الوصول إلى السمية الخلوية واستجابة الخلايا للمواد الحيوية

Anabela  Baptista Paula; Mafalda Laranjo; Ana Sofia Coelho; Ana Margarida Abrantes; Ana  Cristina Gonçalves; Ana  Bela Sarmento-Ribeiro; Manuel  Marques Ferreira; Maria  Filomena Botelho; Carlos  Miguel Marto; Eunice Carrilho

doi:10.3791/61512

يتطلب اشتراك JoVE لعرض هذا المحتوى. تسجيل الدخول أو ابدأ نسخة تجريبية مجانية

مقالة منهجية

الوصول إلى السمية الخلوية واستجابة الخلايا للمواد الحيوية

4.6K مشاهدة

⸱

DOI:

10.3791/61512

⸱

يوليو 8, 2021

Anabela Baptista Paula^*¹^,²^,³^,⁴ , Mafalda Laranjo^*²^,³^,⁴^,⁵ , Ana Sofia Coelho¹^,²^,³^,⁴ , Ana Margarida Abrantes²^,³^,⁴^,⁵ , Ana Cristina Gonçalves²^,³^,⁴^,⁶ , Ana Bela Sarmento-Ribeiro²^,³^,⁴^,⁶ , Manuel Marques Ferreira²^,³^,⁴^,⁷ , Maria Filomena Botelho²^,³^,⁴^,⁵ , Carlos Miguel Marto¹^,²^,³^,⁴^,⁸ , Eunice Carrilho¹^,²^,³^,⁴

¹Institute of Integrated Clinical Practice, Faculty of Medicine, University of Coimbra, Coimbra, Portugal, ²Coimbra Institute for Clinical and Biomedical Research (iCBR) area of Environment Genetics and Oncobiology (CIMAGO), University of Coimbra, Coimbra, Portugal, ³Center for Innovative Biomedicine and Biotechnology (CIBB), University of Coimbra, Coimbra, Portugal, ⁴Clinical Academic Center of Coimbra, CACC, Portugal, ⁵Institute of Biophysics, Faculty of Medicine, University of Coimbra, Coimbra, Portugal, ⁶Laboratory of Oncobiology and Hematology, Faculty of Medicine, University of Coimbra, Coimbra, Portugal, ⁷Institute of Endodontics, Faculty of Medicine, University of Coimbra, Coimbra, Portugal, ⁸Institute of Experimental Pathology, Faculty of Medicine, University of Coimbra, Coimbra, Portugal

^* These authors contributed equally

في هذه المقالة

ملخص

تهدف هذه المنهجية إلى تقييم السمية الخلوية للمواد الحيوية من خلال تحضير المستخلصات القابلة للذوبان ، باستخدام مقايسات الجدوى وتحليل النمط الظاهري ، بما في ذلك قياس التدفق الخلوي ، RT-PCR ، الكيمياء الخلوية المناعية ، وغيرها من تقنيات البيولوجيا الخلوية والجزيئية.

الملخص

تتلامس المواد الحيوية بشكل مباشر أو غير مباشر مع الأنسجة البشرية ، مما يجعل من المهم تقييم سميتها الخلوية. يمكن إجراء هذا التقييم بعدة طرق ، ولكن يوجد تباين كبير بين الأساليب المستخدمة ، مما يعرض للخطر قابلية التكرار والمقارنة بين النتائج التي تم الحصول عليها. في هذه الورقة ، نقترح بروتوكولا لتقييم السمية الخلوية للمواد الحيوية باستخدام المستخلصات القابلة للذوبان ، والتي نستخدمها للمواد الحيوية للأسنان. يتم تفصيل تحضير المستخلصات ، من إنتاج الكريات إلى استخراجها في وسط الاستزراع. يعتمد تقييم السمية الخلوية للمواد الحيوية على النشاط الأيضي باستخدام مقايسة MTT ، وصلاحية الخلية باستخدام مقايسة Sulphorhodamine B (SBR) ، وملف موت الخلية عن طريق قياس التدفق الخلوي ، ومورفولوجيا الخلية باستخدام May-Grünwald Giemsa. بالإضافة إلى تقييم السمية الخلوية ، يتم وصف بروتوكول لتقييم وظيفة الخلية بناء على التعبير عن علامات محددة تم تقييمها بواسطة الكيمياء المناعية و PCR. يوفر هذا البروتوكول دليلا شاملا للسمية الخلوية للمواد الحيوية وتقييم التأثيرات الخلوية ، باستخدام منهجية المستخلصات ، بطريقة قابلة للتكرار وقوية.

المقدمة

يمكن تعريف التوافق الحيوي على أنه قدرة المادة على دمج الأنسجة وإحداث استجابة علاجية مواتية ، خالية من الأضرار المحلية والجهازية¹،²^،³. يعد تقييم التوافق الحيوي أمرا بالغ الأهمية لتطوير أي مادة مخصصة للاستخدام الطبي. لذلك ، يوفر هذا البروتوكول نهجا منظما وشاملا لكل باحث يهدف إلى تطوير مواد حيوية جديدة أو دراسة تطبيقات جديدة للمواد الحيوية الموجودة.

تستخدم اختبارات السمية الخلوية في المختبر على نطاق واسع كمرحلة أولى لتقييم التوافق الحيوي ، باستخدام مزارع الخلايا الأولية أو خطوط الخلايا. تشكل النتائج مؤشرا أوليا للتطبيق السريري المحتمل. إلى جانب كونه ح....