عزل وتمايز الخلايا التمهيدية الأولية البيضاء والبنية من الفئران حديثي الولادة

Andrea Galmozzi; Bernard P. Kok; Enrique Saez

doi:10.3791/62005

يتطلب اشتراك JoVE لعرض هذا المحتوى. تسجيل الدخول أو ابدأ نسخة تجريبية مجانية

مقالة منهجية

عزل وتمايز الخلايا التمهيدية الأولية البيضاء والبنية من الفئران حديثي الولادة

16.2K مشاهدة

⸱

DOI:

10.3791/62005

⸱

يناير 25, 2021

Andrea Galmozzi¹^,² , Bernard P. Kok¹ , Enrique Saez¹

¹Department of Molecular Medicine, The Scripps Research Institute, La Jolla, CA, USA, ²Department of Medicine, University of Wisconsin-Madison, School of Medicine and Public Health, Madison, WI, USA

في هذه المقالة

ملخص

يصف هذا التقرير بروتوكولا للعزل المتزامن للخلايا الأولية قبل الخلايا البنية والبيضاء من الفئران حديثي الولادة. يمكن زراعة الخلايا المعزولة في الثقافة وتحث على التفريق إلى خلايا بيضاء وبنية ناضجة تماما. تمكن هذه الطريقة من التوصيف الوراثي والجزيئي والوظيفي للخلايا الدهنية الأولية في الثقافة.

الملخص

وقد استفاد فهم الآليات الكامنة وراء التمايز adipocyte ووظيفة إلى حد كبير من استخدام خطوط خلايا preadipocyte البيضاء الخالدة. هذه خطوط الخلية المثقفة، ومع ذلك، لديها قيود. وهي لا تلتقط بشكل كامل الطيف الوظيفي المتنوع للسكان الخلايا الدهنية غير المتجانسة التي من المعروف الآن أن تكون موجودة داخل المستودعات الدهنية البيضاء. لتوفير نموذج أكثر أهمية من الناحية الفسيولوجية لدراسة تعقيد الأنسجة الدهنية البيضاء ، تم تطوير بروتوكول وتحسينه لتمكين العزل المتزامن لذريات الخلايا الدهنية البيضاء والبنية الأولية من الفئران حديثي الولادة ، وتوسعها السريع في الثقافة ، وتمايزها في المختبر إلى خلايا شحمية ناضجة تعمل بكامل طاقتها. الميزة الأساسية لعزل الخلايا الأولية عن الفئران الوليدة ، بدلا من الفئران البالغة ، هي أن المستودعات الدهنية تتطور بنشاط ، وبالتالي فهي مصدر غني للخلايا المسبقة التكاثر. تفرق الخلايا الأولية السابقة للبديهة المعزولة باستخدام هذا البروتوكول بسرعة عند الوصول إلى التقاء وتصبح ناضجة تماما في 4-5 أيام ، وهي نافذة زمنية تعكس بدقة مظهر منصات الدهون المتقدمة في الفئران حديثي الولادة. ويمكن توسيع الثقافات الأولية المعدة باستخدام هذه الاستراتيجية ودراسة مع استنساخ عالية، مما يجعلها مناسبة للشاشات الوراثية والفينوتيبيك وتمكين دراسة الأنماط الظاهرية للخلايا الدهنية المستقلة من نماذج الماوس الوراثية. يقدم هذا البروتوكول نهجا بسيطا وسريعا وغير مكلف لدراسة تعقيد الأنسجة الدهنية في المختبر.

المقدمة

السمنة تنتج عن اختلال مزمن بين استهلاك الطاقة والإنفاق على الطاقة. مع تطور السمنة ، تخضع الخلايا الدهنية البيضاء لتوسع هائل في حجم الخلية يؤدي إلى نقص الأكسيجة في البيئة الدقيقة ، وموت الخلايا ، والالتهاب ، ومقاومة الأنسولين¹. مختلة, الخلايا الدهنية hypertrophied لا يمكن تخزين الدهون الزائدة بشكل صحيح, التي تتراكم بدلا من ذلك في الأنسجة الأخرى حيث أنها تضعف عمل الأنسولين²^,³. من المتوقع أن تكون العوامل التي تحسن وظيفة الخلايا الدهنية وتعيد تقسيم الدهون الطبيعي بين الأنسجة مفيدة لعلاج الحالات المرتبطة بالسمنة التي تتميز بمقاومة الأنسولين مثل داء السكري من النوع 2. وقد أثبتت الشاشات Phenot....