Method Article

النقل العابر للأشكال القوية من المشوكات الحبيبية

DOI:

10.3791/62783

⸱

September 16th, 2022

 ,  ,  ,  ,  ,  , 
1Student Research Committee, School of Medicine, Kerman University of Medical Sciences, 2Research Center for Hydatid Disease in Iran, Kerman University of Medical Sciences, 3Department of Parasitology and Mycology, Faculty of Medicine, Kurdistan University of Medical Sciences, 4State Key Laboratory for Zoonotic Diseases, Key Laboratory of Zoonosis Research, Ministry of Education, Institute of Zoonosis, College of Veterinary Medicine, Jilin University

In This Article

Summary

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

نحن نصف تقنية نقل عابرة سريعة في مراحل النمو المختلفة من Echinococcus granulosus باستخدام الجيل الثالث من ناقلات lentivirus.

Abstract

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

داء المشوكات الكيسي أو مرض الهيداتيد هو واحد من أهم الأمراض الطفيلية الحيوانية المنشأ التي تسببها المشوكات الحبيبية ، وهي دودة شريطية صغيرة تؤوي في أمعاء الأنياب. هناك حاجة ملحة للبحوث الجينية التطبيقية لفهم آليات التسبب في الأمراض ومكافحة الأمراض والوقاية منها. ومع ذلك ، فإن عدم وجود نظام فعال لتقييم الجينات يعوق التفسير المباشر للوراثة الوظيفية لطفيليات cestode ، بما في ذلك أنواع Echinococcus . توضح هذه الدراسة إمكانات النقل الجيني العابر للفيروسات الخيطية في الأشكال الميتاسيستولية والقوية . تم عزل البروتوسكوليسيس (PSCs) من الخراجات الهيداتية ونقلها إلى وسائط استزراع ثنائية الطور محددة لتتطور إلى ديدان قوية. تم نقل الديدان مع الجيل الثالث من فيروس lentivirus الذي تم حصاده ، إلى جانب خلايا HEK293T كعنصر تحكم في عملية النقل. تم الكشف عن تألق واضح في الديدان القوية على مدار 24 ساعة و 48 ساعة ، مما يشير إلى انتقال فيروسي عابر في E. granulosus. يقدم هذا العمل المحاولة الأولى للنقل العابر القائم على فيروس lentivirus في الديدان الشريطية ويوضح النتائج الواعدة ذات الآثار المحتملة في الدراسات التجريبية على بيولوجيا الدودة المسطحة.

Introduction

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

داء المشوكات الكيسي (CE) هو واحد من أهم أمراض الديدان الطفيلية التي تسببها المشوكات الحبيبية ، وهي دودة شريطية صغيرة داخل عائلة Taeniidae 1,2. وقد أجريت دراسات مستفيضة عن التشخيص المناعي وتطوير اللقاحات للإشعاع الحبيبي. ومع ذلك ، فإن المعرفة غير الكافية حول الأساس الجزيئي لبيولوجيا الطفيليات تشكل قيودا كبيرة في تشخيص وإدارة والوقاية من مرض hydatid 3,4,5,6.

في السنوات الأخيرة ، بسبب تطور تسلسل الجينوم وطرق النسخ ، تم إجراء مجموعة واسعة من ....

Access restricted. Please log in or start a trial to view this content.

Protocol

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

تمت الموافقة على هذه الدراسة من قبل المعهد الوطني لتطوير البحوث الطبية ولجنة مراجعة أخلاقيات البحث العلمي ، رقم 958680. تصنف فيروسات Lentiviruses على أنها كائنات BSL-2. وبالتالي ، تم تنفيذ جميع إجراءات الزراعة المختبرية في هذا البروتوكول باستخدام ممارسات مختبرية معقمة وأجريت تحت غطاء تدفق صفائحي وفقا لإرشادات المعاهد الوطنية للصحة. يوضح الشكل 1 عرضا تخطيطيا لبروتوكول الدراسة لمختلف مراحل E. granulosus.

1. جمع الخراجات hydatid

  1. جمع الخراجات الكبدية من الأغنام المصابة بشكل طبيعي والتي يتم ذبحها بشكل روتيني في مسلخ.
  2. قم بتعقيم سطح الكيس بالكامل باستخدام شاش معقم وكحول بن....

Access restricted. Please log in or start a trial to view this content.

Results

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

هنا ، نصف تقنية نقل عابرة سريعة وفعالة في E. granulosus باستخدام الجيل الثالث من ناقلات lentivirus. لقد قمنا بزراعة PSCs في وسط استزراع ثنائي الطور للحصول على ديدان قوية ، كما هو موضح سابقا25,26. تتطور البروتوسكوليتس إلى ديدان قوية بعد 6 أسابيع في المختبر. لوحظت مراحل مختلفة من E. granulosus في وسط الاستزراع ثنائي الطور ، بما في ذلك PSCs الغازية (الشكل 2A) ، و PSCs المراوغة (الشكل 2B) ، والديدان القوية مع تكوين البروجلوتيد الأول والثالث.......

Access restricted. Please log in or start a trial to view this content.

Discussion

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

إن فهم الأساس الجزيئي للديدان الخيطية وبيولوجيا Platyhelminthes أمر بالغ الأهمية لفهم إمراض الطفيليات الحيوانية المنشأ27. يعد عدم وجود نظام فعال لتقييم الجينات عقبة رئيسية أمام التفسير المباشر لعلم الوراثة الوظيفي لطفيليات cestode ، بما في ذلك أنواع Echinococcus 12,27. توضح هذه الدراسة الإمكانات الممتازة للفيروس lentivirus في النقل العابر E. granulosus.

يجمع النقل الفيروسي Lentiviral بين بساطة .......

Access restricted. Please log in or start a trial to view this content.

Disclosures

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

وليس لدى المؤلفين أي تضارب في المصالح للإفصاح عنه.

Acknowledgements

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

تم دعم الأبحاث الواردة في هذا المنشور من قبل لجنة منح الباحثين النخبة تحت رقم الجائزة 958680 من المعهد الوطني لتطوير البحوث الطبية (NIMAD) ، طهران ، إيران.

....

Access restricted. Please log in or start a trial to view this content.

Materials

List of materials used in this article
NameCompanyCatalog NumberComments
12 بئر لوحات ثقافةSPL علومالحياة 30012
25 سم 2< / sup> قارورة ثقافةSPL علومالحياة 70325
لوحات ثقافة 6 آبار SPLعلوم الحياة30006
كلوريد الكالسيومسيجما-ألدريتشC4901-500Gتركيز العمل: 2.5 & nbsp ؛ mM
CMRL 1066 متوسطThermo Fisher Scientific11530037
CO2< / sub> حاضنةmemmertICO150
D- (+) -GlucoseSigma-AldrichG8270-1KG
DMEMLife Technology12100046
صفراءمعزولة من قتل رحيم وتعقيمها بمقدار 0.2 & mu ؛ مرشح المحقنة
م Eosin YSigma-AldrichE4009-5Gتحضير 0.1٪ من Eosin لاختبار استبعاد العمل
مصل الأبقار الجنيني (FBS)DNAbiotechDB9723-100mlتعطيل الحرارة   of  FBS (30 دقيقة في 40 درجة ؛ ج)
مصل ربلة الساق الجنينية (FCS)DNAbiotechDB9724-100mlتعطيل الحرارة   ؛ of  FCS (30 دقيقة في 40 درجة ؛ ج)
خلايا HEK293TBONbiotechBN_0012.1.14الكلى الجنينية البشرية 293T
HEPES محلول ملحي مخزن (HBS)سيجما ألدريتش51558-50 مل2x
مجهر مضان مقلوبمركز أوليمبوسIX51
البنسلينسيجما ألدريتشP3032-10MUتركيز العمل: 100 وحدة دولية / مل
بيبسينروش10108057001تركيز العمل: 2 مجم / مل ، درجة الحموضة 2
ملحي مخزن بالفوسفات (PBS)DNAbiotechDB0011يحل هذا الكاشف في أقل من 1 دقيقة في DW
Polybrene (كاشف التعداد)Sigma-AldrichTR-1003-G
RPMI متوسطBioIdeaBI-1006-05
بيكربونات الصوديوم (NaHCO3< / sub>)Sigma-AldrichS5761-1KG
StreptomycinSigma-AldrichS9137-25Gتركيز العمل: 100 مو ؛ جم / مل
من الجيل الثالث من البلازميد الفيروسي (pCDH513b) نظامالعلوم البيولوجية لنظام SBI (BioCat GmbH)ناقل نقل CD513B-1-SBI(تم الحصول عليه تجاريا من قسم أبحاث الطب الجزيئي التابع للمركز الأكاديمي الإيراني للتعليم والثقافة والبحث (ACECR) ، مشهد ، إيران) الجيل
من البلازميد الفيروسي (pLPI و pLPII) Invitrogen(تقنيات الحياة)K4975-00ناقل مساعد (تم الحصول عليه تجاريا من قسم أبحاث الطب الجزيئي في المركز الأكاديمي الإيراني للتعليم والثقافة والبحث (ACECR) ، مشهد ، إيران) الجيل
من البلازميد الفيروسي (pMD2G) الناقلأدرجين 12259(تم الحصول عليه تجاريا من قسم أبحاث الطب الجزيئي التابع للمركز الأكاديمي الإيراني للتعليم والثقافة والبحث (ACECR) ، مشهد ، إيران)
Tris / EDTA Buffer (TE)DNAbiotechDB9713-100ml
TrypsinSigma-AldrichT9935-50MG1x حلول العمل (درجة الحموضة 7.4 & ndash ؛ 7.6)
محلول الثالث الثالث المساعد لبلازميد

References

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,
  1. Deplazes, P., et al. Global distribution of alveolar and cystic echinococcosis. Advances in Parasitology. 95, 315(2017).
  2. Borhani, M., et al. Echinococcoses in Iran, Turkey, and Pakistan: Old diseases in the new millennium. ....

Access restricted. Please log in or start a trial to view this content.

Reprints and Permissions

Request permission to reuse the text or figures of this JoVE article

Request Permission

Tags

Echinococcus GranulosusTransient TransductionLentiviral VectorsStrobilated WormsHydatid DiseaseProtoscoleces IsolationBiphasic CultureGene TransferFluorescence MicroscopyTapeworm Genetics

Related Articles