مقالة منهجية

التحليل الوظيفي للخلايا النخاعية المتسللة للورم عن طريق قياس التدفق الخلوي والنقل بالتبني

3.4K مشاهدات

⸱

DOI:

10.3791/61511

⸱

مارس 5, 2021

 ,  , 
1Department of Pathology and Molecular Medicine, McMaster University

* These authors contributed equally

في هذه المقالة

ملخص

يوفر هذا البروتوكول طرقا موثوقة لتفكك الورم الصلب وعزل الخلايا النخاعية في نماذج الأورام داخل الأدمة أو تحت الجلد في الفئران. يسمح قياس التدفق الخلوي بالتوصيف الظاهري للمجموعات النخاعية غير المتجانسة داخل البيئة المكروية للورم وسيظهر الفرز وظائفها في سياق النقل بالتبني.

الملخص

تمثل حجرة الخلايا النخاعية المتسللة للورم مجموعة غير متجانسة من الخلايا المثبطة للمناعة على نطاق واسع والتي استغلها الورم لدعم نموه. يؤدي تراكمها في الورم والأنسجة اللمفاوية الثانوية إلى قمع الاستجابات المناعية المضادة للأورام ، وبالتالي فهي هدف للتدخل العلاجي. كما هو معروف أن بيئة السيتوكين المحلية يمكن أن تملي البرمجة الوظيفية للخلايا النخاعية المتسللة للورم ، فقد تم وضع استراتيجيات لمعالجة البيئة المكروية للورم (TME) للتعبير عن مشهد السيتوكين الأكثر ملاءمة لنشاط الخلايا النخاعية المضادة للأورام. لتقييم التغيرات التي يسببها العلاج في الخلايا النخاعية المتسللة للورم ، ستحدد هذه الورقة إجراء فصل أنسجة الورم داخل الأدمة / تحت الجلد من الفئران الحاملة للورم الصلبة استعدادا للتعافي من الكريات البيض. سيتم توفير استراتيجيات لتحليل قياس التدفق الخلوي لتمكين تحديد مجموعات النخاع غير المتجانسة داخل الكريات البيض المعزولة وتوصيف الأنماط الظاهرية النخاعية الفريدة. أخيرا ، ستصف هذه الورقة وسيلة لتنقية الخلايا النخاعية القابلة للحياة للمقايسات الوظيفية وتحديد قيمتها العلاجية في سياق النقل بالتبني.

المقدمة

تتكون البيئة المكروية للورم (TME) من خلايا ورمية سريعة التكاثر وحجرة الخلايا اللحمية غير المتجانسة المحيطة. نظرا لأن الأورام النامية غالبا ما تكون ضعيفة الأوعية الدموية ، فإن TME هو موقع محيطي يتميز بشكل فريد بنقص الأكسجة والحرمان من المغذيات والحماض1. للبقاء على قيد الحياة في هذا المشهد ، تؤدي استجابات إجهاد الورم وإعادة البرمجة الأيضية إلى إفراز العوامل القابلة للذوبان التي تعزز إعادة تشكيل الأنسجة وتكوين الأوعية الدموية بالإضافة إلى التجنيد الانتقائي للخلايا المناعية2. نظرا لأن الخلايا النخاعية هي واحدة من أكثر أنواع الخلايا المكونة للدم وفرة في TME ، فهناك اهتمام متزايد بفحص دور الخلايا النخاعية المتسللة للورم في TME.

الخلايا النخاعية هي مجموعة غير متجانسة وبلاستيكية من الخلايا المناعية الفطرية بما في ذلك الخلايا الوحيدة والضامة والخلايا المتغصنة والخلايا الحبيبية. على الرغم من أن لها أدوارا حاسمة في توازن الأنسجة وتنظيم الاستجابة المناعية التكيفية ، إلا أن وظيفتها يمكن أن تكون مستقطبة اعتمادا على تكوين إشارات التنشيط داخل البيئة المكروية المحلية3. تستفيد الأورام من خصائص الخلايا النخاعية من خلال إفراز العوامل القابلة للذوبان داخل TME. يمكن لهذه الإشارات البديلة أن تحول تكون النخاع نحو التمايز غير الناضج وتحرف وظيفة الخلايا النخاعية الموجودة في الورم3. في الواقع ، غالبا ما تعزز الخلايا النخاعية داخل TME تطور السرطان ويمكن أن تثبط الاستجابات المناعية المضادة للأورام ، مما يؤدي إلى آثار ضارة على علاج السرطان.

على الرغم من أن الاستراتيجيات العلاجية التي تعزز استنفاد الخلايا النخاعية المثبطة للمناعة قد ثبت أنها تؤخر نموالورم 4 ، إلا أن الافتقار إلى الخصوصية المستهدفة يخاطر بإزالة الخلايا النخاعية المحفزة للمناعة ، والتي على النقيض من ذلك ، تساعد في حل السرطان. يمكن أن يكون لهذه الخلايا النخاعية الالتهابية تأثيرات مضادة للأورام عميقة بما في ذلك القتل المباشر للخلايا السرطانية وتنشيط الخلايا التائية CD8 + السامةللخلايا 5. بدلا من ذلك ، أظهرت استراتيجيات تطبيع تكوين ووظيفة الخلايا النخاعية في TME نجاحا علاجيا6. ومع ذلك ، فإن الآليات البيولوجية الكامنة وراء إعادة تثقيفها نحو النمط الظاهري المضاد للأورام لم يتم فهمها بشكل كامل بعد. في النهاية ، يعد التوصيف الشامل للخلايا النخاعية السرطانية ضروريا لمزيد من التحسين في علاج السرطان.

لسوء الحظ ، فإن التفكيك القابل للتكرار للأورام لعزل الخلايا النخاعية يمثل تحديا. الخلايا النخاعية المشتقة من الورم حساسة للتلاعب خارج الجسم الحي مقارنة بالمجموعات الفرعية الأخرى من الكريات البيض ، ويمكن أن تؤدي عدوانية معالجة الورم إلى انقسام الحاتمة الأنزيمية وتقليل قابلية الخلايا المستردةللحياة 7. الغرض من هذه الطريقة هو توفير وسيلة موثوقة لتفكك الورم للحفاظ على سلامة علامة السطح للتحليل والحيوية الخلوية للدراسة الوظيفية. بالمقارنة مع بروتوكولات عزل الكريات البيض المتسللة للورم (TIL) التي تفضل الخلطات الأنزيمية الأكثر قسوة لتعزيز الإطلاق القابل للتكرار لمجموعات فرعية خلوية مختلفة ، فإن هذه الطريقة تفضل الهضم الأنزيمي الأكثر تحفظا لزيادة استعادة الخلايا النخاعية إلى أقصى حد. يتم أيضا توفير استراتيجيات بوابات تدفق متعددة الألوان عالية المستوى لتحديد مجموعات فرعية من الخلايا النخاعية لورم الفئران لمزيد من التوصيف و / أو الفرز.

الوصول مقيد. يرجى تسجيل الدخول أو بدء فترة تجريبية لعرض هذا المحتوى.

البروتوكول

ملاحظة: امتثلت جميع الدراسات التي أجريت على مع إرشادات المجلس الكندي لرعاية وتمت الموافقة عليها من قبل مجلس أخلاقيات أبحاث بجامعة ماكماستر.

1. حصاد الورم والتفكك

  1. تلقيح الفئران C57BL / 6 البالغة من العمر 6-8 أسابيع داخل الجلد / تحت الجلد مع 2 × 105 خلايا الورم الميلانيني B16 كما هو موضح من قبل Nguyen et al.8 السماح للأورام بالنمو لمدة 7 أيام قبل الحصاد.
  2. قتل الفأر عن طريق خلع عنق الرحم مع التأكد من عدم تعطيل الورم عند القيام بذلك. رش الماوس ب 70٪ من الإيثانول قبل الحصاد.
  3. باستخدام مشرط ومقص ، قم بإزالة الورم داخل الأدمة / تحت الجلد جراحيا من الأنسجة المحيطة (بما في ذلك الغدد الليمفاوية المتصلقة بتصريف الورم) ، ووضع الأورام في أنبوب ميكرو فوج موزن مسبقا. ابق على الجليد.
    ملاحظة: قم بإجراء حصاد الورم في خزانة السلامة البيولوجية للاستخدام الحيواني. استخدم أنبوبا مخروطيا سعة 15 مل للأورام الكبيرة.
  4. قم بوزن الأورام ، وأضف 500 ميكرولتر من وسط RPMI-1640 مع مصل بقري الجنين بنسبة 10٪ (FBS) إلى كل أنبوب ، باستخدام المقص لتقطيع الأورام إلى قطع صغيرة داخل الأنبوب أو في صفيحة من 6 آبار.
    ملاحظة: يجب أن تكون قطع الورم صغيرة بما يكفي لخلطها بواسطة ماصة كهربائية بمجرد إضافة وسط الهضم.
  5. تحضير مزيج التفكك عن طريق إذابة الكولاجيناز من النوع الرابع عند 0.5 مجم / مل و DNase عند 0.2 مجم / مل في وسط RPMI-1640 مع 10٪ FBS و 5 ملي كلوريد الكالسيوم.
    ملاحظة: يجب تحضير مزيج التفكك طازجا لزيادة نشاط الكولاجيناز.
  6. انقل معلق الورم المفروم إلى أنبوب مخروطي سعة 15 مل ، وأضف 10 مل من مزيج التفكك لكل 0.25 مجم من الورم. ضع الأنبوب في شاكر مداري يتم التحكم في درجة حرارته لمدة 30 دقيقة عند 37 درجة مئوية مع تحريك 200 دورة في الدقيقة. قم بتحييد نشاط الكولاجيناز عن طريق إضافة مجلدين من وسط RPMI-1640 البارد مع 10٪ FBS و 2 ملي مولار من حمض رباعي الأسيتيك إيثيلين ديامين (EDTA) ، ثم ضعه في الثلاجة لمدة 10 دقائق عند 4 درجات مئوية.
  7. قم بتدوير التعليق لفترة وجيزة وقم بتقطيعه إلى مصفاة 40 ميكرومتر على أنبوب مخروطي سعة 50 مل. استخدم مكبس حقنة ووسائط معادلة لتفكيك أنسجة الورم المتبقية وغسلها من خلال المصفاة. قم بالطرد المركزي للتعليق لمدة 5 دقائق (500 × جم ، 4 درجات مئوية) ، وتخلص من المادة الطافية ، وأعد تعليق الحبيبات في محلول ملحي مخزن بالفوسفات (PBS) مع 2٪ FBS و 1 ملي مولار EDTA.

2. التخصيب TIL وتلوين التدفق الخلوي (FACS)

  1. لإثراء TILs لتوصيف الخلايا النخاعية ، استخدم مجموعة فصل الخلايا المغناطيسية المصممة للاختيار الإيجابي للبيوتين مع الأجسام المضادة CD45.2 البيوتينيل وفقا لتعليمات الشركة المصنعة (انظر جدول المواد).
  2. أعد تعليق الخلايا في 200 ميكرولتر من المخزن المؤقت FACS (PBS مع 0.5٪ وزن / حجم ألبومين مصل البقر (BSA)) ، وانقلها إلى صفيحة قاع U مكونة من 96 بئرا.
    ملاحظة: لا تتجاوز تركيز التلوين 1 × 108 خلايا / مل. اضبط الحجم ، وقسم العينات إلى آبار متعددة للتعويض عن أعداد الخلايا العالية.
  3. قم بالطرد المركزي للوحة لمدة 5 دقائق (500 × جم ، 4 درجات مئوية) ، وتخلص من المادة الطافية. أضف 50 ميكرولتر من محلول كتلة Fc (تخفيف 1: 200 من الفئران المنقى المضاد للفأر CD16 / CD32 [انظر جدول المواد) في المخزن المؤقت FACS ، التركيز النهائي 2.5 ميكروغرام / مل) ، وأعد تعليق الخلايا عن طريق سحب العينات. احتضن لمدة 10 دقائق عند 4 درجات مئوية.
  4. أضف 50 ميكرولتر من المخزن المؤقت FACS الذي يحتوي على تركيز 2x من الجسم المضاد الملطخ السطحي (تخفيف 1:50 من CD45.2 ، NK1.1 ، CD11c ، F4 / 80 ، CD8a ، Ly6C ، CD11b ، CD4 ، Ly6G) وبقعة قابلة للبقاء قابلة للإصلاح (FVS ، تخفيف 1: 500) ، واخلط الخلايا عن طريق سحب العينات. احتضن لمدة 20 دقيقة عند 4 درجات مئوية.
    ملاحظة: قم بتغطية اللوحة بورق الألمنيوم لتقليل التعرض للضوء. يجب معايرة الأجسام المضادة قبل التجربة لتحديد التخفيف الأمثل تجريبيا.
  5. اغسل الخلايا مرتين عن طريق إضافة 200 ميكرولتر من المخزن المؤقت FACS إلى كل بئر ، والطرد المركزي للتعليق (5 دقائق ، 500 × جم ، 4 درجات مئوية) ، والتخلص من المادة الطافية.
  6. أضف 100 ميكرولتر من محلول التثبيت/النفاذية (انظر جدول المواد) إلى كل بئر، واخلط الخلايا عن طريق سحب العينات، واحتضنه لمدة 20 دقيقة عند 4 درجات مئوية.
  7. أضف 100 ميكرولتر من 1x المخزن المؤقت للنفاذية (انظر جدول المواد) إلى كل بئر ، وقم بالطرد المركزي للوحة لمدة 5 دقائق (500 × جم ، 4 درجات مئوية) ، وتخلص من المادة الطافية.
  8. اغسل الخلايا عن طريق إضافة 200 ميكرولتر من 1x المخزن المؤقت للنفاذية إلى كل بئر ، والطرد المركزي للتعليق (5 دقائق ، 500 × جم ، 4 درجات مئوية) ، والتخلص من المادة الطافية.
    ملاحظة: يمكن إيقاف التجربة مؤقتا طوال الليل بعد إعادة تعليق الخلايا في المخزن المؤقت للنفاذية. قم بتخزين العينة في درجة حرارة 4 درجات مئوية ومحمية من الضوء. استأنف بعد خلط الخلايا لفترة وجيزة قبل الطرد المركزي.
  9. أضف 100 ميكرولتر من المخزن المؤقت للنفاذية الذي يحتوي على تركيز 1x من الجسم المضاد للتلوين داخل الخلايا (1: 100 تخفيف من سينسيز أكسيد النيتريك 2 (NOS2) ، أرجيناز 1 (Arg1)) ، واخلط الخلايا عن طريق سحب العينات. احتضن لمدة 20 دقيقة عند 4 درجات مئوية.
    ملاحظة: قم بتغطية اللوحة بورق الألمنيوم لتقليل التعرض للضوء. يجب معايرة الأجسام المضادة قبل التجربة لتحديد التخفيف الأمثل تجريبيا.
  10. أضف 100 ميكرولتر من 1x المخزن المؤقت للنفاذية إلى كل بئر ، وقم بالطرد المركزي للوحة لمدة 5 دقائق (500 × جم ، 4 درجات مئوية) ، وتخلص من المادة الطافية.
  11. اغسل الخلايا بإضافة 200 ميكرولتر من 1x المخزن المؤقت للنفاذية إلى كل بئر ، والطرد المركزي للتعليق (5 دقائق ، 500 × جم ، 4 درجات مئوية) ، والتخلص من المادة الطافية.
  12. أعد تعليق الخلايا في 300 ميكرولتر من المخزن المؤقت FACS. قم بتصفية العينة من خلال أنبوب بوليسترين دائري القاع سعة 5 مل مع غطاء مصفاة 40 ميكرومتر قبل إجراء تحليل قياس التدفق الخلوي.

3. فرز الخلايا النخاعية الورمية للدراسات الوظيفية

  1. بعد تحديد مجموعات الخلايا النخاعية المطلوبة عن طريق تحليل قياس التدفق الخلوي ، قم بتخصيب الخلايا النخاعية السائبة مسبقا للفرز باستخدام مجموعة فصل الخلايا المغناطيسية المصممة للاختيار الإيجابي CD11b أو CD11c وفقا لتعليمات الشركة المصنعة (انظر جدول المواد).
  2. باستخدام الأجسام المضادة الملطخة السطحية الخاصة بالمجموعات الفرعية للخلايا النخاعية المرغوبة (تخفيف 1: 100 من CD11b و Ly6C و Ly6G) ، قم بتلطيخ الخلايا المخصبة مسبقا كما هو موضح في الخطوات 2.2-2.5.
    ملاحظة: قم بتضمين بقعة قابلة للبقاء قابلة للإصلاح لضمان فرز الخلايا النخاعية الحية. لا تتجاوز تركيز التلوين 1 × 108 خلايا / مل. اضبط الحجم ، وقسم العينات إلى آبار متعددة للتعويض عن أعداد الخلايا العالية.
  3. أعد تعليق الخلايا في مخزن مؤقت للفرز على البارد (PBS مع 1٪ وزن / حجم BSA ، 25 ملي مولار 4- (2-هيدروكسي إيثيل) -1-بيبرازين إيثان سلفونيك حمض (HEPES) ، و 1 ملي مولار EDTA). قم بتصفية العينة من خلال أنبوب بولي بروبيلين دائري القاع سعة 5 مل بغطاء مصفاة 40 ميكرومتر. احتفظ بالخلايا على الجليد ، وقم بتغطية الأنبوب بورق الألمنيوم.
    ملاحظة: اضبط تركيز الخلايا/الحجم وفقا لمواصفات الجهاز المطلوبة للفرز.
  4. قم بإعداد أنبوب جمع العينات مع وسيط التقاط (5 مل أنبوب بولي بروبلين دائري القاع يحتوي على PBS مع 50٪ FBS).
    ملاحظة: تلتقط الأنابيب المعطفية بسعة 5 مل متوسطا طوال الليل قبل الفرز. تخلص من كل وسيط الالتقاط باستثناء 1-2 مل في اليوم التالي قبل تشغيل العينة.
  5. قم بتعديل إعدادات أداة الفرز لتقليل ضغط العينة ومنع الاضطرابات في تكوين القطرات. جهز طرف الفوهة 130 ميكرومتر ، واستخدم إعداد 10 رطل لكل بوصة مربعة. قم بتشغيل العينة بمعدل تدفق منخفض مع تحريك دوري للعينة عند 100 دورة في الدقيقة ، مع التأكد من أن ترسب القطرات في وسط الأنبوب. بعد الفرز ، احتفظ بالعينة على الجليد.
  6. احتضان العينة لمدة 10 دقائق عند 4 درجات مئوية. قم بالطرد المركزي للأنبوب لمدة 5 دقائق (500 × جم ، 4 درجات مئوية) ، وتخلص من المادة الطافية ، وأعد تعليق الحبيبات في الوسط المطلوب للمقايسات الوظيفية أو النقل بالتبني.

4. النقل بالتبني للخلايا النخاعية السرطانية المنقاة

  1. تلقيح الفئران C57BL / 6 البالغة من العمر 6-8 أسابيع داخل الجلد مع 1 × 106 خلايا ورم ميلانيني B16 معلقة في 30 ميكرولتر من PBS.
    ملاحظة: قم بتلقيح الفئران مسبقا بحيث لا يتجاوز نمو الورم 100 مم3 بحلول وقت النقل بالتبني.
  2. أعد تعليق الخلايا النخاعية السرطانية المصنفة في PBS مع 25 ملي مولار HEPES و 1 ملي EDTA بتركيز 2 × 106 خلايا / مل. قم بتصفية العينة من خلال أنبوب بوليسترين دائري القاع سعة 5 مل بغطاء مصفاة 40 ميكرومتر. ابق على الجليد.
  3. تحفيز الفئران والحفاظ عليها تحت التخدير بنسبة 3٪ أيزوفلوران. ضع مرهم العين لمنع جفاف العين / إصابتها.
  4. قم بتحميل حقنة 31 جم مع 50 ميكرولتر من تعليق الخلية. قم بإخراج فقاعات الهواء عن طريق النقر برفق على المحقنة. نظف موقع الحقن باستخدام مسحة كحولية.
  5. باستخدام ملقط معقم ، ارفع الجلد عند قاعدة الورم. أدخل الإبرة في الفراغ تحت الجلد بزاوية تصاعدية طفيفة لدخول الورم من أسفل الجلد. استخدم الملقط لقرص الجلد المحيط بالإبرة ، وقم بتوزيع حجم المحقنة ببطء. استمر في الضغط على الجلد بالملقط أثناء إزالة الإبرة ببطء ، واستخدم قطعة قطن لتنظيف التسرب المحتمل.
    ملاحظة: تابع أي علاجات علاجية إضافية إذا رغبت في ذلك.
  6. اسمح للفئران بالتعافي من التخدير.

الوصول مقيد. يرجى تسجيل الدخول أو بدء فترة تجريبية لعرض هذا المحتوى.

النتائج

توضح النتائج أن هذه الطريقة تنتج إنتاجية عالية من الخلايا النخاعية من أورام الفئران الصلبة. يسهل الحفاظ على سلامة المستقبلات وقابلية الخلوية التحليل الوظيفي الموثوق به للمجموعات الفرعية النخاعية المرغوبة. سمحت هذه التحسينات لعزل الخلايا النخاعية بتمييز الوظيفة المتغيرة للخلايا النخاعية داخل الورم عند تطبيع TME باستخدام مثبط هيستون ديستيلاز من الفئة الأولى (HDACi) ، MS-275 ، أثناء العلاج بالخلايا التائية بالتبني. عادة لا تتخذ بروتوكولات عزل TIL الخطوات لتعظيم إنتاجية الخلايا النخاعية9. نتيجة لذلك ،...

الوصول مقيد. يرجى تسجيل الدخول أو بدء فترة تجريبية لعرض هذا المحتوى.

المناقشة

على الرغم من وجود الخلايا النخاعية المتسللة للورم في حالات تنشيط وتمايز متفاوتة داخل الورم ، فقد تم تحديد العديد من المجموعات الفرعية بما في ذلك DCs المرتبطة بالورم (TADCs) ، والعدلات المرتبطة بالورم (TANs) ، والخلايا المثبطة المشتقة من النخاع (MDSCs) ، والضامة المرتبطة بالورم (TAMs) 12. لسوء الحظ ، فإن التعبير المتداخل لعلامات سطح الخلية المستخدمة لتحديد هذه المجموعات الفرعية للخلايا النخاعية يجعل من الصعب حاليا التمييز بين الخلايا النخاعية السرطانية الظاهريا وال...

الوصول مقيد. يرجى تسجيل الدخول أو بدء فترة تجريبية لعرض هذا المحتوى.

الإفصاحات

لم يتم الإعلان عن أي تضارب في المصالح.

شكر وتقدير

تم دعم هذا العمل من قبل معهد أونتاريو لأبحاث السرطان من خلال التمويل المقدم من حكومة أونتاريو ، وكذلك المعاهد الكندية للبحوث الصحية (FRN 123516 و FRN 152954) ، وجمعية السرطان الكندية (منحة 705143) ، ومعهد تيري فوكس للأبحاث (TFRI-1073).

الوصول مقيد. يرجى تسجيل الدخول أو بدء فترة تجريبية لعرض هذا المحتوى.

المواد

قائمة المواد المستخدمة في هذه المقالة
الاسمالشركةرقم فهرسيالتعليقات
أليكسا فلور 700 ماوس مضاد للفأر CD45.2BD Biosciences5606931:100
APC-Cy7 ماوس مضاد للفأر NK-1.1BD Biosciences5606181:100
ماوس البيوتين مضاد للفأر CD45.2BD Biosciences553771
BV421 الهامستر المضاد للفأر CD11cBD Biosciences5627821:100
BV650 الفئران المضادة للفأر F4 / 80BD العلوم البيولوجية7432821:100
BV711 الفئران المضادة للفأر CD8aBD Biosciences5630461:100
كولاجيناز ، النوع الرابع ، مسحوقجيبكو17104019
DNase IRoche10104159001
EasySep Mouse CD11b مجموعة الاختيار الإيجابي IIتقنيات الخلايا الجذعية18970
EasySep Mouse CD11c مجموعة الاختيار الإيجابي IIتقنيات الخلايا الجذعية18780
EasySep Release Mouse Biotin Positive SelectionKit تقنيات الخلايا الجذعية17655
FITC Rat Anti-Mouse Ly-6CBD Biosciences5531041:100
بقعة قابلة للإصلاح 510BD Biosciences5644061: 1000
مجموعة حلول التثبيت / النفاذية (BD Cytofix / Cytoperm)Biosciences554714
PE Rat Anti-CD11bBD Biosciences5573971:100
PE-Cy7 Rat Anti-Mouse CD4BD Biosciences5527751:100
PerCP-Cy5.5 Rat Anti-Mouse Ly-6GBD Biosciences5606021:100
بيرم / غسيل (BD Perm / غسيل)BD Biosciences554723
الفئران المنقاة المضادة للفأر CD16 / CD32 (كتلة الماوس BD Fc)BD Biosciences553141
iNOS الأجسام المضادة أحادية النسيلة (CXNFT) ، APCThermo Fisher17-5920-821: 100
Human/Mouse Arginase  1 / ARG1 الأجسام المضادة المترافقة بالفلورسينR & أنظمة DIC5868F1:100
BD

المراجع

  1. Paardekooper, L. M., Vos, W., vanden Bogaart, G. Oxygen in the tumor microenvironment: effects on dendritic cell function. Oncotarget. 10 (8), 883-896 (2019).
  2. Schouppe, E., De Baetselier, P., Van Ginderachter, J. A., Sarukhan, A. Instruction of myeloid cells by the tumor microenvironment: Open questions on the dynamics and plasticity of different tumor-associated myeloid cell populations. Oncoimmunology. 1 (7), 1135-1145 (2012).
  3. Jahchan, N. S., et al. Tuning the tumor myeloid microenvironment to fight cancer. Frontiers in Immunology. 10, 1611(2019).
  4. Srivastava, M. K., et al. Myeloid suppressor cell depletion augments antitumor activity in lung cancer. PLoS One. 7 (7), 40677(2012).
  5. Awad, R. M., De Vlaeminck, Y., Maebe, J., Goyvaerts, C., Breckpot, K. Turn back the TIMe: targeting tumor infiltrating myeloid cells to revert cancer progression. Frontiers in Immunology. 9, 1977(2018).
  6. Strauss, L., et al. Targeted deletion of PD-1 in myeloid cells induces antitumor immunity. Science Immunology. 5 (43), 1863(2020).
  7. Cassetta, L., et al. Deciphering myeloid-derived suppressor cells: isolation and markers in humans, mice and non-human primates. Cancer Immunology, Immunotherapy. 68 (4), 687-697 (2019).
  8. Nguyen, A., et al. HDACi delivery reprograms tumor-infiltrating myeloid cells to eliminate antigen-loss variants. Cell Reports. 24 (3), 642-654 (2018).
  9. Newton, J. M., Hanoteau, A., Sikora, A. G. Enrichment and characterization of the tumor immune and non-immune microenvironments in established subcutaneous murine tumors. Journal of Visual Experiments: JoVE. (136), e57685(2018).
  10. Engfeldt, P., Arner, P., Ostman, J. Nature of the inhibitory effect of collagenase on phosphodiesterase activity. Journal of Lipid Research. 26 (8), 977-981 (1985).
  11. Quah, B. J., Parish, C. R. The use of carboxyfluorescein diacetate succinimidyl ester (CFSE) to monitor lymphocyte proliferation. Journal of Visual Experiments: JoVE. (44), e2259(2010).
  12. Schupp, J., et al. Targeting myeloid cells in the tumor sustaining microenvironment. Cellular Immunology. 343, 103713(2019).
  13. Gabrilovich, D. I., Ostrand-Rosenberg, S., Bronte, V. Coordinated regulation of myeloid cells by tumours. Nature Reviews Immunology. 12 (4), 253-268 (2012).
  14. Seglen, P. O. Preparation of isolated rat liver cells. Methods in Cell Biology. 13, 29-83 (1976).
  15. Roussel, M., et al. Mass cytometry deep phenotyping of human mononuclear phagocytes and myeloid-derived suppressor cells from human blood and bone marrow. Journal of Leukocyte Biology. 102 (2), 437-447 (2017).

الوصول مقيد. يرجى تسجيل الدخول أو بدء فترة تجريبية لعرض هذا المحتوى.

إعادة الطباعة والأذونات

طلب إذن لإعادة استخدام النص أو الأشكال في مقالة JoVE هذه

طلب إذن

الوسوم

الفيديو قريباً

مقالات ذات صلة