Method Article

تصميم دعامة الرغامي المضادة للادويه المتوافقة بيولوجيا في الفئران مع تضيق الحنجرة

DOI:

10.3791/60483

⸱

January 21st, 2020

 ,  ,  ,  ,  ,  , 
1Department of General Surgery, University of California, San Francisco, 2Department of Otolaryngology Head and Neck Surgery, Johns Hopkins School of Medicine

In This Article

Summary

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

ينتج تضيق الحنجرة من ترسب الندبة الباثولوجي الذي يضيق بشكل خطير مجري القصبات الهوائية ويفتقر إلى العلاجات الطبية الفعالة. باستخدام PLLA-PCL (70 ٪ بولي-L-lactide و 30 ٪ polycaprolactone) الدعامات كنظام تسليم المخدرات المحلية ، يمكن دراسة العلاجات المحتملة التي تهدف إلى خفض انتشار ندبه في القصبة الهوائية.

Abstract

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

تضيق الحنجرة (لتر) هو تضييق باثولوجي للتهاب الرغامي والقصبة الهوائية مما يؤدي إلى انسداد خارج المضيق وضيق كبير في التنفس. ينتج هذا المرض عن أصابه الغشاء المخاطي من جسم غريب في القصبة الهوائية ، مما يؤدي إلى تلف الانسجه والاستجابة التهابيه المحلية التي تذهب بشكل منحرف ، مما يؤدي إلى ترسب الانسجه المصابة بندبات مرضيه. العلاج لل ه هو الجراحية بسبب عدم وجود العلاجات الطبية الفعالة. والغرض من هذا الأسلوب هو بناء الدعامات المتوافقة مع الحيوية التي يمكن تصغيرها لوضعها في الفئران مع لتر. أظهرنا ان PLLA-PCL (70 ٪ بولي-L-lactide و 30 ٪ polycaprolactone) بناء كان الأمثل نشاط القوه ، كانت متوافقة بيولوجيا ، عمليا في وضع الدعامات في الجسم الحيوي ، وقادره علي التملص من المخدرات. يوفر هذا الأسلوب نظام تسليم المخدرات لاختبار العوامل المناعية المختلفة لمنع التهاب محليا والحد من تليف مجري التنفس. تصنيع الدعامات ياخذ 28 − 30 ح ويمكن استنساخها بسهوله ، مما يسمح للتجارب مع الأفواج الكبيرة. هنا أدرجنا راباميسين المخدرات داخل الدعامة لاختبار فعاليتها في الحد من التليف وترسب الكولاجين. وكشفت النتائج ان الخيام plla-PCL أظهرت الإفراج عن راباميسين موثوق بها ، وكانت مستقره ميكانيكيا في الظروف الفسيولوجية ، وكانت متوافقة بيولوجيا ، مما يحفز استجابه التهابيه قليلا في القصبة الهوائية. وعلاوة علي ذلك ، فان الدعامات PLLA-PCL التي تقلل من الندبات في القصبة الهوائية في الجسم المجري.

Introduction

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

تضيق القصبة الهوائية هو تضييق باثولوجي للرغامي في معظم الأحيان بسبب الاصابه بعد التنبيب الضموري. الجمع بين الاستعمار البكتيري ، استجابه الجسم الاجنبيه لفغر الرغامي أو أنبوب الرغامي ، والعوامل الخاصة بالمريض تؤدي إلى استجابه التهابيه شاذة. يؤدي هذا الاستجابة المناعية غير المتكيفة إلى ترسب الكولاجين في القصبة الهوائية ، مما يؤدي إلى تضييق القصبة الهوائية والتضيق اللاحق1،2. ونظرا لان العلاج الحالي لهذا المرض هو في المقام الأول الجراحية ، وتطوير بديل العلاج الطبي القائم علي نموذج استهداف مسارات التهابيه والخبيثة المنحرفة التي تؤدي إلى ترسب الكولاجين المفرط قد درست. راتاميسين ، الذي يمنع مركب الإشارات mTOR ، وقد ثب....

Access restricted. Please log in or start a trial to view this content.

Protocol

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

ملاحظه: تمت الموافقة علي جميع الطرق الموصوفة هنا من قبل لجنه الرعاية الحيوانية والاستخدام التابعة لجامعه جونز هوبكنز (MO12M354).

1. اعداد راباميسين في plla-PCL

  1. اعداد قارورة زجاجيه اثنين (مع قبعات) من 70:30 البوليمر PLLA-PCL الحلول (اللزوجة المتاصله 1.3 − 1.8 DL/G ؛ جدول المواد) الحلول ، مع قارورة واحده تحتوي علي 1.0 ٪ راباميسين والاخر دون راباميسين.
    1. جعل 1.0 ٪ راباميسين التي تحتوي علي محلول البوليمر عن طريق أضافه 6 ملغ من راباميسين إلى 600 ملغ من 70:30 plla-PCL في قارورة زجاجيه.
    2. لمحلول البوليمر دون راباميسين (السيطرة) ، أضافه فقط 600 ملغ من 70:30 plla-PCL إلى قارورة زجاجيه.

Access restricted. Please log in or start a trial to view this content.

Results

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

وكان بناء الدعامات plla-PCL القابلة للتحلل التي تم تحميلها مع راباميسين المستخدمة في هذه الدراسة قادره علي التملص راباميسين بطريقه متسقة ويمكن التنبؤ بها في الظروف الفسيولوجية (الشكل 1). يبين الشكل 2 الدعامة PLLA-PCL التي تم وضعها حول مقياس الشعيرات 22 جرام لاستخدامها في نموذج murine. لتحديد ما إذا كانت اثار التملص من راباميسين في القصبة الهوائية فعاله في التخفيف من التليف ، يمكن تقييم التغيرات المقيسة في التعبير الجيني المرتبط بالتليف وعلامات التهاب الحاد من خل.......

Access restricted. Please log in or start a trial to view this content.

Discussion

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

الخطوات الأكثر اهميه لبناء بنجاح واستخدام الدعامات المخدرات التملص في الجسم الحيوي هي 1) تحديد نسبه PLLA-PCL الأمثل لمعدل الإدمان المخدرات مرغوب فيه ، 2) تحديد التركيز المناسب من المخدرات ليكون التملص ، 3) صب الدعامات حول الاوعيه الدموية لاستخدامها في الجسم الفيفو ، و 4) نقل الدعامات عبر الفم إلى الفئران بعد الحث الكهربائي الهوائي دون التسبب في انسداد مجري التنفس المميت.

في حين ان هناك عده طرق لتسليم المخدرات باستخدام الدعامات في النماذج الحيوانية من امراض المسالك الهوائية ، وتطوير دعامة حيوية.......

Access restricted. Please log in or start a trial to view this content.

Disclosures

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

وليس لدي المؤلفين ما يفصحون عنه.

Acknowledgements

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

المعهد الوطني لامراض الصمم وغيرها من اضطرابات الاتصال في المعاهد الوطنية للصحة تحت رقم الجائزة 1K23DC014082 و 1K23DC014082 (الكسندر هليل). وقد دعمت هذه الدراسة أيضا ماليا من قبل الجمعية الثلاثية والكلية الامريكيه للجراحين (الكسندر هليل) ، ومؤسسه الجمعية الطبية الامريكيه ، شيكاغو ، IL (Madhavi Duvvuri) ومنحه T32 NIDCD التدريب (كيفن Motz).

....

Access restricted. Please log in or start a trial to view this content.

Materials

List of materials used in this article
NameCompanyCatalog NumberComments
<قوي>1. بالنسبة للدعامات < / قوية >
22 مقياس قسطرة الأوعيةالدموية Jelco4050
ثنائي كلورو ميثانسيجما ألدريتش270997-100ML
GlycerolFisher Scientific56-81-5متوفر من البائعين الآخرين أيضا.
PDLGASigma Aldrich739955-5G
PLLA-PCL (70: 30)Evonik Industries AG65053
RapamycinLC LaboratoriesR-5000
2. جراحة< / قوية >
فرشاة الأسلاكشركة Mill-Rose320101
3. لتلوين الكيمياء المناعية < / قوي >
مستضد عازلة retririvalAbcamab93678متوفر من بائعين آخرين أيضا ؛ الرقم الهيدروجيني الحمضي المطلوب
DAPICell Signaling8961S
DMEMThermoFisher Scientific11965-092متاح من البائعين الآخرين أيضا.
FBS (مصل الأبقار الجنينية)MilliporeSigmaF4135-500ML
الماعز المضاد للأرانب -488تقنية Lifa11008
الماعز المضاد للجرذان 633 تقنيةLifa21094
Hydrophilic plus slideBSB7028
PBSThermoFisher Scientific100-10023متوفر من بائعين آخرين أيضا.
الأرانب المضادة للجسم المضاد ل CD3Abcamab5690
الفئران المضادة للجسم المضاد F4 / 80Biolengend123101
Zeiss LSM 510 Metaالمجهر Zeiss
4. للحصول على الخرز الزجاجي الكمي PCR< / قوي >
0.5 ممOMNI International19-645
مطحنة الخرزة الخرزة الخالطيOMNI International
Gene Specific Forward / Reverse Primersالموارد الجينومية المنشأة
Nanodrop 2000 مقياس الطيفالضوئي الطاقة العلمية الحرارية
SYBR Green MastermixLife Technologies4367659
RNeasy mini kitQiagen80404
StepOnePlus Real Time PCR SystemLife Technologies
Confocal الأساسية

References

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,
  1. Minnigerode, B., Richter, H. G. Pathophysiology of subglottic tracheal stenosis in childhood. Progress in Pediatric Surgery. 21, 1-7 (1987).
  2. Wynn, T. A. Fibrotic disease and the T(H)1/T(H)2 paradigm. Nature Reviews Immunology. 4 (8), 583-594 ....

Access restricted. Please log in or start a trial to view this content.

Reprints and Permissions

Request permission to reuse the text or figures of this JoVE article

Request Permission

Tags

Laryngotracheal StenosisDrug Eluting StentPLLA PCL PolymerRapamycin ReleaseTransoral IntubationTracheal Injury ModelBiocompatibility TestingFlow Cytometry AnalysisImmunohistochemistry StainingMurine Airway Model

Related Articles