النماذج الحيوانية للاكتئاب - نموذج اليأس المزمن (CDM)

تعد الاضطرابات العاطفية، مثل الاضطراب الاكتئابي الكبير، من بين الأمراض العقلية الأكثر شيوعا وتحديا، وترتبط بمعاناة فردية ^عالية1، وزيادة خطر ^{الانتحار2}، وتسبب عبئا اجتماعيا واقتصاديا ^كبيرا3 للمجتمع. على الرغم من تأثيره ، فإن خيارات العلاج محدودة ، وهناك حاجة ملحة لتطوير تدخلات جديدة مضادة للاكتئاب ، خاصة بسبب أزمة الابتكار في علم الأدوية النفسية على مدى العقود الماضية. من أجل فهم الفيزيولوجيا المرضية للاكتئاب واختبار العوامل الجديدة المحتملة ، هناك حاجة ماسة إلى نماذج حيوانية عقلانية وصالحة ⁴. على مدى ما يقرب من نصف قرن ، تم استخدام اختبار السباحة القسري الكلاسيكي (FST) ، الذي وصفه في الأصل Porsolt5 ، كتحريض وقراءة لفحص مضادات الاكتئاب الجديدة المحتملة. وهو يتألف من فترة سباحة قسرية لمدة 5-15 دقيقة في اليوم الأول ، وتطبيق الدواء لمرة واحدة لاحقا ، وتقييم الجزء الذي تقضيه الفئران غير متحركة في الماء في فترة سباحة أخرى في اليوم التالي. واعتبر وقت الجمود يمثل سلوك هروب طبيعي مفقود وكان يعتقد أنه يرتبط بدرجة حالة تشبه الاكتئاب في ^{الفئران5}.

تعرضت FST الكلاسيكية لانتقادات شديدة ، ليس فقط في المجتمع ^{العلمي6،7،8} ولكن أيضا في وسائل الإعلام ^{العامة8}. معظم الخلافات حول FST ترجع إلى فترات الحث والعلاج القصيرة من 1 يوم فقط في النموذج الكلاسيكي. قيل إن FST يمثل نموذجا للصدمة الحادة بدلا من حالة مماثلة للاكتئاب البشري. علاوة على ذلك ، قد يكون اختبار Porsolt مناسبا كأداة فحص للعوامل المضادة للاكتئاب المحتملة ، لكنه يتجاهل تأخر ظهور العديد من مضادات الاكتئاب.

نموذج اليأس المزمن (CDM) ⁹،^10،11،12،¹³،¹⁴،¹⁵ ، وهو مشتق من FST الأصلي ^، يمثل نموذجا حيوانيا أكثر ملاءمة للاكتئاب. في آلية التنمية النظيفة ، يتجنب إجهاد السباحة المتكرر على مدى 5 أيام متتالية الآثار المؤلمة الحادة. من خلال الفشل في الهروب من موقف مرهق متكرر ومستمر ، يعتقد أن الفئران تطور حالة من العجز والاستسلام واليأس في نهاية المطاف. هذا النموذج أكثر قابلية للمقارنة مع النظريات النفسية الحالية لتطوير الاكتئاب لدى البشر من صدمة حادة واحدة ، والتي عادة ما تحدث في بداية اضطراب ما بعد الصدمة. الحالة الشبيهة بالاكتئاب الناتجة في آلية التنمية النظيفة مستقرة لمدة تصل إلى 4 ^{أسابيع9} وبالتالي تفتح إمكانية لفترات علاج أطول، والتي يمكن مقارنتها بشكل أفضل بالحالات السريرية، حيث تحتاج مضادات الاكتئاب عادة إلى 2-4 أسابيع لإظهار ^فائدة16.

يجب أن يكون تقييم الحالة الشبيهة بالاكتئاب متعدد الأبعاد. يعد قياس وقت الجمود ، كما هو الحال في FST الكلاسيكي ، مفيدا ، ولكن لا ينبغي استخدامه كمعلمة النتيجة الوحيدة. يجب أن تكون الطرق المختلفة ، الموضحة أدناه ، قادرة على رسم خريطة لأبعاد مختلفة لحالة الاكتئاب بما يتماشى مع الأعراض الموجودة عادة في البشر المكتئبين. يمكن أن تشمل تقييمات القراءة المناسبة سلوك الهروب (وقت عدم الحركة9،10،¹⁷) ، اختبار تعليق الذيل (TST)⁹ ، anhedonia (اختبار تفضيل السكروز الكلاسيكي (SPT)18) ، السلوك الموجه نحو الدافع (اختبار تفضيل السكروز لكزة الأنف (NPSPT)10) ^، سلوك التوقع / الاستكشاف (الاستجابة للإشارة الغامضة ¹⁹ ؛ اختبار المتاهة Y-maze9)، الفيزيولوجيا الكهربية (قياسات اللدونة طويلة الأجل (التقوية طويلة الأجل، LTP؛ الاكتئاب طويل الأجل، LTD)20)، التقييمات الجزيئية (أنماط تنشيط الجينات المبكرة الفورية (IEGs)؛ أنماط الإجهاد الإضافية ²¹).

من الناحية النظرية ، يمكن استخدام اختبار السباحة المتكرر للحث على حالة الاكتئاب دون أي تقييم لوقت الجمود. ومع ذلك ، يوصى بشدة بتوفير سلسلة تجريبية لإثبات المفهوم على الأقل مع أوقات الجمود. بالإضافة إلى ذلك ، تمثل آلية التنمية النظيفة نموذجا مناسبا لتقييم تطور حالة تشبه الاكتئاب عن طريق قياس وقت الجمود خلال مرحلة الحث. يمكن تقييم سلالات الفئران أو الفئران المحددة التي يتم علاجها قبل السباحة فيما يتعلق بالمرونة أو التعرض للإجهاد وتحريض اليأس السلوكي.

أجريت جميع التجارب وفقا للمبادئ التوجيهية الأوروبية (EU 2010/63) ووفقا للقانون الألماني لحماية الحيوان (TierSchG) ، و FELASA (www.felasa.eu/guidelines.php) ، ودليل الهيئة الوطنية لرعاية الحيوان GV-SOLAS (www.gv-solas.de/index.html) لرعاية واستخدام المختبر ، وتمت الموافقة عليها من قبل لجنة رعاية الحيوان بجامعة فرايبورغ ولجنة Ethique en Matiere d'Experimentation Animale de Strasbourg (CREMEAS ، CEEA35)، فضلا عن السلطات المحلية. تم استخدام كلا الجنسين من الفئران من النوع البري C57Bl6N الذين تتراوح أعمارهم بين 10-14 أسبوعا (70-98 يوما بعد الولادة ، PND) للتجارب البرية (WT). كخط مرن للإجهاد ، تم استخدام خط الفأر المعدل وراثيا مع التعبير المعزز عن مستقبلات الأدينوسين _A1 تحت مروج CaMKII العصبي في الدماغ الأمامي ^9,15. بعد التجارب ، تم التضحية بالفئران عن طريق خلع عنق الرحم.

1. التحضير

1. الحصول على ترخيص البحوث الحيوانية، بما في ذلك التخطيط التجريبي الشامل.
2. الوصول: عند الوصول، قم بتربية الحيوانات في مرفق الحيوانات لأداء آلية التنمية النظيفة. إذا تم شراء الحيوانات من مورد خارجي ، فاسمح لهم بأسابيع 2 على الأقل للتكيف مع البيئة الجديدة.
3. السكن: لإيواء الحيوانات ، تأكد من أن الأقفاص غير مشغولة بأكبر عدد ممكن من الحيوانات لتجنب الإجهاد الإضافي. ضمان أن ظروف السكن تتماشى مع التوصيات الدولية لإسكان الفئران (لمزيد من المعلومات ، انظر ²²) والحفاظ عليها باستمرار في جميع الأوقات.
   ملاحظة: تشمل أهم ظروف السكن القياسية أقفاصا ذات تهوية فردية مع 25-120 تغييرا في الهواء في الساعة ، ودورة ضوء وظلمة لمدة 12 ساعة ، ودرجة حرارة مستقرة قدر الإمكان (ثابتة على الأقل بين 20-24 درجة مئوية) ، والرطوبة مستقرة قدر الإمكان (على الأقل بين 45٪ -65٪) ، ومواد القضم والمأوى الموجود ، ولا يوجد سكن فردي.
4. النقطة الزمنية: قم بإجراء جميع التجارب في نفس الوقت من اليوم.
   ملاحظة: لم يجر أي تقييم مباشر للتحقق من تأثير النهار على آلية التنمية النظيفة، ولكن معظم الاختبارات السلوكية التي تقيم الحالات الشبيهة بالاكتئاب تظهر اختلافات تبعا للوقت من ^اليوم23،²⁴،^25، ومن المحتمل جدا أن يؤثر النهار أيضا على آلية التنمية النظيفة.
5. مواد التعشيش: تقليل مواد التعشيش إلى الحد الأدنى. تأكد من عدم وجود عجلات تشغيل ، وما إلى ذلك ، موجودة في القفص.
   ملاحظة: تمنع البيئة المخصب تحريض حالة الاكتئاب.
6. تكوين المجموعة: السماح للحيوانات بالبقاء في نفس المجموعة طوال التجربة بأكملها. تجميع الفئران الإناث معا حتى من الفضلات المختلفة ؛ مجموعة الفئران الذكور جنبا إلى جنب مع الحيوانات الذكور القمامة. بسبب العدوانية القادمة ، وخاصة من الذكور ، قد يصبح العض والحلاقة مشكلة ، وبالتالي إعطاء تركيز خاص على تكوين المجموعة. تجنب السكن الفردي لأن الحرمان هو عامل ضغط إضافي رئيسي.
7. الحيوانات: استخدم سلالات مختلفة من الفئران ، على الرغم من ملاحظة اختلافات ^{محددة9,10}. سلالة الماوس المستخدمة بشكل متكرر هي C57Bl6N. Label الفئران من أجل إجراء تحليل إحصائي مقترن (انظر الخطوة 3.2.4).
8. الجنس الحيواني: استخدم على قدم المساواة كل من الفئران الذكور والإناث.
9. عمر الحيوان: تأكد من أن عمر الحيوانات لا يقل عن 10 أسابيع (70 PND). لا تستخدم الحيوانات الأصغر سنا بسبب الإرهاق الناجم عن السباحة.
10. المعدات: استخدم أسطوانة / دورق زجاجي شفاف بسعة لا تقل عن 2 لتر ، وقطر 24-26 سم ، وارتفاع لا يقل عن 30 سم. تشمل المتطلبات الإضافية مقياس حرارة للتحقق من درجة حرارة الماء أو المناشف الورقية أو مصباح التدفئة / حصيرة التدفئة بالضوء الأحمر أو مصدر مماثل للتدفئة أو مؤقت أو ساعة توقيت أو محيط هادئ. قم بتصوير جلسات السباحة بالفيديو للتحليل والتوثيق في وضع عدم الاتصال. تأكد من أن التاريخ والوقت مرئيان باستمرار على الشريط / الملف ، إلى جانب رقم رمز التعريف للحيوان الفردي. قم بتخزين الملفات لتحليلها لاحقا والرجوع إليها. فيلم من جانب الاسطوانة الزجاجية ، وليس من الأعلى ، لتسهيل التحليل.

2. مرحلة الحث

1. قبل البدء
   1. راقب الحيوانات بصريا بحثا عن التشوهات ، بما في ذلك علامات العض أو الحلاقة. استبعاد القفص بأكمله من السلسلة التجريبية إذا أظهر أي إصابات طفيفة. تأكد من وجود طبيب بيطري في أي وقت لأن الإصابات ستزداد سوءا أثناء التجربة وستمنع الاستمرار حيث تصبح الفئران أكثر عدوانية تحت تأثير الإجهاد.
   2. الحصول على وزن الجسم لكل قبل البدء في التجربة. تأكد من أن فقدان الوزن الذي لوحظ في كثير من الأحيان لا يتجاوز 20٪ من وزن الجسم الأولي. استبعاد الحيوانات التي فقدت وزنها أكثر من 20 ٪ والقتل الرحيم لها على الفور بسبب المعاناة العالية المفترضة.
   3. املأ دورقا أو أسطوانة بالماء في درجة حرارة الغرفة (22-23 درجة مئوية) على ارتفاع لا يقل عن 20 سم من الأسفل ، تاركا ما لا يقل عن 10 سم بين سطح الماء والحدود العليا للوعاء.
2. اداء
   1. نقل الحيوانات بلطف إلى الماء. خلال مرحلة السباحة ، أبق الحيوان تحت المراقبة المستمرة لمنع الغرق. راقب من موضع لا يستطيع فيه الحيوان رؤية المجرب (على سبيل المثال ، مراقبة الفيديو من غرفة مجاورة).
   2. اضبط كرونومترا في بداية التجربة. أخرج الحيوانات من الماء بعد 10 دقائق ببساطة عن طريق الاستيلاء على ذيولها. جففها بلطف بمنشفة ورقية وضعها إما تحت ضوء التدفئة أو على حصيرة التدفئة.
   3. تقييم واحد فقط في كل مرة. تأكد من أن الحيوانات لا تستطيع رؤية بعضها البعض (على سبيل المثال ، فصل القفص السكني عن الإعداد التجريبي بواسطة مقسم الغرفة).
   4. قم بإجراء جلسة السباحة القسرية لمدة 10 دقائق كل يوم لمدة 5 أيام متتالية.
3. الانتهاء
   1. نقل الحيوانات مرة أخرى إلى أقفاصها المنزلية بعد خمس جلسات سباحة والسماح لهم بالراحة لمدة 2 أيام على الأقل. بدء تدخلات علاجية محددة في وقت لاحق.

3. تقييم العلاج المضاد للاكتئاب

1. دورة زمنية
   1. تقييم العلاجات الحادة وشبه المزمنة باستخدام آلية التنمية النظيفة. اعتمادا على السؤال العلمي ، قم بتكييف فترة الراحة بين مرحلة الحث والقراءة.
   2. لتقييم الفعالية الحادة والسريعة المفعول للكيتامين ، اختر فترة راحة قصيرة (بضعة أيام) بعد مرحلة الحث من CDM. قم بتطبيق العلاج (أي الحقن داخل الصفاق) ، ثم قم بإجراء التقييم (جلسة سباحة إضافية أو طريقة تقييم مختلفة) بعد ذلك بوقت قصير.
   3. لتقييم آثار العلاج دون المزمن ، قم بزيادة فترة العلاج حتى 4 أسابيع (لا توجد بيانات متاحة لفترات العلاج الأطول). على سبيل المثال ، قم بإعطاء العلاج عن طريق الفم باستخدام الإيميبرامين للحيوانات خلال 4 أسابيع بعد مرحلة الحث وتقييمها بعد ذلك.
   4. ابدأ في تقييم حالة الاكتئاب مباشرة بعد نهاية فترة العلاج ، على سبيل المثال ، في اليوم التالي. اختر دائما فترة زمنية متطابقة للظروف الضابطة والتجريبية.
2. وقت الجمود
   1. إثبات المفهوم
      1. لاستخدام وقت الجمود كطريقة للقراءة ، قم بتقييم كل يوم من مرحلة الحث ويوم الاختبار لتوفير إثبات للمفهوم (انظر الشكل 1). لمزيد من السلاسل التجريبية ، قلل التقييمات إلى اليوم 1 واليوم 5 ويوم الاختبار (انظر الشكل 1C).
      2. شريط فيديو لكل تجربة. السماح لاثنين من المراقبين المدربين الذين يعانون من العمى عن الظروف التجريبية بإجراء التحليل بشكل مستقل. يمكن تحليل الفيديو المجرب من مراقبة السلوك من غرفة مختلفة ، وبالتالي تقليل التداخل مع الاختبار (على سبيل المثال ، انظر ملف الفيديو في المادة التكميلية).
   2. الشروط: مراقبة وتحديد الحالات السلوكية الثلاثة المختلفة أثناء اختبار السباحة: الكفاح والسباحة وعدم الحركة. يركز معظم الباحثين على الجمود. نادرا ما يكون التمييز الإضافي بين النضال والسباحة مفيدا ويزيد بشكل كبير من تعقيد التحليل ومدته.
      1. يكافح: يحاول الحيوان بنشاط الهروب من الوضع المهدد. وهذا ينطوي على تمهيد جانب الاسطوانة مع توجيه الرأس نحو الجدار وحركات جميع الأطراف. عادة ما يكون سطح الماء مضطربا قليلا.
      2. السباحة: يتحرك الحيوان على الأقل كل من الكفوف الخلفية ويسافر مسافة في جميع أنحاء الماء. يبحث بنشاط عن مخرج ولكنه لا يحاول التغلب على الجدار الزجاجي للسفينة. لا تنطوي السباحة على رفع الكفوف فوق سطح الماء ، وعادة ما يتم توجيه الجسم بالتوازي مع جدران الأسطوانة. في هذه الحالة ، غالبا ما تستدير الحيوانات أو تتحرك في دوائر.
      3. الجمود: يبقى الحيوان ساكنا ، في وضع يشبه التجمد ، ولا يتحرك على الإطلاق أو يحرك الذيل فقط ، أو الكفوف الأمامية للحفاظ على رأسه فوق سطح الماء. لا يتم قطع أي مسافة بنشاط باستثناء التعويم السلبي ، ولا يلاحظ أي حركة موجهة للمخالب الأمامية.
   3. تتبع
      1. قم بإجراء التقييم باستخدام تسجيلات الفيديو في وضع عدم الاتصال. استخدم التصنيفات العمياء من قبل اثنين من الفاحصين المستقلين وذوي الخبرة وحساب المتوسطات بين التصنيفين.
      2. كرر التصنيفات إذا كانت نتائج المصنفين تختلف عن نطاق محدد مسبقا. راقب الفئران باستمرار حيث تتغير الظروف المختلفة بشكل متكرر بين الكفاح والسباحة وعدم الحركة.
      3. استخدم ساعة توقيت لقياس إجمالي الوقت المستغرق في مرحلة مركزة (عادة ما تكون الجمود) على مدى 10 دقائق يبقى فيها الماوس في الماء. ضع في اعتبارك زمن انتقال قصير يبلغ حوالي ثانية قبل تغيير قياس الوقت المستمر (على سبيل المثال ، إذا بقي لمدة 20 ثانية في حالة جمود وتحرك مرة واحدة فقط لمدة تقل عن ثانية وعاد إلى الجمود لمدة 10 ثوان أخرى ، فإن إجمالي وقت الجمود هو 30 ثانية).
   4. الإحصاءات: نظرا للانحراف المعياري المرتفع نسبيا بين الأفراد (ربما بسبب نقل السلوك المعتمد على التسلسل الهرمي من القفص إلى اختبار السباحة) ، ضع علامة أو وضع علامة على الحيوانات لإجراء اختبارات بارامترية مقترنة (بدلا من غير مقترنة) بعد ذلك. قم بتقييم التوزيع الطبيعي ، واعتمادا على السؤال المحدد ، قم بإجراء تحليل التباين (ANOVA) باستخدام اختبارات t اللاحقة أو اختبارات t المقترنة لمقارنة المجموعات المختلفة. قم بإجراء التحليل باستخدام القيم المطلقة لوقت (وقتات) الجمود أو كقيم طبيعية.
      1. القيم المطلقة: أعط القيم المتوسطة لوقت عدم الحركة من اليوم 1 إلى اليوم 5 وليوم الاختبار ± SEM (انظر الشكل 1A). قارن القيم المتوسطة لليوم 1 واليوم 5 ، ويفضل استخدام اختبار t المقترن للتحقق من صحة تحريض حالة الاكتئاب. إذا كان هناك فرق كبير بين اليوم 1 و 5 ، فقارن القيم المتوسطة لليوم 5 بمتوسط نتائج يوم الاختبار. تأكد من أن حجم المجموعة النموذجي في تجربة واحدة يتراوح بين 6 و 10 وتوقع اختلافات كبيرة بين أوقات الجمود الأساسية وما بعد الحث في الحيوانات البرية. ومن الصعب مقارنة المجموعات المختلفة باختبار t غير مقترن إذا استخدمت القيم المطلقة بسبب الاختلافات الأساسية؛ لذلك، استخدم القيم المعيارية.
      2. القيم النسبية / المعيارية: قارن تأثيرات العلاج المختلفة عن طريق التطبيع بالنتيجة الفردية في اليوم 5 ، ثم عبر عن القيم كنسبة مئوية من اليوم 5 (انظر الشكل 1B).
   5. تجارب التحكم
      ملاحظة: قد يكون أداء السباحة مرتبطا بالحركة. المواد التي تسبب فرط الحركة يمكن أن تحفز نتائج إيجابية كاذبة (أي انخفاض وقت الجمود) ؛ وكذلك العوامل المهدئة يمكن أن تزيد بشكل مصطنع من وقت الجمود.
      1. تقييم التغيرات في الحركة للمواد غير المعروفة قبل إجراء تحليل السباحة. استخدم الاختبار الميداني المفتوح (OFT) في مجموعة منفصلة من الحيوانات لمدة 10 دقائق على الأقل.
      2. اختر نفس وقت المراقبة (10 دقائق) في OFT كما هو الحال في آلية التنمية النظيفة للكشف عن الآثار غير المحددة للقاطرة المفرطة للمركب المختبر والتي قد تؤثر على قراءة آلية التنمية النظيفة عن طريق قياس وقت الجمود مع صلاحية عالية.
      3. في حالة وجود تأثيرات كبيرة على القاطرة المفرطة ، لا تقم بتقييم جلسة السباحة لتقييم الفعالية المضادة للاكتئاب ولكن استخدم طرقا مختلفة للقراءة (على سبيل المثال ، تفضيل السكروز ، اختبار تعليق الذيل ، إلخ).

4. تقييم تطور حالة تشبه الاكتئاب

1. لتقييم تطور اضطراب اكتئابي ، قم بتقييم كل يوم من مرحلة الحث لقياس وقت الجمود.
   ملاحظة: في هذه الحالة، فإن الزيادة الطفيفة في وقت الجمود بين كل يوم تصف المرونة، في حين أن الزيادة الأقوى والمبكرة مقارنة بالحيوانات غير المعالجة أو البرية تمثل ضعفا معززا أمام اليأس الناجم عن الإجهاد. من خلال علاج الفئران قبل حدث السباحة ، يمكن تقييم التدخل الوقائي أو خطوط الفئران المعدلة وراثيا فيما يتعلق بتطور اليأس السلوكي.

في جلسة السباحة الأولى من مرحلة الحث على آلية التنمية النظيفة ، تظهر الفئران عادة متوسط وقت الجمود بين 190 ثانية و 230 ثانية ، والذي يرتفع باستمرار مع كل جلسة سباحة إضافية (الشكل 1 أ). هذه الزيادة أكثر وضوحا في أول 3 أيام وتصل إلى مرحلة تشبه الهضبة خلال آخر 2-3 أيام. يظل وقت الجمود الذي تم قياسه في اليوم 5 مستقرا على مدار ما يصل إلى 4 أسابيع ، مما يشير إلى اليأس السلوكي المستقر. يمكن تقييم فعالية مضادات الاكتئاب للتدخل عن طريق علاج الحيوان بين اليوم الأخير من مرحلة الحث ويوم الاختبار. لاحظ أن وقت التسجيل المطلق أثناء جلسات السباحة غير موضوعي تماما ويعتمد على المجرب والعمر والجنس وخط الماوس المستخدم. ومع ذلك ، فإن الفرق النسبي بين الجلسات مستقر إلى حد ما مع اختلافات صغيرة فقط بين المعالجين.

في الشكل 1 ، يتم عرض العديد من العلاجات التمثيلية. إيميبرامين ، والحرمان من النوم ، والكيتامين قلل بشكل كبير من وقت الجمود ، في حين أن الحرمان من النوم جنبا إلى جنب مع نوم الانتعاش لم يظهر تغييرا كبيرا في النمط الظاهري الشبيه بالاكتئاب. تتوافق هذه النتائج مع فعالية مضادة للاكتئاب للعلاجات المطبقة ومشابهة للتأثيرات التي لوحظت في المرضى من البشر. وشمل العلاج تناول الإيميبرامين 20 مغ/كغ/يوم لمدة 3 أسابيع عن طريق مياه الشرب، و3 مغ/كغ من الكيتامين عن طريق حقنة واحدة داخل الصفاق قبل 24 ساعة من الاختبار، والحرمان من النوم لمدة 6 ساعات قبل الاختبار.

اعتمادا على سؤال البحث ، قد يتم عرض تمثيلات مختلفة. يمكن أن يعطي تمثيل القيم المطلقة نظرة عامة حقيقية على البيانات ويسمح بإجراء تقييم جيد لمرحلة الحث ومعالجة واحدة (الشكل 1A و D). ومع ذلك ، لا يمكن مقارنة الاختلافات بين العلاجات المختلفة مباشرة. وبالتالي فإن كل مجموعة علاج لها قيم متوسطة مختلفة لوقت الجمود في اليوم 5. لذلك ، يوصى باستخدام تمثيل قيم الوسط الطبيعي في هذه الحالة (الشكل 1B). ويمكن اختيار تمثيل مخفض بسبب محدودية المساحة (الشكل 1 جيم). لاحظ أنه من الضروري إظهار نتائج اليوم 1 واليوم 5 ويوم الاختبار على الأقل.

الشكل 1: النتائج الناجحة في القيم المطلقة والطبيعية. (أ) يمكن ملاحظة الحث الناجح لحالة تشبه الاكتئاب في 30 فأرا. تمثل كل نقطة وقت الجمود لحيوان واحد في يوم معين وتمثل القضبان القيم المتوسطة للحيوانات التي تم اختبارها. يتم تمثيل وقت الجمود لكل يوم من مراحل الحث (اليوم 1 إلى اليوم 5) وليوم الاختبار (بعد الخط المنقط) مع أو بدون علاج. لاحظ أنه في هذه العينة ، يمكن ملاحظة زيادة كبيرة بين اليوم 1 واليوم 2. في بعض الحالات ، يتم تحقيق مستويات الأهمية أولا بين اليوم 1 واليوم 3. لاستمرار التجربة ، تكون الزيادة ذات الدلالة الإحصائية بين اليوم 1 واليوم 5 إلزامية. لاحظ تأثير السقف النموذجي (الزيادة بين الأيام 1 و 2 و 3 ، مقارنة بالفرق بين الأيام 4 و 5). بين اليوم 5 وأيام الاختبار ، تم إيواء الحيوانات لمدة 4 أسابيع في أقفاصها المنزلية ، إما دون مزيد من العلاج (CDM) أو عولجت بالإيميبرامين (Imip.) ؛ الحرمان من النوم (SD) ؛ الحرمان من النوم والتعافي من النوم (RS) ، والكيتامين (كيت). (ب) يتم إعطاء دورة زمنية مثالية لأداء الحيوانات الفردية لكل يوم. (ج) التمثيل العادي لنفس النتائج المبينة بالفعل في الشكل 1 ألف. تم تطبيع وقت الجمود لكل ويوم إلى وقت الجمود المقابل له في اليوم 5 وتم التعبير عنه بنسبة مئوية. يمكن عرض قيم ما بعد العلاج للمجموعات المختلفة ومقارنتها بشكل أفضل باستخدام هذا النهج. (د) تمثيل القيم العادية لليوم 1 واليوم 5 ويوم الاختبار (CDM). بعد دراسة إثبات المفهوم بنجاح ، قد يتم تقليل النقاط الزمنية للتقييم إلى اليوم الأول واليوم الخامس ويوم الاختبار. هناك حاجة إلى هذه النقاط الزمنية لأن الزيادة الكبيرة بين اليوم 1 واليوم 5 ضرورية لإثبات نجاح الحث ، ويجب مقارنة اليوم 5 بيوم الاختبار لإعطاء بيان حول فعالية العلاج. (ه) مقارنة زمن الجمود لثلاثة خطوط مختلفة للماوس: يظهر النوع البري (WT) استقراء ناجحا؛ يظهر الخط المرن المثالي (RL) انخفاضا كبيرا في السلوك الشبيه بالاكتئاب في الأيام الثلاثة الأولى وفي يوم الاختبار. ANOVA أحادي الاتجاه مع اختبار Bonferroni اللاحق: ∗ / #p < 0.05 ، ∗∗ / # # p < 0.01 ، ∗∗∗ / # # # p < 0.001 ، ∗∗∗∗ / # # # # p < 0.0001. (# الإشارة إلى الفرق إلى القيم المتوسطة لليوم 1 ، ∗ الإشارة إلى الفرق إلى متوسط قيم اليوم 5 في الشكل 1A ، C وإلى خط الماوس WT في الشكل 1E). يتم التعبير عن البيانات كوسيلة ± SEM. يرجى النقر هنا لعرض نسخة أكبر من هذا الرقم.

في حالة عدم تغيير وقت الجمود خلال جميع الأيام الخمسة (الشكل 2) ، لم يتمكن الإجهاد المطبق من تغيير السلوك بشكل مناسب ، ولا يمكن تقييم أي آثار علاجية ؛ يجب التضحية بالحيوانات ويجب عدم استخدامها أكثر.

الشكل 2: النتائج غير الناجحة. يظهر في الشكل تمثيل للتحريض غير الفعال. لاحظ أنه لا توجد زيادة كبيرة في وقت الجمود بين اليوم 1 واليوم 5. لذلك ، لم يتم تحقيق معايير استمرار التجربة ، ولا يوجد إطالة أخرى عقلانية (في هذه الحالة ، تم اختبار الفئران الذكور فقط ، وبعد التحقيق بأثر رجعي ، وجد أنها لم تكن من القمامة). يرجى النقر هنا لعرض نسخة أكبر من هذا الرقم.

يجب استخدام المزيد من أساليب القراءة لوصف رؤية أوسع لليأس السلوكي للحيوانات. تتوفر مجموعة متنوعة من الاختبارات السلوكية والقياسات الكهروفسيولوجية والتقييمات الجزيئية للتغيرات الناجمة عن الإجهاد. وترد في الشكل 3 النتائج المثالية لاختبار تعليق الذيل (TST)، مع علاج آلية التنمية النظيفة والإيميبرامين والكيتامين، واختبار تفضيل الأنف والسكروز (NPSPT)، وتقييم التقوية على المدى الطويل باستخدام تقنية المشبك بالتصحيح. وتشجع هذه النتائج على استخدام مرحلة تحريض آلية التنمية النظيفة كأداة عامة لتحريض اليأس السلوكي. لمزيد من التفاصيل حول التقنيات المستخدمة (TST ، NPSPT ، LTP-ASSESSMENT) ، انظر 9،10،17،20.

الشكل 3: نتائج إضافية مع فئران آلية التنمية النظيفة. (أ) تمثيل نموذجي لآثار آلية التنمية النظيفة في اختبار تعليق الذيل. تمثل كل نقطة وقت الجمود لحيوان واحد ، وتمثل القضبان القيم المتوسطة للحيوانات التي تم اختبارها. ANOVA أحادي الاتجاه مع اختبار Bonferroni اللاحق: ∗∗∗p < 0.001. يتم التعبير عن البيانات كوسيلة ± SEM. (B) النتائج التمثيلية لاختبار تفضيل السكروز الأنف الذي تم إنشاؤه مؤخرا في فئران CDM. في هذه المهمة ، تم قياس تفضيل السكروز بجهد متزايد تدريجيا للوصول إلى زجاجة السكروز (عدد من الوخز الأنفي) (للحصول على التفاصيل المنهجية انظر 10). لاحظ أن تفضيل السكروز قد انخفض في آلية التنمية النظيفة وأن الفرق بين آلية التنمية النظيفة والفئران الضابطة يزداد تدريجيا مع الجهد (القيم المتوسطة لكزات الأنف في كل يوم يشار إليها باسم Nspk1-7) كان على الفئران أن تطبق لشرب المحلول الحلو. ANOVA ثنائي الاتجاه مع اختبار Bonferroni اللاحق: ∗∗p < 0.01 ، ∗∗∗p < 0.001. يتم التعبير عن البيانات كوسيلة ± SEM. (C) يتم تقديم التغيرات المعتمدة على CDM في اللدونة المشبكية طويلة الأجل كتغيرات في القيم المتوسطة ل EPSPs بعد تطبيق بروتوكول تحريض LTP الترابطي في شرائح الدماغ الحصين من فئران WT. تم الحصول على البيانات عن طريق تحفيز المشبك CA3-CA1 (لمزيد من التفاصيل انظر 17,20). اختبار t غير المقترن ، ∗∗p < 0.01 ، يتم التعبير عن البيانات كوسيلة ± SEM. يرجى النقر هنا لعرض نسخة أكبر من هذا الرقم.

المواد التكميلية. يرجى النقر هنا لتنزيل هذا الملف.

يعلن جميع المؤلفين عدم وجود تضارب في المصالح.