$$\rightleftharpoonup{xx}$$
$$\longleftharp{xx}$$,
$$\longrightharp{xx}$$,
تم تحسين البروتوكول الموصوف هنا لاستخدامه في الفئران. في حين اننا قد استخدمت النظام الغذائي CAF بنجاح في الفئران17,18, لينه الغذاء طحن قد يعرض مزيدا من الخطا الحد من موثوقيه التدابير المدخول الغذائي19. تمت الموافقة علي هذا البروتوكول من قبل لجنه الرعاية الحيوانية والأخلاق في جامعه نيو ساوث ويلز ويتوافق مع المبادئ التوجيهية الاستراليه لاستخدام ورعاية الماشية للأغراض العلمية (الطبعة الثامنة) المقدمة من الصحة الوطنية الاستراليه مجلس البحوث الطبية.
ملاحظه: وقد لوحظت اثار ضاره قليله جدا في دراساتنا قصيرة الأجل (اي < 10 أسابيع الوصول الإعلان الكاف); لا يوجد دليل علي التغييرات علي الرفاه العام ، والنشاط ، والاجتماعية أو القلق مثل السلوك في الفئران علي النظام الغذائي CAF20. بعد فترات أطول (> 16 أسابيع) وقد لوحظت حوادث القلب والاوعيه الدموية عرضيه جدا في الفئران الفيدرالية CAF.
1. التاقلم الحيواني والإسكان
- تاقلم الفئران مع المنشاة لمده 5 – 7 أيام بعد الوصول مع امكانيه الدخول المجاني إلى نظام التحكم الغذائي والمياه. التعامل مع الفئران يوميا ابتداء من 24 ساعة بعد الوصول ؛ حمية CAF ينطوي علي التفاعل اليومي مع القفص حتى التعامل المنتظم هو المهم.
- ضمان توفير الإثراء البيئي لجميع الأقفاص. يحتوي القفص القياسي علي مربع ميثاكريلات احمر بوليميثيل ، والمواد التعشيش وعصا مضغ خشبيه ، وهو أمر مهم لان الاطعمه اللينة المقدمة داخل النظام الغذائي CAF قد تؤدي إلى الفئران تطوير الانسداد دون الوصول إلى عناصر أصعب لمضغ.
- قبل بدء النظام الغذائي CAF ، تعيين أقفاص لcaf أو مجموعات الطعام والتاكد من ان هذه هي مطابقه لبدء وزن الجسم عن طريق مقارنه متوسط ونطاق أوزان الجسم بين المجموعات وأعاده تخصيص حسب الضرورة. كما الاضاءه التعرض يمكن ان تؤثر علي إيقاعات الايقاعيه ، وتناول الطعام والنشاط ، وضمان يتم توزيع الكاف وأقفاص تشاو بالتساوي في غرفه مستعمره.
ملاحظه: تشكل القوارض التسلسلات الهرمية الاجتماعية عند إيواء المجموعات (خاصه الذكور). يتم التحكم جزئيا في اثار الإجهاد الاجتماعي عن طريق ضمان إيواء الفئران مع الآخرين من وزن الجسم مماثله (للحد من البلطجة داخل قفص). بالاضافه إلى ذلك ، يجب ان يتم توزيع النظام الغذائي كافتيريا بالتساوي حول القفص حتى يتسنى لجميع الفئران الوصول إلى النظام الغذائي.
2. اختيار النظام الغذائي والاعداد
-
جدوله
- ضمان الطعام العادي والماء دائما متوفرة وتستكمل مع ما لا يقل عن اثنين من الحلو واثنين من العناصر المالحة كل يوم (ويرد مثال علي جدول أسبوعي في الجدول 1؛ خيارات الغذاء لمده 3 أيام المبينة في الشكل 1). إضافات اختياريه هي عاليه الدسم ، وارتفاع السكر تشاو ومحلول السكروز 10 ٪.
- اختيار الاطعمه داخل كل فئة متشابهة في نسب مغذي: جميع العناصر الحلوة هي اعلي نسبيا في الكربوهيدرات من الدهون وجميع العناصر المالحة هي اعلي في الدهون من الكربوهيدرات. تهدف إلى توفير نسب مماثله من الدهون والكربوهيدرات والسكر والبروتين في كل مجموعه يوميا من الاطعمه CAF.
- مراقبه الاستهلاك بانتظام طوال التجربة بحيث يمكن تصميم القائمة ، إذا لزم الأمر ، للحفاظ علي فرط التعرق. ويقدم الجدول 2 المعلومات المتعلقة بكثافة الطاقة والمغذي الغذائية لعده أمثله علي الاطعمه ، ويقترح البدء بمبالغ ل200 غراما من الفئران الذكور.
- تجنب تغذيه اي طعام واحد في أيام متتالية أو في كثير من الأحيان في غضون أسبوع ، لان هذا قد يقلل من تناول هذا الطعام. إذا حدث هذا ، حذف الطعام من الجدول الزمني لبضعة أيام قبل أعاده دمج.
ملاحظه: قد تعرض الفئران رهاب الخوف ومعظم الاطعمه الجديدة تتطلب التعرض المتكرر لتحديد ما إذا كان سيتم استهلاكها. الفئران لا تفضل عاده الاطعمه التي تحتوي علي الخميرة (الخبز والبيتزا ، وما إلى ذلك) أو تلك مع نكات الحمضيات أو القهوة.
-
الاطعمه الرطبة
- النظر في تقديم الاطعمه اعلي في محتوي الرطوبة في حاويه مثل قصدير التونة ، لتجنب تلطيخ الفراش. وينبغي أيضا توفير حاويات فارغه للسيطرة علي أقفاص إذا تم ذلك.
-
مصادر النظام الغذائي
- التاكد من ان الاغذيه CAF المستخدمة هي المواد الغذائية أو الحصول علي ما يكفي للتجربة بأكملها بحيث البنود الغذاء تبقي متسقة ولا تحتاج إلى استبدال.
-
تخزين النظام الغذائي
- يخزن الطعام كما هو مبين علي العبوه أو عند-20 درجه مئوية ويذوب في الليل قبل الاستخدام. يخزن المنتجات الجافة (البسكويت) في وعاء محكم الغلق.
-
محلول السكروز (اختياري)
- اعداد محلول السكروز ، عاده 10 ٪ (w/v) في السائبة (2-5 L) وتخزين في 4 درجه مئوية عندما لا تكون في الاستخدام.
- استبدال زجاجات السكروز أسبوعيا (كحد ادني) لمنع النمو البكتيري أو الفطري. افحص الزجاجات يوميا واستبدلها إذا لوحظت علامات النمو.
ملاحظه: يتم توفير السكروز بالاضافه إلى المياه ، والتي تتوفر دائما.
3. الكافتيريا اعداد النظام الغذائي
-
تذويب
- تاخذ الكميات المناسبة من الاطعمه CAF لأذابه الجليد ~ 24 ساعة قبل الاستخدام. يمكن تذويب الطعام باستخدام الميكروويف ولكن لا ينبغي تقديمه اثناء التسخين.
-
التجديد اليومي لحمية CAF
- ويضمن تغيير الاطعمه الغذائية CAF اليومية ان يتم تكبير التنوع ، وتقليل التزييت في القفص. كما ياكل الفئران معظم المدخول اليومي في الجزء الأول من الدورة المظلمة ، والجدول الزمني لتجديد الاغذيه CAF علي مقربه من بداية الجدول الزمني المظلم بحيث يكون الطعام الطازج في هذا الوقت. تجديد النظام الغذائي لCAF في اليوم الذي لا يتم فيه قياس كميه الطعام.
- إطعام مجموعات تشاو بطريقه تضمن ان هذه المجموعة لديها تجربه يوميه مماثله ، علي النحو التالي.
- تحويل زجاجات المياه حولها (ينبثق) ، وضع القفص علي مساحة العمل وأزاله الغطاء.
- يزعج بخفه الفراش لحوالي 20 ثانيه ، لمحاكاة عمليه جمع المواد الغذائية من الفراش من أقفاص CAF.
- وضع حفنه صغيره من الكريات تشاو من الغذاء هوبر في الفراش ، لمساواه التعرض للغذاء علي الفراش قفص.
- أعاده غطاء القفص والعودة إلى الرف ، واستبدال زجاجات المياه فقط عندما يتم تسويه القفص من أجل الحد من الانسكاب.
- إطعام مجموعات الكافتيريا
- اعداد العناصر الغذائية CAF في حاويه المسمي لكل قفص.
- تحويل زجاجات المياه حولها (ينبثق) ، وضع القفص علي مساحة العمل وأزاله الغطاء.
- أزاله الكثير من النظام الغذائي الكافيتريا القديمة من الفراش ممكن.
- وضع نظام غذائي الكافتيريا الطازجة في القفص.
- إغلاق القفص والعودة إلى الرف.
- استبدال المياه وزجاجات السكروز.
ملاحظه: لتجنب تعريض الفئران تشاو لحمية الكاف ، والنظر في إطعام أقفاص الطعام قبل أقفاص CAF ، أو العكس. يجب تغيير القفازات بين التعامل مع الفئران من مجموعات النظام الغذائي المختلفة.
- الأعلى حتى تشاو ، والمياه وزجاجات السكروز حسب الضرورة. القيام بذلك بعد إجراءات أخرى أكثر كفاءه كما صناديق أثقل بعد تتصدر الطعام والماء.
ملاحظه: صناديق CAF التربة بسرعة أكبر وتحتاج إلى تغيير أكثر في كثير من الأحيان لتجنب الإجهاد الناجم عن التعرض للاسره الرطب ، فضلا عن الروائح القوية. فحص الفراش يوميا وتغيير حسب الاقتضاء.
4. تناول الطعام أكثر من 24 ساعة
ملاحظه: يتم اجراء قياسات المدخول الغذائي علي فتره منفصلة 24 ح عده مرات في الأسبوع.
- عند بدء النظام الغذائي CAF ، قياس وزن الجسم و 24 ساعة تناول الطعام علي الأقل مرتين في الأسبوع لرصد فعاليه النظام الغذائي. بدء قياسات تناول الطعام بالقرب من بداية المرحلة المظلمة. تهدف إلى تقديم نفس المجموعة من الاطعمه CAF علي أيام قياس تناول الطعام ، والمساواة لنكهة وكثافة الطاقة سوف تسمح برصد دقيق للتغيرات علي مر الزمن.
ملاحظه: قد لا يكون هذا ممكنا للدراسات التي تتطلب > 2 قياسات تناول الطعام في الأسبوع ، حيث ان التعرض المفرط لنفس الاطعمه قد يقلل من فرط التعرق مع مرور الوقت.
-
CAF وتدابير التحكم في تناول الحمية
- اعداد النظام الغذائي CAF ووضعها في حاويه المسمي لكل قفص ، وزنها وتسجيل كل مكون. يظهر الشكل 1 مجموعه مكتملة من أغذيه CAF. ويتالف الجدول 3 من نموذج لرصد الكميات الغذائية.
- أعاده ملء المياه ، السكروز ومستويات الطعام كما هو مطلوب.
-
لأقفاص الطعام (التحكم)
- بدوره زجاجات المياه حول (ينبثق) ، ووضع القفص علي مساحة العمل وأزاله الغطاء.
- تزن الفئران ومن ثم نقلها إلى قفص مع الفراش الطازجة ، مع إثراء البيئية.
- سجل الوزن من زجاجات المياه والطعام.
- استبدال غطاء القفص ، وأعاده القفص إلى رف ، ومن ثم تحويل زجاجات المياه حولها. ويمكن أضافه علامات صغيره تشير إلى "تناول الطعام" إلى القفص لاخطار الحاضرين والباحثين بعدم لمس الزجاجات والأكل.
-
لأقفاص CAF:
- تنفيذ نفس الخطوات كما في الخطوة 4.3. بالاضافه إلى ذلك مبعثر الحاوية قبل وزنها من الاطعمه CAF حول القفص مع الفراش الطازجة قبل نقل الفئران.
- ترك الفئران لمده 24 ساعة مع الحد الأدنى من الإزعاج. تسجيل اي اضطرابات غير متوقعه (علي سبيل المثال ، وصول الفئران الجديدة إلى غرفه المستعمرة ، أو التغيرات في الضوضاء المحيطة).
-
الانتهاء من قياس كميه الطعام
- سجل الوزن من زجاجات المياه والطعام لأقفاص تشاو ، والبحث بعناية في الفراش لقطع من الطعام. أزاله علامة "تناول الطعام" من أقفاص مره واحده كامله.
- اعداد حمية جديده CAF لأقفاص CAF.
- لكل قفص CAF
- سجل الوزن من الماء ، والطعام والسكروز.
- أزاله غطاء القفص والإثراء البيئي.
- أزاله شظايا CAF بعناية من الفراش ووضعها في حاويات منفصلة. أزاله أكبر القطع أولا ثم ينخل بانتظام جميع الفراش قفص من نهاية واحده إلى أخرى باستخدام حركات كاسحه لطيف.
ملاحظه: تطبيق نفس الدرجة من الرعاية لكل قفص عند جمع الطعام. سجل حيث كان قفص فوضوي بشكل خاص-في بعض الحالات الفئران طحن أسفل الكعكة و/أو البسكويت في مسحوق غرامه التي من الصعب جمع. وهذا يمكن ان يضخم بشكل مصطنع تدابير تناول الطعام.
- توزيع النظام الغذائي الجديد CAF حول القفص ، وأعاده الإثراء البيئي ، وإغلاق غطاء القفص وأعادته إلى الرف ، وأزاله "تناول الطعام" علامة.
- الوزن القياسي لكل الغذاء CAF إلى أقرب 0.1 غ. طرح الطعام المتبقي من الوزن الغذائي الاولي للحصول علي إجمالي الاغذيه المستهلكة لكل قفص ، ومن ثم تقسيم عدد الفئران في كل مربع (التالي افتراض المدخول المتساوي).
- ضرب كميه المستهلكة (ز/الفئران) من كثافة الطاقة (kJ/g) من كل المواد الغذائية المقدمة من قبل الشركة المصنعة.
ملاحظه: لحساب مغذي المدخول التي نستخدمها تفترض كثافة الطاقة من 16.7 kJ/g للكربوهيدرات والبروتين ، و 37 kJ/g للدهون.