مقالة منهجية

اختبار العلاجات المستهدفة في السرطان باستخدام تحليل تعديل الحمض النووي الهيكلي وXenografts المستمدة من المريض

DOI:

10.3791/60646

⸱

يوليو 25, 2020

 , 
1Center for Individualized Medicine, Mayo Clinic, 2Department of Molecular Pharmacology and Experimental Therapeutics, Mayo Clinic

في هذه المقالة

ملخص

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

هنا نقدم بروتوكول لاختبار فعالية العلاجات المستهدفة المختارة على أساس التركيبة الجينومية للورم. ويصف البروتوكول تحديد وإعادة التحقق من إعادة ترتيب الحمض النووي الهيكلي، وgragraftment من أورام المرضى في الفئران واختبار الاستجابات للأدوية المقابلة.

الملخص

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

نقدم هنا نهجا تكامليا لاختبار فعالية العلاجات المستهدفة التي تجمع بين الجيل القادم من التسلسل technolo - gies ، والتحليلات العلاجية المستهدفة ورصد استجابة الدواء باستخدام xenografts المستمدة من المريض (PDX). تم التحقق من صحة هذه الاستراتيجية باستخدام أورام المبيض كمثال. تم استخدام بروتوكول تسلسل الجيل التالي (MPseq) لتحديد التعديلات الهيكلية وتبعه تحليل للتعديلات التي يمكن استهدافها. تم علاج الأورام البشرية التي تزرع في الفئران المناعية بأدوية تم اختيارها استنادًا إلى التحليلات الجينومية. أظهرت النتائج وجود ارتباط جيد بين الاستجابات المتوقعة والاستجابات الملاحظة في نموذج PDX. يمكن استخدام النهج المقدم لاختبار فعالية العلاجات المركبة والمساعدة في العلاج الشخصي للمرضى الذين يعانون من السرطان المتكرر ، وتحديدا في الحالات التي يفشل فيها العلاج القياسي وهناك حاجة لاستخدام الأدوية خارج التسمية.

المقدمة

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

ظهرت xenografts المستمدة من المريض (PDXs) ، والتي يتم إنشاؤها من زرع قطع الورم المريض في الفئران المناعية ، كنموذج قوي قبل الظهر للمساعدة في الرعاية الشخصية المضادة للسرطان. وقد تم تطوير نماذج PDX بنجاح لمجموعة متنوعة من الأورام الخبيثة البشرية. وتشمل هذه سرطانات الثدي والمبيض، سرطان الجلد الخبيث، سرطان القولون والمستقيم، وسرطان غدية البنكرياس، وسرطان الرئة غير صغيرالخلية 1،2،3،4،5. يمكن زرع أنسجة الورم بشكل متقوي أو غير متغاير. الأول، يعتبر أكثر دقة ولكن من الصعب من الناحية الفنية، ينطوي على زرع مباشرة في ....

الوصول مقيد. يرجى تسجيل الدخول أو بدء فترة تجريبية لعرض هذا المحتوى.

البروتوكول

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

تم جمع الأنسجة الطازجة من المرضى الذين يعانون من سرطان المبيض بالتراضي في وقت إجراء جراحة إزالة الbulking وفقًا لبروتوكول وافق عليه مجلس المراجعة المؤسسية لـ Mayo Clinic (IRB). تمت الموافقة على جميع الإجراءات والعلاجات الحيوانية المستخدمة في هذا البروتوكول من قبل لجنة رعاية الحيوانات المؤسسية واستخدامها (IACUC) في Mayo Clinic (مايو كلينك) واتبعت إرشادات رعاية الحيوان.

1. ماتي تسلسل الزوج والتحليلات

ملاحظة: يجب استخدام الأنسجة المجمدة الطازجة أو الفلاش لتسلسل زوج (MPseq). مادة البارافين غير مناسبة لأنها تحتوي على الحمض النووي المجزأ.

  1. عزل الحمض النووي من أنسجة الورم المجمدة. استخدام عينة الإنسان الأصلي ال....

الوصول مقيد. يرجى تسجيل الدخول أو بدء فترة تجريبية لعرض هذا المحتوى.

النتائج

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

تم جمع الأنسجة من أورام المبيض التي تم استئصالها في وقت عمليات استئصال الاستئصال وفقا لتوجيهات IRB واستخدمت ل1) التوصيف الجينومي و 2) التجمهر في الفئران المثبطة للمناعة(الشكل 1). تم استخدام بروتوكول تسلسل زوج mate-pair36،37 لتحديد التعديلات الهيكلية في الحمض النووي بما في ذلك الخسائر والمكاسب والتضخيم. يظهر في الشكل 2مؤامرة جينوم تمثيلية توضح المناظر الطبيعية للتغيرات الجينومية في ورم واحد (تم تعيينها عل.......

الوصول مقيد. يرجى تسجيل الدخول أو بدء فترة تجريبية لعرض هذا المحتوى.

المناقشة

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

نحن وصف النهج والبروتوكولات التي استخدمناها لإجراء "تجربة سريرية" في نماذج PDX التي تستفيد من الخصائص الجزيئية للورم كما تم الحصول عليها من خلال التنميط الجينومي لتحديد أفضل خيار للأدوية للاختبار. وتستخدم حاليا منصات تسلسل متعددة لتوصيف الجينوم للأورام الأولية بما في ذلك تسلسل الجينوم كله، RNAseq والألواح الجينية المخصصة. لسرطان المبيض المصلي عالية الدرجة، MPseq لتحديد التعديلات الهيكلية، وإعادة ترتيب الحمض النووي وتغييرات عدد نسخة، مفيد بشكل خاص بسبب درجة عالية من عدم الاستقرار الجينوم لوحظ في هذا النوع من الورم. الميزة.......

الوصول مقيد. يرجى تسجيل الدخول أو بدء فترة تجريبية لعرض هذا المحتوى.

الإفصاحات

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

ويعلن أصحاب البلاغ أنه ليس هناك تضارب في المصالح.

شكر وتقدير

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

نشكر أعضاء مركز مايو كلينك للطب الفردي (CIM) الدكتور لين يانغ وفاي ر. هاريس، MS، على المساعدة في إجراء التجارب. وقد دعم هذا العمل السيد والسيدة نيل إي إيكلز هدية إلى مركز Mayo Clinic للطب الفردي (CIM).

....

الوصول مقيد. يرجى تسجيل الدخول أو بدء فترة تجريبية لعرض هذا المحتوى.

المواد

قائمة المواد المستخدمة في هذه المقالة
الاسمالشركةرقم فهرسيالتعليقات
شركة 3M Vetbond3M1469SB
الأجسام المضادةتقنيات إشارات الخلية، Inc.9272
الجسم المضاد المضاد ل GAPDH (G-9)سانتا كروز للتكنولوجيا الحيوية.sc-365062
للأجسام المضادة ل MAPK، Inc.9926
تقنيات إشارات الخلايا المضادة للأجسام المضادة للفوسفو AKT، Inc.9271
المضادة للأجسام المضادةل mTOR ، Inc.2972
الخلايا للأجسام المضادة للفوسفو mTOR، Inc.2971
الخلايا المضادة للأجسام المضادة للفوسفو S6، Inc.4858
المضادة للأجسام المضادة للريكتور، Inc.2114
المضادة للأجسام المضادة ل S6، Inc.2217
كابتيسولChemScene، Inc.cs-0731
CarboplatinNOVAPLUS، Inc.61703-360-18
DMEMMediatech، Inc.10-013-CV
Easy-A Hi-Fi PCR Cloning EnzymeAgilent، Inc.600404-51
زيوت التشحيمكاردينال للرعاية الصحية82-280
ماتريجلكورنينج ، إنك.356234
McCoyMediatech، Inc.10-050-السيرة الذاتية
MK-2206ApexBio، Inc.A3010
MK-8669شركة ARIAD للمستحضرات الصيدلانيةAP23573
ناير للبشرة الحساسةوكنيسة شركة دوايتناير مزيل الشعر دش الطاقة الحساسة
NOD / SCID الفئرانتشارلز ريفر ، إنك.موافقه. CB17-Prkdcscid / NCrCrl
PaclitaxelNOVAPLUS، Inc.55390-304-05
PEG400ميليبور سيجما ، إنك.88440-250ML-F
PerjetaGenetech, Co.Pertuzumab
RituximabGenetech، Co.ريتوكسان
RPMI1640ميديا تيك ، إنك.10-040-CV
الفئران SCIDمختبرات هارلان ، إنك.CB-17 / IcrHsd-PrkdcscidLystbg
SLAx 13-6 ميجا هرتز محول خطيFUJIFILM SonoSite، IncHFL38xp
SonoSite S-series آلة الموجات فوق الصوتيةFUJIFILM SonoSite، IncSonoSite SII
Tween 80Millipore Sigma، Inc.P4780-100 مل
المضادة ل AKT تقنيات إشارات الخلايا تقنيات إشارات الخلايا تقنيات إشارات تقنيات إشارات تقنيات إشارات الخلايا تقنيات إشارات الخلايا إعلام

المراجع

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,
  1. Tentler, J. J., et al. Patient-derived tumour xenografts as models for oncology drug development. Nature Reviews Clinical Oncology. 9, 338-350 (2012).
  2. Marangoni, E., et al. A new model of patient tumor-derived ....

الوصول مقيد. يرجى تسجيل الدخول أو بدء فترة تجريبية لعرض هذا المحتوى.

إعادة الطباعة والأذونات

طلب إذن لإعادة استخدام النص أو الأشكال في مقالة JoVE هذه

طلب إذن

الوسوم

مقالات ذات صلة