نقدم بروتوكوللقياس استجابة المخدرات في الوقت الحقيقي في شرائح أنسجة الورم organotypic. توفر الاستراتيجية التجريبية المبينة هنا منصة لتنفيذ شاشات الأدوية المتوسطة والعالية على شرائح الأنسجة المشتقة من أورام سريرية أو فأرة في ظروف الجسم الحي.
يتطلب اشتراك JoVE لعرض هذا المحتوى. تسجيل الدخول أو ابدأ نسخة تجريبية مجانية
مقالة منهجية
قياس الاستجابة للمخدرات في الوقت الحقيقي في شرائح أنسجة الورم Organotypic
في هذه المقالة
ملخص
الملخص
تتكون أنسجة الورم من خلايا سرطانية وخلايا مناعية مخترقة وخلايا إنهيليلية وخلايا ليفية ومصفوفة خارج الخلية. هذا الوسط المعقد يشكل البيئة الدقيقة الورم (TME) ويمكن تعديل الاستجابة للعلاج في الجسم الحي أو استجابة المخدرات على سبيل الكفو. يتم تنفيذ شاشات اكتشاف أدوية السرطان التقليدية على الخلايا المستزرعة في طبقة أحادية ، وهو نظام يفتقر بشكل خطير إلى تأثير TME. وبالتالي ، فإن الأنظمة التجريبية التي تدمج المقالات الحساسة وعالية الإنتاجية مع TME الفسيولوجية ستعزز عملية اكتشاف الأدوية قبل السريرية. هنا، نقدم زراعة شريحة أنسجة ورم الجسم الحي كمنصة لفحص المخدرات متوسطة-عالية الإنتاجية. تشكل زراعة شرائح الأنسجة المنقّبة على وجه التحديد أقسام الورم الرقيقة التي يتم الحفاظ عليها بدعم من غشاء مسامي في واجهة السائل والهواء. في هذا البروتوكول، ونحن نصف إعداد وصيانة شرائح الأنسجة المعدة من أورام الفئران والأورام من نماذج xenograft المشتقة من المريض (PDX). لتقييم التغيرات في قابلية الأنسجة للاستمرار استجابة للعلاج من المخدرات، استفدنا من فحص قابلية البقاء القائم على الإضاءة المتوافق بيولوجيًا والذي يتيح قياس الخلايا القابلة للحياة في الأنسجة في الوقت الحقيقي والسريع والحساس. باستخدام هذه المنصة، قمنا بتقييم الاستجابات المعتمدة على الجرعة من شرائح الأنسجة إلى مثبط اتيبيز متعدد الكيناز، staurosporine، وعامل السامة للخلايا، دوكسوروبيسين. علاوة على ذلك ، نبين تطبيق شرائح الأنسجة لعلم الأدوية على سبيل الكفيو عن طريق فحص 17 دواءً سريريًا وما قبل سريري على شرائح الأنسجة المعدة من ورم PDX واحد. لدينا ذات الصلة من الناحية الفسيولوجية، وحساسة للغاية، وقوية منصة فحص الجسم الحي السابق سوف تعزز إلى حد كبير اكتشاف المخدرات الأورام قبل السريرية واتخاذ القرارات العلاجية.
المقدمة
تفاعلات الخلايا السرطانية مع الخصائص الفيزيائية والبيوكيميائية للأنسجة سترومال المحيطة تشكل TME. TME يمكن أن تحفز نمو الورم، الانبثاث، وتعدل استجابة الورم للعلاج1. في تطوير الأدوية التقليدية قبل السريرية ، عادة ما يتم فحص المرشحين للأدوية لأول مرة باستخدام خطوط الخلايا السرطانية المثقفة ، وهي منصة فحص تفتقر بشكل حرج إلى TME2. هذا النقص في TME الفسيولوجية في مراحل الفحص المسبق القائمة على الخلايا قد يحد من اكتشاف العوامل الفعالة في النماذج الحيوانية الحاملة للورم وقد يساهم في ارتفاع معدل الاستنزاف للعديد من أدوية الأورام الواعدة في المراحل السريرية اللاحقة من التطور3.
على الرغم من أهمية TME في تعديل استجابات أدوية الورم ، فإن القيود التجريبية تحد من تطبيق أنظمة أكثر ملاءمة من الناحية الفسيولوجية خلال المراحل المبكرة من اكتشاف المخدرات وتطويرها. من غير العملي فحص مئات العوامل العلاجية على الأورام من النماذج الحيوانية أو عينات أورام المريض. والواقع أن العينات الجراحية هي موارد شحيحة ذات خلفيات وراثية متنوعة، كما أن فحص الآلاف من الجزيئات المرشحة في النماذج الحيوانية غير ممكن بسبب النطاق التجريبي والتكلفة ورعاية الحيوان.
زراعة شرائح الأنسجة السرطانية ، حيث قطع بدقة ، يتم استزراع أقسام الورم الرقيقة على سبيل المثال ، يمكن معالجة الحد من TME الفسيولوجية في فحوصات فحص الدواء. تاريخيا، كان مجال علم الأعصاب رائداً وحقق تحسينات واسعة النطاق لثقافة الشريحة لأنسجة الدماغ4. في الآونة الأخيرة، أظهرت العديد من الدراسات إعداد شرائح من أنواع مختلفة من الأنسجة السرطانية بما في ذلك الأورام المشتقة من خط الخلية، ونماذج الورم العفوية، xenografts المشتقة من المريض (PDX)، وأورام المريض الرئيسي. الثقافة شريحة الأنسجة الأفو السابقين يدمج فوائد من كل من في الجسم الحي والثقافة في المختبر5. تحافظ شرائح الأنسجة السرطانية على بنية الأنسجة السليمة وتكوين الخلايا المتنوعة ، مما يتيح دراسة الخلايا السرطانية في سياق TME.
يقدم هذا البروتوكول نظام زراعة شرائح أنسجة الورم الأورغية مقرونة بشهادة قابلية البقاء الحساسة للغاية في الوقت الحقيقي لتقييم استجابات الأدوية. اختبارات فعالية الدواء على شرائح أنسجة الورم organotypic في بروتوكولات أدخلت سابقا تعتمد على قياس التغيرات في قابلية الخلية من خلال دمج الصبغة الفلورية، الكيمياء المناعية (IHC)، أو MTT ((3- [4- 5-dimethylthiazol-2-yl]-2، 5 ثنائي الفينيل تترازوليوم بروميد) قياس66،7،,8،,9. ومع ذلك، كل هذه الأساليب هي المقالات نقطة النهاية وتعاني من حساسية منخفضة، وقت المعالجة الطويل، تحليلات البيانات المعقدة، نطاق الإشارة الضيقة، والخطأ التجريبي العالي. يعمل كاشف الخلايا الحية المتوافق مع الخلايا المتوافق مع الخلايا المعتمة على تحسين هذه المقالات من خلال توفير نطاق إشارة واسع وقياس فوري (~ 5 دقيقة) دون معالجة مسبقة والحد الأدنى من المعالجة. هذا الكاشف حساس للغاية ويمكن أن يتعايش في وسائط ثقافة الخلية ، مما يسمح بقياس مستمر وزمني لصلاحية الخلية. ينطبق نظام الفحص هذا على فحص الإنتاجية العالية للمرشحين للأدوية على شرائح الأنسجة في تطوير الأدوية قبل السريرية.
الوصول مقيد. يرجى تسجيل الدخول أو بدء فترة تجريبية لعرض هذا المحتوى.
البروتوكول
وقد أجريت جميع تجارب الفئران وفقا للتوصيات الواردة في دليل رعاية واستخدام الحيوانات المختبرية لقانون رعاية الحيوان والمبادئ التوجيهية للمعاهد الوطنية للصحة لرعاية الحيوانات واستخدامها في البحوث الطبية الحيوية.
1. إعداد شرائح أنسجة الورم
- إعداد زراعة شرائح الأنسجة (TSC) متوسطة تتبع الوصفة في الجدول 1. تصفية المتوسطة مع وحدة تصفية فراغ 0.45 ميكرون لتعقيم.
- Aliquot 250 ميكرولتر من TSC متوسطة لكل بئر للوحة بئر 24 ، أو 1 مل من المتوسط لكل بئر للوحة بئر 6. احتفظ باللوحة في حاضنة رطبة بزاوية 37 درجة مئوية و5% من ثاني أكسيد الكربونحتى الاستخدام.
ملاحظة: يمكن تحسين الوسط والمكملات الغذائية اعتمادًا على أنواع الأنسجة والأهداف التجريبية. وينبغي أن تكون كمية المتوسطة ما يكفي لامتصاص الغشاء المسامية من إدراج الثقافة. لا تتجاوز مستوى الغشاء. ضبط مستوى الصوت المتوسط إذا كان المستوى المتوسط منخفضًا جدًا أو مرتفعًا جدًا. إذا كان الباحثون يختبرون عوامل المناعة ، فإننا نوصي بمكملات الوسط مع IL-210. - إذا كان استخدام أنسجة الورم المشتقة من الفئران، القتل الرحيم الفئران مع إجراء الموصى بها، وتعقيم الجلد المكشوف من الفئران عن طريق رش 70٪ الإيثانول، وتشريح الأورام مع تقنيات العقيم. تخزين أنسجة الورم في أنبوب يحتوي على الجليد الباردة هانك محلول الملح المتوازن (HBSS).
- إذا كان استخدام أنسجة أورام المريض الطازجة, تخزين في HBSS الجليد الباردة على المدى القصير, أو الجليد الباردة جامعة بيلزر جامعة ويسكونسن (UW) حل للتخزين على المدى الطويل (تصل إلى 24 ح) للحفاظ على صلاحية الأنسجة.
ملاحظة: تم إعداد شرائح من أنسجة PDX التي يتم شحنها بين عشية وضحاها في حل UW الباردة في الجليد بنجاح. - نقل أنسجة الورم إلى لوحة ثقافة 10 سم تحتوي على HBSS الجليد الباردة. قطع الورم إلى أنصاف مع مشرط في حين غمرت في HBSS الجليد الباردة. شكل أنسجة الورم في اسطوانات باستخدام لكمة خزعة قطرها 6 مم وتقليم جانب واحد لإنشاء سطح مستو. تخزين الأنسجة في HBSS الجليد الباردة حتى الاستخدام.
ملاحظة: تجنب بما في ذلك المنطقة النخرية من الأنسجة، والتي هي عموما في المركز ولها مظهر مبهموهشة. - إعداد الهزاز. تطهير جميع المعدات باستخدام الإيثانول 70٪. ضع علبة عازل الهزاز المغطاة بغطاء زجاجي أكريليك في وسط حمام الثلج الهزاز. إضافة الثلج إلى حمام الجليد وملء علبة عازلة مع HBSS المبردة للحفاظ على برودة الأنسجة أثناء تشريح. نعلق شفرة حلاقة إلى حامل شفرة.
ملاحظة: على الرغم من أن حفظ الهزاز اتّصال في بيئة شبه معقمة لم يؤثر على التجارب السابقة، فمن المستحسن تخزين الهزاز تحت خزانة السلامة البيولوجية إذا كان متوفراً. - رفع بعناية حتى أنسجة الورم اللكم خزعة من HBSS باستخدام ملقط مسنن وإزالة المخزن المؤقت الزائد عن طريق dabbing الأنسجة مع منشفة ورقية خالية من الوبر.
- وضع قطرة من الصف الطبي الغراء سيانواكريلات على لوحة عينة ووضع الأنسجة على هذا الانخفاض. الهواء الجاف الغراء لمدة 2-3 دقيقة ووضع لوحة في علبة عازلة. الملحق مع بعض HBSS حتى يتم غمر الأنسجة بالكامل في المخزن المؤقت.
ملاحظة: الأنسجة المتصاعدة في وضع ثابت ومستقر أمر بالغ الأهمية لتوليد شرائح قطع بشكل موحد. إذا كانت الأنسجة المركبة غير مستقرة، فإما إضافة المزيد من الغراء إلى الأنسجة المحيطة للاحتفاظ بوضع ية تستقيم أو تفريغ الأنسجة، وتسطيح القاع، والغراء مرة أخرى. الأنسجة المرنة تميل إلى الحصول على دفع وعازمة بسهولة أكبر أثناء تشريح, وفي هذه الحالة أقصر أطوال (<5 مم) وأشواط متعددة قد تكون مناسبة. بالنسبة للأنسجة الهشة للغاية، يمكن للمناشف الورقية أن تدمر الأنسجة. في هذه الحالة، يمكن وضع الأنسجة على سطح بلاستيكي لفتيل بعيدا بعض HBSS الزائدة. - ضبط إعدادات الهزاز. يتم استخدام الإعدادات التالية: سمك القطع = 250 ميكرومتر، والسعة = 3.00 مم، وسرعة القطع = 0.01-0.25 مم/س، وزاوية الشفرة = 15 درجة-21 درجة.
ملاحظة: تحسين إعدادات تشريح اعتمادا على صلابة الأنسجة. يتم قطع الأنسجة الناعمة بسهولة أكبر مع زاوية شفرة أعمق بسرعة أقل. زاوية شفرة من 18 درجة، وقطع السرعة بين 0.10-0.18 ملم / سنة، وسعة 3.00 ملم يعمل بشكل جيد لأورام الماوس 4T1 و PDX HCI010. يمكن قطع الأنسجة الأكثر صلابة بسرعة شفرة أسرع. - تعيين مواقع البداية والنهاية للشفرة وضبط ارتفاع المرحلة. تشغيل الصك مع وضع مستمر لقطع شرائح لعدة دورات حتى يتم قطع الأنسجة بشكل موحد.
- استمر في تقطيع الأنسجة. نقل شرائح جنبا إلى جنب مع كمية صغيرة من العازلة HBSS على إدراج ثقافة الخلية مع المتوسطة مع ماصة نقل واسعة الطرف، وذلك باستخدام شفط لرفع شريحة كاملة. ضع شريحة واحدة لكل إدراج على لوحة بئر 24. يمكن لإدراج 6 لوحات جيدا استيعاب ما يصل إلى أربع شرائح للفحص تكرار.
ملاحظة: إذا كانت الحافة الأخيرة من شريحة الأنسجة لا تزال متصلة بالأنسجة غير المصقولة، فأوقف الهزاز وفصل شريحة الأنسجة بزوجين من ملقط البقشيش الناعم دون لمس شرائح الأنسجة أو بدسها. شفرة حلاقة منفصلة يمكن أن تكون مفيدة في إزالة الأنسجة المعلقة. - إزالة أي المخزن المؤقت الزائد مع غرامة تلميح نقل pipette.
- عندما يصل النصل إلى مكان قريب من الأنسجة الملتصقة، أوقف الأداة، ويخفض المرحلة، ويزيل الأنسجة المتصلبة بشفرة منفصلة، ويشن نسيجًا جديدًا. استمر في التقطيع حتى يتم جمع شرائح كافية.
- ثقافة لوحات في حاضنة رطبة تعيين في 37 درجة مئوية، 5٪ CO2. يتم استزراع شرائح الأنسجة في الطور البيني بين الهواء والسائل على إدراج ثقافة الخلية. شرائح الأنسجة جاهزة للتجارب 24-48 ساعة بعد إعداد الشريحة الأولية. للزراعة على المدى الطويل، وتبادل المتوسطة كل 2-3 أيام.
2- قياس الجدوى
- لقياس الجدوى من شريحة الأنسجة، تبادل المتوسطة مع كاشف قياس قابلية البقاء القائمة على الإنارة التي تحتوي على كل من لوسيفيراز وprosubstrate في 1:1،000 تخفيف في وسط TSC بعد تعليمات الشركة المصنعة. يقيس الكاشف نشاط تقليل الخلايا الحية من الركيزة الأيضية إلى لوسيفيرين11. نقل 50 ميكرولتر من خليط الأنزيم الركيزة على رأس كل شريحة من الأنسجة.
- احتضان مع الانفعالات لطيف على شاكر المداري ة تقع داخل حاضنة رطبة تعيين في 37 درجة مئوية مع 5٪ CO2 بين عشية وضحاها.
- يمكن قياس إشارات الإنارة باستخدام قارئ ميكروبليت أو أداة تصوير في الجسم الحي للأنسجة المستزرعة في لوحة بئر 24. لقياس قابلية الأنسجة المتعددة الفردية على لوحة بئر 6 ، يجب استخدام نظام تصوير في الجسم الحي.
- عند استخدام قارئ microplate، تعيين microplate دون غطاء. أي نوع من قارئ microplate قادرة على قياس كثافة الإنارة ينبغي أن تكون مناسبة للتجربة. استخدمنا الإعدادات التالية: قراءة الوقت = 1 s، القياس من الأعلى، كسب = 200.
ملاحظة: للحصول على دقة أعلى، استخدم لوحة صغيرة ذات جدار أبيض لإعداد التجربة. تم اختبار الجدار الأبيض ، واضحة القاع 24 لوحات البئر ، وفي معظم الحالات ، لوحات جيدة واضحة لا تعرض للخطر النتائج. - عند استخدام نظام تصوير في الجسم الحي لقياس الجدوى، ضع اللوحة في وسط المرحلة وإزالة الغطاء. الحصول على الصور الفوتوغرافية العادية تليها الصور الإنارة مع حقل الإعداد المرحلة في C، وقت التعرض السيارات، و توقف = 1، الإعداد الموضوعي كما microplate مع ارتفاع الموضوع = 0.0 سم.
- قياس كثافة الإنارة باستخدام برنامج التصوير يرافقه في نظام التصوير في الجسم الحي. رسم مناطق متسقة من الفائدة (ROI) حول كل شريحة الأنسجة. يستخدم هذا البروتوكول دائرة قطرها 1 سم كعائد استثمار (انظر الشكل 1). قياس التدفق الإجمالي (p/s) للمنطقة.
- عند استخدام قارئ microplate، تعيين microplate دون غطاء. أي نوع من قارئ microplate قادرة على قياس كثافة الإنارة ينبغي أن تكون مناسبة للتجربة. استخدمنا الإعدادات التالية: قراءة الوقت = 1 s، القياس من الأعلى، كسب = 200.
3- تقييم تأثير المخدرات على شرائح الأنسجة
- قياس قابلية الخط الأساسي للاستمرار قبل العلاج باستخدام كاشف قياس الجدوى القائم على الإضاءة على النحو المبين في القسم 2.
ملاحظة: إذا كان العديد من الأنسجة أقل بكثير من الجدوى بالمقارنة مع الآخرين، حذف الأنسجة من القياس. - إذابة الأدوية في ثنائي ميثيل سلفوكسيد (DMSO) لجعل حلول الأسهم. إعداد محلول المخدرات 10x مع TSC أو غيرها من الثقافة المتوسطة (25 ميكرولتر / جيدا للوحة بئر 24 تحتوي على 250 ميكرولتر من المتوسط) في تركيزات المطلوب. للتحكم في السيارة، قم بإعداد وسيط يحتوي على حجم مكافئ من DMSO.
- تكملة حل المخدرات 10x إلى وسط الثقافة في الجزء السفلي من البئر. مزيج عن طريق الأنابيب ونقل 50 ميكرولتر من المتوسط على رأس الأنسجة.
ملاحظة: إذا كانت هناك عدة شرائح نسيج متوفرة، قم باختبار التكرارات أو ثلاثية لكل حالة. - احتضان بين عشية وضحاها مع اهتزاز لطيف على شاكر المداري في 37 درجة مئوية, 5% CO2,حاضنة الترطيب.
- إزالة لوحة من شاكر واحتضان بشكل ثابت في 37 درجة مئوية، 5٪ CO2،حاضنة الترطيب.
- عند النقاط الزمنية المطلوبة، قم بقياس كثافة الإنارة من الأنسجة باستخدام قارئ ميكروبليت أو في نظام تصوير في الجسم الحي. عادة، تصبح آثار المخدرات قابلة للكشف بعد 1-6 أيام من العلاج.
ملاحظة: كاشف قابلية التشغيل المستندة إلى الإنارة مستقر لمدة 3 أيام على الأقل في ظل ظروف الثقافة. ومع ذلك ، قد يتم استنفاد الركيزة أثناء عملية الفحص اعتمادًا على النشاط الأيضي للأنسجة. إذا لوحظ انخفاض إشارة كبيرة في الأنسجة مع إشارات عالية سابقا, تكملة الركيزة في جميع الآبار. - حساب الجدوى المتبقية من أنسجة الورم المعالجة باستخدام المعادلة التالية:
يتم تطبيع صلاحية الأنسجة المعالجة من خلال قابليتها للاستمرار الأساسية وتحول قابلية البقاء لأنسجة الورم المكافحة.
الوصول مقيد. يرجى تسجيل الدخول أو بدء فترة تجريبية لعرض هذا المحتوى.
النتائج
هنا، ونحن نظهر دورة زمنية، بروتوكول تقييم فعالية المخدرات متعددة لشرائح أنسجة الورم أعدت من الماوس 4T1 أنسجة ورم الثدي ونموذج PDX سرطان الثدي، HCI01012. قمنا بإعداد شرائح الأنسجة بنجاح من العديد من الأورام المشتقة من الماوس ، PDX ، وأورام المريضالطازجة 10. ويرد وصف سير العمل العام لإعداد أنسجة الورم واختبار فعالية الدواء في الشكل 1. بشكل عام، يمكننا إعداد شرائح الأنسجة 20-40 من ورم واحد السائبة من 1000-1500 ملم3 في الحجم.
الوصول مقيد. يرجى تسجيل الدخول أو بدء فترة تجريبية لعرض هذا المحتوى.
المناقشة
في هذا البروتوكول، ونحن نظهر منصة لدراسات فعالية المخدرات الكمية والوقت الحقيقي على شرائح أنسجة الورم organotypic. يوفر نظام زراعة شرائح الأنسجة مزايا متميزة على الطرق المختبرية التقليدية القائمة على الخلايا من خلال التقاط عدم تجانس الخلايا والخصائص الفسيولوجية للبيئة الدقيقة للورم الأصلي. هذه المنصة تمكن أيضا إنتاجية أعلى لاختبار فعالية الدواء، مما يساعد على سد الفجوة بين الدراسات ثقافة الخلية وفي التجارب على الجسم الحي.
للحصول على نتائج دقيقة ومتسقة ، من الضروري تقليل تلف الأنسجة أثناء التحض...
الوصول مقيد. يرجى تسجيل الدخول أو بدء فترة تجريبية لعرض هذا المحتوى.
الإفصاحات
وليس لدى أصحاب البلاغ ما يكشفون عنه.
شكر وتقدير
تم دعم هذا العمل من قبل المعاهد القومية للصحة / NCI [K22CA201229 ، P30CA015704] ، ومؤسسة سيدني كيميل [جائزة الباحث كيميل] ، جائزة اكتشاف سرطان الرئة (LCD-505536). نود أن نشكر الدكتورألا نالة (جامعة يوتا) لتوفير سرطان الثدي PDX الورم. كما نود أن نشكر العاملين في مركز فريد هاتشينسون لأبحاث السرطان في الطب المقارن على صيانة نموذج PDX وأعضاء مختبر غوجرال على المناقشات المفيدة. يتم دعم N.N.A من قبل زمالة JSPS للبحوث في الخارج ومنحة التدريب متعددة التخصصات من FHCRC. ويدعم A.J.B. من قبل عملية التمثيل الغذائي للكروموسوم ومنحة التدريب على السرطان من FHCRC.
الوصول مقيد. يرجى تسجيل الدخول أو بدء فترة تجريبية لعرض هذا المحتوى.
المواد
| الاسم | الشركة | رقم فهرسي | التعليقات |
|---|---|---|---|
| طبق | كورنينج | 430293 | |
| 24 بئر | طبق CytoOne | CC7682-7524 | |
| 4T1 | ATCC | CRL-2539 | |
| 6 مم لكمة خزعة | Integra Miltex | 33-36 | |
| 6 آبار لوحة | CytoOne | CC7682-7506 | |
| حمض الأسكوربيك | سيجما-ألدريتش | A8960-5g | ل TSC حل |
| التخزين البارد المتوسط Belzer UW (حل UW) | جسر إلى الحياة | 500 مل | |
| Corning Matrigel غشاء ميكس | فيشر العلمي | 356234 | |
| DMSO | Corning | MT-25950CQC | |
| شفرات قطع مزدوجة الحواف من الفولاذ المقاوم | TED PELLA | 121-6 | لتقطيع |
| دوكسوروبيسين (هيدروكلوريد) | كايمان كيماويكال | 15007 | |
| FBS | Gibco | 26140-079 | |
| ملقط طرف ناعم | ROBOZ | RS-4974 | |
| ملقط طرف ناعم | ROBOZ | RS-4976 | |
| Glucose | Sigma-Aldrich | G5767-500g | ل TSC متوسط |
| HBSS بدون الكالسيوم أو المغنيسيوم أو الفينول الأحمر | جيبكو | 14-175-103 | |
| HCI010 | الدكتورة ألانا ويلم ، جامعة يوتا | سرطان الثدي PDX | |
| HEPES Buffer Solution | Gibco | 15630080 ل TSC المتوسطة | |
| ITS + بريمكس | فيشر | 354352 | العلمي ل TSC متوسط |
| IVIS Spectrum | PerkinElmer | 124262 | |
| Leica VT1200S Vibratome | Leica | VT1200S | |
| L-Glutamine | Gibco | 25030164 | |
| لإدراج ثقافة الخلايا المليسيلية المتوسطة TSC ، 12 مم ، PTFE محب للماء ، 0.4 وميكرو ؛ م | ميليبور | PICM01250 | |
| إدراج ثقافة الخلايا المليسيلية ، 30 مم ، PTFE محب للماء ، 0.4 وميكرو ؛ m | Millipore | PICM03050 | |
| نيكوتيناميد | سيجما-ألدريتش | N0636-500g | للاصق الأنسجة |
| المتوسط TSC PELCO Pro CA44 | TED PELLA | 10033 | قلم الغراء |
| Strep | Gibco | 15140-122 | |
| Penicillin-Streptomycin | Fisher Scientific | 15140163 | ل TSC المتوسطة |
| RealTime-Glo MT اختبار جدوى الخلايا | Promega | G9711 | |
| ماوس مؤتلف EGF | BioLegend | 585608 | ل TSC متوسط |
| RPMI1640 | شفرات الحلاقة الصناعية Gibco | 11875135 | |
| أحادية الحافة | VWR | 55411-050 | لإزالة الأنسجة الملصقة |
| بيكربونات الصوديوم | Corning | 25-035-CI | ل TSC متوسطة |
| الصوديوم بيروفات | فيشر BW13115E العلمي | ل TSC متوسط | |
| Staurosporine | سانتا كروز التكنولوجيا الحيوية | sc-3510A | |
| Synergy H4 | BioTek | ||
| ملقط Tooothed | ROBOZ | RS-5155 | |
| ماصات نقل | فيشر Scientific | 13-711-7M | |
| ماصات نقل | عريض Samco Scientific | 235 | طرف ناعم |
| ويليام متوسط E ، بدون جلوتامين | ThermoFisher Scientific | 12551032 | لوسط TSC |
المراجع
- Klemm, F., Joyce, J. A. Microenvironmental regulation of therapeutic response in cancer. Trends in Cell Biology. 25 (4), 198-213 (2015).
- Horvath, P., et al. Screening out irrelevant cell-based models of disease. Nature Reviews: Drug Discovery. 15 (11), 751-769 (2016).
- Seruga, B., Ocana, A., Amir, E., Tannock, I. F. Failures in Phase III: Causes and Consequences. Clinical Cancer Research. 21 (20), 4552-4560 (2015).
- Humpel, C. Organotypic brain slice cultures: A review. Neuroscience. 305, 86-98 (2015).
- Nishida-Aoki, N., Gujral, T. S. Emerging approaches to study cell-cell interactions in tumor microenvironment. Oncotarget. 10 (7), 785-797 (2019).
- van der Kuip, H., et al. Short term culture of breast cancer tissues to study the activity of the anticancer drug taxol in an intact tumor environment. BMC Cancer. 6, 86(2006).
- Nagaraj, A. S., et al. Establishment and Analysis of Tumor Slice Explants As a Prerequisite for Diagnostic Testing. Journal of Visualized Experiments. (141), e58569(2018).
- Naipal, K. A., et al. Tumor slice culture system to assess drug response of primary breast cancer. BMC Cancer. 16, 78(2016).
- Jiang, X., et al. Long-lived pancreatic ductal adenocarcinoma slice cultures enable precise study of the immune microenvironment. Oncoimmunology. 6 (7), 1333210(2017).
- Sivakumar, R., et al. Organotypic tumor slice cultures provide a versatile platform for immuno-oncology and drug discovery. Oncoimmunology. 8 (12), 1670019(2019).
- Duellman, S. J., et al. Real-Time Cell Viability Assay and Use in Inhibitor Screening. Assay and Drug Development Technologies. 13 (8), 456-465 (2015).
- DeRose, Y. S., et al. Tumor grafts derived from women with breast cancer authentically reflect tumor pathology, growth, metastasis and disease outcomes. Nature Medicine. 17 (11), 1514-1520 (2011).
- Lazaro, C. A., et al. Establishment, characterization, and long-term maintenance of cultures of human fetal hepatocytes. Hepatology. 38 (5), 1095-1106 (2003).
- Chadwick, E. J., et al. A Brain Tumor/Organotypic Slice Co-culture System for Studying Tumor Microenvironment and Targeted Drug Therapies. Journal of Visualized Experiments. (105), e53304(2015).
- Parker, J. J., Lizarraga, M., Waziri, A., Foshay, K. M. A Human Glioblastoma Organotypic Slice Culture Model for Study of Tumor Cell Migration and Patient-specific Effects of Anti-Invasive Drugs. Journal of Visualized Experiments. (105), e53304(2017).
الوصول مقيد. يرجى تسجيل الدخول أو بدء فترة تجريبية لعرض هذا المحتوى.
إعادة الطباعة والأذونات
