يتطلب اشتراك JoVE لعرض هذا المحتوى. تسجيل الدخول أو ابدأ نسخة تجريبية مجانية

مقالة منهجية

عزل النواة من أورام الدماغ المجمدة الطازجة لنواة واحدة RNA-seq و ATAC-seq

12.8K مشاهدة

⸱

DOI:

10.3791/61542

⸱

أغسطس 25, 2020

 ,  ,  ,  ,  ,  , 
1Neurology Clinic and National Center for Tumor Diseases, University Hospital Heidelberg, 2Bioinformatics and Omics Data Analytics, German Cancer Research Center (DKFZ), 3Clinical Cooperation Unit Neurooncology, German Cancer Research Center (DKFZ), 4Division of Experimental Neurosurgery, Department of Neurosurgery, University of Heidelberg, INF 400, Heidelberg, Germany

في هذه المقالة

ملخص

التغايرية داخل الورم هي سمة متأصلة في الأورام، بما في ذلك الأورام الدبقية. لقد طورنا بروتوكولا بسيطا وفعالا يستخدم مزيجا من المخازن المؤقتة والطرد المركزي المتدرجة لعزل نواة واحدة عن أنسجة الورم الدبقي المجمدة الطازجة لدراسات تسلسل نواة واحدة من الحمض النووي الريبي و ATAC.

الملخص

تظهر الأورام الدبقية المنتشرة للبالغين عدم تجانس بين الورم وداخله. حتى وقت قريب، ركزت غالبية جهود التنميط الجزيئي على نطاق واسع على النهج السائبة التي أدت إلى التصنيف الجزيئي لأورام الدماغ. على مدى السنوات الخمس الماضية، أبرزت نهج تسلسل الخلايا المفردة العديد من السمات الهامة للأورام الدبقية. وقد استخدمت غالبية هذه الدراسات عينات جديدة من ورم الدماغ لعزل الخلايا المفردة باستخدام قياس التدفق الخلوي أو طرق الفصل القائمة على الأجسام المضادة. وللمضي قدما، فإن استخدام عينات الأنسجة المجمدة الطازجة من البنوك الحيوية سيوفر مرونة أكبر لتطبيقات الخلايا الواحدة. وعلاوة على ذلك، مع تقدم حقل الخلية الواحدة، سيكون التحدي التالي هو توليد بيانات متعددة الوميست من خلية واحدة أو نفس إعداد العينة لكشف تعقيد الورم بشكل أفضل. لذلك، فإن البروتوكولات البسيطة والمرنة التي تسمح بتوليث البيانات لطرق مختلفة مثل تسلسل الحمض النووي الريبي أحادي النواة (snRNA-seq) والنواة الوحيدة Assay ل Chromatin التي يمكن الوصول إليها بواسطة Transposase مع تسلسل عالي الإنتاجية (snATAC-seq) ستكون مهمة لهذا المجال.

وقد سهلت التطورات الأخيرة في مجال الخلية الواحدة إلى جانب الأدوات الدقيقة الفلورية التي يمكن الوصول إليها مثل منصة الجينوم 10x تطبيقات الخلايا المفردة في مختبرات البحوث. لدراسة عدم تجانس ورم الدماغ، وضعنا بروتوكولا معززا لعزل نواة واحدة من الأورام الدبقية المجمدة الطازجة. يدمج هذا البروتوكول بروتوكولات الخلية المفردة الموجودة ويجمع بين خطوة التجانس متبوعة بالتنقية والطرد المركزي المتدرجة الوسيطة المخزن المؤقت. العينات الناتجة هي تعليق نواة واحدة نقية التي يمكن استخدامها لتوليد التعبير الجيني نواة واحدة وبيانات الوصول الكروماتين من إعداد النوى نفسه.

المقدمة

الأورام الدبقية المنتشرة من الدرجة الأدنى (LGG)، وهي ورم الدماغ الأساسي الأكثر شيوعا لدى البالغين، هي الأورام المتسللة التي تنشأ في كثير من الأحيان في نصف الكرة الدماغي. LGGs تظهر كل من التغايرية بين وداخل الورم، والتي ليست مدفوعة فقط من قبل السكان الورم ولكن أيضا من قبل الخلايا غير الخبيثة تشارك بشكل معقد في تطور الورم والتقدم1،2،3،4،5.

على مدى العقد الماضي، كان هناك سيل من البيانات الجينومية التي تم جمعها في مجال الأورام الدبقية. هذه البيانات تأتي أساسا من الدراسات تسلسل الورم السائبة وساهمت بشكل كبير في التوصيف الجزيئي، والتصنيف الحالي لأورام الدماغ5،6،7،8،9،10،11. ومع ذلك ، على الرغم من أن هذه الدراسات كشفت عن المشهد الجزيئي الواسع المرتبط بالأورام الدبقية ، لا يزال هناك نقص مخيب للآمال في التقدم فيما يتعلق بالتدخل العلاجي. واحدة من العقبات التي تحول دون مقاومة العلاج في أورام الدماغ هو عدم التجانس داخل الورم. لمعالجة هذه المسألة، وقد تم التركيز على دراسات مختلفة الجينوم، transcriptomic، proteomic، والتغايرية اللاجينية موجودة داخل ورم في مستوى خلية واحدة12،13،14،15،16،17.

على الرغم من أن هناك تقدما تكنولوجيا ملحوظا في مجال الخلية الواحدة على مدى العامين الماضيين، واحدة من العوامل الرئيسية المقيدة هو توافر العينات الطازجة اللازمة لعزل الخلايا وإجراء هذه التجارب. للتغلب على هذا القيد، كانت هناك عدة محاولات ناجحة في إجراء المقايسات، مثل snRNA-seq و snATAC-seq من الأنسجة المجمدة، وذلك باستخدام النوى بدلا من الخلايا18،19. وتعتمد غالبية هذه الأساليب إما على فرز الخلايا المنشطة بالفلور (FACS) أو استراتيجيات الترشيح. كل من خلية واحدة ونهج نواة واحدة لها نقاط قوتها وعيوبها. نهج خلية واحدة الحفاظ على النصوص الميتوكوندريا، والتي على الرغم من أنها قد تكون مفيدة، يمكن أيضا أن تقلل من تغطية النسخ بسبب وفرة عالية. نهج عزل نواة واحدة القضاء على نسبة عالية من كسر الميتوكوندريا، مما يسمح بتغطية أكثر عمقا من النصوص النووية20.

هناك العديد من المنصات المتاحة تجاريا التي تم استخدامها على مدى السنوات الأخيرة لتقصي بيانات الجينوم خلية واحدة، بما في ذلك الحمض النووي الريبي-seq و ATAC-seq. واحدة من أبرز المنصات هي منصة الكروم الجينوم 10x للتعبير الجيني خلية واحدة والخلية الواحدة ATAC التنميط. كما تعمل المنصة بمساعدة غرف microfluidic، يمكن لأي حطام أو مجاميع تسد النظام مما يؤدي إلى فقدان البيانات والكواشف والعينات السريرية القيمة. لذلك ، يعتمد نجاح دراسات الخلايا المفردة إلى حد كبير على العزل الدقيق للخلايا / النوى المفردة.

البروتوكول الذي سنوضحه هنا هو مزيج معدل قليلا من بروتوكولات DroNc-seq و Omni-ATAC-seq ، ويستخدم نهجا مماثلا للدراسات الحديثة التي تستخدم snRNA-seq لفهم الاضطرابات العصبية وأنواعالخلايا العصبية في الدماغ البشري18و19و21و22و23و24. يستخدم البروتوكول مزيجا من الانزيمية / التفكك الميكانيكي للعينات المجمدة تليها الترشيح والطرد المركزي التدرج ويسمح لعزل سريع ودقيق من نواة واحدة من أنسجة الورم الدبقي المجمدة الطازجة. لقد استخدمنا بنجاح هذا البروتوكول لتوليد بيانات snRNA-seq و snATAC-seq من نفس إعداد النوى من عينات ورم الدماغ.

الوصول مقيد. يرجى تسجيل الدخول أو بدء فترة تجريبية لعرض هذا المحتوى.

البروتوكول

تم الحصول على عينات جليوما مجمدة طازجة من البنك الوطني لأمراض الأورام (NCT) في هايدلبرغ، ألمانيا. وقد وافق مجلس المراجعة المؤسسية في كلية الطب في هايدلبرغ على استخدام مواد المرضى، وتم الحصول على موافقة مستنيرة من جميع المرضى المشمولين في الدراسة.

1. إعداد تجريبي

  1. تنفيذ جميع الخطوات على الجليد أو في 4 °C.
  2. أنابيب ما قبل البرد، والأطباق، وشفرات الحلاقة، وUncers والحشرات إلى 4 درجة مئوية.
  3. قم بإعداد كافة المخازن المؤقتة مقدما. هذه المخازن المؤقتة مستقرة في درجة حرارة الغرفة. يوصى بالترشيح العقيم ، خاصة بالنسبة للسكيروز. يتم تعديل الاستعدادات المخزون من كورسيسوآخرون. انظر الجداول 1-7.
  4. إزالة عينات من النيتروجين السائل أو -80 درجة مئوية تخزين الفريزر والحفاظ على الجليد الجاف حتى الخطوة 2.1.

2. تشريح الأنسجة وتفككها

  1. نقل عينة الأنسجة المجمدة الطازجة (10-60 ملغ) إلى طبق بيتري المبردة مسبقا. Mince / ختم الأنسجة المجمدة الطازجة مع شفرة حلاقة إلى قطع صغيرة على الجليد.
  2. أضف 500 ميكرولتر من عازل تحلل النوى المبرد إلى أنبوب مبرد مسبقا سعة 1.5 مل. ضع قطع الأنسجة في أنبوب 1.5 مل الذي يحتوي على مخزن تحلل النوى ، ونقلها إلى Douncer (جدول المواد).
    ملاحظة: هناك اثنين من الحشرات التجانس Dounce: "فضفاضة" أو "A" الآفات للحد من العينة الأولية و "ضيق" أو "B" pestle لتجانس عينة كاملة.
  3. Dounce قطع الأنسجة مع "فضفاضة" الحشرات لحوالي 20 السكتات الدماغية، حتى يتم تقليل الاحتكاك. إذا كان الحطام موجودا، فقد يتم مسح العينة مسبقا عن طريق الترشيح باستخدام مصفاة 100 مم.
  4. Dounce مع "ضيق" الحشرات لمدة 20 السكتات الدماغية لتحقيق تجانس الأنسجة كاملة.
  5. نقل المتجانسة (حوالي 500 ميكرولتر) في أنبوب 2 مل المبردة مسبقا. أضف 1 مل من عازل التحلل المبرد. تخلط بلطف واحتضان على الجليد لمدة 5 دقائق. مزيج بلطف مع طرف ماصة واسعة تتحمل وكرر 1-2 مرات خلال الحضانة.
  6. تصفية المتجانسة بأكملها باستخدام شبكة مصفاة 30 ميكرومتر، وجمع في أنبوب فالكون 15 مل ونقل مرة أخرى إلى أنبوب جديد قبل المبردة 2 مل. مصفاة واحدة عادة ما تكون كافية للمتجانس بأكمله.
  7. تحقق تحت المجهر الخفيف للتحقق من إزالة الحطام الكبير و سلامة الغشاء النووي. يجب أن تكون النوى مستديرة ولا ينبغي تشويه الغشاء النووي. إذا كان الحطام موجودا، يمكن إعادة تصفية النوى.
  8. الطرد المركزي النوى في 500 × ز لمدة 5 دقائق في 4 درجة مئوية على مقاعد البدلاء أعلى الطرد المركزي. إزالة supernatant، تاركا وراءه ~ 50 ميكرولتر مع بيليه تحتوي على النوى. إعادة إنفاق بيليه بلطف في آخر 1 مل من العازلة تحلل النوى واحتضان لمدة 5 دقائق على الجليد.
  9. طرد مركزي النوى في 500 × ز لمدة 5 دقائق في 4 درجة مئوية. إزالة supernatant دون بيليه المزعجة، إضافة 500 مل من العازلة تجانس 1x (HB) (الجدول 4) واحتضان لمدة 5 دقائق دون إعادة تعليق. ثم، resuspend النوى في آخر 1.0 مل من 1x HB.
  10. طرد مركزي النوى في 500 × ز لمدة 5 دقائق في 4 درجة مئوية. إزالة supernatant وإعادة تركيب بلطف النوى في 200 ميكرولتر من 1x HB في أنبوب جديد 2.0 مل.

3. الطرد المركزي المتدرجة

  1. إضافة 200 ميكرولتر من محلول يوديكسانول 50٪ (الجدول 5) لإعطاء تركيز نهائي من 25٪ يوديكسانول. تخلط جيدا 10 مرات مع ماصة تعيين على 300 مل.
  2. إضافة 300 ميكرولتر من محلول يوديكسانول 29٪ (الجدول 6) تحت خليط 25٪. استخدام P1000 نصيحة غرامة لتجنب خليط من الطبقات.
  3. إضافة 300 ميكرولتر من محلول يوديكسانول 35٪ (الجدول 7) تحت خليط 29٪. استخدام P1000 نصيحة غرامة لتجنب خليط من الطبقات.
    تنبيه: تتطلب هذه الخطوة إزالة تدريجية لطرف ماصة أثناء الأنابيب لتجنب الإزاحة المفرطة لحجم.
  4. ضع العينات في جهاز طرد مركزي متأرجح، وتدور لمدة 20 دقيقة عند 3500 × غرام عند 4 درجات مئوية مع إيقاف تشغيل الفرامل.
  5. إزالة العينات برفق دون اهتزاز ومراقبة تحت الضوء. يجب أن تكون الفرقة البيضاء واضحة من نواة نقية 95٪ مرئية بين الطبقة الثانية والثالثة(الشكل 1).

4. عزل النوى

  1. يستنشق الطبقات العليا حتى النطاق النووي الأبيض في الطور الفاصل من 29٪-35٪.
  2. جمع النطاق النوى في حجم 200 مل، ونقل إلى أنبوب جديد ومرشح مع مرشح 20 ميكرومتر (جدول المواد).
    ملاحظة: لا تحتاج النوى إلى إعادة إنفاقها قبل الترشيح.
  3. تحقق تحت المجهر الخفيف للتحقق من إزالة الحطام الكبير و سلامة الغشاء النووي. يجب أن تكون النوى مستديرة ولا ينبغي تشويه الغشاء النووي.
  4. عد النوى باستخدام تريبان الأزرق تلطيخ على مقياس الدم ونوى aliquot لsnRNA-seq/snATAC-seq.

5. واحد نواة الجيش الملكي النيبالي وAC seq

  1. معالجة النوى فورا باستخدام التعبير الجيني خلية واحدة وخلايا واحدة مجموعات كاشف ATAC(جدول المواد).
    ملاحظة: تركيزات عينة النوى لنظام الجينوم 10x هي 1500-3000 نواة لكل ميكرولتر لsnRNA-seq، و 3500-7000 نواة لكل متر ميكرولتر لsnATAC-seq. يمكن تخفيف النوى باستخدام برنامج تلفزيوني 1x.
  2. تسلسل المكتبات الناتجة في مرفق الجينوم الأساسية.
  3. إجراء تحليل لمراقبة جودة البيانات. يتم تضمين النوى لمزيد من التحليل إذا كانت تحتوي على المعرف الجزيئي الفريد (UMI) >1000 ، وعدد الجينات >500 ونسبة مئوية من جينات الميتوكوندريا <5 ٪، وهي ضمن متوسط + ثلاثة انحرافات معيارية لUMIs والجينات.

الوصول مقيد. يرجى تسجيل الدخول أو بدء فترة تجريبية لعرض هذا المحتوى.

النتائج

علم الجينوم نواة واحدة هو حقل متطور مع بيانات محدودة والبروتوكولات. ومن العوامل الحاسمة التي تؤثر على نتيجة المقايسات النووية الوحيدة عزل النوى النقية وسليمة. جمعنا بروتوكولين منشورين (بروتوكولات DroNc-seq و Omni-ATAC-seq) لعزل النوى عالية الجودة والنقية من كتل الأنسجة الدبقية المجمدة الطازجة في وقت قصير نسبيا وبالتالي الحفاظ على استقرار النصوص (الشكل 1).

استخدام مختلف خطوات الترشيح جنبا إلى جنب مع الطرد المركزي التدرج باستخدام iodixanol / السكروز التدرج يسمح لعزل...

الوصول مقيد. يرجى تسجيل الدخول أو بدء فترة تجريبية لعرض هذا المحتوى.

المناقشة

مجال التغاير داخل الورم هو في مرحلة مثيرة، مع المقايسات الجديدة والمنصات التي يجري تطويرها لتحدي وتوسيع المعرفة القائمة. التغاير داخل الورم هو عامل حاسم يساهم في تطور المرض ومقاومة طرائق العلاج الحالية في الأورام الدبقية28. وقد ركزت الدراسات الحديثة على أورام الدماغ على هذا الجانب الهام باستخدام الخلايا المفردة المقايسات النسخية و epigenomic لتوصيف أفضل للتجانس الخلوي داخل نفس الورم29,30,31,

الوصول مقيد. يرجى تسجيل الدخول أو بدء فترة تجريبية لعرض هذا المحتوى.

الإفصاحات

وليس لدى صاحبي البلاغ ما يكشفان عنه.

شكر وتقدير

نشكر المختبر المفتوح للخلية الواحدة (scOpenLab) في المركز الألماني للسرطان (DKFZ) على المناقشات المفيدة. تم دعم هذا البحث من قبل المعونة الألمانية للسرطان، ماكس إيدر برنامج منحة رقم 70111964 (S.T.).

الوصول مقيد. يرجى تسجيل الدخول أو بدء فترة تجريبية لعرض هذا المحتوى.

المواد

قائمة المواد المستخدمة في هذه المقالة
الاسمالشركةرقم فهرسيالتعليقات
2-MercaptoethanolSigmaM6250
CaCl 2< / sub>Sigma21115-100ML
Dounce Homogenizerالشكل النشط40401
EDTA (0.5 م)Thermo ScientificR1021
Falcon 15 مل أنابيب الطرد المركزي المخروطيةفيشر Scientific352096
Iodixanol (المعروف أيضا باسم تقنيات الخلايا الجذعية Optiprep)07820
MACs مصافي ذكية (30 & micro; م)Miltenyi Biotec130-098-458
MACS SmartStrainers (100 & micro; م)Miltenyi Biotec130-098-463
Mg (Ac) 2< / sub>Sigma63052-100ML
NP-40Abcamab142227
طقم عزل النوى: Nuclei EZ PrepSigmaNUC101-1KT
فينيل ميثان سولفونيل فلوريد (PMSF) مرشحاتالمسبق SigmaP7626
(20 & micro; م)Miltenyi Biotec130-101-812
أنابيب القفل الآمن 1.5 ملEppendorf0030120086
أنابيب القفل الآمن 2.0 ملEppendorf0030120094
خلية واحدة ATAC10x الجينوم
الخلية الواحدة التعبير الجيني10x
السكروزSigmaS0389
أطراف ماصة عريضة التجويف (1000 & micro; ل)ثيمو فيشر Scientific2079GPK
أطراف ماصة واسعة التجويف (200 & ميكرو; ل)ثيمو فيشر العلمي2069GPK
الفصل الجينوم

المراجع

  1. Huse, J. T., Holland, E. C. Targeting brain cancer: advances in the molecular pathology of malignant glioma and medulloblastoma. Nature Reviews Cancer. 10 (5), 319-331 (2010).
  2. Kreso, A., Dick, J. E. Evolution of the cancer stem cell model. Cell Stem Cell. 14 (3), 275-291 (2014).
  3. Filbin, M. G., Suva, M. L. Gliomas Genomics and Epigenomics: Arriving at the Start and Knowing It for the First Time. Annual Review of Pathology. 11, 497-521 (2016).
  4. Ferris, S. P., Hofmann, J. W., Solomon, D. A., Perry, A. Characterization of gliomas: from morphology to molecules. Virchows Archive. 471 (2), 257-269 (2017).
  5. Louis, D. N., et al. The 2016 World Health Organization Classification of Tumors of the Central Nervous System: a summary. Acta Neuropathologica. 131 (6), 803-820 (2016).
  6. Eckel-Passow, J. E., et al. Glioma Groups Based on 1p/19q, IDH, and TERT Promoter Mutations in Tumors. The New England Journal of Medicine. 372 (26), 2499-2508 (2015).
  7. Suzuki, H., et al. Mutational landscape and clonal architecture in grade II and III gliomas. Nature Genetics. 47 (5), 458-468 (2015).
  8. Cancer Genome Atlas Research. Comprehensive, Integrative Genomic Analysis of Diffuse Lower-Grade Gliomas. The New England Journal of Medicine. 372 (26), 2481-2498 (2015).
  9. Noushmehr, H., et al. Identification of a CpG island methylator phenotype that defines a distinct subgroup of glioma. Cancer Cell. 17 (5), 510-522 (2010).
  10. Yan, H., et al. IDH1 and IDH2 mutations in gliomas. The New England Journal of Medicine. 360 (8), 765-773 (2009).
  11. Yan, H., Bigner, D. D., Velculescu, V., Parsons, D. W. Mutant metabolic enzymes are at the origin of gliomas. Cancer Research. 69 (24), 9157-9159 (2009).
  12. Gawad, C., Koh, W., Quake, S. R. Single-cell genome sequencing: current state of the science. Nature Reviews Genetics. 17 (3), 175-188 (2016).
  13. Tanay, A., Regev, A. Scaling single-cell genomics from phenomenology to mechanism. Nature. 541 (7637), 331-338 (2017).
  14. Wu, M., Singh, A. K. Microfluidic Flow Cytometry for Single-Cell Protein Analysis. Methods in Molecular Biology. 1346, 69-83 (2015).
  15. Schwartzman, O., Tanay, A. Single-cell epigenomics: techniques and emerging applications. Nature Reviews Genetics. 16 (12), 716-726 (2015).
  16. Macaulay, I. C., Ponting, C. P., Voet, T. Single-Cell Multiomics: Multiple Measurements from Single Cells. Trends in Genetics. 33 (2), 155-168 (2017).
  17. Buenrostro, J. D., et al. Single-cell chromatin accessibility reveals principles of regulatory variation. Nature. 523 (7561), 486-490 (2015).
  18. Habib, N., et al. Massively parallel single-nucleus RNA-seq with DroNc-seq. Nature Methods. 14 (10), 955-958 (2017).
  19. Corces, M. R., et al. An improved ATAC-seq protocol reduces background and enables interrogation of frozen tissues. Nature Methods. 14 (10), 959-962 (2017).
  20. Slyper, M., et al. A single-cell and single-nucleus RNA-Seq toolbox for fresh and frozen human tumors. Nature Medicine. 26 (5), 792-802 (2020).
  21. Mathys, H., et al. Single-cell transcriptomic analysis of Alzheimer's disease. Nature. 570 (7761), 332-337 (2019).
  22. Krishnaswami, S. R., et al. Using single nuclei for RNA-seq to capture the transcriptome of postmortem neurons. Nature Protocols. 11 (3), 499-524 (2016).
  23. Al-Dalahmah, O., et al. Single-nucleus RNA-seq identifies Huntington disease astrocyte states. Acta Neuropathologica Communications. 8 (1), 19(2020).
  24. Jakel, S., et al. Altered human oligodendrocyte heterogeneity in multiple sclerosis. Nature. 566 (7745), 543-547 (2019).
  25. Butler, A., Hoffman, P., Smibert, P., Papalexi, E., Satija, R. Integrating single-cell transcriptomic data across different conditions, technologies, and species. Nature Biotechnology. , (2018).
  26. Lake, B. B., et al. Integrative single-cell analysis of transcriptional and epigenetic states in the human adult brain. Nature Biotechnology. 36 (1), 70-80 (2018).
  27. Stuart, T., et al. Comprehensive Integration of Single-Cell Data. Cell. 177 (7), 1888-1902 (2019).
  28. Bready, D., Placantonakis, D. G. Molecular Pathogenesis of Low-Grade Glioma. Neurosurgery Clinics of North America. 30 (1), 17-25 (2019).
  29. Venteicher, A. S., et al. Decoupling genetics, lineages, and microenvironment in IDH-mutant gliomas by single-cell RNA-seq. Science. 355 (6332), (2017).
  30. Tirosh, I., et al. Single-cell RNA-seq supports a developmental hierarchy in human oligodendroglioma. Nature. 539 (7628), 309-313 (2016).
  31. Weng, Q., et al. Single-Cell Transcriptomics Uncovers Glial Progenitor Diversity and Cell Fate Determinants during Development and Gliomagenesis. Cell Stem Cell. 24 (5), 707-723 (2019).
  32. Neftel, C., et al. An Integrative Model of Cellular States, Plasticity, and Genetics for Glioblastoma. Cell. 178 (4), 835-849 (2019).
  33. Al-Ali, R., et al. Single-nucleus chromatin accessibility reveals intratumoral epigenetic heterogeneity in IDH1 mutant gliomas. Acta Neuropathologica Communications. 7 (1), 201(2019).

الوصول مقيد. يرجى تسجيل الدخول أو بدء فترة تجريبية لعرض هذا المحتوى.

إعادة الطباعة والأذونات

الوسوم

أنسجة مجمدة طازجةتسلسل كروماتين متاح للإنزيمات للنوى المفردة (Single Nucleus ATAC-seq)طرد مركزي متدرجمحلول يوديكسانولمحلول تحلل النوىخطوات الترشيحالعد باستخدام مقياس كرات الدمصبغ تريبان الأزرق
عزل النواة من أورام الدماغ المجمدة الطازجة لنواة واحدة RNA-seq و ATAC-seq
تواصل معنا
أوصِ به للمكتبة

الخصوصية

شروط الاستخدام

السياسات

حقوق الطبع والنشر © 2026 MyJoVE Corporation. جميع الحقوق محفوظة.