يتطلب اشتراك JoVE لعرض هذا المحتوى. تسجيل الدخول أو ابدأ نسخة تجريبية مجانية

مقالة منهجية

الطباعة 3D من الناقلات الدقيقة هيدروجيل في المختبر عن طريق تناوب القوة اللزجة بالقصور الذاتي النفث

2.5K مشاهدات

DOI:

10.3791/62252

أبريل 21, 2021

* These authors contributed equally

في هذه المقالة

ملخص

يظهر هنا تقنية طباعة 3D خفيفة مدفوعة بقوى لزجة بالقصور الذاتي بالتناوب لتمكين بناء ناقلات هيدروجيل دقيقة. توفر الفوهات محلية الصنع المرونة ، مما يسمح بسهولة الاستبدال للمواد والأقطار المختلفة. يمكن الحصول على الناقلات الدقيقة المرتبطة بالخلايا التي يبلغ قطرها 50-500 ميكرومتر وجمعها لمزيد من الثقافة.

الملخص

الناقلات الدقيقة هي حبات يبلغ قطرها 60-250 ميكرومتر ومساحة سطح محددة كبيرة ، والتي تستخدم عادة كحاملات لمزارع الخلايا واسعة النطاق. أصبحت تكنولوجيا زراعة الناقلات الدقيقة واحدة من التقنيات الرئيسية في البحوث الخلوية وتستخدم عادة في مجال توسيع الخلايا على نطاق واسع. كما ثبت أن الناقلات الدقيقة تلعب دورا متزايد الأهمية في بناء هندسة الأنسجة في المختبر وفحص الأدوية السريرية. تشمل الطرق الحالية لإعداد الناقلات الدقيقة رقائق الموائع الدقيقة والطباعة النافثة للحبر ، والتي غالبا ما تعتمد على تصميم قناة تدفق معقدة ، وواجهة غير متوافقة من مرحلتين ، وشكل فوهة ثابتة. تواجه هذه الطرق تحديات معالجة الفوهة المعقدة ، وتغييرات الفوهة غير المريحة ، وقوى البثق المفرطة عند تطبيقها على حبر حيوي متعدد. في هذه الدراسة ، تم تطبيق تقنية الطباعة ثلاثية الأبعاد ، والتي تسمى نفث القوة اللزجة بالقصور الذاتي بالتناوب ، لتمكين بناء ناقلات هيدروجيل صغيرة يبلغ قطرها 100-300 ميكرومتر. تم زرع الخلايا في وقت لاحق على الناقلات الدقيقة لتشكيل وحدات هندسة الأنسجة. بالمقارنة مع الطرق الحالية ، توفر هذه الطريقة قطر طرف فوهة مجاني ، وتبديل فوهة مرن ، وتحكم مجاني في معلمات الطباعة ، وظروف طباعة معتدلة لمجموعة واسعة من المواد النشطة بيولوجيا.

المقدمة

الناقلات الدقيقة هي خرز يبلغ قطره 60-250 ميكرومتر ومساحة سطح محددة كبيرة وتستخدم عادة لزراعة الخلايا على نطاق واسع1,2. يوفر سطحها الخارجي مواقع نمو وفيرة للخلايا ، ويوفر الجزء الداخلي بنية دعم للانتشار المكاني. يوفر الهيكل الكروي أيضا الراحة في مراقبة المعلمات والتحكم فيها ، بما في ذلك الرقم الهيدروجيني و O2 وتركيز العناصر الغذائية والأيضات. وعند استخدامها مع المفاعلات الحيوية للخزانات المقلوبة، يمكن للناقلات الدقيقة أن تحقق كثافات خلوية أعلى في حجم صغير نسبيا مقارنة بالثقافات التقليدية، مما يوفر طريقة فعالة من حيث التكلفة لتحقيق ثقافات واسعة النطاق3. أصبحت تكنولوجيا زراعة ال....

الوصول مقيد. يرجى تسجيل الدخول أو بدء فترة تجريبية لعرض هذا المحتوى.

البروتوكول

1. زراعة الخلايا

  1. تكملة الحد الأدنى من الوسط الأساسي المعدل من Dulbecco عالي الجلوكوز (H-DMEM) مع 10٪ مصل بقري جنيني (FBS) ، و 1٪ محلول حمض أميني غير أساسي (NEAA) ، و 1٪ بنسلين G و streptomycin، و 1٪ ملحق الجلوتامين كوسائط ثقافة لخلايا A549.
  2. زراعة خلايا A549 في حاضنة CO2 عند 37 درجة مئوية ومع 5٪ CO2
  3. فصل الخلايا للزراعة الفرعية باستخدام التربسين عند التقاء 80٪ تقريبا.
    1. استخدم 3 مل من التربسين لعلاج الخلايا الموجودة في قارورة ثقافة T75 عند 37 درجة مئوية لمدة 3 دقائق ، ثم أضف 6 مل من وسط المزرعة لوقف التربسين.
    2. ماصة وسط الثقافة لحصاد الخلايا الملتصقة بشكل فضفاض.
    3. جهاز طرد مركزي عند 72.5 × ....

الوصول مقيد. يرجى تسجيل الدخول أو بدء فترة تجريبية لعرض هذا المحتوى.

النتائج

تم تصنيع رؤوس طباعة ذات معدلات تقارب وأقطار متنوعة لتحقيق طباعة أنواع متعددة من المواد. يتم عرض الفوهات التي تم الحصول عليها مع زيادة قوة السحب في الشكل 1B. تم تقسيم الفوهات إلى ثلاثة مجالات: الخزان (III) ، والانكماش (II) ، ورأس الطباعة (I). كان الخزان هو الجزء غير المعالج من الفوهة ، حيث وفر السائل ضغطا ثابتا ومدخلات الحبر الحيوي للطباعة. كانت منطقة الانكماش هي الجزء الرئيسي لتوليد القوى الدافعة الهبوطية. كان لقوة السحب تأثير كبير على رأس الطباعة ، مما يدل على انخفاض معدل التقارب مع قوة الس.......

الوصول مقيد. يرجى تسجيل الدخول أو بدء فترة تجريبية لعرض هذا المحتوى.

المناقشة

يوفر البروتوكول الموضح هنا تعليمات لإعداد أنواع متعددة من ناقلات الهيدروجيل الدقيقة وبذر الخلايا اللاحقة. بالمقارنة مع رقاقة الموائع الدقيقة وطرق الطباعة النافثة للحبر ، يوفر نهج AVIFJ لبناء الناقلات الدقيقة مرونة أكبر وتوافقا حيويا. تتيح الفوهة المستقلة استخدام مجموعة واسعة من الفوهات خفيفة الوزن، بما في ذلك الماصات الزجاجية الدقيقة، في أنظمة الطباعة هذه. تتيح المعالجة التي يمكن التحكم فيها بشكل كبير ضبط المعلمات بما في ذلك حجم الخزان والقطر الداخلي وشكل رأس الطباعة بحرية. علاوة على ذلك ، تسهل الفوهة التي يمكن التخلص من.......

الوصول مقيد. يرجى تسجيل الدخول أو بدء فترة تجريبية لعرض هذا المحتوى.

الإفصاحات

ليس لدى المؤلفين ما يكشفون عنه.

شكر وتقدير

تم دعم هذا العمل من قبل مؤسسة بكين للعلوم الطبيعية (3212007) ، وبرنامج البحث العلمي لمبادرة جامعة تسينغهوا (20197050024) ، وصندوق نسيم الربيع بجامعة تسينغهوا (20201080760) ، والمؤسسة الوطنية للعلوم الطبيعية في الصين (51805294) ، والبرنامج الوطني الرئيسي للبحث والتطوير في الصين (2018YFA0703004) ، ومشروع 111 (B17026).

....

الوصول مقيد. يرجى تسجيل الدخول أو بدء فترة تجريبية لعرض هذا المحتوى.

المواد

قائمة المواد المستخدمة في هذه المقالة
الاسمالشركةرقم فهرسيالتعليقات
خلايا A549ATCCCCL-185خط خلايا سرطان الرئة البشرية غير الصغيرة
مجهر المجال الساطعأوليمبوسDP70
مجهر متحد البؤرنيكونTI-FL
مصل الأبقار الجنينية ، FBSBI04-001-1ACS
الجيلاتينSIGMAG1890
زجاجية أداةB150-110-10
GlutaMAXGIBCO35050-061
H-DMEMGIBCO11960-044Dulbecco النسر المتوسط
المعدل مسحوق بيروكسيداز الفجلSIGMAP6782
عامل مسعور3MPN7026اتبع تعليمات الشركة المصنعة واستخدمها بعد التخفيف
جهاز Micro-forgenarishigeMF-900
الأحماض الأمينية غير الأساسية ، NEAAGIBCO11140-050الأحماض الأمينية غير الأساسية
البنسلين G والستربتومايسينGIBCO15140-122
طبق بتريSIGMAP5731-500EA
أداة مجتذبأداة السوترP-1000
ألجينات الصوديومSIGMAA0682
من التربسينجيبكو25200-056
النوع الأول من ذيل الفئرانSIGMAC3867
ماصات محلول الكولاجين

المراجع

  1. Chen, A. K., Reuveny, S., Oh, S. K. W. Application of human mesenchymal and pluripotent stem cell microcarrier cultures in cellular therapy: Achievements and future direction. Biotechnol Advances. 31, 1032-1046 (2013).
  2. Li, B., et al.

الوصول مقيد. يرجى تسجيل الدخول أو بدء فترة تجريبية لعرض هذا المحتوى.

إعادة الطباعة والأذونات

الوسوم