هنا ، يتم وصف زرع تقويم العظام السينغي يليه إجراء بتر لساركوما العظام مع الانبثاث الرئوي التلقائي الذي يمكن استخدامه للتحقيق قبل السريري لبيولوجيا الانبثاث وتطوير علاجات جديدة.
يتطلب اشتراك JoVE لعرض هذا المحتوى. تسجيل الدخول أو ابدأ نسخة تجريبية مجانية
مقالة منهجية
A Syngeneic العظام العظام سبراغ داولي نموذج الفئران مع بتر للسيطرة على معدل الانبثاث
في هذه المقالة
ملخص
الملخص
أحدث تقدم في علاج الساركوما العظمية (OS) حدث في 1980s عندما ثبت العلاج الكيميائي متعدد الوكلاء لتحسين البقاء على قيد الحياة عموما بالمقارنة مع الجراحة وحدها. ولمعالجة هذه المشكلة، تهدف الدراسة إلى تحسين نموذج أقل شهرة لنظام التشغيل في الفئران باستخدام نهج شامل في الهسولوجيا والتصوير والبيولوجيا والزرع والبتر يطيل أمد البقاء على قيد الحياة. استخدمنا مناعة، تفوق سبراغ دولي (SD)، نموذج الفئران السينجينية مع زرع UMR106 OS خط الخلية (التي تنشأ من الفئران SD) مع زرع الورم الظنبوبي التقويمي في الفئران الذكور والإناث 3 أسابيع لنموذج نظام التشغيل للأطفال. وجدنا أن الفئران تتطور الأورام الرئوية الأولية والنقية القابلة للاستنساخ، وأن بتر الأطراف في 3 أسابيع بعد الزرع يقلل بشكل كبير من حدوث الانبثاث الرئوي ويمنع الوفيات غير المتوقعة. من الناحية النسيجية ، كانت OSs الأولية والمنقوتة في الفئران مشابهة جدا لنظام التشغيل البشري. مسح التعبير البروتيني لخلايا نظام التشغيل يكشف أن هذه الأورام تعبر عن kinases الأسرة ErbB. وبما أن هذه kinases هي أيضا أعرب للغاية في معظم منظمة الدول الأمريكية الإنسان، يمكن استخدام هذا النموذج الفئران لاختبار مثبطات مسار ErbB للعلاج.
المقدمة
أوستيوساركوما (OS) هو ورم العظام الأساسي الأكثر شيوعا في الأطفال والمراهقين والشباب. أحدث تقدم في علاج نظام التشغيل حدث في 1980s عندما تبين العلاج الكيميائي متعدد الوكلاء لتحسين البقاء على قيد الحياة عموما مقارنة مع الجراحة وحدها1. يتطور نظام التشغيل أثناء النمو السريع للعظام ، وعادة ما يحدث في العظام الأنبوبية الطويلة مثل عظم الفخذ والساق وعظم العضد. وهي تتميز بمظهر أوستيوليك، أو أوستيوبلاستيك، أو مختلط مع رد فعل ملحوظ من قبل الخلايا القيطية2. العلاج الكيميائي واستئصال الجراحية يمكن أن تحسن النتيجة للمرضى الذين يعانون من البقاء على قيد الحياة لمدة 5 سنوات ل 65٪ من المرضى2،3. لسوء الحظ، مرضى نظام التشغيل عالية الجودة مع مرض النقيلي لديهم البقاء على قيد الحياة 20٪. نظام التشغيل يغزو إقليميا وينتشر في المقام الأول إلى الرئتين أو العظام الأخرى وأكثر انتشارا في الذكور. الحاجة الأكثر إلحاحا لهؤلاء المرضى الصغار هو العلاج الجديد الذي يمنع ويزيل صلاحية الانبثاث البعيدة.
وقد استعرضت نماذج نظام التشغيل ما قبلالسريرية 4,5,6,7 وعدد قليل من النماذج المتاحة المناعية باستخدام بتر نظام التشغيل التقويمي وقد وضعت. في عام 2000، تم تطوير نموذج مهم باستخدام BALB / ج الفئران مع نظام التشغيل السنجني تقويم العظام وبتر8. بالمقارنة مع هذا النموذج الماوس، ويستند نموذج الفئران على الحيوانات الأصيلة وراثيا وأكبر 10 مرات مما يؤدي إلى بعض المزايا. تم تطوير نموذج UMR106 الفئران من نظام التشغيل المستحث 32P في الفئران داولي سبراغ (SD) ، والتي اشتقت إلى خط الخلية9. في عام 2001 ، تم وصف زرع تقويم العظام من UMR106-01 لأول مرة في الساق المزروعة من الفئران اللاهية مع تطور الورم الأولي السريع والمتسق والسمات الإشعاعية والهصلة المشتركة مع نظام التشغيل في البشر. تطورت الانبثاث الرئوي وكانت تعتمد على وضع تقويم العظام من UMR106 في البيئة الدقيقة العظام10. في عام 2009،أنشأ Yu وآخرون. كانت عمليات زرع الورم الناجحة ومعدل الانبثاث الرئوي في الفئران دون بتر مماثلة للبيانات المعروضة هنا. في هذه الدراسة، تم إجراء بتر إضافي للنموذج باستخدام الفئران الصغيرة، مما يشير إلى أن توقيت إزالة الورم الأولي أمر بالغ الأهمية في نمذجة نظام التشغيل، وخاصة فيما يتعلق بالتقدم النقيلي. مع هذا الصقل، وبتر والتصوير في الجسم الحي تحسين هذا النموذج للدراسات ما قبل السريرية لتقييم المخدرات رواية لنظام التشغيل.
الوصول مقيد. يرجى تسجيل الدخول أو بدء فترة تجريبية لعرض هذا المحتوى.
البروتوكول
تم تنفيذ جميع الإجراءات والتجارب التي شملت الفئران وفقا للبروتوكولات التي وافقت عليها لجنة جونز هوبكنز لرعاية الحيوانات واستخدامها.
1. SD الفئران OS خط الخلية UMR-106 بروتوكول ثقافة الخلية
- تنمو الخلايا في DMEM، تكمل مع 10٪ (v/v) FBS، البنسلين (10 U/mL)-streptomycin (10 U/mL) في 37 درجة مئوية في الغلاف الجوي CO2 الرطوبة 5٪. إجراء التجارب باستخدام خلايا مع مقاطع من 2-812.
2. الحقن داخل الخلايا بروتوكول نظام التشغيل
ملاحظة: الفئران SD الحوامل تزاوج الوقت تلد في منشأة الحيوان وفي 3 أسابيع من العمر، وتستخدم القمامة (منذ UMR 106 خط الخلية هو syngeneic للفئران SD، ليست هناك حاجة إلى التشعيع).
- التعريفي
- ضع الجرذ في غرفة تعريف متوسطة الحجم واحفز التخدير مع isoflurane 2٪-3٪. مراقبة الحيوان باستمرار لعمق التخدير عن طريق رد الفعل لقرصة إصبع القدم، ومعدل التنفس، والحرف.
- أدخل الأنف في الأنف. آمنة مع الشريط، إذا لزم الأمر.
- إزالة الشعر على الساق اليمنى حتى البطن وأسفل البطن الظهري مع المقصات أو استخدام عامل إزالة الشعر. ضع الجرذ في وضع ية
- فرك المنطقة الجراحية بشكل مطهر باستخدام الإيثانول 70٪ وتمييع خلات الكلورهيكسيدين أو بتادين المخفف. تبدأ حول منطقة الركبة وفرك في حركة دائرية على حد سواء بشكل تقريبي وdistally. كرر هذه الخطوة ثلاث مرات. لا يتم استخدام ستارة لزرع الورم.
- تطبيق زيوت التشحيم العين في كل من عيون الفئران لمنع الجفاف القرنية الناجمة عن التخدير. ضع الجرذ على وسادة تسخين منخفضة الحرارة. تأكد من أن الجرذ لديه درجة حرارة الجسم العادية (37 درجة مئوية) ومعدل التنفس الطبيعي.
- جراحة
- بدوره على ايزوفلوران في ~ 1.5 ٪ - 2 ٪ (للصيانة). تأكد من أن الحيوان في مستوى كاف من التخدير عن طريق عدم وجود منعكس إصبع القدم قرصة. إذا لم يكن كذلك، زيادة نسبة isoflurane إلى 2.5٪.
- وضع علامة على إبرة معقمة (حوالي 22 غرام) في 10 ملم من طرف لتوجيه العمق لإدراج.
- أدخل الإبرة 10 ملم لأسفل في الغشاء الحاجز للظنبوب عن طريق إدخال الركبة المنحنية في منتصف الهضبة الظنبوبية ، وتمديد الإبرة من خلال الميتافيزيقي إلى الانبثاث باستخدام حركة خفيفة تشبه الحفر لإجراء فتحة. أزل الإبرة.
- تحميل تعليق الخلية في حقنة هاملتون مباشرة قبل الحقن في الساق. للقيام بذلك، اخلطي الخلايا برفق قبل الرسم في حقنة حيث أن الجاذبية تجعل الخلايا تستقر في الجزء السفلي من الأنبوب.
ملاحظة: يمكن تخزين الخلايا في أنبوب 1.5 إلى 2 مل (في درجة حرارة الغرفة) قبل الرسم في حقنة هاملتون (100 ميكرولتر) بعد الخلط الدقيق. يمكن الاحتفاظ بالخلايا في درجة حرارة الغرفة لمدة 2-3 ساعات أثناء إجراء الزرع. تحقق دائما من صلاحية الخلية للخلايا في الأنبوب قبل وبعد جلسة الزرع. استبعاد تريبان الأزرق هو أسهل طريقة لتقييم صلاحية الخلية. - بمجرد اجتياز العظم بالإبرة الأولى، أدخل إبرة ثانية (أصغر قطرا تم وضع علامة عليها أيضا عند 10 مم) إبرة متصلة بحقنة هاملتون 100 ميكرولتر المحملة بالخلايا. تأكد من إدخال الإبرة حتى علامة 10 مم في نفس الثقب الممتد إلى الانقباض.
- تصريف بلطف 20 ميكرولتر من 75،000 تعليق خلايا نظام التشغيل في برنامج تلفزيوني في تجويف الديافيزياء والنخاع.
ملاحظة: يجب أن لا تمايل الإبرة في العظام ويجب أن تشعر بالأمان. إذا تحركت الإبرة بسهولة، قد تكون القشرة قد اجتازت في الديافيس. كرر الإدخال مرة أخرى للحصول على موضع أكثر حزما قبل حقن الخلايا. - أزل إبرة هاملتون من العظم.
ملاحظة: إذا كان قطرة صغيرة من أشكال الدم، وتطبيق ضغط الضوء. إذا كانت أشكال انخفاض السوائل واضحة في موقع ثقب, الإبرة قد لا يكون تم تمديدها بعيدا بما فيه الكفاية في العظام وتعليق الخلايا السرطانية قد تسربت مرة أخرى من خلال ثقب. سجل هذا في الملاحظات ولكن عموما، زرع الورم سوف تكون ناجحة. مع الخبرة، يجب أن يستغرق إجراء زرع الورم 5 دقائق لكل فأر. مع الخبرة، وزرع الورم من الخلايا في العظام تصبح أسهل. الحقن العرضي للخلايا في العضلات حول العظام، قد لا يؤدي إلى البيئة الدقيقة الورم اللازمة للانبثاث الرئوي.
- الانتعاش
- تأكد من أن الجرذ هو ذرة. ضع الجرذ في قفص مع وسادة التدفئة وضعت تحت القفص للتعافي.
- بعد أن يستيقظ تماما, المحمول, والتنفس بشكل جيد, حقن الفئران مع البوبرينورفين (1.0-1.2 ملغ / كغ SC).
ملاحظة: للوصول إلى Buprenorphine، تحقق مع المؤسسة لمعرفة خيارات للموافقة من خلال الموظفين البيطريين لوضع النظام. - نقل الفئران مرة أخرى لتنظيف الأقفاص ورصد مرة واحدة في اليوم، كل أسبوع.
3. القياس والرصد
- قياس حجم الورم 9-10 أيام بعد الزرع ومن ثم كل 2 أيام حتى 3 أسابيع بعد زرع لتحديد معدل النمو. قياس القطر الأقصى للتيبيا باستخدام الفرجار الإلكترونية أو اليدوية. قم بتخزين البيانات في جدول بيانات مع صيغة لحساب حجم الورم. قياس الكونترالاتال (لا زرع الساق) كخط الأساس.
ملاحظة: يتم استخدام أقطار الأطراف الخلفية المزروعة كبديل لحجم الورم. يتم قياس الأطراف الخلفية عموديا على محور الساق الطويل في أكبر قطر لقياسين، البطني / الظهري والوسائط / الجانبي على الطرف. يتم حساب حجم الورم المقدر من خلال الصيغة11: حجم الورم (مم3)= أكبر قطر (مم) × أصغر قطر (مم)2/2. - النظر في الفئران لبتر البقاء على قيد الحياة أو العلاج الكيميائي عندما تقترب الأورام 15 ملم في البعد الأكبر أو 3 أسابيع بعد زرع الورم. يبلغ طول الطرف المقابل حوالي 7-9 مم في معظم الفئران في هذا العمر.
4. دوكسوروبيسين عن طريق الوريد
- تخدير الفئران مع 2٪ isoflurane. إعداد الجلد على الوريد الوداجي مع ثلاثة يغسل الجراحية باستخدام بيتادين والكحول كما هو موضح13.
- تحت تشريح دقيق، تصور الوريد الوداجي الأيمن أو الأيسر. أدخل الإبرة في العضلة المغطية ثم توجه نحو رأس الجرذ في تجويف الوريد الوداجي كما هو متصور في الوريد الوداجي الأمامي إلى عضلة الصدر.
- عندما يتم إدخال الإبرة في الوريد الوداجي، ارسم الدم برفق في الحقنة لضمان الإدراج السليم. من الممكن الاعتقاد بأن الإبرة هي من خلال الوريد ، ولكن الإبرة تحت الوريد وليس في التجويف. إذا أصبح الوريد الوداجي صغيرا جدا للحقن عند التشريح الحاد لفضح الوريد الوداجي، فاستخدم الوريد الوداجي الآخر للحقن.
- حقن الدوكسوروبيسين (2 ملغم/كغ) ببطء أكثر من دقيقة واحدة في حجم 100-150 ميكرولتر. يمكن تصور المحلول عن طريق الوريد في الوريد الوداجي أثناء الولادة.
- حقن كميات مماثلة من المالحة العادية في الفئران السيطرة.
- إزالة الإبرة وتطبيق ضغط لطيف على الوريد مع شاش معقم.
- أغلق شق الجلد باستخدام مقاطع الجرح 3-4. إزالة مقاطع في 7-10 أيام بعد الحقن.
ملاحظة: الفئران لا تحاول عادة لإزالة مقاطع معدنية ولكن سوف لدغة وإزالة الغرز. طريقة الحقن الوداجي هو أفضل لحقن الوريد الذيل للدوكسوروبيسين لأن أي دواء أن تسرب خارج السفينة يسبب نخر الذيل التي قد تتطلب بتر الذيل.
5. بروتوكول بتر الأطراف الخلفية
- التعريفي
- ضع الجرذ في غرفة تعريف متوسطة الحجم واحفز التخدير مع isoflurane 2٪-4٪. مراقبة الفئران باستمرار لعمق التخدير.
ملاحظة: يتم مسح غرفة التعريفي إلى عبوة الفحم ويتم إزالة أي غازات أخرى بواسطة طاولة أسفل المسودة المستخدمة للجراحة. - أدخل الأنف في الأنف. آمنة مع الشريط، إذا لزم الأمر.
ملاحظة: يتم هذا الإجراء على جدول مسودة لأسفل لمسح الغازات المتطايرة الزائدة (أي isoflurane). - إزالة الشعر على الساق اليمنى حتى البطن وأسفل البطن الظهري مع المقصات أو استخدام عامل إزالة الشعر. ضع الجرذ في وضع ية
- فرك المنطقة الجراحية بشكل مطهر باستخدام الإيثانول 70٪ وتمييع خلات الكلورهيكسيدين أو بتادين المخفف. إعداد الجلد لعملية جراحية من منتصف العجل إلى منطقة الجلد فقط فوق مفصل الورك من أسفل البطن الأيمن. فرك الساق القريبة ومنطقة البعيدة محيط. كرر هذه الخطوة ثلاث مرات.
- تطبيق مواد التشحيم العين في كل من عيون الفئران. تأكد من أن الجرذ لديه درجة حرارة الجسم العادية (37 درجة مئوية) وعلامات حيوية طبيعية. مراقبة وتنظيم درجة حرارة الجسم باستخدام وسادة التدفئة التي ترتبط إلى مراقبة مسبار درجة حرارة المستقيم.
- ضع الجرذ في غرفة تعريف متوسطة الحجم واحفز التخدير مع isoflurane 2٪-4٪. مراقبة الفئران باستمرار لعمق التخدير.
- جراحة
- بدوره على ايزوفلوران في 1.5٪ -3٪ (الصيانة). رصد لعمق مخدر، بما في ذلك رد فعل لقرصة إصبع القدم، ومعدل التنفس، والحرف. ضبط معدل isoflurane حسب الحاجة للحفاظ على مستوى مناسب من التخدير.
ملاحظة: يجب أن يتراوح معدل التنفس أثناء التخدير بين 50-100 نفس في الدقيقة. الأنفاس العميقة والنادرة هي مؤشر على أن الجرذ مخدر بعمق. - فتح حزم أداة معقمة والستائر وارتداء قفازات معقمة. الحرص على الحفاظ على العقم خلال مدة الإجراء. وتشمل الأدوات الجراحية العقيمة الأساسية اللازمة، حامل شفرة مشرط، ملقط، hemostats، حامل إبرة، مقص، ومطبق مقطع الجرح.
- سحب ساق الجرذ من خلال تنفيس الستائر الجراحية العقيمة. تأكد من أن الحيوان في مستوى كاف من التخدير عن طريق إصبع القدم قرصة منعكس.
- باستخدام شفرة مشرط أو مقص الجراحية، وجعل محيطي، شق الجلد فقط قريبة من خنق (مفصل الركبة).
- قفاز الطرف الخلفي باستخدام شاش أو تشريح حاد لفضح الشريان الفخذي والوريد على السطح البطني والوسط من الطرف الخلفي.
- Ligate السفن باستخدام 4-0 خياطة قابلة للامتصاص على مستوى منتصف الفخذ وعبر استئصال distally.
- المشبك الوريد distally للحد من التسرب أثناء تشريح العضلات.
ملاحظة: سيتم تحويل العضلات المحيطية إلى مستوى ربط وعاء الشريان الفخذي والعضلات المرتفعة من عظم الفخذ إلى مستوى المفصل كوكسوفيمورال. - باستخدام تشريح حاد، خطف مفصل الورك مع التناوب الخارجي الجانبي.
- العثور على رأس عظم الفخذ وفكه من الأسيتابولوم. قطع أي الأنسجة المتبقية حفظ الساق تعلق على الجسم.
- إعطاء كتلة دفقة إلى الأسيتابولوم والعصب الوركي مع ما يقرب من 6 ملغ / كغ Ropivacaine.
- أغلق العضلات فوق الأسيتابولوم باستخدام خياطة بسيطة متقطعة (4-0 ، خياطة قابلة للامتصاص).
ملاحظة: إضافية 0.5٪ bupivacaine أو الليدوكائين (0.15-0.2 ملغ المجموع) يمكن حقنها في عدة مواقع على طول طبقة العضلات المغلقة (التسلل المحلية / كتلة البداية). - معارضة وإغلاق حواف الجلد باستخدام قصاصات الجرح وضعت بعيدا كل 5-10 ملم.
- بدوره على ايزوفلوران في 1.5٪ -3٪ (الصيانة). رصد لعمق مخدر، بما في ذلك رد فعل لقرصة إصبع القدم، ومعدل التنفس، والحرف. ضبط معدل isoflurane حسب الحاجة للحفاظ على مستوى مناسب من التخدير.
- الانتعاش
- ضع الجرذ في قفص استعادة نظيف مع دعم الحرارة باستخدام وسادة التدفئة وضعت تحت القفص.
ملاحظة: لمنع ارتفاع الحرارة، ينبغي أن تكون وسادة التدفئة لا تكون على اتصال مباشر مع الحيوان ويجب أن لا تتجاوز 40 درجة مئوية. - مراقبة الحيوان حتى يتعافى تماما و normothermic (37.5-39 درجة مئوية).
ملاحظة: لا ينبغي ترك الحيوان دون مراقبة حتى يدرك تماما وصارما recumbent والتحرك بسهولة في جميع أنحاء القفص. - بعد أن يستيقظ تماما, المحمول, والتنفس بشكل جيد, حقن الفئران مع البوبرينورفين (1.0-1.2 ملغ / كغ SC).
ملاحظة: إعطاء البوبرينورفين في الفئران تخدير قد يضعف الانتعاش. - إدارة 10 مل من محلول رينغر الدافئة التي ترضع تحت الجلد بين شفرات الكتف.
- نقل الفئران مرة أخرى إلى قفص نظيفة وجمع شمل مع التخصصات.
- راقب جميع الحيوانات مرتين يوميا خلال الشهر التالي بحثا عن علامات الألم والضيق، بما في ذلك الانتفاخ أو الوضعية الحدبة أو فاتح الشهية أو علامات عدوى موقع الشق، بما في ذلك الحمامية أو التصريف القيحي أو تداهم الجروح.
ملاحظة: حتى الآن لم نلاحظ علامات سريرية (مثل العدوى) بعد التعافي بعد الجراحة في أي من الحيوانات. وكان فأر واحد فقط dehiscence مع الغرز، وبعد ذلك استخدمت مقاطع الجرح لإغلاق الجروح مع أي مشاكل أخرى. - إعطاء البوبرينورفين أو ميلوكسيكام للحيوانات التي تظهر علامات سريرية للألم في الجرعات المنشورة بالتشاور مع طبيب بيطري مختبر.
- إعطاء المضادات الحيوية (أي السيفالوسبورين) للحيوانات التي تظهر عليها علامات سريرية للألم بجرعات منشورة بالتشاور مع طبيب بيطري حيواني مختبري.
ملاحظة: أي تظهر عليها علامات طويلة من الألم أو الضيق لا تتحسن مع المسكنات أو الحيوانات التي تظهر عليها علامات العدوى التي لا تستجيب للمضادات الحيوية تحتاج إلى القتل الرحيم إنسانيا.
- ضع الجرذ في قفص استعادة نظيف مع دعم الحرارة باستخدام وسادة التدفئة وضعت تحت القفص.
6. التصوير بالأشعة السينية
- بعد زرع الورم، صور الساق والرئتين غير الغازية للكشف عن نمو الورم باستخدام الأشعة السينية مع جهاز مصمم للقوارض.
- تخدير الفئران كما فعلت سابقا.
- التقاط الصور في 3x التكبير لمدة 6 ق في 25 كيلو فولت.
- معالجة الفيلم باستخدام معالج الأشعة السينية. ويمكن أيضا مسح الصور الشعاعية رقميا.
7. إجراء التشريح
- القتل الرحيم الفئران مع CO2. تأكيد الوفاة عن طريق نقص ضربات القلب وسحب الدم على الفور 3 مل من القلب لعينات المصل أو البلازما.
- افتح الصدر والبطن لفحصها.
- عزل القصبة الهوائية والكنول مع قسطرة (18 غرام). لتأمين القسطرة في القصبة الهوائية، قم بربط خياطة حريرية حول القصبة الهوائية بالقسطرة.
- قم بتوصيل قسطرة التسريب بحقنة 3 أو 5 مل. غرس الفورمالين أو المالحة لتضخيم بلطف فصوص الرئة لعينات الأنسجة أفضل. على التسريب ، فإن الرئتين نفخة وتمكين تصور أفضل من الانبثاث الرئوي.
- فحص وتشريح ووزن جميع الأعضاء الصدرية والبطنية المختارة (مثل الكبد والكلى).
- إصلاح الأجهزة في الفورمالات لعلم الأمراض الأنسجة أو تجميد على الجليد الجاف، 2-ميثيل بوتان، أو النيتروجين السائل.
- لتقييم التعبير البروتين باستخدام لطخة الغربية، وجعل lysates من الأنسجة المجمدة. الأجسام المضادة التي تتفاعل مع أنسجة الفئران مفصلة13.
8. الكيمياء المناعية
- معالجة أنسجة نظام التشغيل الأولية، وتضمين في البارافين، وقسمه لتلطيخ المناعية الهسكيميائية.
- استرداد مستضد بعد إزالة التحلل باستخدام المخزن المؤقت سيترات (pH 6.0). احتضان في 0.3٪ H2O2 في الميثانول لمدة 30 دقيقة لإرواء البيروكسيداز الذاتية.
- كتلة أقسام البارافين سميكة 5 ميكرومتر باستخدام المصل العادي.
- احتضان مع الأجسام المضادة CD68 و CD3 الأولية (انظر الجدول) بين عشية وضحاها في 4 درجة مئوية.
- شطف المقاطع في برنامج تلفزيوني واحتضانها في البوليمر HRP باستخدام عدة الكشف.
ملاحظة: تم تطوير المناعة مع ديامينوبنزيدين ككروموجين.
9. النشاف الغربي
- Lyse الخلايا UMR-106 في 200-300 ميكرولتر من العازلة تحلل14 لأداء الكهربائي هلام القياسية والنشاف الغربي.
- استخدام 4٪ إلى 12٪ المواد الهلامية بيس تريس.
- احتضان في المضادة ErbB2، المضادة ErbB4، المضادة EGFR، المضادة للERK، β-أكتين أو المضادة للفأرة β2-AR الأجسام المضادة الأولية (انظر الجدول) والفجل الأجسام المضادة الثانوية المرتبطة peroxidase.
- إضافة الركيزة الشيميلوميني. تعريض الأغشية لفيلم الأشعة السينية.
ملاحظة: يتم استخدام مستويات β-actin كعناصر تحكم التحميل.
الوصول مقيد. يرجى تسجيل الدخول أو بدء فترة تجريبية لعرض هذا المحتوى.
النتائج
وتستخدم الفئران المتجاوزة SD المناعة لهذه الدراسات نظام التشغيل، والذي يقدم نموذجا حيوانية مع نظام المناعة سليمة. لقد استخدمنا خط الخلية UMR106 من ATCC ، التي تم تطويرها من الخلايا التي تم عزلها في البداية من نظام التشغيل من فأر SD. زرعنا الخلايا في فئران SD ، وبالتالي توفير نموذج syngeneic لنظام التشغيل. يتم زرع خلايا UMR106 في الساق من الفئران SD الذكور والإناث البالغ من العمر 3 أسابيع ، ومحاكاة نموذج نظام التشغيل للأطفال. وعلاوة على ذلك، فإن زرع العظام من الخلايا UMR106 مباشرة في ميتافيزيقي الساق / diaphysis يعطي بيئة...
الوصول مقيد. يرجى تسجيل الدخول أو بدء فترة تجريبية لعرض هذا المحتوى.
المناقشة
الفئران مع زراعة الظنبوب OS تطوير أورام قابلة للقياس من قبل 3 أسابيع بعد زرع. إذا تم بتر الأطراف المصابة بالأورام بعد 3 أسابيع من الزرع ، يتم تقليل حدوث انبثاث الرئة بشكل كبير. OSs هي على حد سواء هشاشة العظام والعظام. الفئران دون بتر تطوير الانبثاث الرئة التي هي متعددة ومتباينة الحجم، لوحظ من قبل التصوير الشعاعي أو في التشريح من قبل 7 أسابيع بعد الزرع. يتم التعبير عن EGFR، ErbB2، وErbB4 في نظام التشغيل UMR106 الفئران، على غرار نظام التشغيل البشري16،17،...
الوصول مقيد. يرجى تسجيل الدخول أو بدء فترة تجريبية لعرض هذا المحتوى.
الإفصاحات
لا إفصاح للإعلان عنه.
شكر وتقدير
تمويل المعاهد القومية للصحة من خلال المعهد الوطني للسرطان، منحة # CA228582. شون إيشياما يتلقى حاليا منحة من شركة Toray الطبية المحدودة.
الوصول مقيد. يرجى تسجيل الدخول أو بدء فترة تجريبية لعرض هذا المحتوى.
المواد
تقنية الكيميائية معالج الأشعة معالج
| الاسم | الشركة | رقم فهرسي | التعليقات |
|---|---|---|---|
| إشارات خلية | AKT | 4685S | |
| خياطة قابلة للامتصاص | Ethicon | J214H | |
| & beta ؛ أكتين | سانتا كروز التكنولوجيا الحيوية | sc-47778 | |
| & بيتا ؛ 2-AR الجسم المضاد | سانتا كروز التكنولوجيا الحيوية | sc-569 | استبدال ب & beta ؛ 2-AR (E-3): sc-271322 |
| Bis– تريس هلامية | ثيرمو فيشر | NP0321PK2 | |
| بوبرينورفين SR Lab | ZooPharm | IZ-70000-201908 | |
| CD3 الجسم المضاد | داكو | #A0452 | |
| CD68 الجسم المضاد | eBioscience | # 14-0688-82 | |
| الركيزة | سيلومينسينسينت سيتيفا | RPN2232 | |
| CL-Xposure فيلم | ثيرمو فيشر | 34089 | |
| نظام التخدير الكامل | EVETEQUIP | 922120 | |
| diaminobenzidine | VECTOR LABORATORIES | SK-4100 | |
| Doxorubicin | Actavis | NDC 45963-733-60 | |
| EGFR الجسم المضاد | SANTA CRUZ BIOTECHNOLOGY | sc-03 | تم استبداله ب EGFR (A-10): SC-373746 |
| ERBB2 الجسم المضاد | SANTA CRUZ BIOTECHNOLOGY | SC-284 | تم استبداله ب Neu (3B5): SC-33684 |
| ERBB4 الجسم المضاد | SANTA CRUZ BIOTECHNOLOGY | sc-283 | تم استبداله ب ErbB4 (C-7): sc-8050 |
| ERK الجسم المضاد | SANTA CRUZ BIOTECHNOLOGY | sc-514302 | |
| زيوت تشحيم العين | PHARMADERM | NDC 0462-0211-38 | |
| حقنة هاميلتون (100 & micro; L) | هاميلتون | موديل 1710 SN SYR | |
| الفجل الحار المرتبط بالبيروكسيداز المرتبط بالأجسام المضادة | الثانوية سيتيفا | NA934 | |
| HRP طقم الكشف عن البوليمر | مختبرات ناقلات | MP-7401 | |
| HRP طقم الكشف عن البوليمر | مختبرات ناقلات | MP-7402 | |
| الأيزوفلوران | بتلر شاين | NDC 11695-6776-2 | |
| الأيزوفلوران المرذاذ | EVETEQUIP | 911103 | |
| UMR-106 خلية | ATCC | CRL-1661 | |
| السينية | Faxitron | UltraFocus | |
| الأشعة السينية | الأمل X-Ray Peoducts Inc | معالج MicroMax X-ray | معالجات الأمل غير متوفرة في الولايات المتحدة الأمريكية بعد الآن |
| مقاطع الجرح | BECTON DICKINSON | 427631 |
المراجع
- Link, M. P., et al. The effect of adjuvant chemotherapy on relapse-free survival in patients with osteosarcoma of the extremity. New England Journal of Medicine. 314 (25), 1600-1606 (1986).
- Bielack, S. S., et al. Prognostic factors in high-grade osteosarcoma of the extremities or trunk: an analysis of 1,702 patients treated on neoadjuvant cooperative osteosarcoma study group protocols. Journal of Clinical Oncology. 20 (3), 776-790 (2002).
- Botter, S. M., Neri, D., Fuchs, B. Recent advances in osteosarcoma. Current Opinion in Pharmacology. 16, 15-23 (2014).
- Ek, E. T. H., Dass, C. R., Choong, P. F. M. Commonly used mouse models of osteosarcoma. Critical Reviews in Oncology Hematology. 60 (1), 1-8 (2006).
- Guijarro, M. V., Ghivizzani, S. C., Gibbs, C. P. Animal models in osteosarcoma. Frontiers Oncology. 4, 189(2014).
- Janeway, K. A., Walkley, C. R. Modeling human osteosarcoma in the mouse: From bedside to bench. Bone. 47 (5), 859-865 (2010).
- Mohseny, A. B., Hogendoorn, P. C., Cleton-Jansen, A. M. Osteosarcoma models: from cell lines to zebrafish. Sarcoma. 2012, 417271(2012).
- Khanna, C., et al. An orthotopic model of murine osteosarcoma with clonally related variants differing in pulmonary metastatic potential. Clinical & Experimental Metastasis. 18 (3), 261-271 (2000).
- Martin, T. J., et al. Parathyroid hormone-responsive adenylate cyclase in induced transplantable osteogenic rat sarcoma. Nature. 260 (5550), 436-438 (1976).
- Fisher, J. L., Mackie, P. S., Howard, M. L., Zhou, H., Choong, P. F. The expression of the urokinase plasminogen activator system in metastatic murine osteosarcoma: an in vivo mouse model. Clinical Cancer Research. 7 (6), 1654-1660 (2001).
- Yu, Z., et al. Establishment of reproducible osteosarcoma rat model using orthotopic implantation technique. Oncology Reports. 21 (5), 1175-1180 (2009).
- Zhang, P., et al. Homologous mesenchymal stem cells promote the emergence and growth of pulmonary metastases of the rat osteosarcoma cell line UMR-106. Oncology Letters. 8 (1), 127-132 (2014).
- Gabrielson, K., et al. Heat shock protein 90 and ErbB2 in the cardiac response to doxorubicin injury. Cancer Research. 67 (4), 1436-1441 (2007).
- Sysa-Shah, P., et al. Bidirectional cross-regulation between ErbB2 and β-adrenergic signalling pathways. Cardiovascular Research. 109 (3), 358-373 (2016).
- Wachtman, L. M., Browning, M. D., Bedja, D., Pin, S., Gabrielson, K. L. Validation of the use of long-term indwelling jugular catheters in a rat model of cardiotoxicity. Journal of American Association Laboratory Animal Science. 45, 55-64 (2006).
- Abdou, A. G., et al. The Prognostic role of Ezrin and HER2/neu expression in osteosarcoma. Applied Immunohistochemistry & Molecular Morphology. 24 (5), 355-363 (2016).
- Hughes, D. P., Thomas, D. G., Giordano, T. J., McDonagh, K. T., Baker, L. H. Essential erbB family phosphorylation in osteosarcoma as a target for CI-1033 inhibition. Pediatric Blood & Cancer. 46 (5), 614-623 (2006).
- Wen, Y. H., et al. Epidermal growth factor receptor in osteosarcoma: expression and mutational analysis. Human Pathology. 38 (8), 1184-1191 (2007).
- Khanna, C., et al. Toward a drug development path that targets metastatic progression in osteosarcoma. Clinical Cancer Research. 20 (16), 4200-4209 (2014).
الوصول مقيد. يرجى تسجيل الدخول أو بدء فترة تجريبية لعرض هذا المحتوى.
إعادة الطباعة والأذونات
