هذا البروتوكول هو وسيلة فعالة وفعالة من حيث التكلفة وقوية لعزل microglia الأولية من العيش، والكبار، أنسجة الدماغ البشرية. يمكن أن تكون ميكروجليا الإنسان المعزولة أداة لدراسة العمليات الخلوية في التوازن والمرض.
يتطلب اشتراك JoVE لعرض هذا المحتوى. تسجيل الدخول أو ابدأ نسخة تجريبية مجانية
مقالة منهجية
الحصول على ميكروجليا الإنسان من أنسجة الدماغ البشري الكبار
في هذه المقالة
ملخص
الملخص
Microglia هي الخلايا المناعية الفطرية المقيمة في الجهاز العصبي المركزي (CNS). تلعب Microglia دورًا حاسمًا أثناء التطوير ، وفي الحفاظ على التوازن ، وأثناء الإصابة أو العدوى. وقد سلطت عدة مجموعات بحثية مستقلة الضوء على الدور المركزي الذي تلعبه المايكجليا في أمراض المناعة الذاتية، ومتلازمات المناعة الذاتية والسرطانات. قد يؤدي تنشيط الوميكروجليا في بعض الأمراض العصبية إلى المشاركة مباشرة في العمليات المسببة للأمراض. microglia الأولية هي أداة قوية لفهم الاستجابات المناعية في الدماغ، والتفاعلات الخلية الخلية والأنماط الظاهرية microglia dysregulated في المرض. ميكروجليا الأولية تقليد في خصائص ميكروجليال الجسم الحي أفضل من خطوط الخلايا الصغيرة الخالدة. تظهر ميكروجليا الإنسان الكبار خصائص متميزة بالمقارنة مع الجنين البشري والقوارض microglia. يوفر هذا البروتوكول طريقة فعالة لعزل ميكروجليا الأولية عن الدماغ البشري البالغ. دراسة هذه microglia يمكن أن توفر رؤى حاسمة في التفاعلات الخلية الخلية بين microglia وغيرها من السكان الخلوية المقيمين في الجهاز العصبي المركزي بما في ذلك، oligodendrocytes، الخلايا العصبية والخلايا الفلكية. بالإضافة إلى ذلك، قد تكون مثقفة microglia من أدمغة بشرية مختلفة لتوصيف الاستجابات المناعية الفريدة للطب الشخصي وعدد لا يحصى من التطبيقات العلاجية.
المقدمة
تم بناء الجهاز العصبي المركزي (CNS) من شبكة معقدة من الخلايا العصبية والخلايا الدبقية1. بين الخلايا الدبقية، وظيفة microglia كالخلايا المناعية الفطرية من الجهاز العصبي المركزي2،3. Microglia هي المسؤولة عن الحفاظ على التوازن في الجهاز العصبي المركزي صحية4. Microglia تلعب أيضا دورا هاما في النمو العصبي، عن طريق تقليم نقاط الاشتباك العصبي2. Microglia هي مركزية في علم الفيزيولوجيا المرضية من عدة أمراض عصبية بما في ذلك ولكن لا تقتصر على; مرض الزهايمر5, مرض باركنسون6, السكتة الدماغية
الوصول مقيد. يرجى تسجيل الدخول أو بدء فترة تجريبية لعرض هذا المحتوى.
البروتوكول
تم الحصول على جميع الأنسجة بعد موافقة أخلاقية من لجان أخلاقيات المعهد الهندي للتكنولوجيا جودبور ومعهد عموم الهند للعلوم الطبية (AIIMS) جودبور.
1.نسيج اكتساب وتجهيز (يوم 0)
- جمع الأنسجة في أنبوب 50 مل تحتوي على 10 مل من الجليد السائل النخاعي الاصطناعي البارد (aCSF) (2 mM CaCl2∙ 2H2O، 10 mM الجلوكوز، 3 M KCl، 26 mM NaHCO3،2.5 mM NaH2PO4،1 mM MgCl2∙ 6H2O، 202 mM سكروز)20. تأكد من أن الأنبوب يبقى على الجليد إذا كان النسيج يحتاج إلى نقلها إلى مكان مختلف.
ملاحظة: إعداد aCSF في الماء المقطر المقطّع. تصفية مع 0.22 μm مرشاح حقنة في غطاء م....
الوصول مقيد. يرجى تسجيل الدخول أو بدء فترة تجريبية لعرض هذا المحتوى.
النتائج
باستخدام البروتوكول المذكور أعلاه(الشكل 1) ، تمكنا من عزل ميكروجليا الإنسان الأولية من أنسجة الدماغ الحية التي تم استئصالها جراحيًا. كانت الخلايا المستزرعة ملطخة بالريسينوس كومونيس agglutinin-1 (RCA-1) للليكتين للميكروجليا (الأخضر) ومع البروتين الضبي الرجيلي الحمضي (GFAP) للسيّدات الفلكية (أحمر)(الشكل 2)كما هو موضح سابقا22،23،24.......
الوصول مقيد. يرجى تسجيل الدخول أو بدء فترة تجريبية لعرض هذا المحتوى.
المناقشة
Microglia ضمان التوازن في الدماغ العادي وتلعب أدوارا مركزية في علم الفيزيولوجيا المرضية من مختلف الأمراض العصبية4. Microglia هي مركزية لنماء الأعصاب وتشكيل نقاط الاشتباك العصبي2. وقد أثبتت الدراسات microglial محوري في فهم تطور وتطور الأمراض العصبية المتنوعة4. microglia القوارض هي النموذج السائد من اختيار للدراسات microglial الأولية، على الرغم من أن القوارض microglia تختلف عن microglia الإنسان الأولية في الجوانب الرئيسية13. قد .......
الوصول مقيد. يرجى تسجيل الدخول أو بدء فترة تجريبية لعرض هذا المحتوى.
الإفصاحات
ليس لدى المؤلفين ما يكشفون عنه.
شكر وتقدير
تم تأسيس مختبر SJ بمنح مؤسسية من IITJ ويتم تمويله من خلال منح من إدارة التكنولوجيا الحيوية (BT/PR12831/MED/30/1489/2015) ووزارة الإلكترونيات وتكنولوجيا المعلومات الحكومية في الهند (No.4(16)/2019-ITEA). تم الحصول على أقسام أنسجة الدماغ البشري من معهد عموم الهند للعلوم الطبية (AIIMS) جودبور بعد موافقة لجنة الأخلاقيات المؤسسية. نشكر مايانك راثور، عضو B.Tech Student في جمعية التصميم والفنون IIT Jodhpur، لدعم التصوير بالفيديو.
....الوصول مقيد. يرجى تسجيل الدخول أو بدء فترة تجريبية لعرض هذا المحتوى.
المواد
| الاسم | الشركة | رقم فهرسي | التعليقات |
|---|---|---|---|
| محلول مضاد حيوي مضاد للفطريات | هيميديا | A002 | |
| كلوريد الكالسيوم | سيجما | 223506 | |
| طرد مركزي (4 درجات ؛ ج) | سيجما 146532 | ||
| Abdos | P10203 | ||
| CO2< / sub> حاضنة | New Brunswik | Galaxy 170 S | |
| D-Glucose | Himedia | GRM077 | |
| DMEM medium مع الجلوتامين | Himedia | AL007S | |
| مصل الأبقار الجنيني | Himedia | RM9955 | |
| أنبوب فلاكون (50 مل) | Thermo Fsiher Scientific | 50CD1058 | |
| الفلوريسين Ricinus communis agglutinin-1 | Vector | FL-1081 | |
| مجهر الفلورسنت | Leica | DM2000LED | |
| Fluoroshield مع DAPI | Sigma | F6057 | |
| GFAP الأجسام المضادة | GA5 | 3670S | |
| شاكر حاضنة | نيو برونسويك Scientific | Innova 42 | |
| L929 خط الخلية | ATCC | NCTC استنساخ 929 [خلية L ، L-929 ، مشتق من السلالة L] (ATCC & nbsp ؛ CCL-1) | |
| تدفق الهواء الصفحي | Thermo Fsiher Scientific ؛ | 1386 | |
| كلوريد المغنيسيوم | هيميديا | MB040 | |
| فوسفات أحادي الصوديوم | ميرك | 567545 | |
| خليط المغذيات F-12 لحم الخنزير متوسط | هيميديا | Al106S | |
| طبق بتري | دوران المجموعة | 237554805 | |
| محلول ملحي مخزن | بالفوسفات هيميديا | ML023 | |
| كلوريد | البوتاسيومHimedia | MB043 | |
| ماصة مصلية | Labware | LW-SP1010 | |
| بيكربونات الصوديوم | Himedia | MB045 | |
| سكروز | Himedia | MB025 | |
| مرشح حقنة (0.2 مو ؛ قطر 25 مم) | Axiva SFPV25R | ||
| T-25 مناسبة لزراعة الخلايا الملتصقة. | Himedia | TCG4-20X10NO | |
| Trypsin-EDTA (0.25٪) | Gibco ؛ | هاتف: 25200-056 |
المراجع
- Allen, N. J., Barres, B. A. Glia - more than just brain glue. Nature. 457 (7230), 675-677 (2009).
- Lenz, K. M., Nelson, L. H. Microglia and Beyond: Innate Immune Cells As Regulators of Brain Development and Behavioral Function. Frontiers in Immunology. 9
الوصول مقيد. يرجى تسجيل الدخول أو بدء فترة تجريبية لعرض هذا المحتوى.
إعادة الطباعة والأذونات
