مقالة منهجية

وضع العلامات والتصوير من لويحات اميلويد في انسجه المخ باستخدام الكركمين البوليفينول الطبيعية

DOI:

10.3791/60377

⸱

نوفمبر 1, 2019

 ,  ,  ,  , 
1Field Neurosciences Institute, Ascension St. Mary's Hospital, 2Field Neurosciences Institute Laboratory for Restorative Neurology, Central Michigan University, 3Program in Neuroscience, Central Michigan University, 4Department of Psychology, Central Michigan University, 5Department of Health Sciences, Saginaw Valley State University

في هذه المقالة

ملخص

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

الكركمين هو فلوكوفيري مثاليه لوضع العلامات والتصوير من لويحات بروتين بيتا اميلويد في انسجه المخ نظرا لارتباطها التفضيلية إلى بروتين بيتا اميلويد ، فضلا عن أوجه التشابه الهيكلية مع غيرها من الاصباغ التقليدية الملزمة اميلويد. ويمكن استخدامه لتسميه وصوره لويحات بروتين بيتا اميلويد أكثر كفاءه وغير مكلفه من الأساليب التقليدية.

الملخص

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

ترسب بروتين بيتا اميلويد (Aβ) في المساحات الخارجة وداخل الخلايا هي واحده من الامراض المميزة لمرض الزهايمر (AD). ولذلك ، فان الكشف عن وجود Aβ في انسجه المخ AD هو أداه قيمه لتطوير العلاجات الجديدة لمنع تطور AD. وقد استخدمت العديد من الاصباغ الكلاسيكية الملزمة اميلويد ، الفلوروكروم ، وتحقيقات التصوير ، والأجسام المضادة الخاصة Aβ للكشف عن الرسوم البيانية Aβ في انسجه المخ AD. استخدام هذه المركبات للكشف عن Aβ مكلفه وتستغرق وقتا طويلا. ومع ذلك ، بسبب نشاطها الفلورسنت مكثفه ، عاليه التقارب ، والخصوصية ل Aβ ، فضلا عن أوجه التشابه الهيكلية مع الاصباغ التقليدية الملزمة اميلويد ، الكركمين (Cur) هو مرشح واعده لوضع العلامات والتصوير من لويحات Aβ في تشريح الجثة انسجه المخ. وهو البوليفينول طبيعيه من عشبه كركم لونغا. في الدراسة الحالية, وقد استخدمت الصورة الكترونيه لتصنيف لويحات Aβ التسمية من كل من نموذج الماوس الوراثية لمرض الزهايمر العائلي 5x (5Xبدعه) ومن الانسجه البشرية الاعلانيه في غضون دقيقه. تم مقارنه القدرة علي وضع العلامات من Cur إلى الاصباغ التقليدية الملزمة اميلويد ، مثل ثيوفلافين (Thio-S) ، الكونغو الأحمر (CR) ، وفلورو-اليشم C (FJC) ، فضلا عن الأجسام المضادة الخاصة Aβ (6E10 و A11). لاحظنا ان Cur هو الطريقة الأكثر تكلفه وأسرع لتسميه وصوره لويحات Aβ بالمقارنة مع هذه الاصباغ التقليدية وقابله للمقارنة إلى الأجسام المضادة المحددة Aβ. الاضافه إلى ذلك ، يربط Cur مع معظم الأنواع Aβ ، مثل قله المواليد وألياف الليفية. ولذلك ، يمكن استخدام Cur باعتبارها الأكثر فعاليه من حيث التكلفة ، وبسيطه ، وسريعة الفلوروكروم عامل الكشف عن لويحات Aβ.

المقدمة

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

مرض الزهايمر (الإعلان) هو واحد من الاضطرابات العصبية الأكثر شيوعا المرتبطة بالسن والتقدمية واحده من الأسباب الرئيسية للوفاة في جميع انحاء العالم1,2. ان التعلم والذاكرة وضعف الإدراك ، إلى جانب الاضطرابات النفسانية العصبية ، هي الاعراض الشائعة التي تظهر في AD3. علي الرغم من ان مسببات AD لم يتم توضيحها بالبالكامل ، تشير الادله الوراثية والبيوكيميائية والتجريبية المتاحة إلى ان الترسب التدريجي لل Aβ هو مؤشر حيوي نهائي ل AD4. يتراكم هذا البروتين غير المطوي في المساحات داخل الخلايا وخارجها ، ويعتقد انه متورط في فقدان التشابك ، وزيادة التهاب العصبي ، والضمور العصبي في المناطق القشرية والهيبوكامباله في الدماغ المتضررة بواسطة AD5. لذلك ، الكشف الكيميائي النسيجي لل Aβ في الانسجه AD هو خطوه اولي حاسمه في تطوير غير سامه ، ومكافحه اميلويد المخدرات لمنع تقدم AD.

خلال العقود القليلة الماضية ، تم استخدام العديد من الاصباغ والأجسام المضادة من قبل العديد من مختبرات البحوث لتسميه وصوره لويحات Aβ في انسجه المخ ، ولكن بعض هذه الطرق هي مضيعه للوقت والاصباغ أو الأجسام المضادة المستخدمة مكلفه ، وتتطلب العديد من الملحقات المواد الكيميائيه. ولذلك ، فان تطوير وسيله غير مكلفه للكشف عن لويحات Aβ في الدماغ AD يكون أداه جديده ترحيب. بدات العديد من المختبرات باستخدام Cur ، واعده مكافحه اميلويد الطبيعية البوليفينول ، لوضع العلامات والتصوير aβ ، فضلا عن وكيل العلاجية لل6،7،8،9. هيدروفوبيسيتيها وطبيعتها ، وأوجه التشابه الهيكلية مع الاصباغ الكلاسيكية الملزمة اميلويد ، والنشاط الفلوري القوي ، فضلا عن تقارب قوي للربط مع Aβ يجعل من فلوكوفيري مثاليه لوضع العلامات والتصوير من لويحات Aβ في الانسجه AD10 . يتم الكشف عن الخلية مع aβ-لويحات وقله الطفرات ووجودها أيضا في المساحات داخل الخلايا7,11,12,13. الاضافه إلى ذلك ، فقد ثبت ان الحد الأدنى من المبالغ (1 − 10 نانومتر) من Cur يمكن تسميه لويحات Aβ في 5x مرض الزهايمر العائلي (5Xبدعه) انسجه المخ7. علي الرغم من ان تركيز 1 نانومتر لا يوفر كثافة مضان الأمثل للعد لويحات Aβ, 10 نانومتر أو تركيز اعلي من Cur لا. ركض والزملاء14 ذكرت ان جرعات منخفضه مثل 0.2 nM من ديفلوبوبورون-ديريفاتيزيد Cur يمكن الكشف في الجسم الخارجي aβ الودائع تقريبا فضلا عن مسبار الاشعه تحت الحمراء. ما إذا كانت هذه الجرعة كافيه لتسميه لويحات Aβ في الانسجه لا يزال غير واضح. وقد استخدمت معظم الدراسات السابقة 20 − 30 دقيقه لتلطيخ لويحات Aβ باستخدام Cur ، ولكن قد يتطلب تلطيخ الأمثل وقتا اقل بكثير.

تم تصميم هذه الدراسة لاختبار الحد الأدنى من الوقت المطلوب من قبل Cur لتسميه لويحات Aβ في انسجه الدماغ AD ومقارنه حساسية لوضع العلامات والتصوير من لويحات Aβ في انسجه المخ من الفئران 5xFAD بعد تلطيخ مع Cur مع التقليدية الأخرى Aβ-الاصباغ ملزمه ، مثل ثيوفلافين (Thio-S) ، الكونغو الأحمر (CR) ، وفلورو-اليشم C (FJC). تمت مقارنه القدرة علي وضع العلامات Aβ من هذه الاصباغ الكلاسيكية الملزمة اميلويد مع تلطيخ Cur في أقسام الدماغ الاكليليه والتي تحتوي علي البارافين والتي من الفئران 5xFAD ومن العمر المتطابقة AD الإنسان والسيطرة علي انسجه المخ. وتشير النتائج إلى ان Cur تسميات Aβ لويحات بطريقه مماثله للأجسام المضادة الخاصة Aβ (6E10) وأفضل باعتدال من Thio-S ، CR ، أو FJC. الاضافه إلى ذلك ، عندما تدار الحقن داخل الصفاق من Cur إلى الفئران 5xFAD لمده 2 − 5 أيام ، عبرت حاجز الدم في الدماغ وملزمه مع لويحات Aβ7. ومن المثير للاهتمام, وقد استخدمت تركيزات نانومولار من Cur لتسميه وصوره لويحات aβ في 5xfad انسجه المخ7,14. وعلاوة علي ذلك ، يمكن تصنيف لويحات Aβ المتميزة من الناحية الشكلية ، مثل النواة ، والعصب ، والمنتشرة ، واللويحات المحترقة بواسطة Cur بكفاءة أكبر من اي من الاصباغ الأخرى التقليدية الملزمة اميلويد7. عموما ، يمكن تطبيق Cur علي التسمية وصوره لويحات Aβ في انسجه المخ بعد الوفاة من نماذج الحيوانية AD و/أو الانسجه البشرية AD بطريقه سهله وغير مكلفه ، كبديل موثوق بها للأجسام المضادة الخاصة Aβ.

الوصول مقيد. يرجى تسجيل الدخول أو بدء فترة تجريبية لعرض هذا المحتوى.

البروتوكول

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

وقد تمت الموافقة علي جميع الطرق الموصوفة هنا من قبل لجنه الرعاية والاستخدام الحيوانية (ACUC) من جامعه الدولة وادي Saginaw. تم الحصول علي الانسجه البشرية من بنك الدماغ الراسخة في معهد الصحة راية الشمس في اريزونا15,16.

1. perfusion من الحيوانية

  1. اعداد المخازن المؤقتة المثبتة والتروية.
    1. اعداد 0.1 M الفوسفات الصوديوم المخزن المؤقت عن طريق أضافه 80 g من كلوريد الصوديوم (NaCl) ، 2 غرام من كلوريد البوتاسيوم (KCl) ، 21.7 g من فوسفات الهيدروجين الصوديوم (Na2hpo4· 7h2س) ، 2.59 g من فوسفات ثنائي الهيدروجين البوتاسيوم (KH2PO4 ) ، والماء المقطر مزدوجة لجعل ما مجموعه 1 لتر.
    2. اعداد بارافورمالدهيد 4 ٪ (PFA).
      1. أضافه 40 غرام من بارافورمالدهيد إلى 1 لتر من تلفزيوني (0.1 M ، pH 7.4).
      2. يسخن محلول PFA إلى 60 − 65 درجه مئوية ويخلط باستخدام التحريك المغناطيسي.
        ملاحظه: يجب ان لا تتجاوز درجه الحرارة 65 درجه مئوية.
      3. أضافه بضع قطرات من NaOH (1 N) مع قطاره لحل PFA تماما.
      4. تصفيه الحل PFA مع المتوسطة إلى غرامه تصفيه الورق وتخزين في 4 درجه مئوية.
        ملاحظه: الحل جيد لمده شهر.
  2. اجراء التخدير الحيواني والتروية.
    ملاحظه: تم شراؤها اثني عشر شهرا من العمر B6SJL التطبيق SwFlLon ، PSEN1 * M146L * L286V ، 1136799Vas/J (5 × بدعه) الفئران التحكم المتطابقة العمر (ن = 6 لكل مجموعه) من الباعة وولدت في بيت الحيوانية من جامعه وادي Saginaw الدولة. وقد تاكد التنميط الجيني من قبل التفاعل البلمره سلسله (PCR) كما هو موضح سابقا7. وتشمل انسجه الدماغ البشرية AD بعد الوفاة انسجه الدماغ AD وانسجه التحكم العمر المتطابقة.
    1. تخدير الحيوانية مع عامل التخدير المناسب ، مثل البنتوباربيتال الصوديوم (390 ملغ/كغ من وزن الجسم) ، أو خليط الكيتامين/اكسيليازين (تصل إلى 80 ملغم/كغ من وزن الجسم الكيتامين و 10 ملغ/كغ من وزن الجسم اكسيليازين) بواسطة حقن داخل الصفاق (27 G ابره و 1 مل حقنه). التحقق من مستوي التخدير عن طريق معسر اصبع القدم. إذا كان الحيواني لا يستجيب ، ثم انها مستعدة لجراحه التروية.
    2. مكان الحيوانية تخدير في موقف ضعيف علي صينية الجراحة ترويه واستخدام مقص القزحية الصغيرة اجراء شق في النهاية الخلفية من البطين الأيسر.
    3. ادخل ابره الانصهار 22 جرام إلى البطين الأيسر واصنع شقا صغيرا في الأذين الأيمن لأزاله السائل المنصهر من الجسم. استخدام نظام ترويه تغذيه الجاذبية للسماح للسائل الجليد الباردة ترويه (0.1 M تلفزيوني ، pH 7.4) لتدفق لمده 5 − 6 دقيقه (معدل التدفق 20 − 25 مل/دقيقه).
      ملاحظه: الكبد واضح هو مؤشر الانصهار الأمثل.
    4. التبديل صمام العازلة إلى محلول الجليد الباردة 4 ٪ بارافورمالدهيد لتحديد والسماح لها بالتدفق لمده 8 − 10 دقيقه.
      ملاحظه: الهزة متبوعه بأطراف تصلب أو تصلب هي مؤشرات للتثبيت الجيد.
    5. أزاله الدماغ من الجمجمة باستخدام مقص. باستخدام ملعقة ، وجمع الدماغ ووضعه في قارورة من 4 ٪ PFA (علي الأقل 10x حجم حجم الدماغ) وتخزين في 4 درجه مئوية حتى مزيد من الاستخدام.

2. معالجه الانسجه

  1. قطع الأجزاء الباكية.
    1. نقل الدماغ إلى حلول السكروز متدرج (10 ٪ ، 20 ٪ ، و 30 ٪) وتخزين في 4 درجه مئوية لمده 24 ساعة لكل منهما ، حتى الاستخدام.
    2. باستخدام التبريد في-22 درجه مئوية ، وقطع 40 μm-المقاطع السميكة. جمع 10 − 20 المقاطع لكل بئر في 6 لوحه جيدا مليئه بالتلفزيونية والصوديوم أزيد (0.02 ٪).
  2. البارافين تضمين أقسام للماوس وانسجه المخ البشرية.
    1. لأقسام البارافين ، وأزاله الهيدرات والانسجه الدماغية الثابتة بعد 24 ساعة مع الكحول متدرج (50 ٪ ، 70 ٪ ، 90 ٪) لمده 2 ساعة لكل منهما ، تليها 100 ٪ الكحول 2x لمده 1 ساعة لكل منهما) ، ومن ثم مع الزيلين 2x لمده 1 ساعة لكل منهما) في درجه حرارة الغرفة.
    2. تخترق الانسجه مع البارافين--بارافين (1:1) 2x ل 1 ح في 56 درجه مئوية في قارورة زجاجيه مخروطيه مغطاه رقائق ألومنيوم.
    3. تزج الانسجه في البارافين المذاب (56 درجه مئوية) لمده 4 − 6 ساعة.
    4. قطع 5 ميكرون-المقاطع السميكة باستخدام ميكروتومي الدوارة في درجه حرارة الغرفة ووضعها في حمام المياه الانسجه في 45 درجه مئوية.
  3. التسمية النسيجية لويحات Aβ في أقسام التبريد مع Cur.
    1. شطف المقاطع من الخطوة 2-1-2 مع تلفزيوني (pH 7.4) 3x لمده 5 دقائق لكل منهما.
    2. تزج الأقسام في 70 ٪ الايثانول لمده 2 دقيقه في درجه حرارة الغرفة.
    3. تذوب الأوراق المالية Cur (1 ملم) في الميثانول وتمييع مع 70 ٪ الايثانول للحصول علي تركيز العمل النهائي من 10 μM.
    4. تزج الأقسام مع العمل الحل Cur لمده 1 − 5 دقيقه في درجه حرارة الغرفة علي شاكر في 150 rpm.
    5. تجاهل حل Cur ويغسل مع 70 ٪ الايثانول 3x لمده 2 دقيقه لكل منهما.
    6. وضع المقاطع علي بولي-L-يسين الشرائح الزجاجية المغلفة وجبل مع كوفيرسليب باستخدام وسائل الاعلام العضوية المتصاعدة ، مثل البلاستيك ديسلين ديسيلين (dpx).
    7. عرض تحت المجهر مضان باستخدام 480/550 nm الاثاره/مرشحات الانبعاثات.
  4. التسمية النسيجية لويحات Aβ في الماوس جزءا لا يتجزا من البارافين وأقسام الدماغ البشري مع Cur.
    1. الأقسام الانسجه من الخطوة 4.2.2 مع الزيلين 2x لمده 5 دقائق كل في درجه حرارة الغرفة.
    2. الترطيب مع حلول الكحول متدرج (100 ٪ ، 80 ٪ ، 70 ٪ ، 50 ٪ لمده 1 دقيقه لكل منهما) ومع الماء المقطر 2x لمده 5 دقائق كل في درجه حرارة الغرفة.
    3. أقسام وصمه عار مع Cur (10 μM) لمده 10 دقيقه في درجه حرارة الغرفة في الظلام ، وتهتز في 150 لفه في الدقيقة. يغسل مع 70 ٪ ، 90 ٪ ، والكحول 100 ٪ لمده 2 دقيقه لكل منهما.
    4. واضح مع الزيلين 2x لمده 5 دقائق لكل وغطاء زلة مع dpx.
    5. تصور تحت المجهر الفلوري كما هو مذكور في الخطوة 2.3.7.
  5. Colocalize Cur مع الأجسام المضادة Aβ في لويحات Aβ وقله المواليد.
    1. غسل المقاطع بالتبريد من الخطوة 2-1-2 مع تلفزيوني 3x في لوحه 12 جيدا.
    2. منع المقاطع مع 10 ٪ مصل الماعز العادي (خ ع) المذاب في الخدمات التلفزيونية مع 0.5 ٪ تريتون-X-100 في درجه حرارة الغرفة لمده 1 ساعة.
    3. تجاهل حل الحظر. احتضان الأقسام مع الأجسام المضادة الخاصة Aβ (6E10 أو A11 ، المخفف 1:200) المذاب في حل الحجب الطازجة التي تحتوي علي 10 ٪ خ ع و 0.5 ٪ تريتون-X100 بين عشيه وضحيها في 4 درجه مئوية في شاكر في 150 دوره في الدقيقة.
    4. تجاهل حل الأجسام المضادة وغسل الأقسام مع 3x تلفزيوني لمده 10 دقيقه لكل منهما.
    5. احتضان مع العلامة الأجسام المضادة الثانوية مع فلوكوفيري الأحمر (علي سبيل المثال ، اليكسا 594) لمده 1 ساعة في درجه حرارة الغرفة في الظلام.
    6. غسل مع تلفزيوني 3x لمده 10 دقيقه لكل منهما.
    7. يغسل مع 70 ٪ الكحول 1x.
    8. احتضان الأقسام مع Cur (10 μM) لمده 5 دقائق في درجه حرارة الغرفة.
    9. يغسل مع 70 ٪ الكحول 3x لمده 1 دقيقه لكل منهما.
    10. ديهيدرات مع 90 ٪ و 100 ٪ الكحول لمده دقيقه واحده لكل منهما ، واضحة مع الزيلين 2x لمده 5 دقائق لكل منهما ، وجبل علي الشرائح باستخدام dpx.
    11. تصور باستخدام المجهر مضان مع مرشحات الاثاره/الانبعاثات المناسبة للإشارات الحمراء والخضراء.
    12. للتنظير داخل الخلايا Aβ ، وصمه عار الأقسام باستخدام Aβ-الأجسام المضادة (6E10) ، restain مع Cur في درجه حرارة الغرفة في الظلام مع اهتزاز في 150 لفه في الدقيقة ، ومضاد للبقع مع اي Hoechst-33342 (1 ملغ/مل) و/أو DAPI (1ug/ml) الظلام مع اهتزاز في 150 لفه في الدقيقة. غسل مع تلفزيوني 3x.
    13. التقاط الصور باستخدام الفلاتر الحمراء والخضراء والزرقاء بهدف 100x (التكبير الإجمالي 1, 000x).
  6. تسميه لويحات Aβ مع Thio-S ، CR ، و FJC.
    ملاحظه: تم الإبلاغ عن البروتوكولات المفصلة لعلامات Thio-S و CR في السابق7.
    1. لتلطيخ FJC ، وغسل المقاطع العائمة الحرة التي تم الحصول عليها من الخطوة 2-1-2 مع تلفزيوني 3x لمده 5 دقائق لكل منهما.
    2. وضع الأقسام في 12 لوحه بئر ووصمه عار مع FJC (0.001 ٪) لمده 10 دقيقه في الظلام في درجه حرارة الغرفة.
    3. تجاهل حل FJC ويغسل مع تلفزيوني 3x لمده 5 دقائق لكل منهما.
    4. احتضان مع كلوريد الأمونيوم (NH4Cl ، 50 mM المذاب في الخدمات التلفزيونية العامة) لمده 10 دقيقه في درجه حرارة الغرفة.
    5. تجاهل الحل NH4Cl وغسل مع التلفزيونية 3x لمده 5 دقائق لكل منهما.
    6. بعد الخطوات الواردة في القسم 2.4 ، ديهيدرات مع حلول الكحول متدرج ، واضحة ، جبل ، وعرض تحت المجهر مضان باستخدام 450/520 nm الاثاره/مرشحات الانبعاثات.

الوصول مقيد. يرجى تسجيل الدخول أو بدء فترة تجريبية لعرض هذا المحتوى.

النتائج

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

الكركمين تسميات اللويحات Aβ في غضون دقيقه. عندما كنا ملطخه 5xFAD الانسجه مع Cur ، وجدنا ان التسمية Cur Aβ لويحات في غضون 1 دقيقه. علي الرغم من زيادة وقت الحضانة مع Cur زيادة طفيفه كثافة مضان من لويحات Aβ ، وكان عدد لويحات Aβ لوحظ لا تختلف اختلافا كبيرا بين 1 دقيقه و 5 دقيقه تلطيخ الوقت (الشكل 1).

يمكن التسمية الآن لويحات Aβ في المعدة بالتبريد ، والماوس جزءا لا يتجزا من البارافين والانسجه البشرية الا...

الوصول مقيد. يرجى تسجيل الدخول أو بدء فترة تجريبية لعرض هذا المحتوى.

المناقشة

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

وكانت الفرضية التي لدينا ان Cur يمكن ان تستخدم كاسرع وأسهل ، والطريقة الأقل تكلفه لتسميه وصوره لويحات Aβ في انسجه الدماغ AD بعد الوفاة بالمقارنة مع غيرها من الاصباغ الكلاسيكية الملزمة اميلويد ، فضلا عن الأجسام المضادة الخاصة Aβ. وكانت أهداف هذه الدراسة لتحديد الحد الأدنى من الوقت اللازم لتسميه وصوره لويحات Aβ بواسطة Cur في انسجه الدماغ AD بعد الوفاة وتحديد ما إذا كان يمكن استخدام Cur كبديل للأجسام المضادة Aβ لتسميه لويحات Aβ. وتحقيقا لهذه الغاية ، لوحظت القدرة علي وضع العلامات الخاصة ب Cur في نقاط زمنيه مختلفه. وكان الCu...

الوصول مقيد. يرجى تسجيل الدخول أو بدء فترة تجريبية لعرض هذا المحتوى.

الإفصاحات

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

وليس لدي المؤلفين ما يفصحون عنه.

شكر وتقدير

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

وجاء الدعم لهذه الدراسة من معهد أعصاب الميداني في اسنسيون سانت ماري.

الوصول مقيد. يرجى تسجيل الدخول أو بدء فترة تجريبية لعرض هذا المحتوى.

المواد

قائمة المواد المستخدمة في هذه المقالة
الاسمالشركةرقم فهرسيالتعليقات
4 & prime ؛ ، 6-diamidino-2-phenylindole (DAPI)IHC world ، وودستوك ، MD
نموذج Aanimal لمرض الزهايمرمختبر جاكسون ، بار هاربور ، ME
الكحولالمطلق VWR ، رادنور ، بنسلفانيا
Alexa 594Santacruz Biotech ، دالاس ، تكساس
الأجسام المضادة 6E10Biolegend ، سان دييغو ، كاليفورنيا
الأجسام المضادة A11Millipore ، Burlington ، MA
مجهر ضوئي مركبأوليمبوس ، شينجوكو ، اليابانأوليمبوس BX51
الكونغو الأحمرسيجما ، سانت لويس ، MO
CryostatGMI ، رامزي ، مينيسوتاLeicaCM1800
الكركمينسيجما ، سانت لويس ، ميزوري
هيدروجين ثنائي الصوديوم فوسفاتسيجما ، سانت لويس ، ميزوري
ملدنات ديسترين زيلينBDH ، داوسونفيل ، جورجيا
أوراق الترشيحفيشر العلمية ، بيتسبرغ ، بنسلفانيا
Hoechst-33342سيجما ، سانت لويس ، ميزوري
مجهر الفلورسنت المقلوبلايكا ، بوفالو جروف ، إلينويلايكا DMI 6000B
الفلورسنت المقلوب مجهرأوليمبوس ، شينجوكو ، اليابانأوليمبوس 1x70
مصل الماعز العاديسيجما ، سانت لويس ، ميزوري
بارافينسيجما ، سانت لويس ، ميزوري
بارافورمالدهيدسيجما ، سانت لويس ، ميزوري
شريحة زجاجية مشحونة مطلية ب Ploy-lysineGlobe Scientific Inc ، Mahwah ، NJ
كلوريدالبوتاسيومسيجما ، سانت لويس ، ميزوري
فوسفات ثنائي هيدروجين البوتاسيومسيجما ، سانت لويس ، MO
أزيد الصوديومسيجما ، سانت لويس ، ميزوري
كلوريد الصوديومسيجما ، سانت لويس ، ميزوري
هيدروكسيد الصوديومEMD ميليبور ، برلنغتون ، ماساتشوستس
الصوديوم بنتوباربيتالفورتكس للمستحضرات الصيدلانية المحدودة ، ديربورن ، ميشيغان
ثيوفلافين إسسيجما ، سانت لويس ، ميزوري
تريتون-X-100سيجما ، سانت لويس ، ميزوري
زيلينVWR ، رادنور ، بنسلفانيا

المراجع

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,
  1. Cummings, J. L. Alzheimer's disease. New England Journal of Medicine. 351 (1), 56-67 (2004).
  2. Jack, C. R., Holtzman, D. M. Biomarker modeling of Alzheimer's disease. Neuron. 80 (6), 1347-1358 (2013).
  3. Tarawneh, R., Holtzman, D. M. The clinical problem of symptomatic Alzheimer disease and mild cognitive impairment. Cold Spring Harbor Perspectives in Medicine. 2 (5), (2012).
  4. Selkoe, D. J. Cell biology of protein misfolding: the examples of Alzheimer's and Parkinson's diseases. Nature Cell Biology. 6 (11), 1054-1061 (2004).
  5. Hardy, J., Allsop, D. Amyloid deposition as the central event in the aetiology of Alzheimer's disease. Trends in Pharmacological Sciences. 12 (10), 383-388 (1991).
  6. Chen, M., et al. Use of curcumin in diagnosis, prevention, and treatment of Alzheimer's disease. Neural Regeneration Research. 13 (4), 742-752 (2018).
  7. Maiti, P., et al. A comparative study of dietary curcumin, nanocurcumin, and other classical amyloid-binding dyes for labeling and imaging of amyloid plaques in brain tissue of 5x-familial Alzheimer's disease mice. Histochemistry and Cell Biology. 146 (5), 609-625 (2016).
  8. Maiti, P., Dunbar, G. L. Use of Curcumin, a Natural Polyphenol for Targeting Molecular Pathways in Treating Age-Related Neurodegenerative Diseases. International Journal of Molecular Sciences. 19 (6), (2017).
  9. Maiti, P., Dunbar, G. L. Comparative Neuroprotective Effects of Dietary Curcumin and Solid Lipid Curcumin Particles in Cultured Mouse Neuroblastoma Cells after Exposure to Abeta42. International Journal of Alzheimer's Disease. , (2017).
  10. den Haan, J., Morrema, T. H. J., Rozemuller, A. J., Bouwman, F. H., Hoozemans, J. J. M. Different curcumin forms selectively bind fibrillar amyloid beta in post mortem Alzheimer's disease brains: Implications for in-vivo diagnostics. Acta Neuropathologica Communications. 6 (1), 75(2018).
  11. Koronyo, Y., et al. Retinal amyloid pathology and proof-of-concept imaging trial in Alzheimer's disease. JCI Insight. 2 (16), (2017).
  12. Koronyo, Y., Salumbides, B. C., Black, K. L., Koronyo-Hamaoui, M. Alzheimer's disease in the retina: imaging retinal abeta plaques for early diagnosis and therapy assessment. Neurodegenerative Diseases. 10 (1-4), 285-293 (2012).
  13. Koronyo-Hamaoui, M., et al. Identification of amyloid plaques in retinas from Alzheimer's patients and noninvasive in vivo optical imaging of retinal plaques in a mouse model. NeuroImage. 54 (Suppl 1), S204-S217 (2011).
  14. Ran, C., et al. Design, synthesis, and testing of difluoroboron-derivatized curcumins as near-infrared probes for in vivo detection of amyloid-beta deposits. Journal of the American Chemical Society. 131 (42), 15257-15261 (2009).
  15. Beach, T. G. The Sun Health Research Institute Brain Donation Program: Description and Experience, 1987-2007. Cell Tissue Bank. 9 (3), 229-245 (2008).
  16. Green, S. J., Killiany, R. J. Subregions of the inferior parietal lobule are affected in the progression to AD. Neurobiology of Aging. 31 (8), 1304-1311 (2010).
  17. Ono, K., Hasegawa, K., Naiki, H., Yamada, M. Curcumin has potent anti-amyloidogenic effects for Alzheimer's beta-amyloid fibrils in vitro. Journal of Neuroscience Research. 75 (6), 742-750 (2004).
  18. Garcia-Alloza, M., Borrelli, L. A., Rozkalne, A., Hyman, B. T., Bacskai, B. J. Curcumin labels amyloid pathology in vivo, disrupts existing plaques, and partially restores distorted neurites in an Alzheimer mouse model. Journal of Neurochemistry. 102 (4), 1095-1104 (2007).
  19. Mutsuga, M., et al. Binding of curcumin to senile plaques and cerebral amyloid angiopathy in the aged brain of various animals and to neurofibrillary tangles in Alzheimer's brain. Journal of Veterinary Medical Science. 74 (1), 51-57 (2012).
  20. Tei, M., Uchida, K., Mutsuga, M., Chambers, J. K., Nakayama, H. The binding of curcumin to various types of canine amyloid proteins. Journal of Veterinary Medical Science. 74 (4), 481-483 (2012).
  21. Liu, L., Komatsu, H., Murray, I. V., Axelsen, P. H. Promotion of amyloid beta protein misfolding and fibrillogenesis by a lipid oxidation product. Journal of Molecular Biology. 377 (4), 1236-1250 (2008).
  22. Wu, C., Scott, J., Shea, J. E. Binding of Congo red to amyloid protofibrils of the Alzheimer Abeta(9-40) peptide probed by molecular dynamics simulations. Biophysical Journal. 103 (3), 550-557 (2012).
  23. Wu, C., Wang, Z., Lei, H., Zhang, W., Duan, Y. Dual binding modes of Congo red to amyloid protofibril surface observed in molecular dynamics simulations. Journal of the American Chemical Society. 129 (5), 1225-1232 (2007).
  24. Gutierrez, I. L., et al. Alternative Method to Detect Neuronal Degeneration and Amyloid beta Accumulation in Free-Floating Brain Sections With Fluoro-Jade. ASN Neuro Methods. 10, 1-7 (2018).
  25. Yang, F., et al. Curcumin inhibits formation of amyloid beta oligomers and fibrils, binds plaques, and reduces amyloid in vivo. Journal of Biological Chemistry. 280 (7), 5892-5901 (2005).

الوصول مقيد. يرجى تسجيل الدخول أو بدء فترة تجريبية لعرض هذا المحتوى.

إعادة الطباعة والأذونات

طلب إذن لإعادة استخدام النص أو الأشكال في مقالة JoVE هذه

طلب إذن

الوسوم

مقالات ذات صلة