لوحة LC-MS/MS المعتمدة لقياس 11 دواءً مقاومًا للأدوية في عينات الشعر الصغيرة

Andrew Reckers; Anita Wen; David Aguilar; Peter Bacchetti; Monica Gandhi; John Metcalfe; Roy Gerona

doi:10.3791/60861

يتطلب اشتراك JoVE لعرض هذا المحتوى. تسجيل الدخول أو ابدأ نسخة تجريبية مجانية

مقالة منهجية

لوحة LC-MS/MS المعتمدة لقياس 11 دواءً مقاومًا للأدوية في عينات الشعر الصغيرة

7.3K مشاهدة

⸱

DOI:

10.3791/60861

⸱

مايو 19, 2020

Andrew Reckers¹ , Anita Wen¹ , David Aguilar¹ , Peter Bacchetti² , Monica Gandhi³ , John Metcalfe⁴ , Roy Gerona¹

¹Department of Obstetrics, Gynecology and Reproductive Sciences, TB Hair Analysis Laboratory, University of California San Francisco, ²Department of Epidemiology and Biostatistics, University of California San Francisco, ³Department of Medicine, Division of HIV, Infectious Diseases, and Global Medicine, University of California San Francisco, ⁴Department of Medicine, Division of Pulmonary and Critical Care Medicine, University of California San Francisco

في هذه المقالة

ملخص

يمكن أن تكون الطرق الحالية لتحليل التزام المرضى بأنظمة السل المقاوم للأدوية المعقدة غير دقيقة وكثيفة الموارد. تقوم طريقتنا بتحليل الشعر، وهو مصفوفة يتم جمعها وتخزينها بسهولة، لتركيزات 11 دواءً من أدوية السل المقاوم للأدوية. باستخدام LC-MS/MS، يمكننا تحديد مستويات المخدرات دون نانوغرام التي يمكن استخدامها لفهم أفضل للتقيد المخدرات.

الملخص

يشكل السل المقاوم للأدوية تهديداً متزايداً للصحة العامة، وقد يكون لتقييم مستويات الأدوية العلاجية فوائد سريرية هامة. مستويات البلازما المخدرات هي التقييم القياسي الذهب الحالي، ولكن تتطلب فليبوتوبضع وسلسلة التبريد، والتقاط الالتزام فقط الأخيرة جدا. تستخدم طريقتنا الشعر، وهو مصفوفة يتم جمعها بسهولة وتعكس الالتزام على المدى الطويل، لاختبار 11 دواءً مضادًا للسل. ويبين العمل السابق الذي قامت به مجموعتنا أن مستويات العقاقير المضادة للفيروسات العكوسة في الشعر ترتبط بنتائج فيروس نقص المناعة البشرية. لدينا طريقة لأدوية السل المقاوم للأدوية يستخدم 2 ملغ من الشعر (3 سم قريبة من الجذر)، والتي يتم سحقها واستخراجها في الميثانول. يتم تحليل العينات باستخدام طريقة LC-MS/MS واحدة ، مما يحدد 11 دواءً في تشغيل 16 دقيقة. وتتراوح الحدود الدنيا للقياس الكمي للأدوية الإحدى عشرة من 0.01 نانوغرام/ملغم إلى 1 نانوغرام/ملغم، ويؤكد وجود المخدرات بمقارنة نسب انتقالين من انتقالي قياس الطيف الكتلي. يتم قياس العينات باستخدام نسبة مساحة الدواء إلى المتجانس ، ¹⁵N - أو ¹³isotopologue المخدرات المسمى C. استخدمنا منحنى معايرة يتراوح بين 0.001-100 نانوغرام/ملغ. تطبيق الأسلوب على عينة الراحة من عينات الشعر التي تم جمعها من مرضى السل المقاوم للأدوية على العلاج الخاضع للملاحظة المباشرة (DOT) أشار إلى مستويات الدواء في الشعر ضمن النطاق الديناميكي الخطي لتسعة من الأدوية الأحد عشر (isoniazid، pyrazinamide، ethambutol، linezolid، ليفوفلوكساسين، اللوكسلوكساسين، الكلوف ايزماتين، بيداكلين، pretomanid). لم يكن أي مريض على البروتيوناميد ، وكانت المستويات المقاسة للإيثيوناميد قريبة من LLOQ (مع مزيد من العمل بدلاً من ذلك دراسة مدى ملاءمة المستقلب ethionamide لرصد التعرض). وباختصار، فإننا نصف تطوير لوحة متعددة الأنالية لأدوية السل المقاوم للأدوية في الشعر كتقنية لرصد الأدوية العلاجية أثناء علاج السل المقاوم للأدوية.

المقدمة

في القرن الحادي والعشرين، يشكل السل المقاوم للأدوية كارثة متطورة بالنسبة للبرامج الوطنية الضعيفة بالفعل لمكافحة السل، حيث تضاعفت الحالات المؤكدة في السنوات الخمس الماضية وحدها، وهو ما يمثل ما يقرب من ثلث جميع الوفيات المرتبطة بمقاومة مضادات الميكروبات على الصعيد العالمي^1،^,^2. وقد تطلب العلاج الناجح للسل المقاوم للأدوية تقليدياً أنظمة الخط الثاني الأطول سمية من علاج السل الحساس للأدوية. وعلاوة على ذلك، غالباً ما يواجه المرضى المصابون بالسل المقاوم للأدوية تحديات كبيرة قائمة من قبل للتمسك، مما ساهم في ظهور المقاومة في البداية^3.

على عكس عدوى فيروس نقص المناعة الب....