يصف هذا البروتوكول طريقة شائعة وممكنة للحث على إصابة الكبد الحادة (ALI) عبر التعرض CCl4 من خلال أنبوب أموالمعدة. CCl4 التعرض يحفز ALI من خلال تشكيل أنواع الأكسجين التفاعلي خلال تحولها الحيوي في الكبد. وتستخدم هذه الطريقة لتحليل الفيزيولوجيا المرضية من ALI وفحص استراتيجيات الكبد المختلفة.
يتطلب اشتراك JoVE لعرض هذا المحتوى. تسجيل الدخول أو ابدأ نسخة تجريبية مجانية
مقالة منهجية
تحفيز إصابة الكبد الحادة في الفئران عبر رابع كلوريد الكربون (CCl4)التعرض من خلال أنبوب الأوروالمعدة
* These authors contributed equally
في هذه المقالة
ملخص
الملخص
إصابة الكبد الحادة (ALI) تلعب دورا حاسما في تطور الفشل الكبدي، الذي يتميز بضعف الكبد الشديد بما في ذلك مضاعفات مثل اعتلال الدماغ الكبدي وضعف تخليق البروتين. النماذج الحيوانية المناسبة حيوية لاختبار آلية والفيزيولوجيا المرضية لALI والتحقيق في استراتيجيات الكبد المختلفة. نظرا لقدرته على إجراء التحولات الكيميائية، ويستخدم على نطاق واسع رباعي كلوريد الكربون (CCl4)في الكبد للحث علي من خلال تشكيل أنواع الأكسجين التفاعلي. يمكن إجراء التعرض CCl4 داخل perperitoneally ، عن طريق الاستنشاق ، أو من خلال أنبوب الأنفي ة أو الأوروالمعدة. هنا ، نصف نموذج القوارض ، حيث يتم حث ALI من قبل التعرض CCl4 من خلال أنبوب أموالمعدة. هذه الطريقة غير مكلفة ، ويسهل تنفيذها ، ولها الحد الأدنى من خطر الخطر. النموذج قابل للاستنساخ للغاية ويمكن استخدامه على نطاق واسع لتحديد فعالية الاستراتيجيات المحتملة للوقاية الكبدية وتقييم علامات إصابة الكبد.
المقدمة
ويتزايد تواتر الإهانات السامة للكبد، لا سيما بسبب تعاطي الكحول والمخدرات. ترتبط إصابة الكبد الحادة (ALI) بارتفاع معدلات الوفيات وتسببت في مخاوف سريرية1,2. تؤدي الإصابة السامة إلى مسارات تشير إلى الموت في الكبد ، مما يؤدي إلى موت الخلايا العضوية في الكبد ، أو النخر ، أو البيروبات. يلعب ALI دورًا حاسمًا في تطور الفشل الكبدي ، والذي يتميز بخلل حاد في الكبد بما في ذلك مضاعفات مثل اعتلال الدماغ الكبدي وضعف تخليق البروتين3،4. على الرغم من أن الأبحاث الحديثة قد زادت معرفتنا حول التغيرات الفسيولوجية والمرضية المصاحبة للفشل الكبدي ، إلا أنها لم تشرح تمامًا السم....
الوصول مقيد. يرجى تسجيل الدخول أو بدء فترة تجريبية لعرض هذا المحتوى.
البروتوكول
وأجريت التجارب وفقا لتوصيات إعلاني هلسنكي وطوكيو والمبادئ التوجيهية لاستخدام الحيوانات التجريبية للجماعة الأوروبية. وقد وافقت لجنة رعاية الحيوانات التابعة لجامعة بن غوريون في النقب على هذه التجارب.
ملاحظة: تم إنشاء نموذج CCl4 واستخدامه في دراسة سابقة17. يتم عرض الجدول الزمني للبروتوكول في الجدول 1.
1. إعداد الفئران للإجراء التجريبي
ملاحظة: اختر فئران سبراغ داولي الذكور البالغين التي تزن 300-350 غرام.
- الحصول على الموافقة على التجارب من اللجنة المؤسسية لرعاية الحيوان واستخدامه (IACUC).
- الحفاظ على الفئران في درجة حرار....
الوصول مقيد. يرجى تسجيل الدخول أو بدء فترة تجريبية لعرض هذا المحتوى.
النتائج
مستويات السل، GOT، وGPT زيادة كبيرة 24 ساعة بعد حث ALI (أكثر في جرعات CCl4 أعلى) مقارنة مع الضوابط التي تعمل بصور (ع < 0.001)(الشكل 1). وكانت مستويات السل، وGOT، وGPT عند خط الأساس طبيعية ولم تكن مختلفة بشكل كبير عن الضوابط التي تعمل بصورية. في 24 ساعة، جميع المجموعات التدخلية الثلاث، 1 مل/كغ CCl4 (1، 1−2)، 2.5 مل/كغ CCl4 (3، 3−4)، و5 مل/كغ CCl4 (4، 4-5.75)، كان لديها درجة تصنيف النسيجأعلى بكثير من مجموعة التحكم التي تعمل بصور (0، 0−0) (p < 0.......
الوصول مقيد. يرجى تسجيل الدخول أو بدء فترة تجريبية لعرض هذا المحتوى.
المناقشة
في هذا البروتوكول، يستخدم CCl4 كسم كبد يُحث على الحث على الـ ALI في الفئران. يتميز ALI بفقدان parenchyma الكبدي وdysregulation اللاحق لوظائف الكبد الأيضية والاصطناعية. الأدوية والفيروسات والسموم وأمراض المناعة الذاتية وأمراض التمثيل الغذائي واضطرابات الأوعية الدموية كلها تحفز موت الكبد ، والاستجابة الالتهابية اللاحقة تساهم في حدوث الإمراض في ALI.
الإهانة الأولية للكبد يؤدي إلى إنتاج السيتوكين، والإفراج عن chemokine، والتسلل اللاحق للخلايا الالتهابية في الكبد. ثلاثة من المؤشرات الحيو.......
الوصول مقيد. يرجى تسجيل الدخول أو بدء فترة تجريبية لعرض هذا المحتوى.
الإفصاحات
وليس لدى أصحاب البلاغ ما يكشفون عنه.
شكر وتقدير
ويشكر المؤلفان بامتنان بيرثا دلغادو، قسم علم الأمراض، مركز سوروكا الطبي، كلية العلوم الصحية، جامعة بن غوريون في النقب، لمساعدتها في المختبر وكذلك في تحليل علم الأنسجة.
....الوصول مقيد. يرجى تسجيل الدخول أو بدء فترة تجريبية لعرض هذا المحتوى.
المواد
| الاسم | الشركة | رقم فهرسي | التعليقات |
|---|---|---|---|
| قسطرة 22 جرام BD Neoflon TM | Becton Dickinson Infusion Therapy AB | ||
| محلول فورمالديهايد مخزن 4٪ | Sigma - Aldrich تقنيات | ||
| BD Microtainer SST TM Tubes | Becton Dickinson and Company | ||
| Carbone Tetrachloride | Sigma - تقنيات مواد مختبر Aldrich | CAS 56-23-5 | |
| Isofluran ، USP 100٪ | Piramamal Critical Care، Inc | ||
| Olympus AU2700 محلل الكيمياء المناعي | أوليمبوس (مينيسوتا ، الولايات المتحدة الأمريكية) | تم إجراء تحليل عينات الدم بطريقة التألق | |
| أوليمبوس BX 40 مجهر | أوليمبوس | ||
| الجرذ إبر تغذية | أوليمبوس الجرذ مجموعة حقن الأوركيد | ||
| العلمية 1 و 2 مل MEDI -PLUS | شاندونغ زيبو شانتشوان الطبية شركة الأدوات المحدودة |
المراجع
- Hoofnagle, J. H., Carithers, R. L., Shapiro, C., Ascher, N. Fulminant hepatic failure: Summary of a workshop. Hepatology. 21 (1), 240-252 (1995).
- Rakela, J., Lange, S. M., Ludwig, J., Baldus, W. P. Fulminant hepatitis: Mayo clinic experience with 34 cases. Mayo Clinic Proceedings.
الوصول مقيد. يرجى تسجيل الدخول أو بدء فترة تجريبية لعرض هذا المحتوى.
إعادة الطباعة والأذونات
