تركز دراستنا علي اثار الليبتين في الجسم السباتي (CB) علي استجابه تنفس نقص الأكسجين (HVR). قمنا بتنفيذ تجارب "فقدان الوظيفة" قياس تاثير الليبتين علي hvr بعد تعصيب CB و ' كسب وظيفة ' التجارب قياس hvr بعد التعبير المفرط من مستقبلات الليبتين في CB.
يتطلب اشتراك JoVE لعرض هذا المحتوى. تسجيل الدخول أو ابدأ نسخة تجريبية مجانية
مقالة منهجية
النهج التجريبي لفحص الإشارات الليبتين في الأجسام السباتية وأثارها علي التحكم في التنفس
في هذه المقالة
ملخص
الملخص
هرمون ليبتين المنتجة الخلايا الشحمية هو منبه الجهاز التنفسي قويه ، والتي قد تلعب دورا هاما في الدفاع عن وظيفة الجهاز التنفسي في السمنة. الأجسام السباتية (CB) ، وهو الجهاز الرئيسي للحساسية الطرفية نقص الأكسجين ، والتعبير عن ايزوفورم وظيفية طويلة من مستقبلات الليبتين (LepRb) ولكن لم يتم توضيح دور الإشارات الليبتين في السيطرة علي التنفس تماما. درسنا استجابه تنفس نقص الأكسجين (HVR) (1) في الفئران C57BL/6J قبل وبعد ضخ ليبتين في خط الأساس وبعد denervation CB; (2) في leprb-نقص السمنة db/db الفئران في خط الأساس وبعد التعبير الفوقي leprb في CBs. في C57BL/6J الفئران ، وزيادة الليبتين HVR وأثار ليبتين علي HVR تم إلغاؤها بواسطة denervation CB. في db/db الفئران ، التعبير leprb في CB المضافة hvr. ولذلك ، نستنتج ان ليبتين يعمل في CB لزيادة الاستجابات لنقص الأكسجين.
المقدمة
أنتجت الخلايا الشحمية هرمون ليبتين يعمل في المهاد لقمع تناول الطعام وزيادة معدل الأيض. وأظهرت الدراسات التي أجريت في مختبرنا1,2 والمحققين الآخرين 3,4 ان ليبتين يزيد من استجابه hypercapnic تنفس (hvr) منع السمنة نقص التهوية في ليبتين نقص السمنة. ومع ذلك, غالبيه الافراد يعانون من السمنة المفرطة لديهم مستويات عاليه من الليبتين البلازما وتظهر مقاومه للآثار الايضيه والتنفسية للهرمون5,6,7,8. مقاومه ليبتين هو متعدد العوامل ، ولكن نفا....
الوصول مقيد. يرجى تسجيل الدخول أو بدء فترة تجريبية لعرض هذا المحتوى.
البروتوكول
وقد وافقت اللجنة المؤسسية لرعاية واستخدام الماشية (MO18M211) علي جميع البروتوكولات التجريبية.
1. ليبتين ضخ
ملاحظه: من أجل فحص تاثير الليبتين علي التنفس ، ونحن غرست جلد ليبتين في الفئران C57BL/6j العجاف بواسطة مضخة الاسموزي لرفع مستويات الليبتين المتداولة لتلك التي لوحظت في الفئران البدناء.
-
اعداد مضخة اوسموتيك
- تزن المضخة الفارغة للتحقق من الوزن الصافي للحل الذي تم تحميله.
- أضافه ليبتين (5 ملغ/مل) إلى مضخة اوسموتيك (1 μL/h لمده 3 أيام). أملا المضخة بحقنه صغيره (1 مل). بعد ملء ، إغلاق المضخة مع المقدمة حاده يميل 27 مقياس أنبوب ملء.
ملاحظه:
الوصول مقيد. يرجى تسجيل الدخول أو بدء فترة تجريبية لعرض هذا المحتوى.
النتائج
التسريب المستمر من ليبتين زيادة كبيره HVR في الفئران C57BL/6J الهزيل من 0.23 إلى 0.31 mL/min/g/ΔFiO2 (P < 0.001 ، الشكل 2)11. ألغيت CSND الزيادة الناجمة عن الليبتين في HVR (الشكل 2) ، في حين لم يلاحظ اي اثار مخففه من csnd علي hvr في مجموعه جراحه الشام بعد ضخ ليبتين.
LepRb التعبير في CB من leprb-ناقص السمنة db/db الفئران التي تسببت في زيادة كبيره في .......
الوصول مقيد. يرجى تسجيل الدخول أو بدء فترة تجريبية لعرض هذا المحتوى.
المناقشة
وكان التركيز الرئيسي للدراسة لدينا لدراسة الآثار التنفسية من الإشارات الليبتين في CB. وقد وضعت عده بروتوكولات لتقييم دور ليبتين بطريقه ميكانيكيه. أولا ، تم تحليل مساهمه محدده من CB إلى HVR عن طريق التقدير الدقيق لل HVR خلال أول 2 دقيقه من التعرض لنقص الأكسجين. ثانيا ، تم فحص اهميه CB في تنظيم التحكم في التنفس الذي يتوسطه الليبتين من خلال نهجين متكاملين. في الفئران من النوع البري الهزيل مع مستويات ليبتين منخفضه ، تم قياس HVR في خط الأساس وبعد ضخ مستمر من الليبتين. وتكررت التجربة بعد denervation CB. في lepr
الوصول مقيد. يرجى تسجيل الدخول أو بدء فترة تجريبية لعرض هذا المحتوى.
الإفصاحات
وليس لدي أصحاب البلاغ مصالح أو إفصاحات متضاربة.
شكر وتقدير
R01HL138932, RO1HL133100, RO1HL128970, AHACDA34700025
....الوصول مقيد. يرجى تسجيل الدخول أو بدء فترة تجريبية لعرض هذا المحتوى.
المواد
| الاسم | الشركة | رقم فهرسي | التعليقات |
|---|---|---|---|
| 1 مل محاقن الأنسولين | BD Biosciences | 309311 | |
| 1x PBS (درجة الحموضة 7.4) | Gibco | 10010-023 | 500 مل |
| Ad-Lacz < / em> | الدكتور كريستوفر رودس (جامعة شيكاغو) | 1 × 1010< / sup> pfu / mL | |
| Ad-LepRb-GFP< / em> | Vector Biolabs | ADV-263380 | 2-5 × 1010< / sup> pfu / مل |
| عربة التخدير | الأطلسي الطبية الحيوية | ||
| البيتادين | بوردو المنتجات المحدودة | 12496-0757-5 | |
| بوبرينورفين (بوبرينيكس) | ريكيت بينكيزر للرعاية الصحية المحدودة. | 12496-0757-5 | 0.3 مجم / مل |
| C57Bl / 6J | مختبر جاكسون | 000664 | سلالة الفئران |
| إسفنج الشاش القطني | فيشربراند | 22-362-178 | |
| ديسيبل / ديسيبل | مختبر جاكسون | 000697 | سلالة الفئران |
| الإيثانول | فارمكو AAPER | 111000200 | |
| الأيزوفلوران | |||
| الرسم البياني علوم | البيانات الدولية (DSI) | البرمجيات | |
| Matrigel Matrix | BD Biosciences | 356234 | |
| Spring Scissors | World Precision Instruments (WPI) | 14124 | |
| Mouse Ox Plus | STARR Life Sciences Corp. | برنامج | |
| ماوس Ox Plus طوق الاستشعار | STARR Life Sciences Corp. | 015022-2 | مشبك طوق متوسط خاص 7 بوصة |
| الفأر لكامل الجسم تحجم غرفة | علوم البيانات الدولية (DSI) | PLY3211 | |
| حاضنة أوهايو كير بلس | أوهيدا مقص | HCHD000173 | |
| أدوات الدقة العالمية (WPI) | 501753-G | مضخة | |
| تناضحية | Alzet | 1003D | 1 & mu ؛ لتر / ساعة ، 3 أيام |
| فينول | سيجما ألدريتش | P4557 | |
| بروتين اللبتين المؤتلف للفأر | R & أنظمة D | 498-OB-05M | 5 مجم |
| محلول ملحي | RICCA Chemical | 7210-16 | 0.9٪ خياطة جراحية معقمة كلوريد الصوديوم |
| DemeTech | DT-639-1 | حرير ، مقاس 6-0 | |
| ميزان حرارة | حلول معايرة مبتكرة (INNOCAL) | EW 20250-91 |
المراجع
- O'donnell, C. P., et al. Leptin prevents respiratory depression in obesity. American Journal of Respiratory and Critical Care Medicine. 159, 1477-1484 (1999).
- Polotsky, V. Y., et al.
الوصول مقيد. يرجى تسجيل الدخول أو بدء فترة تجريبية لعرض هذا المحتوى.
إعادة الطباعة والأذونات
