مقالة منهجية

توليف الجسيمات النانوية المغناطيسية الوظيفية، والاقتران مع Siderophore فيلوكسامين وتقييمها للكشف عن البكتيريا

DOI:

10.3791/60842

⸱

يونيو 16, 2020

 ,  ,  ,  ,  ,  , 
1Centro de Investigacións Científicas Avanzadas (CICA), Departamento de Química, Facultade de Ciencias, Universidade da Coruña, 2Centro de Investigacións Científicas Avanzadas (CICA), Unidad de Comunicación y Divulgación, Universidade da Coruña, 3Department of Microbiology and Parasitology, Institute of Aquaculture, Universidade de Santiago de Compostela

في هذه المقالة

ملخص

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

يصف هذا العمل بروتوكولات لإعداد الجسيمات النانوية المغناطيسية ، وطلاءها مع SiO2، متبوعة بوظيفتها الأمينية مع (3-aminopropyl) triethoxysilane (APTES) والاقتران مع تأجيلoxamine باستخدام مويتي succinyl كمرتابط. وصف توصيف الهيكلية العميقة ومقايسة البكتيريا التقاط باستخدام Y. enterocolitica لجميع الجسيمات النانوية المتوسطة ومترافق النهائي هي أيضا وصف مفصل.

الملخص

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

في العمل الحالي، وتوليف الجسيمات النانوية المغناطيسية، وطلاءها مع SiO2، تليها وظيفية أمين مع (3-أمينوبروبيل) triethoxysilane (APTES) والاقتران مع تأجيلoxamine، وs siderophore المعترف بها من قبل Yersinia enterocolitica، وذلك باستخدام مويتي succinyl كما وصفت رابط.

تم إعداد الجسيمات النانوية المغناطيسية (MNP) من الممغنط (Fe3O4)بواسطة طريقة solvothermal ومغلفة بـ SiO2 (MNP@SiO2)باستخدام عملية Stöber تليها وظيفية مع APTES (MNP@SiO2@NH2). ثم، كان مترافقا فيروكسيمين مع MNP@SiO2@NH2 من قبل اقتران كاربودييميد لإعطاء MNP@SiO2@NH2@Fa. تم فحص مورفولوجيا وخصائص المترافقة والوسيطة من خلال ثماني طرق مختلفة بما في ذلك مسحوق X-Ray DIFFACTION (XRD) ، وفورييه تحويل الطيفي بالأشعة تحت الحمراء (FT-IR) ، والتحليل الطيفي رامان ، والأشعة السينية الطيفي الضوئي (XPS) ، والمجهر الإلكتروني انتقال (TEM) وشعاع الأشعة السينية (EDX) الطاقة رسم الخرائط. وقد أكد هذا الوصف الشامل تشكيل المترافق. وأخيرا، من أجل تقييم قدرة وخصوصية الجسيمات النانوية، تم اختبارها في التقاط البكتيريا اختبار باستخدام Yersinia enterocolitica.

المقدمة

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

تعتمد طرق الكشف عن البكتيريا باستخدام MNP على الاعتراف الجزيئي للأجسام المضادة ، aptamers ، البروتين الحيوي ، الكربوهيدرات المترافقة مع MNP بواسطة البكتيريا المسببة للأمراض1. مع الأخذ في الاعتبار أن يتم التعرف على siderophores من قبل مستقبلات محددة على الغشاء الخارجي للبكتيريا، فإنها يمكن أن ترتبط أيضا إلى MNP لزيادة خصوصيتها2. Siderophores هي الجزيئات العضوية الصغيرة المشاركة في Fe3 + امتصاص البكتيريا3،4. لم يتم بعد الإبلاغ عن إعداد الترافق بين siderophores و MNP جنبا إلى جنب مع تقييمها لالتقاط وعزل البكتيريا.

واحدة من الخط....

الوصول مقيد. يرجى تسجيل الدخول أو بدء فترة تجريبية لعرض هذا المحتوى.

البروتوكول

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

ملاحظة: بالنسبة لردود الفعل التي يتم تنفيذها تحت ظروف الغلاف الجوي الخاملة، كانت جميع الأواني الزجاجية قد جفت سابقا في فرن عند 65 درجة مئوية، مختومة بختم مطاطي وتطهيرها بالأرغون ثلاث مرات.

1. توليف الجسيمات النانوية المغناطيسية المقترنة مع فيلوكسامين

  1. تركيب Fe3O4 الجسيمات النانوية المغناطيسية (MNPs)
    1. إضافة 0.5 غرام من Fe(acac)3 في 20 مل الزجاج قارورة ثم تخلط مع 10 مل من الكحول البنزيل.
    2. سونيكات هذا الخليط لمدة 2 دقيقة، ثم نقل إلى كتلة التدفئة والحرارة في 180 درجة مئوية لمدة 72 ساعة.
    3. بعد الانتهاء من التفاعل، والسماح للقارورة لتهدئة، وشطف الجسيمات النانوية مع 96٪ الإيثانول ....

الوصول مقيد. يرجى تسجيل الدخول أو بدء فترة تجريبية لعرض هذا المحتوى.

النتائج

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

ويتم إجراء توصيف هيكلي شامل من أجل تحديد مورفولوجيا وخصائص كل من المرافق الوسيطة والنهائية. لهذا الغرض، وتستخدم تقنيات XRD، FT-IR، التحليل الطيفي رامان، TGA، TEM، EDX رسم الخرائط وXX من أجل إثبات تشكيل المترافق. حالات أكسدة الذرات على سطح الجسيمات النانوية التي حصل عليها التحليل الطيفي الضوئي بالأشعة السينية (XPS) هي البيانات الأكثر صلة لتأكيد تكوين الروابط التساهمية بين الجسيمات النانوية والجنبية. في الاتفاق مع هذه النتائج، هذا البروتوكول هو استنساخ.

يتم خلط MNP عارية، MNPs وظيفية وconjugate .......

الوصول مقيد. يرجى تسجيل الدخول أو بدء فترة تجريبية لعرض هذا المحتوى.

المناقشة

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

يصف هذا البروتوكول تركيب اقتران بين الجسيمات النانوية المغناطيسية وspartrophore feroxamine بواسطة الترابط التساهمي. تم تركيب الممغنطة باستخدام بروتوكول أبلغت عنه بينا وآخرون5 تليها طلاء السيليكا لحماية النواة المغناطيسية للتآكل في النظم مائي، للحد من تجميع وتوفير سطح مناسب للوظيفية6. تم تعديل عملية طلاء السيليكا. بدلا من تنفيذ ثلاثة طلاء كما ذكرت لي وآخرون6، كانت مغلفة MNPs مع طبقتين السيليكا في هذه الطريقة(الشكل 2D)الذي.......

الوصول مقيد. يرجى تسجيل الدخول أو بدء فترة تجريبية لعرض هذا المحتوى.

الإفصاحات

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

ليس لدينا ما نكشف عنه

شكر وتقدير

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

الكتاب ممتنا نقدر البروفيسور كلاوس Hantke (جامعة توبنغن ، ألمانيا) للتكرم توريد Yersinia enterocolitica سلالات المستخدمة في هذا العمل. وقد تم دعم هذا العمل من خلال المنح AGL2015-63740-C2-1/2-R وRTI2018-093634-B-C21/C22 (AEI/FEDER, EU) من الوكالة الحكومية للأبحاث (AEI) في إسبانيا، والتي يشارك في تمويلها برنامج فيدر من الاتحاد الأوروبي. كما تم دعم العمل في جامعة سانتياغو دي كومبوستيلا وجامعة كورونيا بمنح من قبل GRC2018/018 و GRC2018/039 و ED431E 2018/03 (مجموعة إستراتيجية CICA-INIBIC) من Xunta de Galicia. وأخيراً، نود أن نشكر نوريا كالفو على تعاونها الكبير في تنفيذ بروتوكول الفيديو هذا.

....

الوصول مقيد. يرجى تسجيل الدخول أو بدء فترة تجريبية لعرض هذا المحتوى.

المواد

قائمة المواد المستخدمة في هذه المقالة
الاسمالشركةرقم فهرسيالتعليقات
1-هيدروكسي بنزوتريازول هيدرات
HOBT		Acros300561000
2،2 & prime ؛ -BipyridylSigma AldrichD216305
3-Aminopropyltriethoxysilane 99٪Acros151081000
محلول هيدروكسيد الأمونيوم 28٪ NH3< / sub>Sigma Aldrich338818
بنزوتريازول -1-إيلوكسيتريس (ثنائي ميثيل أمينو) - فوسفونيوم سداسي فلورو فوسفات كاشف BOPأكروس209800050
كحول البنزيلسيجما ألدريتش822259
ملح ديفيروكسامين ميسيلات >92,5٪ (TLC)سيجما ألدريتشD9533
إيثانول ، لامائي ، 96٪بانرياك131085
أسيتات إيثيل ، نقي إضافي ، SLR ، فيشر كيميكال
الحديد (III) أسيتيل يسيتونات 97٪سيجما ألدريتشF300
رطل مرق (لينوكس)سيجما ألدريتشL3022
N ، N-Diisopropylethylamine ، 99.5 + ٪ ، AcroSealAcros459591000
N ، N-Dimethylformamide ، 99.8٪ ، جاف للغاية ، AcroSealAcros326871000
بيريدين ، 99.5٪ ، جاف جدا ، AcroSealAcros339421000
Sephadex LH-20Sigma AldrichLH20100
أنهيدريد السكسينيك >99٪سيجما ألدريتش239690
رباعي إيثيل أورثوسوليكات >99،0٪سيجما ألدريتش86578

المراجع

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,
  1. Pan, Y., Du, X., Zhao, F., Xu, B. Magnetic nanoparticles for the manipulation of proteins and cells. Chemical Society Reviews. 41 (7), 2912-2942 (2012).
  2. Zheng, T., Nolan, E. M. Siderophore-based detection of Fe(III) and microbial pathogens. Metallomics. ....

الوصول مقيد. يرجى تسجيل الدخول أو بدء فترة تجريبية لعرض هذا المحتوى.

إعادة الطباعة والأذونات

طلب إذن لإعادة استخدام النص أو الأشكال في مقالة JoVE هذه

طلب إذن

الوسوم

FTIR TEM XPS Yersinia enterocolitica

مقالات ذات صلة