess. لقد حققنا سلسله من azos مع ألوان مختلفه. وقد وجد ان الانانينات مع الكترون التبرع مستبدل يمكن ان يسبب التحول الأحمر في طيف امتصاص الاشعه فوق البنفسجية-فيس. وأجريت الحسابات النظرية من خلال نظرية الكثافة الوظيفية المعتمدة علي الوقت (TD-DFT). وكما هو مبين في الشكل 2 الف، كانت نتيجة الحساب في اتفاق جيد مع القياسات البصرية التي بلغ متوسط الخطا فيها 3.1 في المائة. 4-ميثو.......
الوصول مقيد. يرجى تسجيل الدخول أو بدء فترة تجريبية لعرض هذا المحتوى.
المناقشة
وصفنا طريقه القياس اللوني لقياس الكمية المناسبة ل PMQ. ومن المحتمل ان تكون الطريقة الحالية الأكثر بساطه وفعالية من حيث التكلفة. الأهم من ذلك ، يوفر هذا الأسلوب يتيح قياس PMQ علي أساس العين المجردة دون استخدام اي معدات.
رد فعل Griess الأمثل للكشف عن PMQ يمكن ان تولد اللون الأحمر azo مع امتصاص اقصي في 504 nm. التاثير المحتمل للاشعه فوق البنفسجية-فيس امتصاص الجزيئات الحيوية الذاتية محدود ، مما يجعل الطريقة واعده للقياس المباشر ل PMQ في السوائل البيولوجية. كما هو مبين في النتيجة ، تم العثور علي عل.......
الوصول مقيد. يرجى تسجيل الدخول أو بدء فترة تجريبية لعرض هذا المحتوى.
الإفصاحات
وليس لدي أصحاب البلاغ ما يعلنونه.
شكر وتقدير
ويعترف المؤلفون بمنحه البدء من جامعه قوانغتشو للطب الصيني ومشروع التدريب علي البحث العلمي للشباب في غزوم (2019QNPY06). ونحن نعترف أيضا مركز لينغنان للبحوث الطبية في جامعه قوانغتشو للطب الصيني لدعم المرافق.
....الوصول مقيد. يرجى تسجيل الدخول أو بدء فترة تجريبية لعرض هذا المحتوى.
المواد
| الاسم | الشركة | رقم فهرسي | التعليقات |
|---|---|---|---|
| 4-ميثوكسينيلين | علاء الدين | K1709027 | |
| 2،4-ثنائي ميثوكسينيلين | هيونز | 10154207 | |
| 3،4-ثنائي ميثوكسينيلين | بيديفارم | BD21914 | |
| 4-ميثيل أنيلين | أداماس | بيتا P1414526 | |
| 4-نيتروأنيلين | ماكلين | C10191447 | |
| 96 بئر ، فلات بوتون | لابسيرف | 310109008 | |
| برنامج Gaussian@16 | Gaussian، Inc | الإصدار: x86-64 SSE4_2 enabled / Linux | |
| حمض الهيدروكلوريك | GCRF | 20180902 | |
| Marvin Sketch (برنامج) | CHEMAXON | الإصدار المجاني: 15.6.29 | |
| حمض الفوسفوريك | ماكلين | C10112815 | |
| بريماكين ثنائي الفوسفات | 3A كيماويات | CEBK200054 | |
| نتريت الصوديوم | Alfa Aesar | 5006K18R | |
| سلفوناميدات | TCI (شنغهاي) | GCPLO-BP | |
| Varioskan LUX قارئ لوحة | Thermo Fisher | مزود ببرنامج SkanIt 4.1 |
المراجع
- Fernando, D., Rodrigo, C., Rajapakse, S. Primaquine in vivax malaria: an update and review on management issues. Malar Journal. 10, 351(2011).
- Deng, C., et al. Large-....
الوصول مقيد. يرجى تسجيل الدخول أو بدء فترة تجريبية لعرض هذا المحتوى.
إعادة الطباعة والأذونات
