يتطلب اشتراك JoVE لعرض هذا المحتوى. تسجيل الدخول أو ابدأ نسخة تجريبية مجانية

مقالة منهجية

3D زراعة الأجهزة العضوية من ظهارة سيلي المعوية التي تخضع للتمايز

4.5K مشاهدة

⸱

DOI:

10.3791/61809

⸱

أبريل 1, 2021

 ,  ,  ,  ,  ,  , 
1Department of Biology and Chemical Biology, Stevens Institute of Technology, 2Department of Pharmacology, Pennsylvania State University College of Medicine

في هذه المقالة

ملخص

يصف الإجراء عزل الزغب من ظهارة الفأر المعوية التي تخضع للتمايز لتحديد إمكانات تكوين الأعضاء.

الملخص

ويعزى كلونوجينيتي من organoids من ظهارة الأمعاء إلى وجود الخلايا الجذعية فيه. يتم تقسيم ظهارة الفأر المعوية الصغيرة إلى سرداب وزغب: تقتصر الخلايا الجذعية والمتكاثرة على السرداب ، في حين أن ظهارة الزغب تحتوي على خلايا مختلفة فقط. وبالتالي ، فإن سرداب الأمعاء العادية ، ولكن ليس الزغب ، يمكن أن تؤدي إلى الأجهزة العضوية في الثقافات ثلاثية الأبعاد. الإجراء الموصوف هنا ينطبق فقط على ظهارة villus التي تخضع للتمايز مما يؤدي إلى الجذعية. يستخدم الأسلوب الموصوف Smad4-loss-of-function:β-catenin كسب من وظيفة (Smad4 KO:β-cateninGOF) الماوس متحولة مشروطة. الطفرة يسبب الزغب المعوية لdedifferentiate وتوليد الخلايا الجذعية في الزغب. يتم كشط الزغب المعوي الذي يخضع للتمايز من الأمعاء باستخدام الشرائح الزجاجية ، ووضعها في مصفاة 70 ميكرومتر وغسلها عدة مرات لتصفية أي خلايا فضفاضة أو سرداب قبل الطلاء في مصفوفة BME-R1 لتحديد إمكاناتها لتشكيل الجهاز. تم استخدام معيارين رئيسيين لضمان تطوير الأجهزة العضوية الناتجة من مقصورة villus المتمايزة وليس من السراديب: 1) تقييم الزغب المعزول بشكل مجهري لضمان عدم وجود أي سرداب مربوطة ، قبل وبعد الطلاء في المصفوفة ثلاثية الأبعاد ، و 2) مراقبة المسار الزمني لتطور الجهازية من villi. بدء العضوية من الزغب يحدث بعد يومين إلى خمسة أيام فقط من الطلاء ويبدو على شكل غير منتظم، في حين أن organoids المستمدة من سرداب من ظهارة الأمعاء نفسها واضحة في غضون ستة عشر ساعة من الطلاء وتظهر كروية. الحد من هذه الطريقة، ومع ذلك، هو أن عدد organoids شكلت، والوقت اللازم لبدء organoid من الزغب تختلف تبعا لدرجة dedifferentiation. وبالتالي ، اعتمادا على خصوصية الطفرة أو الإهانة التي تسبب التمايز ، يجب تحديد المرحلة المثلى التي يمكن فيها حصاد الزغب لتقصي إمكانات تشكيل الأعضاء الخاصة بهم ، تجريبيا.

المقدمة

السراديب المعوية ولكن ليس زغب، تشكل organoids عندما مثقف في مصفوفة Matrigel أو BME-R1. هذه organoids هي هياكل التنظيم الذاتي، وغالبا ما يشار إليها باسم "الأمعاء المصغرة" بسبب وجود مختلف الأنساب المختلفة، السلف، والخلايا الجذعية الموجودة في ظهارة الأمعاء في الجسم الحي. ويعزى احتمال تشكيل organoids من سرداب إلى وجود الخلايا الجذعية1. الزغب المعوي من ناحية أخرى تتكون فقط من خلايا مختلفة، وبالتالي لا يمكن تشكيل organoids. ومع ذلك، قد تؤدي الطفرات2 أو الشروط التي تسمح dedifferentiation من ظهارة villus إلى الخلايا الجذعية في زغب2،3. يمكن تأكيد هذا التغيير المصيري الناتج عن الجذعية في ظهارة السيلي عن طريق طلاء ظهارة villus المتمايزة في مصفوفة ثلاثية الأبعاد لتحديد إمكاناتها لتشكيل الجهاز كمؤشر على النبع من الدي نوفو في ظهارة villus. وبالتالي ، فإن الجانب الحاسم من هذا الإجراء هو ضمان عدم وجود تلوث سرداب.

وSmad4KO:β-cateninGOF الطفرة الشرطية يسبب dedifferentiation في ظهارة الأمعاء تميزت التعبير عن الانتشار وعلامات الخلايا الجذعية في الزغب, وفي نهاية المطاف تشكيل هياكل مثل سرداب في زغب يشار إليها باسم سرداب خارج الرحم تم تحديد وجود هذه الخلايا الجذعية هذه villi dedifferentiated من خلال التعبير عن علامات الخلايا الجذعية في سرداب خارج الرحم(في الجسم الحي)وقدرة الزغب متحولة لتشكيل organoids wh en مطلي ماتريجل3. الإجراء المذكور أدناه يوضح المنهجية المستخدمة لتأكيد الجذعية من ظهارة الأمعاء المتمايزة في Smad4 KO:β-cateninGOF الفئران المتحولة. كانت إحدى السمات الرئيسية لهذه المنهجية لعزل الزغب هي استخدام كشط التجويف المعوي ، بدلا منطريقةEDTA 4. على عكس طريقة إزالة EDTA ، تحتفظ عزلة الزغب عن طريق كشط غالبية mesenchyme الأساسي وتسمح بضبط ضغط الكشط لتسفر عن زغب بدون سرداب مربوطة. ضغط كشط ذاتية للمشغل، وبالتالي، يجب تحديد الضغط الأمثل لتسفر عن زغب دون سرداب المربوطة تجريبيا من قبل المشغل. الجانب الحاسم من هذا الإجراء هو ضمان عدم وجود تلوث سرداب عن طريق الفحص المجهري للزغب قبل وبعد الطلاء في مصفوفة BME-R1.

يتم كشط زغب الأمعاء قبالة التجويف المعوي مع الشرائح الزجاجية ووضعها في مرشح 70 ميكرومتر وغسلها مع برنامج تلفزيوني للتخلص من الخلايا فضفاضة أو سرداب، إن وجدت، قبل الطلاء في مصفوفة BME-R1. وتشدد هذه الطريقة على المعايير التالية لتجنب التلوث سرداب: أ) حصر حصاد الزغب النصف القريب من الاثني عشر حيث الزغب هي الأطول، ب) التقليل من عدد الخدوش ذات العائد الزغب، ج) غسل المرشح الذي يحتوي على الزغب من خلال سلسلة من برنامج تلفزيوني في طبق من ستة آبار، و د) مما يؤكد عدم وجود تلوث سرداب عن طريق الفحص المجهري قبل وبعد الطلاء في مصفوفة BME-R1. عزل سيلي عن طريق كشط، بدلا من EDTA chelation، يمنع فقدان كامل من mesenchyme الكامنة التي قد توفر إشارات المتخصصة5،6،7،8، إذا لزم الأمر، لبدء organoid من ظهارة villus.

الوصول مقيد. يرجى تسجيل الدخول أو بدء فترة تجريبية لعرض هذا المحتوى.

البروتوكول

وقد حظيت جميع تجارب الماوس التي أجريت، بما في ذلك استخدام تاموكسيفين والقتل الرحيم عن طريق خلع عنق الرحم، بموافقة اللجنة المؤسسية لرعاية الحيوانات واستخدامها في معهد ستيفنز لعلم ال echnology.

1. الفئران

ملاحظة: جيل Smad4f/f; كاتنبlox(ex3)/+; وقد وصفت سابقا الفئران Villin-CreERT2 3. الفئران الإناث البالغات بين ثمانية إلى اثني عشر أسبوعا من agewere المستخدمة.

  1. حث Smad4KO:β-cateninGOF طفرة في Smad4f/f; كاتنبlox(ex3)/+; Villin-CreERT2 مع الحقن داخل الصفاق من تاموكسيفين في زيت الذرة لمدة أربعة أيام متتالية.
  2. التضحية miceby خلع عنق الرحم بعد عشرة أيام من حقن تاموكسيفين الأولى.
  3. رش البطن مع الإيثانول 70٪ لمنع فرو الماوس الدخول في تجويف الصفاق.
  4. افتح تجويف البطن بمقص تشريح لكشف الأمعاء. عزل الأمعاء بمساعدة مقص والمملقط.
    ملاحظة: ما يصاحب ذلك من فقدان Smad4 جنبا إلى جنب مع كسب طفرة وظيفة من β-catenin (Smad4KO;β-cateninGOF) في ظهارة الأمعاء تم تحقيقه عن طريق حقنSmad4و / و; كاتنبlox(ex3)/+; فئران Villin-CreERT2 كل يوم لمدة أربعة أيام متتالية بوزن جسم 0.05 غرام تاموكسيفين/كجم في زيت الذرة. يتم حصاد هذه الفئران بعد عشرة أيام من حقن تاموكسيفين الأولى لضمان وجود خلايا تعبر عن علامات مرتبطة بالخلايا الجذعية في الزغب المتمايز.

2. العزلة الاثني عشر وإعداد

  1. تشريح النصف القريب من الاثني عشر.
  2. تدفق الاثني عشر مع 5 مل من الجليد الباردة PBS في حقنة 10 مل لمسح المحتوى الإنارة.
  3. فتح duodenum طوليا مع مقص الزاوية ووضع شقة الاثني عشر على لوحة بيتري 15 سم على الجليد مع تجويف الاثني عشر التي تواجه المشغل.

3. عزلة Villi عن طريق كشط

  1. قبل البدء في كشط، ضع مصفاة شبكة 70 ميكرومتر في واحدة من آبار لوحة زراعة الأنسجة 6-جيدا. ملء جميع الآبار مع 4 مل من برنامج تلفزيوني 1x ووضع لوحة زراعة الأنسجة 6-جيدا على الجليد (الشكل 1).
  2. كشط الزغب على النحو التالي باستخدام اثنين من الشرائح الزجاجية المجهرية: واحد لعقد الاثني عشر إلى أسفل والآخر لكشط (الشكل 1B1).
    1. كشط الجانب الإنارة من الاثني عشر سطحيا إلى جيئة وذهابا مرتين لإزالة المخاط. تطبيق الضغط بحيث هذه الخطوة يزيل طبقة المخاط، ولكن ليس الزغب.
    2. كشط duodenum مرة أخرى، إلى جيئة وذهابا مرتين تطبيق نفس الضغط كما هو الحال في 3.1، وخلال ذلك يمكن أن ينظر إلى زغب جمع على الشرائح(الشكل 1B2). هذا هو الضغط الأمثل (الذي يجب تحديده تجريبيا من قبل المشغل) لتحقيق الزغب دون ربط سرداب.
  3. استخدام أنبوب نقل 1 مل تحتوي على برنامج تلفزيوني لنقل زغب (التي يتم جمعها على الشريحة من الخطوة 3.2.2.) إلى 70 ميكرومتر شبكة مصفاة وضعت في طبق 6-جيدا. يتم جمع الزغب وبالتالي، بعد كل كشط(الشكل 1B2).
  4. غسل الزغب التي تم جمعها في مصفاة 70 ميكرومتر (من الخطوة 3.3) عن طريق نقل مصفاة (مع زغب) من خلال سلسلة من الآبار في طبق 6 آبار تحتوي على برنامج تلفزيوني الباردة (~ 4 مل / بئر). هذا هو لإزالة سرداب فضفاضة، إن وجدت.
  5. باستخدام أنبوب p1000، نقل تعليق زغب في برنامج تلفزيوني (~ 3 مل) من مصفاة 70 ميكرومتر إلى أنبوب جديد 15 مل على الجليد.
  6. استخدام 0.1٪ BSA المغلفة حادة انتهت P200 تلميح pipet إلى يستنشق حجم 50 ميكرولتر من تعليق زغب على شريحة زجاجية. عد عدد الزغب في قطرة 50 ميكرولتر تحت التكبير 4x لتحديد تركيز الزغب في تعليق برنامج تلفزيوني. على سبيل المثال، إذا كان هناك 10 زغب في تعليق 50 ميكرولتر فحص، ثم تركيز الزغب هو 0.2 زغب / ميكرولتر. هذا هو أيضا الوقت المناسب لتأكيد عدم وجود سرداب المربوطة.
  7. حساب حجم تعليق الزغب المطلوبة لوحة بتركيز 0.5 زغب / ميكرولتر من مصفوفة BME-R1. إضافة إضافية 100 ميكرولتر لحساب خطأ pipetting وحجم المطلوبة للفحص المجهري المطلوبة لضمان نقاء الزغب.
    تنبيه: الضغط المستخدم في أول كشطين ، يزيل المخاط ولكن ليس الزغب ، يجب استخدامه في الخدوش اللاحقة التي سيتم خلالها إطلاق الزغب. الحد من عدد كشط جيئة وذهابا إلى اثنين بعد أن لوحظ لأول مرة الإفراج الزغب. هذا التدبير يتجنب الإفراج عن الزغب مع سرداب المربوطة. من الضروري تقييم الزغب بشكل مجهري لضمان عدم وجود سرداب مربوطة.

4. الطلاء من الزغب على مصفوفة BME-R1

  1. باستخدام 0.1٪ BSA المغلفة P200 طرف الأنابيب حادة النهاية، ونقل إلى أنبوب الطرد المركزي الدقيق حجم الزغب (من الخطوة 3.6) المطلوبة لوحة في كثافة ~ 6 سيلي لكل بئر في 12.5 ميكرولتر من مصفوفة BME-R1. استخدام طرف BSA المغلفة حادة انتهت في هذه المرحلة يضمن أن الزغب، والتي هي كبيرة جدا لطرف مدببة يستنشق دون أن يتم حظرها أو فقدت من أن تمسك إلى جانبي الطرف.
  2. تدور أسفل الزغب لمدة 2 دقيقة في 200 × ز في جهاز طرد مركزي المبردة (4 درجة مئوية) وإزالة supernatant.
  3. كرر الخطوة 4.2 لإزالة أي برنامج تلفزيوني المتبقية والمضي قدما إلى الخطوة التالية تحت غطاء محرك السيارة تدفق صفح.
  4. Resuspend بيليه الزغب بلطف في الكمية المطلوبة من BME-R1 الباردة إذابة على الجليد.
  5. باستخدام أنبوب P20، لوحة 12.5 ميكرولتر / بئر من الزغب في مصفوفة BME-R1 في 3D في لوحة U-bottom قبل الحرب 96 جيدا.
  6. احتضان اللوحة في حاضنة زراعة الأنسجة عند 37 درجة مئوية لمدة 15 دقيقة للسماح بتقويم مصفوفة BME-R1.
  7. إضافة 125 ميكرولتر / بئر من ENR قبل الحارة (عامل نمو البشرة / Noggin / R-spondin1) وسائل الإعلام: متقدمة DMEM F-12 وسائل الإعلام, تكملها 1x البنسلين: ستريبتومايسين, 10 MM HEPES, الجلوتاماكس, 50 نانوغرام/ مل EGF, 100 نانوغرام/مل نوجين, 5٪ وسائط مكيفة من خلايا HEK293-T تعبر عن R-Spondin1, 1x N2, 1x B27, 1 mM N-أسيتيل سيستين, و0.05 ملغم/مل بريموسين.
  8. احتضان الزغب المطلي في حاضنة زراعة الأنسجة التي يتم الحفاظ عليها عند 37 درجة مئوية مع 5٪ CO2، وتغيير الوسائط كل يومين.
  9. تجاهل أي بئر تظهر فيه الأجهزة العضوية قبل يومين من الطلاء ، حيث أن أقرب نقطة زمنية يتوقع فيها وجود عضويات مشتقة من الزغب هي بعد يومين.
    ملاحظة: يتم احتساب أي زغب يحتوي على نصف أو أكثر من نصف طول الزغب ك villus واحد. على عكس الأجهزة العضوية المشتقة من سرداب، لا يتوقع الأجهزة المشتقة من الزغب في غضون 24 ساعة بعد الطلاء. يبدو أن الزغب الذي يبدأ بالعضوية يظلم ويتقلص قبل تكوين الأعضاء العضوية. وبالتالي ، ينبغي التخلص من أي آبار مع organoids النامية في غضون يوم من الطلاء لتجنب معقولية بعد أن اشتقت من التلوث سرداب معقول. المنهجية المستخدمة لإنتاج وسائل الإعلام مشروطة متاحة عند الطلب.

الوصول مقيد. يرجى تسجيل الدخول أو بدء فترة تجريبية لعرض هذا المحتوى.

النتائج

العامل الحاسم لنجاح الإجراء هو منع تلوث سرداب. يتم ضمان تطور الجهاز من الزغب (وليس من أي سرداب ملوثة) من خلال تأكيد أربعة معايير رئيسية: 1) ضمان نقاء الزغب المحصود عن طريق الفحص المجهري قبل وبعد طلاء الزغب في BME-R1 ، 2) طلاء عدد محدود من الزغب لكل بئر للسماح بتصور جميع الزغب المطلي بشكل فردي ، 3) على زراعة تطوير الجهاز يوميا؛ صور من الدورة الزمنية تظهر تطور organoid من الزغب(الشكل 3)،و 4) onitoring الحركية والمظهر المورفولوجي من organoids الشروع من الزغب؛ الأجهزة التي تبدأ من الزغب تظهر على...

الوصول مقيد. يرجى تسجيل الدخول أو بدء فترة تجريبية لعرض هذا المحتوى.

المناقشة

يمكن أن تؤكد هذه الطريقة قدرة التجديد الذاتي لظهارة السيلي المتمايزة التي تكتسب علامات الخلايا الجذعية في الجسم الحي. يمكن أن تؤدي ظهارة الأمعاء العادية إلى ظهور أعضاء من سرداب ولكن ليس مقصورة الزغب ، عندما تكون مثقفة في 3D بسبب وجود خلايا جذعية في سرداب1. وهكذا، فإن تكوين الجهاز من ظهارة السيلي المتمايزة المستزرعة في الثقافات ثلاثية الأبعاد يؤكد تكوين الخلايا الجذعية من انعكاس مصير الخلية. تقارير عن انعكاس مصير الخلية في ظهارة الأمعاء الناشئة عن الطفرات و / أو الإصابة تزداد

الوصول مقيد. يرجى تسجيل الدخول أو بدء فترة تجريبية لعرض هذا المحتوى.

الإفصاحات

ولا يعلن صاحبا البلاغ عن وجود تضارب في المصالح.

شكر وتقدير

تم دعم هذا المنشور من قبل جائزة رقم K22 CA218462-03 من المعهد الوطني للسرطان NIH. كانت خلايا HEK293-T التي تعبر عن R-Spondin1 هدية سخية من الدكتور مايكل ب. فيرزي.

الوصول مقيد. يرجى تسجيل الدخول أو بدء فترة تجريبية لعرض هذا المحتوى.

المواد

قائمة المواد المستخدمة في هذه المقالة
الاسمالشركةرقم فهرسيالتعليقات
وسائط DMEM F-12 المتقدمةGibco12634010
3،3-diaminobenzidineVector LabsSK-4105
96 جيدا U-bottom لوحةفيشر ScientificFB012932
ABC مجموعةVector Labs  ؛ PK4001
مقص بزاويةفيشر Scientific11-999
مكمل EGF البشري المؤتلف الخالي منPeprotechAF-100-15
B-27 (50X) ، ناقص فيتامين أجيبكو12587010
ألبومين مصل البقر (BSA) مسحوق خال من البروتيازفيشر ScientificBP9703100
CD44 الأجسام المضادةBioLegend1030001
خلية الأجسام المضادة Cdx212306
زيت الذرةSigma-AldrichC8267-500ML
مصفاة خلية Corning 70 ميكرونالحياة431751
مستخلص الغشاء القاعدي لعامل النمو المنخفض Cultrex ، النوع R1R & D3433-005-R1
مقص تشريحفيشر ساينتفيك22-079-747
ملقطفيشر ساينتفيك17-456-209
جلوتاماكس (100X)جيبكو35050-061
HEK 293-T الخلايا التي تعبر عن RSPO-1هدية من الدكتور مايكل فيرزي
هيبس (1 م)جيبكو15630-080
HistogelThermoscientificHG-4000-012
مرشح شبكيفيشر ساينتفيك07-201-431
شريحة زجاجية MicrscopeVWR89218-844
N-2 مكمل غذائي (100X)Gibco17502048
N-acetyl cysteineSigma-AldrichA9165
p200 نصائح حادةVWR46620-642
البنسلين الستربتومايسين (10،000 وحدة / مل)جيبكو15140-122
بريموسين (50 مجم / مل)إنفيفوجينant-pm-1
Quality Biological Inc PBS (10X)فيشر سيانتيفك50-146-770
المؤتلف Murine NogginPeprotech250-38
خليةمخففة8112L
تاموكسيفينسيجما ألدريتشT5648-1G
6 آبار لوحة زراعة الأنسجةفيشر Scientific50-146-770
إشارات علوم إشارة

المراجع

  1. Sato, T., et al. Single Lgr5 stem cells build crypt-villus structures in vitro without a mesenchymal niche. Nature. 459 (7244), 262-265 (2009).
  2. Schwitalla, S., et al. Intestinal tumorigenesis initiated by dedifferentiation and acquisition of stem-cell-like properties. Cell. 152 (1-2), 25-38 (2013).
  3. Perekatt, A. O., et al. SMAD4 Suppresses WNT-Driven Dedifferentiation and Oncogenesis in the Differentiated Gut Epithelium. Cancer Research. 78 (17), 4878-4890 (2018).
  4. Roche, J. K. Isolation of a purified epithelial cell population from human colon. Methods in Molecular Medicine. 50, 15-20 (2001).
  5. Aoki, R., et al. Foxl1-expressing mesenchymal cells constitute the intestinal stem cell niche. Cellular and Molecular Gastroenterology and Hepatology. 2 (2), 175-188 (2016).
  6. Seiler, K. M., et al. Tissue underlying the intestinal epithelium elicits proliferation of intestinal stem cells following cytotoxic damage. Cell and Tissue Research. 361 (2), 427-438 (2015).
  7. Stzepourginski, I., et al. CD34+ mesenchymal cells are a major component of the intestinal stem cells niche at homeostasis and after injury. Proceedings of the National Academy of Sciences of the United States of America. 114 (4), 506-513 (2017).
  8. Roulis, M., et al. Paracrine orchestration of intestinal tumorigenesis by a mesenchymal niche. Nature. 580 (7804), 524-529 (2020).
  9. Haramis, A. P., et al. De novo crypt formation and juvenile polyposis on BMP inhibition in mouse intestine. Science. 303 (5664), 1684-1686 (2004).
  10. Madison, B. B., et al. Epithelial hedgehog signals pattern the intestinal crypt-villus axis. Development. 132 (2), 279-289 (2005).
  11. van Es, J. H., et al. Dll1+ secretory progenitor cells revert to stem cells upon crypt damage. Nature Cell Biology. 14 (10), 1099-1104 (2012).
  12. Tetteh, P. W., et al. Replacement of Lost Lgr5-Positive Stem Cells through Plasticity of Their Enterocyte-Lineage Daughters. Cell Stem Cell. 18 (2), 203-213 (2016).
  13. Baulies, A., et al. The Transcription Co-Repressors MTG8 and MTG16 Regulate Exit of Intestinal Stem Cells From Their Niche and Differentiation Into Enterocyte vs Secretory Lineages. Gastroenterology. 159 (4), 1328-1341 (2020).
  14. Zeilstra, J., et al. Stem cell CD44v isoforms promote intestinal cancer formation in Apc(min) mice downstream of Wnt signaling. Oncogene. 33 (5), 665-670 (2014).
  15. Gracz, A. D., et al. Brief report: CD24 and CD44 mark human intestinal epithelial cell populations with characteristics of active and facultative stem cells. Stem Cells. 31 (9), 2024-2030 (2013).
  16. Gao, N., White, P., Kaestner, K. H. Establishment of intestinal identity and epithelial-mesenchymal signaling by Cdx2. Developmental Cell. 16 (4), 588-599 (2009).
  17. Verzi, M. P., Shin, H., Ho, L. L., Liu, X. S., Shivdasani, R. A. Essential and redundant functions of caudal family proteins in activating adult intestinal genes. Molecular and Cellular Biology. 31 (10), 2026-2039 (2011).
  18. Verzi, M. P., Shin, H., San Roman, A. K., Liu, X. S., Shivdasani, R. A. Intestinal master transcription factor CDX2 controls chromatin access for partner transcription factor binding. Molecular and Cellular Biology. 33 (2), 281-292 (2013).
  19. Grainger, S., Hryniuk, A., Lohnes, D. Cdx1 and Cdx2 exhibit transcriptional specificity in the intestine. PLoS One. 8 (1), 54757(2013).
  20. Stringer, E. J., et al. Cdx2 determines the fate of postnatal intestinal endoderm. Development. 139 (3), 465-474 (2012).

الوصول مقيد. يرجى تسجيل الدخول أو بدء فترة تجريبية لعرض هذا المحتوى.

إعادة الطباعة والأذونات

الوسوم

تكوين العضيّاتبروتوكول إزالة التمايزتعطيل جين Smad4اكتساب وظيفة بيتا-كاتينينطريقة كشط الزغاباتزراعة مصفوفة BME-R1توقيت بدء تكوين العضيّاتتجنب تلوث الخباياالتحليل المظهري
3D زراعة الأجهزة العضوية من ظهارة سيلي المعوية التي تخضع للتمايز
تواصل معنا
أوصِ به للمكتبة

الخصوصية

شروط الاستخدام

السياسات

حقوق الطبع والنشر © 2026 MyJoVE Corporation. جميع الحقوق محفوظة.