يتطلب اشتراك JoVE لعرض هذا المحتوى. تسجيل الدخول أو ابدأ نسخة تجريبية مجانية

مقالة منهجية

البذر الخلايا Stepwise على السقالات تيسلاتيد لدراسة الأوعية الدموية تنبت

3.2K مشاهدة

⸱

DOI:

10.3791/61995

⸱

يناير 14, 2021

في هذه المقالة

ملخص

تعتمد الأنسجة المهندسة بشكل كبير على شبكات الأوعية الدموية المناسبة لتوفير العناصر الغذائية والغازات الحيوية وإزالة النفايات الأيضية. في هذا العمل، يخلق بروتوكول البذر التدريجي للخلايا البطانية وخلايا الدعم شبكات الأوعية الدموية عالية التنظيم في منصة عالية الإنتاجية لدراسة تطوير سلوك الأوعية في بيئة ثلاثية الأبعاد خاضعة للرقابة.

الملخص

نظام القلب والأوعية الدموية هو لاعب رئيسي في فسيولوجيا الإنسان، وتوفير الغذاء لمعظم الأنسجة في الجسم. الأوعية موجودة في أحجام مختلفة، والهياكل، والأنماط الظاهرية، والأداء اعتمادا على كل نسيج معين perfused. يعتمد مجال هندسة الأنسجة، الذي يهدف إلى إصلاح أو استبدال أنسجة الجسم التالفة أو المفقودة، على تكوين الأوعية الدموية الخاضع للرقابة لخلق الأوعية الدموية المناسبة داخل الأنسجة المهندسة. بدون نظام الأوعية الدموية ، لا يمكن تغذية البنى الهندسية السميكة بما فيه الكفاية ، مما قد يؤدي إلى موت الخلايا ، وسوء الحرمان ، والفشل في نهاية المطاف. وبالتالي ، فإن فهم ومراقبة سلوك الأوعية الدموية المهندسة هو تحد بارز في هذا المجال. يقدم هذا العمل نظام إنتاجية عالية يسمح بإنشاء شبكات سفن منظمة وقابلة للتكرار لدراسة سلوك السفن في بيئة سقالة ثلاثية الأبعاد. يظهر بروتوكول البذر هذا ذو الخطوتين أن الأوعية داخل النظام تتفاعل مع تضاريس السقالة ، وتقدم سلوكيات مميزة تنبت اعتمادا على هندسة المقصورة التي تتواجد فيها السفن. يمكن تطبيق النتائج التي تم الحصول عليها وفهم من هذا النظام الإنتاجي العالي من أجل إبلاغ تصاميم بناء سقالة ثلاثية الأبعاد ذات طباعة بيولوجية أفضل ، حيث لا يمكن تقييم تصنيع مختلف الأشكال الهندسية ثلاثية الأبعاد بسرعة عند استخدام الطباعة ثلاثية الأبعاد كأساس للبيئات البيولوجية الخلوية. وعلاوة على ذلك، يمكن استخدام الفهم من هذا النظام الإنتاجي العالي لتحسين الفحص السريع للأدوية، والتطور السريع لنماذج الثقافات المشتركة، والتحقيق في المحفزات الميكانيكية على تكوين الأوعية الدموية لتعميق المعرفة بنظام الأوعية الدموية.

المقدمة

مجال هندسة الأنسجة يتقدم بسرعة نحو تصنيع البنى الهندسية لتحل محل الأعضاء والأنسجة المفقودة أو التالفة1. ومع ذلك، لم يتم بعد تحقيق البنى الوظيفية بالكامل، جزئيا، لأن إنشاء شبكات الأوعية الدموية التشغيلية لتغذية الأنسجة لا يزال تحديا بارزا. دون الأوعية الدموية المناسبة، تقتصر الأنسجة المهندسة على نقل الانتشار السلبي للأوكسجين والمواد المغذية، وتقييد سمك الأنسجة قابلة للحياة القصوى إلى حد الانتشار، ما يقرب من 200 ميكرومتر2. هذه السماكة ليست مناسبة لإصلاح عيوب الأنسجة الكبيرة أو لتصنيع الأعضاء الكاملة ، مما يجعل وجود شبكة الأوعية الدموية الوظيفية سمة إلزامية للأنسجة الوظيفية والغرسة3.

ي....

الوصول مقيد. يرجى تسجيل الدخول أو بدء فترة تجريبية لعرض هذا المحتوى.

البروتوكول

1. تيسلاتيد تصنيع السقالة

ملاحظة: التصوير الضوئي تقنية واسعة الانتشار تتطلب معدات متخصصة تقع عادة داخل منشأة/مختبر لتصنيع النانو. وقد تم تعميم الطريقة المنصوص عليها في هذا البروتوكول قدر الإمكان للجمهور؛ ومع ذلك، قد تكون هناك ضرورة لتغييرات طفيفة في الإجراءات اعتمادا على المعدات المتاحة للقارئ. نوصي بإجراء هذه الإجراءات في غرفة نظيفة في منشأة تصنيع النانو لضمان أعلى جودة عملية. قبل البدء، احصل على إمكانية الوصول إلى جهاز محاذاة القناع (أو بعض أجهزة إعداد التعرض للأشعة فوق البنفسجية)، ومعطف الدوران، والصحون الساخنة، ومحطة غسيل المذيبات، وقناع ضوئي، ومنظف البلازما. المذيبات والمواد الكيميائية المستخدمة في الإجراء هي خطرة، لذا يرجى اتخاذ أقصى در....

الوصول مقيد. يرجى تسجيل الدخول أو بدء فترة تجريبية لعرض هذا المحتوى.

النتائج

البروتوكول المقدم، وذلك باستخدام تقنيات التصوير المجسم، يسمح لتصنيع السقالات تيسلاتيد مصنوعة من SU-8 الضوئي. تم الحصول على السقالات مع هندسات مقصورة متميزة (المربعات ، السداسي ، والدوائر) ، وميزات دقيقة للغاية وقابلة للتكرار(الشكل 1).

figure-results-1
الشكل 1:صور المجهرالإلكتروني المسح التمثيلي .......

الوصول مقيد. يرجى تسجيل الدخول أو بدء فترة تجريبية لعرض هذا المحتوى.

المناقشة

الحاجة إلى الأوعية الدموية الغنية داخل جزءا لا يتجزأ من الأنسجة المهندسة أمر بالغ الأهمية لبناء البقاء على قيد الحياة والوظيفة المناسبة1. على الرغم من أن هندسة نظام الأوعية الدموية كانت محور كمية كبيرة من البحوث ، إلا أنه لم يتبق الكثير للتحقيق وفهم24. على وجه الخصوص ، عند إعادة إنشاء نسيج معين ، يجب أن تتصرف الميكروسكولاتور وتنظم وفقالذلك 12. النهج الأكثر شيوعا لتوليد microvessels هو المشاركة في البذر البطانية ودعم الخلايا داخل بيئة 3D مناسبة متوافق.......

الوصول مقيد. يرجى تسجيل الدخول أو بدء فترة تجريبية لعرض هذا المحتوى.

الإفصاحات

وليس لدى صاحبي البلاغ ما يكشفان عنه.

شكر وتقدير

تم دعم هذا البحث بتمويل من جامعة ميشيغان - الشراكة الإسرائيلية للبحوث. ويود المؤلفون أن يشكروا أوري ميردلر وليور ديبي وغاليا بن ديفيد على مساعدتهم ودعمهم الكبيرين، ونادين وانغ، والدكتوراه، وبيلار هيريرا - فييرو، والدكتوراه في مرفق لوري للإنشاءات النانوية في جامعة ميشيغان، وكذلك لويس سولوريو، دكتوراه في المناقشات المستنيرة لتقنيات التصوير الضوئي.

....

الوصول مقيد. يرجى تسجيل الدخول أو بدء فترة تجريبية لعرض هذا المحتوى.

المواد

قائمة المواد المستخدمة في هذه المقالة
الاسمالشركةرقم فهرسيالتعليقات
تنزيل برنامج Angiotool المجانيNIH-CCRمجانا في https://ccrod.cancer.gov/confluence/display/ROB2/Home
مصل ألبومين البقر ProbuminMillipore82-045-1
الخلايا الجذعية لب الأسنانLonzaPT-5025
ECM media + طقم رصاصةSciencell# 1001
الإيثانول 96٪مجموعة Gadot-Group64-17-5
مانع التسرب الفيبرين EvicelJohnson& جونسونEVB05ILيوفر كلا من حلول الثرومبين والفيبرينوجين (BAC2)
جلوتاماكسجيبكو35050061
الماعز المضاد للفأر Cy3 الجسم المضادجاكسون115-166-072
الماعز المضاد للأرانب Alexa-Fluor 488Thermo- Fisher ScientificA11034
خلايا الأوعية الدموية الدقيقة الدهنية البشريةSciencell# 7200
Human فيبرونيكتينسيجماF0895-5MGتركيز المخزون: 1 مجم / مل
ImageJللمعاهد الوطنية للصحةفي https://imagej.nih.gov/ij/download.html
كحول الأيزوبروبيلGadot-Group67-63-0
كاشف الإقلاعKayaku Advanced Materials، IncG112850الاسم التجاري Omnicoat
منخفض الجلوكوز DMEMالصناعاتالبيولوجية01-050-1A
الفأر المضاد للجسم المضاد SMADakoM0851
NEAAGibco11140068
محلول بارافورمالديهايد 4٪ في PBSChemCruzSC-281692
Penicillin-Streptomycin-Nystatin Solutionالصناعات البيولوجية03-032-1B
محلول ملحي مخزن بالفوسبات (PBS)SigmaP5368-10PAK
الأرانب المضادة للجسم المضاد ل vWFAbcamab9378
رقاقة السيليكونوادي السيليكون للإلكترونيات الدقيقة (SVM)رقائق 4 "، نوع N-1-10 ، 500-550 ميكرون
SU-8 2050 مقاوم للضوءKayaku Advanced Materials، IncY11058
SU-8 المطورKayaku Advanced Materials، IncY020100
Tryton-X 100BioLab LTD57836
تحميل مجاني

المراجع

  1. Novosel, E. C., Kleinhans, C., Kluger, P. J. Vascularization is the key challenge in tissue engineering. Advanced Drug Delivery Reviews. 63 (4), 300-311 (2011).
  2. Landau, S., Guo, S., Levenberg, S. Localization of Engineered Vasculature within ....

الوصول مقيد. يرجى تسجيل الدخول أو بدء فترة تجريبية لعرض هذا المحتوى.

إعادة الطباعة والأذونات

الوسوم

تكوين الشبكة الوعائيةالخلايا البطانيةالمجهر البؤريطلاء الفيبرونيكتينالمقاوم الضوئي SU-8نضج الأوعيةالخلايا الداعمة