مورين استئصال الجروح التئام نموذج وتحليل الجروح الفسطولوجي

ملخص

يصف هذا البروتوكول كيفية توليد الجروح الثنائية ذات السماكة الكاملة في الفئران وكيفية مراقبة الجروح وحصدها وإعدادها لتحليلها. يتضمن وصفاً متعمقاً لكيفية استخدام أقسام النسيج التسلسلية لتحديد عيوب المورفوميات وتحديدها بدقة والكشف عنها.

الملخص

وقد استخدم نموذج الجرح استئصال المورين على نطاق واسع لدراسة كل من المراحل المتداخلة بالتتابع من التئام الجروح: التهاب, انتشار وإعادة عرض. يتلقّى مورين جروح هدّم جيّدا نوعيّة جيّدا ويمكن التعرف على سرير جرح على أيّ هذا مراحل مختلفة من ال يشفي عملية يكون قابل للقياس. داخل الحقل، من الشائع استخدام "وسط" محدد بشكل تعسفي للجرح لإجراء تحليلات النسيج. ومع ذلك، فإن الجروح هي كيان ثلاثي الأبعاد وغالباً ما لا تكون متماثلة من الناحية النسيجية، مما يدعم الحاجة إلى طريقة واضحة المعالم وقوية للقياس الكمي للكشف عن عيوب المورفوميتري ذات الحجم الصغير للتأثير. في هذا البروتوكول، نحن وصف الإجراء لإنشاء الثنائية، كامل سمك الجروح الختان في الفئران، فضلا عن تعليمات مفصلة حول كيفية قياس معلمات morphometric باستخدام برنامج معالجة الصور على أقسام تسلسلية مختارة. وتستخدم قياسات البعدين لطول الجرح، وطول البشرة، ومنطقة البشرة، ومنطقة الجرح بالاقتران مع المسافة المعروفة بين الأقسام لاستقراء منطقة البشرة ذات الأبعاد الثلاثة التي تغطي الجرح، ومنطقة الجرح العام، وحجم البشرة وحجم الجرح. على الرغم من أن هذا التحليل النسيجي التفصيلي يستهلك الوقت والموارد أكثر من التحليلات التقليدية ، فإن دقته تزيد من احتمال اكتشاف الأنماط الظاهرية الجديدة في عملية شفاء الجروح المعقدة بطبيعتها.

المقدمة

التئام الجروح الجلدية هو عملية بيولوجية معقدة مع مراحل متداخلة بالتتابع. وهو يتطلب تنسيق العمليات الخلوية والجزيئية التي يتم تنظيمها زمانيا ومكانيا من أجل استعادة وظيفة الحاجز للظهارة التالفة. في المرحلة الأولى، الالتهاب، العدلات والظامة تهاجر إلى الجرح، وحشد الدفاعات المحلية والنظامية¹. وبعد المرحلة التحريضية وتداخلها هي مرحلة الانتشار. تبدأ الخلايا الليفية في الانتشار بسرعة والهجرة إلى أنسجة التحبيب. Keratinocytes بعيدا عن الحافة الرائدة تتكاثر اتجاهها نحو الجرح كما keratinocytes متباينة في الحافة الرائدة تهاجر لإعادة الظهارة الجرح². وأخيرا، تبدأ مرحلة إعادة عرض ونضج، خلالها الخلايا الليفية في الأنسجة الحبيبية بدء تولي....

البروتوكول

وقد تم الانتهاء من جميع التجارب وفقا للأنظمة الاتحادية وسياسة جامعة ايوا والإجراءات التي وافقت عليها جامعة ايوا IACUC.

1- الحيوانات وتربية الحيوانات

1. استخدام الفئران الكبار من خط الماوس المطلوب في 8-10 أسابيع من العمر عندما تكون مرحلة بصيلات الشعر في telogen.
2. في يوم الجراحة ، فصل الفئران إلى أقفاص نظيفة ومنزل فردي لتقليل اضطراب الجروح.

2. الجراحة

ملاحظة: من غير الضروري الحفاظ على ظروف جراحية معقمة. في حين ينبغي توخي الحذر للحفاظ على العقم بين الحيوانات ، يتم خزعة اللكمة نفسها على سطح نظيف ، ولكن غير معقمة. مدة الجراحة لكل هي بين 10 و 15 دقيقة.

1. تخدير

النتائج

5- يصور الشكل 5 النطاق في القيم المقاسة والمحسوبة التي تم الحصول عليها من خلال إجراء تحليل مُرفومتري على الجروح البرية التي تُولَّد في سلالات ماوس مختلفة من قبل جراحين متعددين وتحليلها من قبل أفراد مختلفين. يمكن للفئران البرية من نوع من سلالات مختلفة عرض الاختلافات الإحصائية كما هو موضح في كل من دراساتنا وفي الأدب^9،10. وبناء على هذه النتائج التمثيلية، نوصي باستخدام فئران من سلالة واحدة فقط ضمن دراسة واحدة. على الرغم من أننا نوصي بأن .......

المناقشة

نموذج الجرح الختان الثنائي هو إجراء قابل للتخصيص للغاية والذي يمكن استخدامه لدراسة العديد من الجوانب المختلفة لتضميد الجروح. قبل البدء في مشروع التئام الجروح، يجب على المحققين إجراء تحليل للطاقة لتحديد عدد الجروح اللازمة للكشف عن عيب في حجم تأثير معين. توجد تناقضات داخل الأدبيات حول ما إذا كان ينبغي استخدام الفئران أو الجروح الفردية كمحاكيات بيولوجية ، ومع ذلك ، أظهرت دراسة حديثة أنه لا يوجد ارتباط كبير بين جرحين على واحد⁴. وهذا يشير إلى أن الجروح من واحد مستقلة عن بعضها البعض ويمكن اعتبارها نسخاً.......

المواد

قائمة المواد المستخدمة في هذه المقالة

الاسم	الشركة	رقم فهرسي	التعليقات
100٪ إيثانول
70٪ إيثانول
80٪ إيثانول
95٪ إيثانول
كحول الإعدادية	NOVAPLUS	V9100	70٪ كحول الأيزوبروبيل ،
هيدروكسيد
	المعقمة Cellpath	22-222-012
		بلاستيكية سوداء	شيء ثابت ولكن قابل للتلاعب بحجم ورقة
مجهر			مع قدرات الاستحواذ الرقمية وموضوعية
			4X أدوات تطبيق قطنية ذات رؤوس
أغطية			22 × 60 # 1
صفائح
شمع الأسنانالكاميرا			تشمل مسطرة للمقياس ، إن أمكن
إبرة تشريح إغاظة (مستقيمة)
التضمين			22 × 22 × 12
التضمين Simport	Scientific Inc.	M460
Eosin Y
ماكينة قص
الشعر لحمض
وسادة تسخين	Conair		وسادة تسخين جافة
Microtome
فرش الطلاء البارافين
نوع 6
Paraformaldehyde
Permount
محلول عازلة الفوسفات (PBS)
Povidone-iodine	Aplicare	82-255
معالجة كاسيت	Simport Scientific Inc.	M490-2
	ASR.009		شفرات مشرط الخدمة العادية
# 10
مقبض
مقص			معقم للجراحة
لكمات			الحجم على النحو الذي يحدده الباحث
صناديق
سخانات
المجهر الفائق الصقيع	فيشر ساينتفيك	22 037 246
التحكم في درجة الحرارة حمام
		تضمين الأنسجة	الحد الأدنى من موزع البارافين ولوحة باردة
معالج			الحد الأدنى من الفرن بمضخة تفريغ
مضاد حيوي ثلاثي ملاقط مرهم
، طرف منحني			معقم للجراحة
ملاقط ، طرف			معقم للجراحة
WypAll X60	Kimberly-Clark	34865

وسادات خزعة الأمونيومورقة برايتفيلد الرقمية قوالب حلقات الخليك الجليدي رطبة شفرات Hematoxylin Microtome شفرات الحلاقة مشرط جراحي حاد خزعة الجلد الشرائحالشرائح شرائح مائيمحطة المناديل بصري مدبب