المهمة السلوكية لاختيار ثلاث غرف باستخدام Zebrafish كنظام نموذجي

Summary

نحن نقدم غرفة سلوكية مصممة لتقييم الأداء المعرفي. نحن نقدم بيانات تبين أنه بمجرد الحصول عليها ، تذكر حمار وحشي المهمة بعد 8 أسابيع. كما نظهر أن سمك الحمار الوحشي المفرط السكر في الدم قد غير الأداء المعرفي، مما يشير إلى أن هذا النموذج ينطبق على الدراسات التي تقيم الإدراك والذاكرة.

Abstract

الأمراض العصبية تعتمد على العمر، المنهكة، وغير قابلة للشفاء. وقد ربطت التقارير الأخيرة أيضا ارتفاع السكر في الدم مع التغيرات في الذاكرة و / أو ضعف الإدراك. لقد قمنا بتعديل وتطوير مهمة معرفية من ثلاث غرف مماثلة لتلك المستخدمة مع القوارض لاستخدامها مع سمك الحمار الوحشي المفرط السكر في الدم. تتكون غرفة الاختبار من غرفة انطلاق ذات موقع مركزي ومقصورتين للاختيار على كلا الجانبين ، مع مجموعة من التخصصات المستخدمة كمكافأة. نحن نقدم بيانات تبين أنه بمجرد الحصول عليها ، تذكر حمار وحشي المهمة بعد 8 أسابيع على الأقل. تشير بياناتنا إلى أن سمك الحمار الوحشي يستجيب بقوة لهذه المكافأة ، وقد حددنا العجز المعرفي في الأسماك المفرطة السكر في الدم بعد 4 أسابيع من العلاج. قد ينطبق هذا الفحص السلوكي أيضا على الدراسات الأخرى المتعلقة بالإدراك والذاكرة.

Introduction

الأمراض العصبية تعتمد على العمر، المنهكة، وغير قابلة للشفاء. وتتزايد هذه الأمراض انتشارا، مما يؤدي إلى الحاجة الملحة إلى تحسين وتطوير استراتيجيات علاجية جديدة. بداية وعرض كل مرض فريد من نوعه، حيث يؤثر بعضها على مناطق الدماغ اللغوية والحركية والاستقلالية، في حين أن البعض الآخر يسبب عجزا في التعلم وفقدان الذاكرة¹. أبرزها, العجز المعرفي و / أو ضعف هي المضاعفات الأكثر انتشارا في جميع الأمراض العصبية². أملا في تسليط الضوء على الآليات الكامنة الكامنة وراء هذه الأمراض العصبية التنكسية، تم استخدام العديد من النظم النموذجية المختلفة (بما في ذلك الكائنات وحيدة الخلية إلى دروسوفيلا إلى الفقاريات ذات الترتيب الأعلى مثل القوارض والبشر)؛ ومع ذلك ، فإن غالبية الأمراض العصبية لا تزال غير قابلة للشفاء.

التعلم والذاكرة هي عمليات حفظها للغاية بين الكائنات الحية والتغيرات المستمرة في البيئة تتطلب التكيف³. وقد ثبت ضعف في كل من الإدراك واللدونة متشابك في العديد من نماذج القوارض. على وجه التحديد، تستخدم المقايسات السلوكية الراسخة التعلم النقابي لتقييم التغيرات المعرفية بعد مختلف الأمراض والاضطرابات الناجمة عن ضعف^4. بالإضافة إلى ذلك، فإن انعكاس التمييز على النقيض من ذلك يقيم العجز المعرفي لأنه ينطوي على وظائف التعلم والذاكرة ذات الترتيب الأعلى، ويعتمد الانعكاس على تثبيط ارتباط تم تعلمه من قبل. مهمة اختيار ثلاث غرف المستخدمة على نطاق واسع يوضح العجز المحتمل في مسارات التعلم والذاكرة في الجهاز العصبي المركزي^5،6. في الآونة الأخيرة ، توسع هذا المجال ليشمل نماذج غير ثديية ، مثل سمك الحمار الوحشي(Danio rerio)، حيث تم تطوير العديد من النماذج لمجموعة من الأعمار من اليرقات إلى البالغين^7،8.

Zebrafish توفير توازن بين التعقيد والبساطة التي هي مفيدة لتقييم الإعاقات المعرفية مع التقنيات السلوكية. أولا، سمك الحمار الوحشي قابل للفحص السلوكي عالي الإنتاجية نظرا لصغر حجمه وطبيعته الإنجابية الغزيرة. ثانيا، تمتلك حمار وحشي هيكل، والباليوم الجانبي، وهو مماثل للقرن آمون الثدييات كما أن لديها علامات الخلايا العصبية مماثلة وأنواع الخلايا⁷. حمار وحشي هي أيضا قادرة على الحصول على وتذكر المعلومات المكانية⁹ و, مثل البشر, هي^{اليومية 10}. لذلك ، ليس من المستغرب أن يتم استخدام سمك الحمار الوحشي كنموذج للأمراض العصبية مع زيادة وتيرة. ومع ذلك، فإن غياب المقايسات السلوكية المناسبة جعل من الصعب تطبيق نموذج سمك الحمار الوحشي للتقييمات المعرفية. العمل المنشور باستخدام المقايسات السلوكية الخاصة لحمار الوحشي تشمل مهام التعلم النقابي¹¹، سلوك القلق¹²، الذاكرة¹³، التعرف على الكائن¹⁴، وتفضيل المكان المكيف^{15،16،17،18،19}. على الرغم من أن هناك العديد من التطورات فيما يتعلق المقايسات السلوكية حمار وحشي, النظراء لبعض الاختبارات من الوظائف المعرفية في القوارض لم يتم تطويرها لاستخدامها مع حمار وحشي¹⁸.

بناء على الدراسات السابقة من مختبرنا ، قمنا بنمذجة / تطوير مهمة معرفية في سمك الحمار الوحشي استنادا إلى مهمة الاختيار من ثلاث غرف المستخدمة مع القوارض باستخدام التفاعل الاجتماعي كمكافأة. بالإضافة إلى ذلك ، توسعنا في جانب التعلم النقابي للمهمة السلوكية ودمجنا انعكاس التمييز على النقيض على أمل مواصلة تطوير هذه المهمة السلوكية لتقييم الضعف الإدراكي. وقد مكننا ذلك من دراسة كل من اكتساب التعلم من التمييز في البداية وما تلاه من تثبيط لذلك التعلم في مرحلة الانعكاس. في الدراسة الحالية، ونحن نثبت أن هذا الإجراء قدم طريقة موثوقة لتقييم الأداء المعرفي في حمار وحشي بعد الغمر الجلوكوز لمدة 4 أو 8 أسابيع.

Protocol

تمت الموافقة على جميع الإجراءات التجريبية من قبل اللجنة المؤسسية لرعاية الحيوان واستخدامه (IACUC) في الجامعة الأمريكية (البروتوكول رقم 1606، 19-02).

1. الحيوانات

1. تربية الحيوانات وصيانتها
   1. الحصول على الكبار البرية نوع حمار وحشي (دانيو rerio) الذين تتراوح أعمارهم بين 4-11 أشهر والأجنة وتربيتها في المنزل.
   2. الحفاظ على الأسماك في نظام الرف المائية في 28-29 درجة مئوية على ضوء 14 ساعة: 10 ساعة فوتوبريود الظلام.
   3. إطعام الأسماك مرتين يوميا مع رقائق التجارية وتكملة مع Artemia الحية.
   4. اختيار الأسماك عشوائيا من هذه الخزانات المخزون للتجارب السلوكية.
2. عند الانتهاء من التجربة، تخدير الحيوانات عن طريق الغمر في tricaine 0.02٪ لمدة 2 دقيقة أو حتى يكون هناك نقص في التنسيق الحركي وانخفاض معدل التنفس للتحليلات الجزيئية و / أو الكيميائية العصبية في وقت لاحق.

2. غرفة اختبار الاختيار من ثلاث غرف

ملاحظة: تم تعديل هذه التقنية السلوكية من Ruhl^{وآخرون.}

1. بناء غرفة
   1. تعديل الغرفة السلوكية²⁶- حوض السمك 40 لتر (50 × 30 × 30 سم^3)—أن يكون غرفة مركزية أو بدءا (10 × 30 × 30 سم^3)،فصل من غرفتين الاختيار الجانبي (كل 20 × 30 × 30 سم³، الشكل 1A).
   2. بناء المقصورات الثلاث باستخدام الألومنيوم "على شكل حرف U" قناة الملصقة على الجدران الزجاجية الداخلية مع تسرب الحوض، لفصل الخزان إلى ثلاث غرف.
   3. بناء فواصل مبهمة، وارتفاع 10 سم، من ورقة PVC الرمادية تناسب قنوات الألومنيوم على جانبي. جعل كل مقسم من 2 قطعة، كل متساوية في الحجم: قطعة أسفل ثابتة شنت بشكل دائم داخل الخزان وقطعة أعلى تتحرك صعودا وهبوطا في مسارات الألومنيوم.
   4. الغراء مقاطع الموثق خارج كبيرة إلى الجزء العلوي من أوراق PVC الرمادية لتكون بمثابة مقابض.
   5. باستخدام علامة دائمة، رسم خطوط أفقية صغيرة 10 سم فوق أنبوب PVC الرمادية التي تم الالتزام بها على السطح الخارجي للدبابات.
      ملاحظة: هذه العلامة هي النقطة التي سيتم فتح ورقة PVC الرمادي العلوي للسماح بالوصول إلى أي من الجانبين.
   6. إضافة التحكم (نظام) المياه إلى الخزان إلى مستوى 25 سم من أسفل إلى أعلى الخزان، أو ~ 30 L. مكان سخانات حوض السمك الزجاج في كل قسم من الغرفة لمدة 24 ساعة قبل الاختبار لجعل درجة الحرارة إلى 28.5 درجة مئوية.
      ملاحظة: إزالة سخانات في بداية جلسة السلوك وإجراء تبادل المياه الكامل بعد يومين من الاستخدام.
2. إعداد التمييز
   1. لكل مهمة تمييز، ضع القطع الملونة بشكل فردي (بيج، أسود، أو أبيض) على الظهر الخارجي، الجانب، وأسفل غرف الاختيار باستخدام الفيلكرو(الشكل 1B-D).
      ملاحظة: يجب أن يكون الغرفة المركزية أي لون الخلفية المقترنة به.
3. كمكافأة، إنشاء مجموعة من الأنواع (الضحلة) عن طريق وضع 4 حمار وحشي الكبار، الذين لن تستخدم خلاف ذلك في الدراسة، في خزان صغير، واضحة في الزاوية الخلفية البعيدة من كل غرفة الاختيار (الشكل 1B-D).
   ملاحظة: اختر أسماك المياه الضحلة عشوائيا من خزانات المخزون كل يوم، مع ذكر واحد على الأقل وأنثى واحدة من نفس عمر وحجم الأسماك التجريبية في كل خزان ضحل.

3. المهام السلوكية

1. التأقلم
   ملاحظة: التأقلم مع غرفة السلوك يتكون من ثلاثة أيام من التدريب; يومين من التأقلم الجماعي يليه يوم واحد من التدريب الفردي.
2. التأقلم الجماعي
   1. إرفاق البيج (محايدة) شعرت الخلفية إلى الخارج من كل من مقصورات الاختيار، وغمر خزان المياه الضحلة الحية في كل من مقصورات الاختيار(الشكل 1B).
   2. أضف خمسة ستة حمار وحشي إلى غرفة البداية المركزية مع فتح كلا البابين المنزلقين ، والسماح للأسماك بالتجول بحرية لمدة 30 دقيقة.
      ملاحظة: يجب أن تكون سمكة الحمار الوحشي التجريبية قادرة على التفاعل والاختلاط مع هذه الأسماك الضحلة من خلال الخزان كمكافأة بعد العبور إلى مقصورة الاختيار أثناء التأقلم. وتعتبر سمكة قد دخلت واحدة من الغرف الجانبية عندما يدخل الجسم كله الغرفة.
   3. كرر هذا الإجراء مع نفس السمك التجريبي لليوم الثاني (2 أيام من التأقلم الجماعي).
      ملاحظة: لا تحتفظ بنفس المجموعات من الأسماك.
3. التأقلم الفردي
   1. إعداد الغرفة: إرفاق البيج (محايد) شعر الخلفية إلى الخارج من كل من مقصورات الاختيار، وغمر خزان المياه الضحلة الحية في كل من مقصورات الاختيار، كما هو الحال في التأقلم المجموعة(الشكل 1B، E).
      1. ضع سمكة حمار وحشي فردية في غرفة البداية المركزية لمدة دقيقتين مع إغلاق الأبواب المنزلقة ، وبعد فترة دقيقتين ، افتح كلا البابين في وقت واحد.
      2. تأكد من أن كل سمكة تسبح من الغرفة المركزية من خلال الباب لما مجموعه 10 مرات، بغض النظر عن أي جانب. مكافأة السمك في كل مرة يدخل واحدة من الغرف الجانبية (1 يوم من التأقلم الفردية).
         ملاحظة: إذا كانت السمكة غير قادرة على إكمال هذه المهمة 10 مرات في غضون فترة 30 دقيقة أو رفضت مغادرة غرفة البداية على الإطلاق، استبعدها من الدراسة.
   2. الحصول على البيانات: سجل عدد المرات التي تسبح فيها الأسماك في أي من الجانبين وإجمالي الوقت الذي يستغرقه إكمال المهمة.
4. اقتناء
   ملاحظة: بعد التأقلم، بدأت حمار وحشي مهمة اقتناء لمدة 3 أيام.
   1. إعداد الغرفة: إرفاق قطعة شعر بيضاء إلى خارج مقصورة اختيار واحد وقطعة شعر أسود إلى خارج مقصورة الاختيار الأخرى(الشكل 1C, F).
      ملاحظة: بديل لون الخلفية من كل جانب يوميا باستخدام جدول pseudorandom³⁷.
      1. طوال هذه المرحلة من التدريب، ضع مكافأة ضحلة فقط في واحدة من مقصورات الاختيار؛ هذا يصبح الجانب المكافأ.
      2. للبدء في الاستحواذ، ضع سمكة تجريبية واحدة في غرفة البداية لمدة دقيقتين مع إغلاق مقصورات الاختيار.
      3. بعد التأقلم لمدة دقيقتين، افتح كلا البابين في نفس الوقت، مما يتيح الوصول إلى مقصورتي الاختيار، وابدأ ساعة التوقيت لتقييم زمن الوصول الاختياري.
      4. باستخدام تصميم متحيز، قم بتعيين السمك عشوائيا إما تفضيلا أبيض أو أسود (أي إما W+/B- أو B+/W-)، مما يعني أن المياه الضحلة توضع إما في مقصورة الاختيار الأسود (B+) أو الأبيض (W+).
   2. دلالة على استجابة الاختيار
      1. بمجرد أن تقوم السمكة بالاختيار عن طريق دخول إحدى المقصورات الجانبية، أوقف المؤقت.
      2. إذا اختارت السمكة الجانب المفضل بشكل صحيح، أغلق الباب فورا بين الغرفة المركزية وذلك الجانب لتقييد السمكة إلى الجانب المفضل لمدة دقيقة واحدة، والسماح بمكافأتها بالتفاعل مع خزان المياه الضحلة (الشكل 1C، F). سجل هذه التجربة على أنها "C" ل "Correct" (مكافأة).
      3. إذا كانت الأسماك تسبح من خلال الباب غير صحيحة، ونقله مرة أخرى إلى الغرفة المركزية، وإغلاق كلا البابين، ويسجل المحاكمة باسم "أنا" ل "غير صحيحة" (غير مكافأة).
      4. إذا لم تتخذ السمكة قرارا في غضون دقيقتين بعد فتح الأبواب ، فانتقل بالسمكة إلى الجانب الصحيح لمدة دقيقة واحدة ، وسجل التجربة على أنها "M" ل "ملحوظ" (مكافأة بالقوة).
      5. عند نقل / نقل الأسماك مرة أخرى إلى غرفة البداية، وتوجيه بلطف الأسماك في الغرفة المركزية باستخدام شبكة السمك كأداة للرعاية.
         ملاحظة: لا تغرف السمكة من الماء وتستبدلها في غرفة البداية لأن هذا يمكن أن يؤثر على المقايسة السلوكية.
      6. بمجرد عودة السمك إلى الغرفة المركزية، انتظر لمدة دقيقة واحدة قبل أداء المهمة مرة أخرى. تأكد من أن كل سمكة تؤدي المهمة 8 مرات.
   3. الحصول على البيانات
      1. لكل سمكة تجريبية، سجل الوقت إلى القرار الأول (أو زمن الاختيار) والدرجات الفردية (C أو I أو M) لكل تجربة من تجارب الاستحواذ ال 8 (القسم 3.4.2) بالترتيب.
      2. تم الإبلاغ عن نتائج هذه التجارب كمتوسطات جماعية لكل تجربة في كل يوم استحواذ.
      3. بمجرد الانتهاء من تجربة السمك، تصنيفه إما كسمكة "عالية الأداء" أو سمكة "منخفضة الأداء".
         ملاحظة: اعتبرت السمكة "عالية الأداء" إذا نجحت في اختيار الجانب الصحيح من الخزان في 6 تجارب على الأقل من إجمالي التجارب ال 8 لهذا اليوم. وأي سمكة لا تستوفي هذا المعيار هي "منخفضة الأداء".
      4. بمجرد تحديدها، منزل عالية الأداء ومنخفضة الأداء الأسماك بشكل منفصل.
      5. تصنيف الأسماك على أنها "عالية" أو "منخفضة الأداء" في كل يوم من أيام الاستحواذ الثلاثة، بعد أن تنتهي الأسماك من التجارب.
         ملاحظة: في نهاية اليوم الثالث من اكتساب الأسماك تبقى إما "عالية" أو "منخفضة الأداء" طوال مدة الدراسة.
         ملاحظة: بعض الأسماك التي كانت في البداية في مجموعة "منخفضة الأداء" تعلم المهمة في يوم الاستحواذ 2 أو 3. وعندما يحدث ذلك، يمكن نقل الأسماك الأولية "منخفضة الأداء" إلى المجموعة "عالية الأداء". لا تنقل السمكة بين المجموعات بهذه الطريقة بعد اليوم الثالث (نهاية الاستحواذ).

4. العلاج التجريبي

1. بعد فترة الاستحواذ ، عندما تظهر الأسماك القدرة على حل مهمة تمييز بسيطة بين الخلفية البيضاء والسوداء ، ابدأ نظام علاج سمك الحمار الوحشي التجريبي.
   ملاحظة: لإظهار قابلية تطبيق هذه الطريقة، تظهر هذه الدراسة تصميمين تجريبيين:
   1. دراسة طولية
      1. إعادة الأسماك التجريبية إلى خزانات عقد لمدة 8 أسابيع. الحفاظ على الأسماك في خزانات قياسية مع تغييرات المياه اليومية، وإطعامهم مرتين يوميا.
         ملاحظة: لا تقم بإجراء أي تدريب سلوكي خلال هذه الأسابيع 8 في خزانات عقد.
      2. إجراء تقييم انعكاس بعد هذه الفترة لتقييم ما إذا كان الحمار الوحشي يمكن حل مهمة عكس بعد 8 أسابيع دون تدريب.
   2. فرط السكر في الدم: تعريض المجموعات التجريبية للمياه (التعامل مع السيطرة على الإجهاد)، مانيتول (1٪-3٪، والسيطرة التناضح)، أو الجلوكوز (1٪-3٪) لمدة 4 أو 8 أسابيع^22،23.
      ملاحظة: لا تقم بإجراء أي تدريب سلوكي خلال هذه الأسابيع 4 أو 8.

5. عكس

ملاحظة: بعد التلاعب التجريبي (كما هو الحال في القسم 4.2)، يتم اختبار الأسماك في الجزء الأخير من نموذج الاختيار من 3 غرف - عكس. للقيام بذلك ، يتم عكس الجانب المكافأ (مقارنة بالاستحواذ) بحيث يتم الآن مكافأة الأسماك التي كانت تكافأ سابقا مع المياه الضحلة على الجانب الأبيض مع المياه الضحلة على الجانب الأسود والعكس بالعكس. وبهذه الطريقة، يقيم الانعكاس ما إذا كانت الأسماك قد تعلمت مكان المكافأة (الضحلة)، بغض النظر عن لون الخلفية.

1. إعداد الغرفة
   1. إرفاق شعر أسود إلى الخارج من واحدة من غرف الاختيار وشعر الأبيض إلى الخارج من جهة أخرى، والتأكد من أن الجانبين الأسود والأبيض هي نفس الجوانب كما هو الحال في محاكمات الاستحواذ (القسم 3.4).
   2. غمر خزان المياه الضحلة في الزاوية الخلفية البعيدة من الجانب الذي هو عكس غرفة الاختيار مكافأة سابقا (الشكل 1D, G).
      ملاحظة: وبعبارة أخرى، الأسماك التي كانت تكافأ سابقا على الجانب الأبيض يكافأ الآن على الجانب الأسود والعكس بالعكس.
   3. اختبار الأسماك بشكل فردي كما هو الحال في القسم 3.5. ابدأ بوضع سمكة تجريبية واحدة في غرفة البداية لمدة دقيقتين، وإغلاق الوصول إلى مقصورات الاختيار.
   4. في وقت واحد فتح كلا الجانبين من الغرفة.
      ملاحظة: أكمل ما مجموعه 8 تجارب كل يوم لمدة ثلاثة أيام علاج متتالية.
2. دلالة على استجابة الاختيار
   1. إذا اختارت السمكة اللون المفضل بشكل صحيح، أغلق الباب مباشرة إلى الغرفة المركزية لمدة دقيقة واحدة، مما يسمح للأسماك بالتفاعل مع مكافأة المياه الضحلة. سجل هذه التجربة على أنها "C" ل "Correct" (مكافأة).
   2. إذا كانت الأسماك تسبح من خلال الباب غير صحيحة، ونقله مرة أخرى إلى الغرفة المركزية، وإغلاق كلا البابين، ويسجل هذه المحاكمة باسم "أنا" ل "غير صحيحة" (غير مكافأة).
   3. إذا لم تتخذ السمكة قرارا في غضون دقيقتين بعد فتح الأبواب ، فانتقل بالسمكة إلى الجانب الصحيح ، وسجل التجربة على أنها "M" ل "ملحوظ" (مكافأة بالقوة).
3. الحصول على البيانات
   1. لكل حمار وحشي تجريبي، سجل زمن الاختيار والنتائج الفردية (C، I، M)، بالترتيب، لكل تجربة.
   2. أبلغ عن نتائج هذه التجارب كمتوسطات جماعية لكل كتلة تجريبية في كل يوم من أيام الانعكاس ال 3.
   3. الاحتفاظ ببيانات الأسماك عالية الأداء ومنخفضة الأداء منفصلة لتحديد ما إذا كانت تعرض نفس مستوى الأداء أثناء الانعكاس كما كانت تفعل أثناء الاستحواذ.

Results

التأقلم مع غرفة السلوك ينطوي على ثلاثة أيام من التدريب: 2 أيام من التأقلم الجماعي تليها 1 يوم من التأقلم الفردي. ومع ذلك ، لأننا لم نتمكن من التمييز بين سمك الحمار الوحشي الفردي عن بعضنا البعض ، تمكنا فقط من جمع البيانات أثناء التأقلم الفردي. في هذا الوقت، أخذت الحيوانات التجريبية (ن = 30)، مشروطة باستخدام مكافأة المياه الضحلة، في المتوسط 125.11 ق للوصول إلى قرارهم الأول(الشكل 2A)ومتوسط 725.34 s (12 دقيقة) لإكمال مهمة التأقلم الفردية بأكملها(الشكل 2B). لم يكن هن...

Discussion

على الرغم من أن هناك نموا هائلا في كمية ومتنوعة من البحوث في علم الأعصاب التي أجريت باستخدام حمار وحشي في السنوات ال 15 الماضية²⁴، لا توجد المقايسات السلوكية في هذا النوع مقارنة مع أنظمة نموذج الثدييات^11،25،26. هنا، نظهر أن مهمة اختيار من ثلاث غرف وضعت للاستخدام مع القوارض يمكن تكييفها لتقييم اكتساب وعكس التعلم التمييز البصري في حمار وحشي. باستخدام المياه الضحلة الحية كمكافأة ، قدمت هذه المهمة فحصا قويا ي...

Materials

List of materials used in this article

Name	Company	Catalog Number	Comments
طقم مؤقت ساعة توقيت Champion Sports: ساعات توقيت رياضية على مدار الساعة الرقمية المقاومة للماء مع شاشة كبيرة للأطفال أو المدرب - ألوان زاهية 6 عبوات	Amazon	N / A	https://www.amazon.com/Champion-Sports-910SET-Stopwatch-Timer/dp/B001CD9LJK/ref=sr_1_17?dchild=1&keywords=stopwatch+for+sports&qid=1597081570&sr=8-17 يوصي باثنين من ألوان مختلفة ؛ واحد لزمن انتقال الاختيار والآخر للوقت اللازم للانتهاء
مشابك رابطة كبيرة جدا Coofficer مقاس 2 بوصة (24 عبوة) ، مشابك ورقية كبيرة لللوازم المكتبية ، أسود	أمازون	غير	متاحhttps://www.amazon.com/Coofficer-Binder-2-Inch-Clamps-Supplies/dp/B07C94YCR5/ref=sr_1_3_sspa?dchild=1&keywords=large+binder+clips&qid=1597081521&sr=8-3-spons&psc=1&spLa=ZW5jcnlwdGVkUXVhbGlmaWVyPUExUENWUTRZVjlIWEVPJmVuY3J5cHRlZElkPUEwNDQ5NDU0MlpSREkwTFlLSThVQiZlbmNyeXB0ZWRBZElkPUEwMTg5NDI3MllRV1EzOUdWTVpSOCZ3aWRnZXROYW1lPXNwX2F0ZiZhY3Rpb249Y2xpY2tSZWRpcmVjdCZkb05vdExvZ0NsaWNrPXRydWU=
Marineland® سيليكون حوض السمك مانع التسرب	Petsmart	البند # 2431002
PVC (البولي فينيل كلوريد) ورقة ، رمادي غير شفاف ، التسامح القياسي ، UL 94 / ASTM D1784 ، سمك 0.125 بوصة ، عرض 12 بوصة ، طول 24 بوصة	أمازون	N	/ A https://www.amazon.com/Polyvinyl-Chloride-Standard-Tolerance-Thickness/dp/B000MAMGEQ/ref=sr_1_2?dchild=1&keywords=grey+PVC+sheet&qid=1597081440&sr=8-2
أعمال الصلب  1/4 بوصة عرض × 8 قدم L مطحنة منتهية من الألومنيوم قابل للحام تقليم قناة على شكل حرف U	البند	#55979Model # 11377	https://www.lowes.com/pd/Steelworks-1-4-in-W-x-8-ft-L-Mill-Finished-Aluminum-Weldable-Trim-Channel/3058181
Tetra 10 جالون حوض أسماك	Petsmart	البند #5271256
أعلى زعنفة شبكة السمك شبكة غرامة (3 بوصة)	Petsmart	البند #5175115