مقالة منهجية

طرق الاستزراع المباشرة وغير المباشرة لدراسة مواد الزرع القابلة للتحلل الحيوي في المختبر

4.9K مشاهدات

DOI:

10.3791/63065

أبريل 15, 2022

* These authors contributed equally

في هذه المقالة

ملخص

نحن نقدم ثلاث طرق للثقافة المباشرة ، ثقافة التعرض المباشر ، وثقافة التعرض لتقييم التوافق الخلوي في المختبر لمواد الزرع القابلة للتحلل الحيوي. تحاكي هذه الطرق في المختبر التفاعلات المختلفة بين زرع الخلايا في الجسم الحي ويمكن تطبيقها لدراسة مختلف المواد القابلة للتحلل الحيوي.

الملخص

على مدى العقود العديدة الماضية ، تم استكشاف المواد القابلة للتحلل الحيوي على نطاق واسع للتطبيقات الطبية الحيوية مثل زراعة العظام والأسنان والقحف والوجه والفكين. لفحص المواد القابلة للتحلل الحيوي للتطبيقات الطبية الحيوية ، من الضروري تقييم هذه المواد من حيث استجابات الخلايا في المختبر ، والتوافق الخلوي ، والسمية الخلوية. وقد استخدمت معايير المنظمة الدولية للتوحيد القياسي (ISO) على نطاق واسع في تقييم المواد الحيوية. ومع ذلك ، تم وضع معظم معايير ISO في الأصل لتقييم السمية الخلوية للمواد غير القابلة للتحلل ، وبالتالي توفير قيمة محدودة لفحص المواد القابلة للتحلل البيولوجي.

تقدم هذه المقالة وتناقش ثلاث طرق مختلفة للاستزراع ، وهي طريقة الاستزراع المباشر ، وطريقة ثقافة التعرض المباشر ، وطريقة ثقافة التعرض لتقييم التوافق الخلوي في المختبر لمواد الزرع القابلة للتحلل الحيوي ، بما في ذلك البوليمرات القابلة للتحلل الحيوي والسيراميك والمعادن ومركباتها ، مع أنواع الخلايا المختلفة. وقد أظهرت الأبحاث أن أساليب الاستزراع تؤثر على استجابات الخلايا للمواد القابلة للتحلل البيولوجي لأن تدهورها الديناميكي يحفز الاختلافات الزمانية المكانية في الواجهة وفي البيئة المحلية. على وجه التحديد ، تكشف طريقة الاستزراع المباشر عن استجابات الخلايا المزروعة مباشرة على الغرسات. توضح طريقة ثقافة التعرض المباشر استجابات الخلايا المضيفة الراسخة التي تتلامس مع الغرسات ؛ وتقوم طريقة ثقافة التعرض بتقييم الخلايا المضيفة المنشأة التي ليست على اتصال مباشر مع الغرسات ولكنها تتأثر بالتغيرات في البيئة المحلية بسبب تدهور الزرع.

تقدم هذه المقالة أمثلة على طرق الاستزراع الثلاثة هذه لدراسة التوافق الخلوي في المختبر لمواد الزرع القابلة للتحلل الحيوي وتفاعلاتها مع الخلايا الجذعية الوسيطة المشتقة من نخاع العظام (BMSCs). كما يصف كيفية الحصاد والمرور والثقافة والبذور والإصلاح والبقع وتوصيف الخلايا وتحليل وسائط ومواد ما بعد الزراعة. تحاكي الطرق المخبرية الموضحة في هذه المقالة سيناريوهات مختلفة للبيئة في الجسم الحي ، مما يوسع نطاق تطبيق وأهمية اختبار التوافق الخلوي في المختبر للمواد الحيوية المختلفة لمختلف التطبيقات الطبية الحيوية.

المقدمة

على مدى عقود، تمت دراسة المواد القابلة للتحلل الحيوي على نطاق واسع واستخدامها في التطبيقات الطبية الحيوية مثل تطبيقات العظام 1،2 والأسنان 3،4 والقحف والفص 5. على عكس الغرسات والمواد الدائمة ، تتحلل المعادن القابلة للتحلل الحيوي والسيراميك والبوليمرات ومركباتها تدريجيا في الجسم بمرور الوقت عبر تفاعلات كيميائية مختلفة في البيئة الفسيولوجية. على سبيل المثال ، المعادن القابلة للتحلل الحيوي مثل سبائك المغنيسيوم (Mg) 1,6,7 وسبائك الزنك (Zn)

الوصول مقيد. يرجى تسجيل الدخول أو بدء فترة تجريبية لعرض هذا المحتوى.

البروتوكول

تمت الموافقة على هذا البروتوكول من قبل اللجنة المؤسسية لرعاية واستخدام الحيوانات (IACUC) في جامعة كاليفورنيا في ريفرسايد (UCR) لحصاد الخلايا والأنسجة. تظهر أنثى الفئران Sprague-Dawley (SD) البالغة من العمر 12 أسبوعا كمثال في الفيديو. ويفضل الفئران الإناث والذكور الأصغر سنا.

1. إعداد زراعة الخلايا

ملاحظة: طرق الاستزراع الثلاثة الموضحة في هذه المقالة قابلة للتطبيق بشكل عام على أنواع الخلايا المختلفة المرتبطة. هنا ، سيتم تقديم BMSCs التي يتم حصادها من فطام الفئران كمثال لإعداد زراعة الخلايا. اعتمادا على أهميتها لتطبيقات طبية محددة ، يمكن استخدام أنواع مختلفة من الخلايا ، بما في ذلك الخلايا الأولية الت....

الوصول مقيد. يرجى تسجيل الدخول أو بدء فترة تجريبية لعرض هذا المحتوى.

النتائج

ويبين الشكل 4 صور التألق التمثيلية ل BMSCs في ظل ظروف اتصال مباشرة وغير مباشرة باستخدام طرق استزراع مختلفة. يوضح الشكل 4A ، B BMSCs تحت ظروف الاتصال المباشر وغير المباشر بعد نفس الثقافة المباشرة لمدة 24 ساعة مع سبائك المغنيسيوم ZC21 1. تتكون سبائك ZC21 من 97.5٪ وزن٪ من المغنيسيوم و 2 واط من الزنك و 0.5٪ من الكالسيوم. تنتشر الخلايا التي ليس لها اتصال مباشر مع عينات سبائك ZC21 بشكل أفضل من تلك التي لها اتصال مباشر مع العينا.......

الوصول مقيد. يرجى تسجيل الدخول أو بدء فترة تجريبية لعرض هذا المحتوى.

المناقشة

يمكن استخدام طرق زراعة الخلايا المختلفة لتقييم التوافق الخلوي في المختبر للمواد الحيوية ذات الأهمية لمختلف جوانب التطبيقات في الجسم الحي. توضح هذه المقالة ثلاث طرق للزراعة في المختبر ، أي الثقافة المباشرة ، وثقافة التعرض المباشر ، وثقافة التعرض ، لتقليد سيناريوهات مختلفة في الجسم الحي حيث يتم استخدام مواد زرع قابلة للتحلل الحيوي داخل جسم الإنسان. تستخدم طريقة الاستزراع المباشر بشكل أساسي لتقييم سلوك الخلايا المزروعة حديثا الملتصقة مباشرة بمواد الزرع والمحيطة بها. تحاكي طريقة زراعة التع.......

الوصول مقيد. يرجى تسجيل الدخول أو بدء فترة تجريبية لعرض هذا المحتوى.

الإفصاحات

ليس لدى المؤلفين أي تضارب في المصالح.

شكر وتقدير

يقدر المؤلفون الدعم المالي المقدم من مؤسسة العلوم الوطنية الأمريكية (NSF CBET Award 1512764 و NSF PIRE 1545852) ، والمعاهد الوطنية للصحة (NIH NIDCR 1R03DE028631) ، وزمالة جامعة كاليفورنيا (UC) لتنمية أعضاء هيئة التدريس ، ولجنة منحة بذور الأبحاث (Huinan Liu) ، ومنحة أبحاث أطروحة UC-Riverside (Jiajia Lin). يقدر المؤلفون المرفق المركزي للفحص المجهري المتقدم والتحليل الدقيق (CFAMM) في UC-Riverside لاستخدام SEM / EDS والدكتور بيري تشيونغ لاستخدام أدوات XRD. يقدر المؤلفون أيضا ثانه في نغوين وكويني شو للتحرير الجزئي. يود المؤلفون أيضا أن يشكروا سيندي لي على تسجيل السرد للفيديو. أي آراء أو نتائج أو استنتاجات أو توصيات يتم التعبير عنها في هذه المقالة هي آراء المؤلفين ولا تعكس ....

الوصول مقيد. يرجى تسجيل الدخول أو بدء فترة تجريبية لعرض هذا المحتوى.

المواد

قائمة المواد المستخدمة في هذه المقالة
الاسمالشركةرقم فهرسيالتعليقات
10 مل ماصة مصليةVWR490019-704
ألواح معالجة بزراعة الأنسجة ذات 12 بئرThermo Fisher Scientific353043
أنبوب مخروطي 15 مل (بولي بروبيلين) VWR89039-666
18 جم إبرةBD305196
25 & frac12 ؛ إبرة GBD305122
4 & ، 6-diamidino-2- فينيليندول ثنائي اللاكتات (DAPI)InvitrogenD3571
50 مل أنبوب مخروطي (بولي بروبيلين)VWR89039-658
70 & مصفاة نايلون mفيشر Scientific50-105-0135
Alexa Flour 488-phalloidinLife technologiesA12379
خزانة السلامة البيولوجيةLABCONCOالفئة الثانية ، جهاز طرد مركزي من النوع A2
EppendorfRotor F-35-6-30 ، جهاز طرد مركزي 5430
دائري من الكوارتز المنصهر الشفاف AdValueTechnologyFQ-4085
CO2< / sub> حاضنةSANYOMCO-19AIC
حاوية فريزر CoolCellحاوية رغوة Corning432000مصممة لتنظيم انخفاض درجة الحرارة
CryovialThermo Fisher Scientific5000-1020
ثنائي ميثيل سلفوكسيد (DMSO)سيجما ألدريتش472301
Dulbecco ' s النسر المعدل s متوسط (DMEM)Sigma-AldrichD5648
برنامج تحليل EDXأكسفورد إنسترومنتسأزتكالتحليل
للأشعة السينية المشتتة للطاقة (EDX)FEI50 مم < sup>2< / sup> X-Max50 SDD
مصل بقري الجنين (FBS) شركةثيرمو فيشر العلمية.SH30910
المجهر الفلورينيكونكسوف Ti
الفورمالديهايدVWR100496-496
مقياس الدمبرنامج Hausser Scientific3520
ImageJالمعاهد الوطنية للصحة ومختبر الأجهزة البصرية والحسابية (LOCI ، جامعة ويسكونسن)
قياس طيف الانبعاث البصري بالبلازما المقترنة بالحث
(ICP-OES)
PerkinElmerOptima 8000
مجهر بصريVWRVistaVision
البنسلين / الستربتومايسين (P / S)Thermo Fisher Scientific، Inc. ،15070063
مقياس الأس الهيدروجينيVWRنموذج SB70P
محلول ملحي مخزن بالفوسفات (PBS)VWR97062-730
المجهر الإلكتروني الماسح الضوئي (SEM) FEINova NanoSEM 450
شفرة جراحيةVWR76353-728
قوارير زراعة الأنسجةVWRT-75 ، MSPP-90076
إدراج TranswellCorning3460
محلول حمض التربسين - إيثيلين ديامين تترا أسيتيك (Trypsin-EDTA)Sigma-AldrichT4049
أداة حيود الأشعة السينية (XRD)PANalyticalEmpyrean Series 2
طبق الطيفي

المراجع

  1. Zhang, C., et al. Antimicrobial bioresorbable Mg-Zn-Ca alloy for bone repair in a comparison study with Mg-Zn-Sr Alloy and pure Mg. ACS Biomaterials Science & Engineering. 6 (1), 517-538 (2019).
  2. Xu, C., et al.

الوصول مقيد. يرجى تسجيل الدخول أو بدء فترة تجريبية لعرض هذا المحتوى.

إعادة الطباعة والأذونات

طلب إذن لإعادة استخدام النص أو الأشكال في مقالة JoVE هذه

طلب إذن

الوسوم

ISO

مقالات ذات صلة