تفاصيل المخطوطة الحالية كيفيه عزل هيبوكامبال الشرايين والشعيرات الدموية من دماغ الفار وكيفيه الضغط عليها للضغط علي التصوير العضلي ، والمناعي ، والكيمياء الحيوية ، والدراسات الجزيئية.
يتطلب اشتراك JoVE لعرض هذا المحتوى. تسجيل الدخول أو ابدأ نسخة تجريبية مجانية
مقالة منهجية
السابق فيفو هيبوكامبال الضغط الشعرية-Pareniole الشرايين التحضير للدراسة الوظيفية
في هذه المقالة
ملخص
الملخص
من التغييرات السلوكية خفيه إلى الخرف في مرحله متاخره ، يتطور العجز المعرفي الوعائي عاده بعد الاسكيميه الدماغية. السكتة الدماغية وتوقف القلب هي امراض المثلية الجنسية بشكل ملحوظ ، وكلاهما يحفز نقص التروية الدماغية. ومع ذلك ، كان التقدم في فهم الاعاقه المعرفية الوعائية ، ومن ثم تطوير العلاجات الخاصة بالجنس ، محدود جزئيا من التحديات في التحقيق في دوران المخ من نماذج الفئران في الدراسات الوظيفية. هنا ، نقدم نهجا لفحص الإشارات الشعرية إلى الشريانية في السابق فيفو هيبوكامبال الشعيرات الشعرية-Pareniole (hicapa) الاعداد من الدماغ الماوس. نحن وصف كيفيه عزل ، تعليب ، والضغط علي دوران الاوعيه الدقيقة لقياس قطر شرايين استجابه لتحفيز الشعرية. نعرض الضوابط الوظيفية المناسبة التي يمكن استخدامها للتحقق من سلامه الاعداد HiCaPA وعرض النتائج النموذجية ، بما في ذلك اختبار البوتاسيوم كعامل اقتران الاوعيه الدموية وتاثير المثبط تميزت مؤخرا من Kir2 الداخل تصحيح البوتاسيوم قناه الاسره ، ML133. وعلاوة علي ذلك ، نقارن الاستجابات في الاستعدادات التي يتم الحصول عليها من الفئران الذكور والإناث. في حين ان هذه البيانات تعكس التحقيقات الوظيفية ، ويمكن أيضا ان تستخدم نهجنا في البيولوجيا الجزيئية ، والكيمياء المناعية ، ودراسات الفيزيولوجيا الكهربية.
المقدمة
وكانت الدورة الدموية علي سطح الدماغ موضوع الكثير من الدراسة ، ويرجع ذلك جزئيا إلى امكانيه الوصول التجريبية. ومع ذلك ، فان طوبولوجيا الاوعيه الدموية الدماغية تخلق مناطق متميزة. وعلي النقيض من شبكه قرض قويه غنيه في اناستاوسيس مع قدره كبيره لأعاده توجيه تدفق الدم ، والشرايين داخل الاوعيه الدموية (PAs) العرض التبعي محدوده ، كل واحد منهم النبض حجم منفصل من الانسجه العصبية1،2. وهذا يخلق تاثير عنق الزجاجة علي تدفق الدم الذي ، مع الميزات الفسيولوجية فريدة من نوعها3،4،5،6،
الوصول مقيد. يرجى تسجيل الدخول أو بدء فترة تجريبية لعرض هذا المحتوى.
البروتوكول
تمت الموافقة علي جميع التجارب من قبل لجنه الرعاية الحيوانية المؤسسية والاستخدام (IACUC) من جامعه كولورادو, Anschutz الطبية الحرم الجامعي وأجريت وفقا للمبادئ التوجيهية من المعاهد الوطنية للصحة.
1-الحلول
- استخدام MOPS-المحلول الملحي المخزنة لتشريح والحفاظ علي عينات في 4 درجه مئوية قبل استخدامها. لا غاز الحل. اعداد MOPS مخزنه المالحة مع التركيب التالي: 135 mM كلوريد الصوديوم ، 5 ملم KCl ، 1 مم KH2بو4، 1 مم mops4، 2.5 mM cacl2، 5 مم الجلوكوز ، 3 مم mops ، 0.02 mm أدتا ، 2 ملليمتر Pyruvate ، 10 ملغ/مل البقري مصل الزلال ، pH 7.3 في 4 ° c.
- استخدام السائل النخاعي الاصطناعي (aCSF) كحل ال....
الوصول مقيد. يرجى تسجيل الدخول أو بدء فترة تجريبية لعرض هذا المحتوى.
النتائج
البطانيات الصغيرة (SK) والمتوسطة التوصيل (IK) Ca2 +-الحساسةK + القناات ممارسه تاثير المماطلة علي قطر PAs. تطبيق الحمام من 1 μM NS309 ، وهو الاصطناعية أيك و SK قناه ناهض ، تسبب بالقرب من توسيع القصوى (الشكل 2ا ، ب). ومع ذلك ، تفتقر الخلايا الغشائية الشعرية أيك وقناات SK ولم فرط الاستقطاب ردا علي NS30920. ونتيجة لذلك ، تحفيز نهايات الشعرية مع 1 μM NS309 بواسطة الضغط البؤري طرد (20 ثانيه ، 5 رطل) لم .......
الوصول مقيد. يرجى تسجيل الدخول أو بدء فترة تجريبية لعرض هذا المحتوى.
المناقشة
الاعداد المضغوط HiCaPA (هيبوكامبال الشعرية-pareniole) الموصوفة في المخطوطة الحالية هو امتداد لإجراءاتنا الراسخة لعزل ، والضغط ، ودراسة الشرايين العقديه29. وقد ذكرنا مؤخرا ان القناات كير 2.1 في الدماغ الخلايا الغشائية الشعرية الزيادات في [K +]o المرتبطة التنشيط العصبية ، وتوليد اشاره فرط الاستقطاب التصاعدي الذي يوسع الشرايين المنبع20. الكشف عن هذا الدور غير المتوقع سابقا لشعيرات الشعرية كان ممكنا في جزء من خلال تطوير التحضير capa من الاوعيه الدقيقة القش.......
الوصول مقيد. يرجى تسجيل الدخول أو بدء فترة تجريبية لعرض هذا المحتوى.
الإفصاحات
وليس لدي المؤلفين ما يفصحون عنه.
شكر وتقدير
ويود أصحاب البلاغ ان يشكروا جولز موران علي التعليقات الثاقبة علي المخطوطة. وقد تم تمويل هذا البحث من خلال جوائز من المنظمة التي لا تبغي الربح التابعة لمؤسسه كاداسيل معا ، ومركز صحة المراه والبحوث ، وR01HL136636 NHLBI (FD).
....الوصول مقيد. يرجى تسجيل الدخول أو بدء فترة تجريبية لعرض هذا المحتوى.
المواد
| الاسم | الشركة | رقم فهرسي | التعليقات |
|---|---|---|---|
| 0.22 ومايكرو ؛ مرشحات الحقنة | م سيلتريت المنتجات العلمية | 229751 | |
| 12-0 نايلون (12 سم) أدوات | الجراحة المجهرية السوداء ، Inc | S12-0 نايلون | |
| جهاز التحكم في درجة الحرارة الأوتوماتيكي | Warner Instruments | TC-324B | |
| زجاج البورسليكات OD: 1.2 مم ، معرف: 0.68 مم | أدوات Sutter | B120-69-10 | |
| ألبومين مصل البقر | Sigma-Aldrich | A7030 | |
| CaCl 2< / sub > ثنائي هيدرات | سيجما ألدريتش | C3881 | |
| D- (+) - الجلوكوز | سيجما - ألدريتش | G5767 | |
| نطاق التشريح | أوليمبوس | SZ11 | |
| ECOLINE VC-MS / CA 4-12 & مضخة كاملة مع محرك ورأس مضخة MS / CA 4-12 | Ismatec | ISM 1090 | |
| EGTA | Sigma-Aldrich | E4378 | |
| مقص دقيق - | أدوات العلوم الدقيقة | 14063-09 | |
| سخان مياه مضمن | Warner Instruments | SH-27B | |
| Integra & trade ؛ Miltex & trade; ملقط الأنسجة | فيشر العلمي | 12-460-117 | |
| KCl | سيجما ألدريتش | P9333 | |
| KH2< / sub>PO4< / sub> | Sigma-Aldrich | P5379 | |
| كبريتات المغنيسيوم سباعي هيدرات | سيجما ألدريتش | M1880 | |
| MgCl اللامائي | سيجما ألدريتش | M8266 | |
| Micromanipulator | Narishige | MN-153 | |
| ML 133 هيدروكلوريد | Tocris | 4549 | |
| MOPS | Sigma-Aldrich | M1254 | |
| NaCl | Sigma-Aldrich | S9625 | |
| NaH2PO4 | Sigma-Aldrich | S9638 | |
| NaHCO3 | Sigma-Aldrich | S8875 | |
| NS309 | Tocris | 3895 | |
| Picospritzer III - أنظمة الاستغناء عن الحقن الدقيق داخل الخلايا ، 2 قناة | Parker Hannifin | 052-0500-900 | |
| وحدة تحكم مؤازرة للضغط مع أنظمة المعيشة للمضخة التمعجية | أجهزة | PS-200 | |
| بيروفات الصوديوم | Sigma-Aldrich | P3662 | |
| ملقط | فائق الدقةأدوات العلوم الدقيقة | 11252-20 | |
| مقص جراحي - | أدوات العلوم الدقيقة | الحادة 14001-13 | |
| مجتذب الماصات الدقيقة العمودي | Narishige | PP-83 |
المراجع
- Nishimura, N., Schaffer, C. B., Friedman, B., Lyden, P. D., Kleinfeld, D. Penetrating arterioles are a bottleneck in the perfusion of neocortex. Proceedings of the National Academy of Sciences of the United States of America. 104 (1), 365-370 (2007).
- Shih, A. Y., et al.
الوصول مقيد. يرجى تسجيل الدخول أو بدء فترة تجريبية لعرض هذا المحتوى.
إعادة الطباعة والأذونات
