نحن نصف بروتوكول التطعيم المتأخر لتوليد التهابات الجروح المزمنة في الفئران ذات الكفاءة المناعية.
يتطلب اشتراك JoVE لعرض هذا المحتوى. تسجيل الدخول أو ابدأ نسخة تجريبية مجانية
مقالة منهجية
نموذج التلقيح المتأخر لعدوى الجروح المزمنة الزائفة الجيروجينوسا
* These authors contributed equally
في هذه المقالة
ملخص
الملخص
Pseudomonas aeruginosa (P. aeruginosa)هو أحد مسببات الأمراض الرئيسية nosocomial ذات الصلة المتزايدة لصحة الإنسان والمرض, لا سيما في وضع التهابات الجروح المزمنة في مرضى السكري والمستشفيات. هناك حاجة ملحة لنماذج العدوى المزمنة للمساعدة في التحقيق في مسببات الجروح وتطوير علاجات جديدة ضد هذا العامل الممرض. هنا ، نصف بروتوكول يستخدم التطعيم المتأخر بعد 24 ساعة من جرح الاستئصال الكامل السماكة. عدوى مصفوفة الجرح المؤقت الحالي في هذا الوقت إما إحباط التطهير السريع أو نشر العدوى وبدلا من ذلك يؤسس العدوى المزمنة تستمر 7-10 أيام دون الحاجة إلى زرع مواد أجنبية أو قمع المناعة. يحاكي هذا البروتوكول مسارًا زمنيًا نموذجيًا للعدوى بعد الجراحة في البشر. استخدام سلالة P. aeruginosa الإنارة (PAO1:lux) يسمح للتقييم الكمي اليومي للعبء البكتيري لالتهابات الجروح P. aeruginosa. قد يكون هذا النموذج الجديد أداة مفيدة في التحقيق في الإمراض البكتيري وتطوير علاجات جديدة لالتهابات الجروح P. aeruginosa المزمنة.
المقدمة
Pseudomonas aeruginosa (P. aeruginosa)هي بكتيريا على شكل قضيب سلبي الغرام مع زيادة صلتها بصحة الإنسان والمرض. وهي مسؤولة عن المراضة والوفيات واسعة النطاق في البيئات nosocomial، ولا سيما التي تنطوي على التهابات الجروح في المرضى الذين يعانون من نقص المناعة1،2. وقد وفرت ظهور سلالات مقاومة للأدوية المتعددة من هذا العامل الممرض المزيد من الزخم للتحقيق في العوامل التي تسهم في فوعة P. aeruginosa ، وآليات مقاومة المضادات الحيوية P. aeruginosa ، وأساليب جديدة للوقاية والعلاج من هذه العدوى القاتلة3. وعلى هذا النحو، فإن الحاجة إلى نماذج الحيوانات من عدوى الجروح ....
الوصول مقيد. يرجى تسجيل الدخول أو بدء فترة تجريبية لعرض هذا المحتوى.
البروتوكول
تمت الموافقة على جميع الطرق الموضحة هنا من قبل لجنة رعاية الحيوانات المؤسسية واستخدامها (IACUC) في جامعة ستانفورد.
1. إعداد ونمو البكتيريا
- إجراء جميع الأعمال مع P. aeruginosa والحيوانات مع احتياطات BSL-2 لكل لجنة السلامة البيولوجية المؤسسية للباحث والمبادئ التوجيهية للجنة استخدام الحيوانات. القيام بجميع الخطوات الموضحة هنا التي تنطوي على P. aeruginosa، بما في ذلك تلقيح الماوس ، في مجلس الوزراء السلامة البيولوجية.
- وPAO1 الإنارة: سلالة لوكس من P. aeruginosa يتوفر من مختبرنا حسب الطلب. Streak PAO1، المخزنة كمخزون الجلسرين المجمدة، على ليسوجيني مرق (LB) أغار. بالنسبة لسلالة PAO1: لوكس التجويفية، يج....
الوصول مقيد. يرجى تسجيل الدخول أو بدء فترة تجريبية لعرض هذا المحتوى.
النتائج
باستخدام سلالة الإنارة من PAO1 مع البلازميد ترميز نظام مراسل luxABCDE (PAO1:lux)، قمنا بإجراء جرح الختان على الفئران، وتلقيح هذه الجروح مع العوالق P. aeruginosa 24 ح في وقت لاحق، وقياس العبء البكتيري على مر الزمن(الشكل 1 والشكل 2). صورة تمثيلية تم الحصول عليها باستخدام نظام بصري التصوير يوضح أن هذا النموذج يؤدي إلى التلألؤ يمكن الكشف عنها(الشكل 3A). بلغت العدوى ذروتها في الي.......
الوصول مقيد. يرجى تسجيل الدخول أو بدء فترة تجريبية لعرض هذا المحتوى.
المناقشة
لقد وضعنا رواية تأخر التطعيم P. aeruginosa نموذج عدوى الجرح. استراتيجية تأخير التطعيم مع البكتيريا حتى 24 ساعة بعد جرح الختان تمكن من تقييم التهابات الجروح على مدى فترة زمنية 1 أسبوع. باستخدام سلالة الإنارة من P. aeruginosa، فمن الممكن لتتبع تطور العدوى في جميع أنحاء دورة العدوى. وسيتيح المسار الأطول للعدوى مقارنة بنماذج العدوى الأخرى P. aeruginosa فرصًا جديدة لدراسة تفاعلات الممرض المضيف والعلاجات الجديدة التي تستهدف التهابات الجروح P. aeruginosa. على سبيل المثال ، استخدمنا بالفعل هذا.......
الوصول مقيد. يرجى تسجيل الدخول أو بدء فترة تجريبية لعرض هذا المحتوى.
الإفصاحات
وليس لأصحاب البلاغ مصالح مالية متنافسة للكشف عنها.
شكر وتقدير
وكان pUT-Tn5-EM7-lux-Km1 الإنارة بناء ناقلات هدية كريمة من J. هاردي. تم إنشاء التخطيطات مع BioRender.com. نشكر مختبر (جي غورتنر) على نصائحهم بشأن نموذج عدوى الجروح كما نشكر ت. دويل من مركز ستانفورد للابتكار في التصوير في فيفو على خبرته التقنية. تم دعم هذا العمل من خلال المنح R21AI133370، R21AI133240، R01AI12492093، والمنح من ستانفورد سبارك، وثقة الأبحاث الطبية فالك ومؤسسة التليف الكيسي (CFF) إلى P.L.B. C.R.D كان مدعوما من قبل T32AI007502. زمالة خريج ة في جامعة غابلان ستانفورد للعلوم والهندسة وزمالة لوبرت ستراير بيو-إكس ستانفورد للدراسات العليا متعددة التخصصات تدعم J.M.S.
....الوصول مقيد. يرجى تسجيل الدخول أو بدء فترة تجريبية لعرض هذا المحتوى.
المواد
| الاسم | الشركة | رقم فهرسي | التعليقات |
|---|---|---|---|
| 0.9٪ حقن كلوريد الصوديوم | Hospira | 2484457 | |
| 18 جم × 1 إبرة معقمة | BD | 305195 | |
| 25 جم × 1 1/5 إبرة معقمة | BD | 305127 | |
| مسحة كحول | BD | 326895 | |
| Aura Imaging | Spectral Instruments Imaging | N / A | |
| شركة Betadine | Purdue Frederick Company | 19-065534 | |
| Buprenorphine SR LAB | Zoopharm | N / A | |
| C57BL / 6J ذكور الفئران | مختبر جاكسون | 000664 | |
| لكمة خزعة يمكن التخلص منها ، | 6 مم Integra | 33-36 | |
| أدوات العلوم الدقيقة | من كربيد التنجستن | 14568-09 | |
| معقم جاف بالخرزة الزجاجية | هارفارد | 61-0183 | |
| حبيبات أجار | فيشر الكواشف الحيوية | BP9744 | |
| وسادة تسخين | مليارد | 804879481218 | |
| حقنة الأنسولين مع 28 جرام إبرة | BD | 329461 | |
| نظام التصوير Lago X | الأدوات الطيفية التصوير | N / A | |
| مرق LB | فيشر الكواشف الحيوية | BP1426 | |
| Leur-Lok 1 مل حقنة | BD | 309628 | |
| Mini Arco Animal Trimmer | Wahl Professional | 919152 | |
| Nair لوشن إزالة الشعر مع زيت الأطفال | Church و Dwight | n / a | متوفر في أي صيدلية |
| مثمن ملقط | أدوات العلوم الدقيقة | 11041-08 | |
| طبق بتري | فالكون | 351029 | |
| فوسفات محلول ملحي مخزن (PBS) 1x | Corning | 21-040-CV | |
| اضغط على غلاف الختم | Glad | n / A | |
| SafetyGlide حقنة الأنسولين مع 30 جرام إبرة | BD | 305934 | |
| Safetyglide حقنة الأنسولين ، 1/2 مل ، 30 جم × 5/16 TW | BD | 305934 | |
| Scale | Ohaus Scout Pro | SP202 | |
| مكمل غذائي إضافي | هنري شاين صحة | 29908 | |
| تيجاديرم، 6 سم × 7 سم | 3 م | 1624 واط |
المراجع
- Sen, C. K., et al. Human skin wounds: a major and snowballing threat to public health and the economy. Wound Repair and Regeneration. 17 (6), 763-771 (2009).
- Serra, R., et al. Chronic....
الوصول مقيد. يرجى تسجيل الدخول أو بدء فترة تجريبية لعرض هذا المحتوى.
إعادة الطباعة والأذونات
