مقالة منهجية

فحص Phytoestrogens باستخدام مستقبلات الاستروجين القائم على الخلية β مراسل Assay

DOI:

10.3791/61005

⸱

يونيو 7, 2020

 ,  , 
1Department of Anthropology, Indiana University

في هذه المقالة

ملخص

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

لقد قمنا بتحسين مستقبلات هرمون الاستروجين المتاحة تجاريا β مقولي فحص الأطعمة الرئيسية البشرية وغير البشرية لنشاط إستروجين. نحن التحقق من صحة هذا الفحص من خلال إظهار أن الغذاء البشري استروجين معروف فول الصويا يسجل عالية، في حين أن الأطعمة الأخرى تظهر أي نشاط.

الملخص

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

النباتات هي مصدر للغذاء لكثير من الحيوانات، وأنها يمكن أن تنتج الآلاف من المواد الكيميائية. بعض هذه المركبات تؤثر على العمليات الفسيولوجية في الفقاريات التي تستهلك لهم، مثل وظيفة الغدد الصماء. Phytoestrogens، الأكثر دراسة جيدا الغدد الصماء النشطة المواد الكيميائية النباتية، تتفاعل مباشرة مع محور gonadal تحت الغدة النخامية hypothalamo من نظام الغدد الصماء الفقاريات. هنا نقدم استخدام رواية من الخلية القائمة على مقايسة لفحص المستخلصات النباتية لوجود المركبات التي استروجين النشاط البيولوجي. يستخدم هذا الفحص خلايا الثدييات المهندسة للتعبير عن مستقبلات الإستروجين (ERβ) التي تم نقلها مع جين luciferase. التعرض للمركبات مع النشاط الاستروجيني النتائج في الخلايا المنتجة للضوء. هذا الفحص هو وسيلة موثوقة وبسيطة لاختبار النشاط استروجين البيولوجية. لديها العديد من التحسينات على مقايسات عابرة عابرة، وأبرزها، سهولة الاستخدام، واستقرار الخلايا، وحساسية من الفحص.

المقدمة

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

النباتات هي مصدر ضروري للغذاء لكثير من الحيوانات، وتوفير السعرات الحرارية والمواد المغذية الحاسمة للبقاء على قيد الحياة، والتكاثر، والنمو، والتنمية، والسلوك1. تنتج النباتات الآلاف من المواد الكيميائية، وكثير منها كتكييفات لنموها الخاص، والصيانة التناسخية، والتكاثر. مركبات أخرى, يعتبر الأيض النباتية الثانوية (PSMs), لها وظائف أقل وضوحا, على الرغم من أن بعض سامة ومن المرجح أن تستخدم كدفاع ضد شعيرات وتطفلية (على سبيل المثال, قلويدات, العفص)2,3. بعض هذه المواد الكيميائية لديها القدرة على التأثير على العمليات الفسيولوجية على المدى الطويل في الحيوانات، مثل وظائف الغدد الصماء، على الرغم من أن السبب في هذه المواد الكيميائية النباتية النشطة الغدد الصماء تتفاعل مع نظام الغدد الصماء الفقاريات لا يزال غير واضح2،4.

Phytoestrogens، الأكثر دراسة جيدا الغدد الصماء النشطة المواد الكيميائية النباتية، هي PSMs بوليفينوليك التي تحاكي هيكليا ووظيفيا الاستروجين، والتفاعل مباشرة مع محور gonadal تحت النخامية تحت النخامية من نظام الغدد الصماء الفقارية5. ابتلاع فيتويستروغنز في النظام الغذائي البشري يرتبط مع الحماية ضد بعض أنواع السرطان, أمراض القلب, وأعراض انقطاع الطمث, على الرغم من آثار أخرى تشمل مشاكل الخصوبة. في الواقع، تم اكتشاف الآثار الفسيولوجية لهذه المركبات في 1940s عندما العقم في الأغنام كان يعزى إلى رعيهم على البرسيم النباتي الغني(Trifolium subterrareum)6. عند تناولها، يمكن أن تنتقل فيتويستروغنز إلى الخلايا وتقليد آثار هرمون الاستروجين. في حين أن فيتويستروغنز له آثار سلبية على خصوبة الأغنام، والعلاقة بين فيتويستروغنز وعلم وظائف الأعضاء ليست بسيطة. مثل الأغنام، يظهر وحيد القرن الأبيض الجنوبي حساسية للمركبات الإستروجينية في الأعلاف المشتقة من كميات عالية من الصويا والبرسيم. بنات الإناث تغذية هذا النظام الغذائي أثناء الحمل هم أقل عرضة للتكاثر7. ومع ذلك، فقد أظهرت دراسات أخرى أن فيتويستروغنز قد يكون لها آثار إيجابية كذلك، بما في ذلك نضوج بصيلات المبيض في الفئران القديمة8، والوقاية من بعض أنواع السرطان، والنشاط المضادة للأكسدة، وآثار مضادة للبروبروليفية9.

اتساع آثار فيتويستروغنز ليست مفاجئة نظرا لأن هرمون الاستروجين تؤثر على مجموعة واسعة من الوظائف البيولوجية, بما في ذلك النمو, التنمية, وتنظيم الجهاز العصبي الإنجابية والمركزية10. على الرغم من أن هناك العديد من آليات العمل, فيتويستروغنز غالبا ما يكون القدرة على تعديل, تعزيز, أو تعطيل إشارات هرمون الاستروجين من خلال قدرتها على العمل كيغاندس لمستقبلات هرمون الاستروجين داخل النواة ألفا وبيتا (ERα وERβ). العديد من فيتويستروغنز لديها بنية حلقة فينولية مماثلة لهرمون الاستروجين الذي يسمح لهم لربط مستقبلات هرمون الاستروجين. أولئك الذين لديهم وظيفة النشاط الاستروجيني ناهض مثل هرمون الاستروجين، وتشكيل تنشيط ER-ligand المعقدة التي يمكن أن يمتم ربطها عنصر استجابة هرمون الاستروجين (ERE) وتحريك النسخ الجيني11. وهكذا، هرمون الاستروجين وفيتويستروغنز تنظيم نشاط الخلية ووظائف النظام من خلال أعمالهم كعوامل النسخ.

هنا نقدم استخدام رواية من الخلية القائمة على مقايسة لفحص المستخلصات النباتية لوجود المركبات التي استروجين النشاط البيولوجي. يستخدم هذا الفحص الخلايا الصينية الصينية CHO المبيض الهامستر المهندسة لERβ التعبير عن للغاية, التي تم transed مع اليراعات (Photinus pyralis) لوسيفيراز جين مرتبطة المروج ERE12. عندما تكون المركبات الإستروجين موجودة، فإنها ترتبط إلى ER، يمرم، وربط إلى ERE، مما يؤدي إلى نسخ الجين luciferase. عند إضافة محلول الركيزة ، يحفز luciferase رد فعل يؤدي إلى انبعاث الفوتون. ولذلك، تعطي عينات إيجابية عينات الضوء والسلبية لا.

هذا المقايسة المتاحة تجاريا يلغي الحاجة إلى مختبرات نقل الخلايا الثديية مع مستقبلات الجينات والإستروجين مراسل13,14, الذي كان غير مستقر ومتغير في فعالية. يوفر المقايسة منصة مستقرة transfection التي تسمح بسرعة وببساطة تحديد ما إذا كان المصنع لديه نشاط استروجين عبر مستقبلات ملزمة.

نحن اختبار فرضية أن فول الصويا لديها نشاط استروجين أعلى من جميع الأطعمة الأخرى نظرا لتركيزات معروفة من الإيسوفلافوناتإستروجين 15 باستخدام الأطعمة البشرية من البقالين المحليين.

الوصول مقيد. يرجى تسجيل الدخول أو بدء فترة تجريبية لعرض هذا المحتوى.

البروتوكول

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

1- إعداد المواد النباتية

  1. تجميد المواد النباتية الجافة التي تم جمعها طازجة باستخدام مزيل ا لهذا المرض.
    1. لحماية العينات من الضوء، تغطية الغرف مع رقائق الألومنيوم أثناء عملية التجفيف.
    2. لضمان أن العينات جافة تماما، التجميل حتى غرف لم تعد تشعر الباردة للمس والمواد النباتية لم تعد تفقد كتلة عندما وزنها.
    3. تخزين النباتات المجففة في أكياس المخلفات المنخفضة العقيمة في غياب الضوء حتى طحن.
  2. طحن عينات بدقة باستخدام طاحونة طحن مع 0.85 ملم شبكة الشاشة.
    1. تخزين العينات الأرضية في الأكياس في غياب الضوء حتى الاستخراج.

2- استخراج نواتج الأيض الثانوية النباتية

  1. لاستخراج الأيض النباتي الثانوي، استخدم نسبة 1 غرام من العينة المجففة إلى 10 مل من ميثانول HPLC الصف.
    1. تزن عينة على التوازن التحليلي وإضافته إلى قارورة Erlenmeyer الحجم المناسب (125 – 250 مل). ثم إضافة حجم مناسب من الميثانول. سجل كتلة العينة المستخرجة.
    2. تغطية محلول النبات الميثانول مع رقائق الألومنيوم، ومن ثم تعيين لتدوير في سرعة 100 دورة في الدقيقة في درجة حرارة الغرفة (RT) لمدة 3 أيام على شاكر المدارية، مما يسمح للمركبات استروجين يحتمل أن تذوب في الميثانول.
    3. decant الماسخ في نظام الترشيح بالتنقيط باستخدام ورقة مرشح (125 مم).
    4. باستخدام المبخر الدوار، وتجفيف استخراج النبات حتى يتم سميكة العينة، ولكن سكب، في قارورة 300 مل جولة القاع. صب عينة في قارورة 50 مل الجولة القاع، شطف قارورة كبيرة مع كمية صغيرة من الميثانول. استمر في تجفيف العينة في القارورة الصغيرة حتى يتبخر الميثانول تمامًا.
    5. وزن بقايا العينة باستخدام توازن تحليلي. سجل بقايا الكتلة.
    6. قم بحل مستخلص النبات في ثنائيات الكبريت (DMSO) بتركيز 0.1 غرام من استخراج إلى 2 مل من DMSO. دوامة حتى متجانسة.
    7. تخزين مصنع استخراج-DMSO حل في 4 درجة مئوية في قارورة الزجاج العنبر حتى المقايسة.

تنبيه: يمكن للنباتات أن تنتج مواد كيميائية نشطة بيولوجياً غير معروفة، وMMSO هي وسيلة يمكنها نقلها عبر أغشية الخلايا. استخدام معدات الحماية الشخصية المناسبة والرعاية عند التعامل مع هذه العينات.

3. مستقبلات هرمون الاستروجين البشري β المقايسة transfection12

ملاحظة: مطلوب تقنية معقمة وغطاء تدفق لامينر لليوم 1 من بروتوكول الفحص.

  1. إعداد التخفيفات من 17 بيتا-استراديول للمنحنى القياسية.
    1. نقل متوسط استرداد الخلية والمركب فحص متوسط (CSM) من تخزين الفريزر وذوبان في حمام مائي 37 درجة مئوية.
    2. تسمية microcentrifuge أنابيب المتوسطة 1 و 2 (INT1، INT2) و 1-8.
    3. تعبئة INT1 مع 995 ميكرولتر من CSM، INT2 مع 615 ميكرولتر من CSM، أنبوب 1 مع 900 ميكرولتر من CSM، والأنابيب 2-8 مع 600 ميكرولتر من CSM. تعيين أنبوب 8 جانبا.
    4. نقل 5 ميكرولتر من 100 ميكرومتر 17β-استراديول الأسهم في INT1. تجاهل الطرف. دوامه.
    5. قبل كل نقل، شطف الماصات 3 مرات، ومن ثم نقل 10 ميكرولتر من INT1 إلى INT2. تجاهل الطرف.
    6. شطف الماصات 3 مرات، ومن ثم نقل 100 ميكرولتر من INT2 إلى أنبوب 1. تجاهل تلميح. نقل 300 ميكرولتر من أنبوب 1 إلى أنبوب 2. كرر للأنابيب 3 إلى 7. تخلص من 300 ميكرولتر من الأنبوب 7 إلى حاوية النفايات. الأنبوب 8 هو صفر ولا يتلقى استراديول. التركيزات النهائية للمعايير المطلية هي: 400، 133.3، 44.44، 14.815، 4.938، 1.646، 0.5487، و 0 pM استراديول.
  2. إعداد مركبات العينة.
    1. عينات دوامة.
    2. خذ 4 ميكرولتر من كل عينة من النباتات في DMSO وأضف إلى 496 ميكرولتر من CSM لإنتاج حل DMSO بنسبة 0.8٪.
  3. بسرعة تذوب خلايا المراسل.
    1. استرداد أنبوب الخلية الانتعاش المتوسطة من 37 درجة مئوية حمام الماء. تطهير السطح الخارجي باستخدام 70٪ الإيثانول.
    2. استرداد خلايا المراسل من -80 درجة مئوية التخزين وذوبان عن طريق نقل 10 مل من إدارة علاقات العملاء قبل warmed إلى أنبوب من الخلايا المجمدة.
    3. أغلق أنبوب من "خلايا المراسل" ونقل إلى حمام مائي 37 درجة مئوية لمدة 5-10 دقيقة.
    4. استرداد أنبوب تعليق الخلية مراسل من حمام الماء. عكس أنبوب الخلايا عدة مرات بلطف لتفريق مجاميع من الخلايا وإنتاج تعليق متجانس. تنظيف سطح الأنبوب مع 70٪ الإيثانول.
  4. طلاء المقايسة
    1. الاستغناء 100 μL من تعليق الخلية مراسل في كل بئر باستخدام ماصة متعددة القنوات.
    2. توزيع 100 ميكرولتر من العينات في ثلاث اُكريات في آبار فحص مناسبة.
    3. نقل لوحة إلى 37 درجة مئوية، مرطب 5٪ CO2 حاضنة لمدة 22-24 ساعة.
  5. ذوبان الركيزة الكشف والكشف عن المخزن المؤقت في ثلاجة داكنة بين عشية وضحاها للتحضير لليوم 2.
  6. قبل نهاية حضانة اللوحة، قم بإزالة الركيزة الكشفية ومخزن الكشف المؤقت من الثلاجة ووضعها في منطقة الإضاءة المنخفضة حتى يتم توازنها إلى RT. مرة واحدة في RT، عكس كل أنبوب بلطف عدة مرات لخلط الحلول بدقة.
    1. مباشرة قبل اكتمال الحضانة، صب محتويات كامل من المخزن المؤقت الكشف في أنبوب الركيزة الكشف عن لخلق كاشف الكشف Luciferase. تخلط بلطف حتى لا تنتج الرغوة.
    2. بمجرد اكتمال الحضانة، عكس لوحة لتجاهل المحتوى في حاوية النفايات المناسبة. اضغط بلطف على لوحة نظيفة ماصة ورقة منشفة لإزالة قطرات الماضي من الآبار.
    3. إضافة 100 μL من كاشف الكشف لوسيفيراس إلى كل بئر. السماح للوحة المقايسة للراحة في RT لمدة 15 دقيقة. لا تهز اللوحة.
  7. كمي الإنارة باستخدام 96 لوحة جيدا قراءة مضيئة.

الوصول مقيد. يرجى تسجيل الدخول أو بدء فترة تجريبية لعرض هذا المحتوى.

النتائج

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

تم فحص 22 مقتطفات من الفواكه والخضروات الموجودة عادة في الوجبات الغذائية البشرية لوجود مركبات استروجين. تم فحص مجموعة متنوعة من الأطعمة، بما في ذلك البقوليات، مثل فول الصويا والبازلاء الثلجية والبازلاء المفاجئة، حيث أن عائلة البازلاء هي مصدر معروف للـ phytoestrogens16، وكذلك التين والتمور والذرة والجزر والتفاح والموز والفراولة والطماطم واللفت والملفوف. توجد مركبات الغدد الصماء التي تعطل في المواد الشائعة (مثل البلاستيك والمبيدات الحشرية) وبعضها نشط بيولوجياً من خلال ERs17. ...

الوصول مقيد. يرجى تسجيل الدخول أو بدء فترة تجريبية لعرض هذا المحتوى.

المناقشة

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

وERβ مقايسة مراسل وضعت لفحص فردي وكلاء الأدوية هي أيضا مناسبة لفحص الأغذية النباتية ل phytoestrogens النشطة بيولوجيا من خلال ERβ. وتشمل الاعتبارات الهامة في البروتوكول معالجة عينات النباتات بعناية: المواد النباتية الطازجة تحتاج إلى تجفيف بسرعة لمنع صب أو التحلل البيولوجي الأخرى، وأنه يحتاج إلى أن تبقى بعيدا عن الضوء لمنع التحليل الضوئي للمركبات18. إن بروتوكول الفحص12 الذي قدمته الشركة المصنعة واضح ويحتاج إلى تعديلات قليلة جدًا لأغراض الفحص. وقد تم تعديل منحنى القياسية المقت...

الوصول مقيد. يرجى تسجيل الدخول أو بدء فترة تجريبية لعرض هذا المحتوى.

الإفصاحات

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

ليس لدى أصحاب البلاغ ما يكشفون عنه.

شكر وتقدير

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

الكتاب شاكرون لدال Leitman للتدريب الأولي في استخدام المقايسات العابرة لتحديد النشاط الاستروجيني للأغذية النباتية الرئيسيات. بفضل برادفورد ويستريتش وC. اريك جونسون للمساعدة في إعداد معدات المختبر وتدريب الطلاب على أساليب الاستخراج. وأخيراً، شكراً لجامعة إنديانا على تمويل هذا البحث.

الوصول مقيد. يرجى تسجيل الدخول أو بدء فترة تجريبية لعرض هذا المحتوى.

المواد

قائمة المواد المستخدمة في هذه المقالة
الاسمالشركةرقم فهرسيالتعليقات
1000 & ميكرو; L ماصة
20 & ميكرو; ماصة
200 وميكرو ؛ L ماصة
37 &# 176; حمام
37 &# 176;, مرطب 5٪ CO2 حاضنة
70٪ الإيثانول
التوازن التحليلي
لغطاء التدفق
الخلية ثنائي ميثيل سلفوكسيد
حوض الوسائط القابل للتصرف ،
قوارير Erlenmeyer قوارير125 مل و 250 مل
الميثانول
نظام فحص المراسل ، فحوصات بتنسيق 1 × 96 بئرIndigo BiosciencesIB00411مجموعة الفحص - يحلل 24 عينة بالإضافة إلى
تجفيد المنحنى
ومقياس الإضاءة لقراءة لوحة
المداري
القنوات ، على سبيل المثال ،
مستديرة القاع50 مل و 300 مل
أنابيب الطرد المركزي الدقيقة المعقمة أو أحواض
نصائح200 & مايكرو ؛ L و 1000 & L
Whatman الصف 1 أكياس
دوامةالبولي إيثيلين المعقمة
Lمائيالصفحي المصنف لثقافة نظام الترشيح بالتنقيط المعقم من بدرجة HPLC Human ER & beta ؛أداة القياسية ، الهزاز متعدد المبخر الدوار Bioteck Synergy HTX قوارير وسائط معقمة متعددة القنوات معقمة ورقية باك أكياس

المراجع

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,
  1. Wasserman, M. D., et al. Estrogenic plant consumption predicts red colobus monkey (Procolobus rufomitratus) hormonal state and behavior. Hormones and Behavior. 62 (5), 553-562 (2012).
  2. Wasserman, M. D., Milton, K., Chapman, C. A. The roles of phytoestrogens in primate ecology and evolution. International Journal of Primatology. 34 (5), 861-878 (2013).
  3. DeGabriel, J. L., Moore, B. D., Foley, W. J., Johnson, C. N. The effects of plant defensive chemistry on nutrient availability predict reproductive success in a mammal. Ecology. 90 (3), 711-719 (2009).
  4. Wasserman, M. D., Steiniche, T., Després-Einspenner, M. -L. Primate Diet & Nutrition. Lambert, J. E., Rothman, J. M. , University of Chicago Press. (2020).
  5. Benavidez, K. M., Chapman, C. A., Leitman, D. C., Harris, T. R., Wasserman, M. D. Intergroup variation in oestrogenic plant consumption by black-and-white colobus monkeys. African Journal of Ecology. , (2019).
  6. Bennetts, H. W., Underwood, E. J., Shier, F. L. A specific breeding problem of sheep on subterranean clover pastures in Western Australia. Australian Veterinary Journal. 22 (1), 2-12 (1946).
  7. Tubbs, C. W., et al. Estrogenicity of captive southern white rhinoceros diets and their association with fertility. General and Comparative Endocrinology. 238, 32-38 (2016).
  8. Shen, M., et al. Observation of the influences of diosgenin on aging ovarian reserve and function in a mouse model. European Journal of Medical Research. 22 (1), 42(2017).
  9. Boué, S. M., et al. Evaluation of the estrogenic effects of legume extracts containing phytoestrogens. Journal of Agricultural and Food Chemistry. 51 (8), 2193-2199 (2003).
  10. Klinge, C. M. Estrogen receptor interaction with estrogen response elements. Nucleic Acids Research. 29 (14), 2905-2919 (2001).
  11. Nishikawa, J. -i, et al. New screening methods for chemicals with hormonal activities using interaction of nuclear hormone receptor with coactivator. Toxicology and Applied Pharmacology. 154 (1), 76-83 (1999).
  12. Human Estrogen Receptor Beta (ERb; ESR2; NR3A2) Reporter Assay System. , Indigo Biosciences. State College, PA. (2020).
  13. Wasserman, M. D., et al. Estrogenic plant foods of red colobus monkeys and mountain gorillas in uganda. American Journal of Physical Anthropology. 148 (1), 88-97 (2012).
  14. Vivar, O. I., Saunier, E. F., Leitman, D. C., Firestone, G. L., Bjeldanes, L. F. Selective activation of estrogen receptor-β target genes by 3, 3'-diindolylmethane. Endocrinology. 151 (4), 1662-1667 (2010).
  15. Whitten, P. L., Patisaul, H. B. Cross-species and interassay comparisons of phytoestrogen action. Environmental Health Perspectives. 109, suppl 1 5-20 (2001).
  16. Di Gioia, F., Petropoulos, S. A. Advances in Food and Nutrition Research. , Academic Press Inc. (2019).
  17. Lutz, I., Kloas, W. Amphibians as a model to study endocrine disruptors: I. Environmental pollution and estrogen receptor binding. Science of The Total Environment. 225 (1), 49-57 (1999).
  18. Felcyn, J. R., Davis, J. C. C., Tran, L. H., Berude, J. C., Latch, D. E. Aquatic Photochemistry of Isoflavone Phytoestrogens: Degradation Kinetics and Pathways. Environmental Science & Technology. 46 (12), 6698-6704 (2012).
  19. Jeng, Y. -J., Kochukov, M. Y., Watson, C. S. Membrane estrogen receptor-alpha-mediated nongenomic actions of phytoestrogens in GH3/B6/F10 pituitary tumor cells. Journal of Molecular Signaling. 4, 2-2 (2009).
  20. Dixon, R. A. Phytoestrogens. Annual Review of Plant Biology. 55, (2004).
  21. Kuiper, G. G. J. M., et al. Interaction of Estrogenic Chemicals and Phytoestrogens with Estrogen Receptor β. Endocrinology. 139 (10), 4252-4263 (1998).
  22. Wasserman, M. D. Feeding on Phytoestrogens: Implications of Estrogenic Plants for Primate Ecology. , UC Berkeley. (2011).
  23. Jefferson, W. N., Patisaul, H. B., Williams, C. J. Reproductive consequences of developmental phytoestrogen exposure. Reproduction. 143 (3), Cambridge, England. 247-260 (2012).

الوصول مقيد. يرجى تسجيل الدخول أو بدء فترة تجريبية لعرض هذا المحتوى.

إعادة الطباعة والأذونات

طلب إذن لإعادة استخدام النص أو الأشكال في مقالة JoVE هذه

طلب إذن

الوسوم

Estrogen Receptor BetaCell based AssayLuciferase ReporterPhytoestrogen ScreeningPlant Extract AnalysisEstrogenic Activity DetectionDMSO ExtractionOrbital Shaker Incubation96 Well PlateLuminometer Detection

مقالات ذات صلة