مقالة منهجية
يصف هذا البروتوكول كيفيه قياس نفاذيه المعوية من الايلي+آت Caenorhabditis. هذا الأسلوب مفيد للبحوث البيولوجية الاساسيه علي الصحة المعوية المتعلقة بالتفاعل بين البكتيريا المعوية والمضيفة وللكشف لتحديد عوامل بروبيوتيك والكيميائية لعلاج متلازمة الأمعاء المتسربة وامراض الأمعاء التهابيه.
في الكائنات الحية ، فرط نفاذيه الأمعاء هو أحد الاعراض الخطيرة التي تؤدي إلى العديد من امراض الأمعاء التهابيه (IBDs). Caenorhabditis ايليتس هو نموذج الحيوانية غير الثدييات التي تستخدم علي نطاق واسع كنظام الفحص بسبب عمرها القصير ، والشفافية ، والفعالية من حيث التكلفة ، وعدم وجود قضايا الأخلاق الحيوانية. في هذه الدراسة, تم تطوير طريقه للتحقيق في اثار البكتيريا المختلفة و 3, 3 '-دييندوليلميميثان (خافت) علي نفاذيه الأمعاء من c. اليجانينات مع نظام تحليل الصور عاليه الانتاجيه. كانت الديدان مصابه ببكتيريا الأمعاء المختلفة أو cotreated مع DIM ل 48 h وتتغذي مع فلوريسئين ايزوثيسيانات (FITC)-ديكدكان بين عشيه وضحيها. ثم ، تم فحص نفاذيه الأمعاء عن طريق مقارنه الصور مضان وكثافة مضان داخل الهيئات دوده. قد يكون هذا الأسلوب أيضا القدرة علي تحديد بروبيوتيك والبكتيريا المعوية المسببة للامراض التي تؤثر علي نفاذيه الأمعاء في نموذج الحيوانية وفعاله لدراسة اثار المواد الكيميائية الضارة أو تعزيز الصحة علي نفاذيه الأمعاء والصحة المعوية. ومع ذلك ، فان هذا البروتوكول لديه أيضا بعض القيود الكبيرة علي المستوي الجيني ، وخاصه لتحديد الجينات التي يتم تغييرها للسيطرة علي المرض ، لان هذا الأسلوب يستخدم في الغالب لتحديد النمط الظاهري. الاضافه إلى ذلك ، يقتصر هذا الأسلوب لتحديد بالبالضبط اي المواد المسببة للامراض تسبب التهاب أو زيادة نفاذيه الأمعاء الديدان اثناء العدوى. ولذلك ، هناك حاجه إلى مزيد من الدراسات المتعمقة ، بما في ذلك التحقيق في اليه الوراثية الجزيئية باستخدام البكتيريا المتحولة والديدان الخيطية ، فضلا عن تحليل المكونات الكيميائية للبكتيريا ، لتقييم كامل وظيفة البكتيريا والمواد الكيميائية في تحديد نفاذيه الأمعاء.
تعتبر نفاذيه الأمعاء واحده من الحواجز الرئيسية المتعلقة بالجراثيم المعوية والمناعة المخاطية ومن المرجح ان تتاثر بعوامل عديده ، مثل تعديلات الأمعاء الدقيقة ، والضعف الظهاريه ، أو تعديلات طبقه المخاط1. وقد أفادت الصحف الاخيره بروتوكولات فعاله لقياس نفاذيه الأمعاء من خلايا الأمعاء البشرية مثقف من خلال تحليل معدلات الجريان الفلورية عبر طبقه الخلايا المعوية2، ولكن عدد اقل من الأوراق البحثية تقديم اجراء مناسب لقياس نفاذيه الأمعاء في الديدان الخيطية ، وخاصه في c. اليجنيديس.
هناك نوعان من البروتوكولات التمثيلية لقياس نفاذيه الأمعاء في c. اليجليفس باستخدام النيل الأحمر
الوصول مقيد. يرجى تسجيل الدخول أو بدء فترة تجريبية لعرض هذا المحتوى.
1. اعداد الزنجاريه PAO1 و القولونية OP50 الثقافة
الوصول مقيد. يرجى تسجيل الدخول أو بدء فترة تجريبية لعرض هذا المحتوى.
بعد الحضانة مع p. الزنجاريه PAO1 ، وأظهرت c. اليجايليس زيادة كبيره في الفلورية fitc-ديكسكان في الجسم دوده مقارنه مع الفلورية التي تظهر بعد الحضانة مع سلالات بكتيرية أخريين (الشكل 1). كثافة مضان من الديدان التي تغذيها e. القولونية OP50, p. الزنجاريه PAO1, و e. البرازيه KCTC3206 كانت 100.0 ± 6.6, 369.7 ± 38.9, 105.6 ± 10.6%, علي التوالي. وتؤكد البيانات ان الزنجاريه تسبب ضررا أكثر حيوية لحاجز الأمعاء الظهاريه ، التالي ، أظهرت الديدان زيادة ك.......
الوصول مقيد. يرجى تسجيل الدخول أو بدء فترة تجريبية لعرض هذا المحتوى.
من خلال استخدام هذه الطريقة الجديدة لتحديد نفاذيه الأمعاء في c. اليجايليس ، والذي يجمع بين المجهر الألى المجهري وتحليل الصورة الكمية ، والاختلافات الناجمة عن الكائنات المجهرية المعوية أو المواد الكيميائية يمكن تحديدها في الجسم المجري ، وتحديدا في الأمعاء c. . هذا البروتوكول مفيد للتحقيقات نفاذيه الأمعاء وتنطبق علي العديد من المهام ، مثل تحديد أنواع الأكسجين التفاعلية (ROS) في ظل ظروف الإجهاد والفحوص المورفولوجية ، وذلك بسبب راحتها والتلاعب سهله. وعلاوة علي ذلك ، يمكن استخدام هذه الطريقة لتحديد اثار الطر.......
الوصول مقيد. يرجى تسجيل الدخول أو بدء فترة تجريبية لعرض هذا المحتوى.
وليس لدي المؤلفين ما يفصحون عنه.
وقد حظيت هذه الدراسة بدعم معهد كوريا للبحوث العلمية والتكنولوجية (2E29563).
....الوصول مقيد. يرجى تسجيل الدخول أو بدء فترة تجريبية لعرض هذا المحتوى.
| الاسم | الشركة | رقم فهرسي | التعليقات |
|---|---|---|---|
| 3،3'-diindolylmethane | سيجما | D9568 | |
| 90 & مرة ؛ أطباق بتري 15 مم | SPL علوم الحياة ، كوريا الجنوبية | 10090 | |
| 60 & مرة ؛ أطباق بتري 15 ملم | SPL علوم الحياة ، كوريا الجنوبية | 10060 | |
| باكتر أجار | بيكتون ديكنسون | المرجع 214010 | |
| محلول الفورمالديهايد | سيجما | F1635 | |
| تسريب قلب الدماغ (BHI) | Becton Dickinson | REF. 237500 | |
| Caenorhabditis elegans N2 | مركز Caenorhabditis لعلم الوراثة (CGC) | النوع البري | |
| الكوليسترول | سيجما | C3045 | |
| كوستا ، 96 بئر أسود مع قاع مسطح شفاف غير معالج ، بدون غطاء بوليسترين | كورنينج إنكوربوريتد | المرجع 3631 | |
| ثنائي ميثيل سلفوكسيد | Sigma | D2650 | |
| المكورات المعوية البرازية KCTC 3206 | المجموعة الكورية لثقافة النوع | KCTC رقم 3206 | القولونية اللاهوائية |
| OP50 | مركز Caenorhabditis لعلم الوراثة (CGC) | ||
| الفلورسين إيزوثيوسيانات - dextran | Sigma | FD10S | |
| Harmony software | PerkinElmer | verson 3.5 | |
| Luria-Bertani LB متوسط | Merck | VM743185 626 1.10285.5000 | |
| كبريتات المغنيسيوم سباعي الهيدرات | فيشر Bioreagents | BP2213-1 | |
| Fluoromount تصاعد مائي متوسط | Sigma | F4680 | |
| Operetta CLS نظام تحليل المحتوى | العالي PerkinElmer | & nbsp ؛ HH16000000 | |
| Peptone | Merck | EMD 1.07213.1000 | |
| Pseudomonas aeruginosa PA01 | المجموعة الكورية لثقافة النوع | KCTC رقم 1637 | |
| كواشف حيوية | لكلوريد الصوديوم | فيشر BP358-1 | |
| مجهر ستيريو | نيكون ، اليابان | SMZ800N | |
| مستخلص الخميرة | Becton Dickinson | REF. 212750 |
الوصول مقيد. يرجى تسجيل الدخول أو بدء فترة تجريبية لعرض هذا المحتوى.
طلب إذن لإعادة استخدام النص أو الأشكال في مقالة JoVE هذه
طلب إذن