هنا ، نصف منهجية التصنيع لمصفوفات أقطاب ألياف الكربون القابلة للتخصيص للتسجيل في الجسم الحي في الأعصاب والدماغ.
Method Article
هنا ، نصف منهجية التصنيع لمصفوفات أقطاب ألياف الكربون القابلة للتخصيص للتسجيل في الجسم الحي في الأعصاب والدماغ.
يتم تصنيع مجسات الأعصاب الطرفية التقليدية في المقام الأول في غرف الأبحاث ، مما يتطلب استخدام العديد من الأدوات باهظة الثمن والمتخصصة للغاية. تقدم هذه الورقة عملية تصنيع "خفيفة" في غرف الأبحاث لمصفوفات الأقطاب الكهربائية العصبية المصنوعة من ألياف الكربون والتي يمكن تعلمها بسرعة من قبل مستخدم غرف الأبحاث عديم الخبرة. تتطلب عملية تصنيع مصفوفة قطب ألياف الكربون هذه أداة واحدة فقط في غرف الأبحاث ، وهي آلة ترسيب الباريلين C ، التي يمكن تعلمها بسرعة أو الاستعانة بمصادر خارجية إلى منشأة معالجة تجارية بتكلفة هامشية. تتضمن عملية التصنيع هذه أيضا لوحات الدوائر المطبوعة التي تملأ يدويا ، والعزل ، وتحسين الأطراف.
تؤدي تحسينات الأطراف الثلاثة المختلفة التي تم استكشافها هنا (ليزر Nd: YAG وموقد اللحام وليزر الأشعة فوق البنفسجية) إلى مجموعة من هندسات الطرف ومعاوقات 1 كيلو هرتز ، مع ألياف مشعلة تؤدي إلى أقل معاوقة. في حين أثبتت التجارب السابقة فعالية قطب الليزر وموقد اللحام ، تظهر هذه الورقة أيضا أن الألياف المقطوعة بالليزر بالأشعة فوق البنفسجية يمكنها تسجيل الإشارات العصبية في الجسم الحي. صفائف ألياف الكربون الحالية إما لا تحتوي على أقطاب كهربائية مخصصة لصالح الحزم أو تتطلب أدلة مصنعة في غرف الأبحاث للسكان والعزل. تستخدم المصفوفات المقترحة فقط الأدوات التي يمكن استخدامها على سطح الطاولة لسكان الألياف. تسمح عملية تصنيع مصفوفة الأقطاب الكهربائية المصنوعة من ألياف الكربون هذه بالتخصيص السريع لتصنيع الصفيف السائب بسعر مخفض مقارنة بالمجسات المتاحة تجاريا.
يعتمد الكثير من أبحاث علم الأعصاب على تسجيل الإشارات العصبية باستخدام الفيزيولوجيا الكهربية (ePhys). هذه الإشارات العصبية ضرورية لفهم وظائف الشبكات العصبية والعلاجات الطبية الجديدة مثل آلة الدماغ والواجهات العصبية الطرفية1،2،3،4،5،6. تتطلب الأبحاث المحيطة بالأعصاب الطرفية أقطاب تسجيل عصبية مخصصة أو متاحة تجاريا. تتطلب أقطاب التسجيل العصبية - وهي أدوات فريدة ذات أبعاد على نطاق ميكرون ومواد هشة - مجموعة متخصصة من المهارات والمعدات لتصنيعها. وقد وضعت مجموعة متنوعة من المجسات المتخصصة لاستخدامات نهائية محددة؛ ومع ذلك ، فإن هذا يعني أنه يجب تصميم التجارب حول المجسات التجارية المتاحة حاليا ، أو يجب على المختبر الاستثمار في تطوير مسبار متخصص ، وهي عملية طويلة. نظرا للتنوع الواسع في الأبحاث العصبية في الأعصاب الطرفية ، هناك طلب كبير على مسبار ePhys متعدد الاستخدامات4،7،8. وسيضم مسبار ePhys المثالي موقعا صغيرا للتسجيل، ومقاومة منخفضة9، ونقطة سعر واقعية ماليا للتنفيذ في النظام3.
تميل الأقطاب الكهربائية التجارية الحالية إما إلى أن تكون أقطاب كهربائية خارج العصبون أو الكفة (Neural Cuff10 ، MicroProbes Nerve Cuff Electrode11) ، والتي تقع خارج العصب ، أو داخل اللفافة ، التي تخترق العصب وتجلس داخل اللفافة محل الاهتمام. ومع ذلك ، نظرا لأن أقطاب الكفة تجلس بعيدا عن الألياف ، فإنها تلتقط المزيد من الضوضاء من العضلات القريبة والكراسات الأخرى التي قد لا تكون الهدف. تميل هذه المجسات أيضا إلى انقباض العصب ، مما قد يؤدي إلى الحشف الحيوي - تراكم الخلايا الدبقية والأنسجة الندبية - في واجهة القطب الكهربائي أثناء شفاء الأنسجة. تضيف الأقطاب الكهربائية داخل اللفافة (مثل LIFE12 و TIME13 و Utah Arrays14) ميزة انتقائية الكراسة ولها نسب إشارة إلى ضوضاء جيدة ، وهو أمر مهم في تمييز الإشارات لتفاعل الآلات. ومع ذلك ، فإن هذه المجسات لديها مشاكل في التوافق الحيوي ، حيث تصبح الأعصاب مشوهة بمرور الوقت3،15،16. عند شرائها تجاريا ، يكون لكل من هذه المجسات تصميمات ثابتة مع عدم وجود خيار للتخصيص الخاص بالتجربة وهي مكلفة للمختبرات الأحدث.
استجابة لقضايا التكلفة العالية والتوافق الحيوي التي تقدمها المجسات الأخرى ، قد توفر أقطاب ألياف الكربون وسيلة لمختبرات علم الأعصاب لبناء مجسات خاصة بها دون الحاجة إلى معدات متخصصة. ألياف الكربون هي مادة تسجيل بديلة ذات عامل شكل صغير يسمح بإدخال منخفض الضرر. توفر ألياف الكربون توافقا حيويا أفضل واستجابة ندبة أقل بكثير من السيليكون17،18،19 بدون معالجة غرف الأبحاث المكثفة5،13،14. ألياف الكربون مرنة ومتينة ومدمجة بسهولة مع المواد الحيوية الأخرى19، ويمكن أن تخترق وتسجل من الأعصاب7,20. على الرغم من المزايا العديدة لألياف الكربون ، تجد العديد من المختبرات أن التصنيع اليدوي لهذه المصفوفات شاق. تجمع بعض المجموعات21 ألياف الكربون في حزم تؤدي مجتمعة إلى قطر أكبر (~ 200 ميكرومتر) ؛ ومع ذلك ، على حد علمنا ، لم يتم التحقق من هذه الحزم في الأعصاب. قام آخرون بتصنيع صفائف أقطاب ألياف الكربون الخاصة بهم ، على الرغم من أن أساليبهم تتطلب أدلة ألياف الكربون المصنعة في غرف الأبحاث 22،23،24 والمعدات اللازمة لملء صفائفهم17،23،24. لمعالجة هذا ، نقترح طريقة لتصنيع مصفوفة من ألياف الكربون يمكن إجراؤها على سطح المختبر تسمح بإجراء تعديلات مرتجلة. تحافظ المجموعة الناتجة على أطراف القطب الكهربائي الفردية دون أدوات متخصصة لتعبئة الألياف. بالإضافة إلى ذلك ، يتم تقديم أشكال هندسية متعددة لتتناسب مع احتياجات التجربة البحثية. بناء على العمل السابق8،17،22،25 ، توفر هذه الورقة منهجيات مفصلة لبناء وتعديل عدة أنماط من المصفوفات يدويا مع الحد الأدنى من وقت التدريب في غرف الأبحاث اللازمة.
Access restricted. Please log in or start a trial to view this content.
تمت الموافقة على جميع الإجراءات الحيوانية من قبل لجنة جامعة ميشيغان المؤسسية لرعاية الحيوانات واستخدامها.
1. اختيار مجموعة من ألياف الكربون
2. لحام الموصل إلى لوحة الدوائر
3. سكان الألياف
4. تطبيق الأشعة فوق البنفسجية (UV) الايبوكسي لعزل ألياف الكربون
5. التحقق من التوصيلات الكهربائية باستخدام عمليات مسح مقاومة 1 كيلو هرتز (الشكل 5)
6. عزل الباريلين C
ملاحظة: تم اختيار الباريلين C كمادة عازلة لألياف الكربون حيث يمكن ترسيبه في درجة حرارة الغرفة على دفعات من المصفوفات ويوفر طبقة مطابقة للغاية.
7. طرق إعداد تلميح
ملاحظة: يستخدم اثنان من مستحضرات الطرف في هذا القسم الليزر لقطع الألياف. يجب دائما ارتداء معدات الوقاية الشخصية المناسبة ، مثل النظارات الواقية المقاومة للأطوال الموجية المستخدمة ، عند استخدام الليزر ، ويجب أن يكون مستخدمو المختبر الآخرون بالقرب من الليزر أيضا في معدات الوقاية الشخصية. على الرغم من أن أطوال الألياف المدرجة في هذه الخطوات هي أطوال موصى بها ، يمكن للمستخدمين تجربة أي طول يناسب احتياجاتهم. يجب على المستخدم اختيار إحدى طرق إعداد الطرف التالية لأن القطع بالمقص وحده لن يكفي لإعادة فضح القطب الكهربائي25.
8. بولي (3،4-إيثيلين ديوكسي ثيوفين):p-تولوين سلفونات (PEDOT: pTS) طلاء موصل لانخفاض المعاوقة
9. توصيل الأسلاك الأرضية والمرجعية
10. الإجراء الجراحي
ملاحظة: تم استخدام قشرة الفئران لاختبار فعالية الألياف المحضرة بالليزر فوق البنفسجي كما تم وصفها سابقا7,20. ستعمل هذه المجسات في العصب بسبب هندستها المتشابهة ومستويات معاوقتها للألياف المعدة لموقد اللحام. تم إجراء هذه الجراحة بحذر شديد للتحقق من أن ليزر الأشعة فوق البنفسجية لم يغير استجابة الأقطاب الكهربائية.
11. فرز سبايك
12. التصوير المجهري الإلكتروني الماسح (SEM)
ملاحظة: ستجعل هذه الخطوة المصفوفات غير قابلة للاستخدام ويجب استخدامها فقط لفحص نتائج معالجة التلميحات للتحقق من معالجة المصفوفات بشكل صحيح. لا يلزم القيام بهذه الخطوة لإنشاء صفيف ناجح. ويرد أدناه موجز عام لعملية إدارة مصائد الأسماك؛ ومع ذلك ، يجب أن يتلقى المستخدمون الذين لم يستخدموا SEM سابقا مساعدة من مستخدم مدرب.
Access restricted. Please log in or start a trial to view this content.
التحقق من صحة النصيحة: صور SEM
أظهر العمل السابق20 أن القطع بالمقص أدى إلى معاوقات غير موثوقة حيث تم طي الباريلين C عبر موقع التسجيل. يستخدم القطع المقصي هنا فقط لقطع الألياف إلى الطول المطلوب قبل المعالجة باستخدام طريقة قطع نهائية إضافية. تم استخدام صور SEM للأطراف لتحديد طول الكربون المكشوف وهندسة الطرف (الشكل 8).
تمت مراجعة المقص والألياف المقطوعة بالليزر Nd:YAG سابقا17,20
Access restricted. Please log in or start a trial to view this content.
بدائل المواد
وفي حين أن جميع المواد المستخدمة ملخصة في جدول المواد، فإن عددا قليلا جدا من المواد مطلوب أن يأتي من بائعين محددين. يجب أن تأتي لوحة Flex Array من البائع المدرج لأنها الشركة الوحيدة التي يمكنها طباعة اللوحة المرنة. يجب أيضا طلب موصل Flex Array من المورد المدرج لأنه موصل خاص. يوصى بشدة باستخدام الباريلين C كمادة عازلة للألياف لأنه يوفر طبقة مطابقة في درجة حرارة الغرفة بطريقة موثوقة يمكنها بعد ذلك تحمل البيئة في الجسم الحي . لا يمكن للوح البوليميد والإيبوكسيات المو...
Access restricted. Please log in or start a trial to view this content.
ويعلن صاحبا البلاغ أنه ليس لديهما مصالح مالية منافسة.
تم دعم هذا العمل ماليا من قبل المعاهد الوطنية للاضطرابات العصبية والسكتة الدماغية (UF1NS107659 و UF1NS115817) والمؤسسة الوطنية للعلوم (1707316). يعترف المؤلفون بالدعم المالي المقدم من كلية الهندسة بجامعة ميشيغان والدعم الفني من مركز ميشيغان لتوصيف المواد ومختبر فان فلاك الجامعي. يشكر المؤلفون الدكتور خليل نجفي على استخدام ليزر Nd:YAG الخاص به ومرفق Lurie Nanofabrication لاستخدام آلة ترسيب الباريلين C. نود أيضا أن نشكر أنظمة الطلاء المتخصصة (إنديانابوليس ، IN) لمساعدتهم في دراسة مقارنة الطلاء التجاري.
Access restricted. Please log in or start a trial to view this content.
| Name | Company | Catalog Number | Comments |
|---|---|---|---|
| 3 محار | 05-769-6Q | فيشر | الكمية: 2 تكلفة الوحدة (دولار أمريكي): 20 |
| 3،4-ethylenedioxythiophene (25 جم) (PEDOT) | 96618 | Sigma-Aldrich | الكمية: 1 تكلفة الوحدة (دولار أمريكي): 102 |
| 353ND-T إيبوكسي (8 أونصات) + + (ZIF واللوحة العريضة فقط) | 353ND-T / 8OZ | تقنية الايبوكسي | الكمية: 1 تكلفة الوحدة (دولار أمريكي): 48 |
| Ag / AgCl (3M NaCl) القطب المرجعي (عبوة من 3) | 50-854-570 | كمية فيشر | : 1 تكلفة الوحدة (دولار أمريكي): 100 |
| Autolab | PGSTAT12 | Metrohm | |
| Blowtorch | 1WG61 | Grainger | الكمية: 1 تكلفة الوحدة (دولار أمريكي): 36 |
| ألياف الكربون | T-650/35 3K | Cytec Thornel | الكمية: 1 تكلفة الوحدة (دولار أمريكي): غير / |
| شريط كربون | NC1784521 | فيشر | الكمية: 1 تكلفة الوحدة (بالدولار الأمريكي): 27 |
| قضيب قطني مائل | WOD1002 | MediChoice | الكمية: 1 تكلفة الوحدة (دولار أمريكي): 0.57 |
| مجموعة متأخرة إيبوكسي + + | 1FBG8 | Grainger | الكمية: 1 تكلفة الوحدة (دولار أمريكي): 3 |
| DI المياه | n / a | n / a | الكمية: n / a تكلفة الوحدة (دولار أمريكي): n / a |
| Dumont Tweezers # 5 | 50-822-409 | فيشر الكمية: 1 تكلفة الوحدة (دولار أمريكي): 73 | |
| Flex Array** | n / a | MicroConnex | الكمية: 1 تكلفة الوحدة (دولار أمريكي): 68 |
| Flux | SMD291ST8CC | DigiKey | الكمية: 1 تكلفة الوحدة (دولار أمريكي): 13 |
| شعيرات دموية زجاجية (عبوة من 350) | 50-821-986 | فيشر | الكمية: 1 تكلفة الوحدة (دولار أمريكي): 60 |
| طبق زجاجي | غير متوفر | / غير | متوفر الكمية: 1 تكلفة الوحدة (بالدولار الأمريكي): n / a |
| Hirose Connector (ZIF فقط) | H3859CT-ND | DigiKey | الكمية: 2 تكلفة الوحدة (دولار أمريكي): 2 |
| زجاجة زجاجية مقاومة للضوء | غير | فيشر | الكمية: 1 تكلفة الوحدة (دولار أمريكي): n / a |
| خيوط تسخين الماصة | الدقيقة FB315B | Sutter Instrument Co | الكمية: 1 تكلفة الوحدة (دولار أمريكي): N / a |
| مجتذب الماصة | الدقيقة P-97 | Sutter Instrument Co | الكمية: 1 تكلفة الوحدة (بالدولار الأمريكي): n / a |
| قفازات النتريل (عبوة من 200) | 19-041-171C | فيشر | الكمية: 1 تكلفة الوحدة (دولار أمريكي): 47 |
| برنامج فارز غير متصل بالإنترنت | غير متوفر / أ | Plexon | الكمية: 1 تكلفة الوحدة (بالدولار الأمريكي): n / a |
| موصل Omnetics * (صفيف فليكس فقط) A79025-001 | Omnetics Inc | الكمية: 1 تكلفة الوحدة (بالدولار الأمريكي): 35 | |
| موصل Omnetics * (مصفوفة مرنة فقط) | A79024-001 | Omnetics Inc | الكمية: 1 تكلفة الوحدة (بالدولار الأمريكي): 35 |
| Omnetics إلى موصل ZIF | ZCA-OMN16 | Tucker-Davis Technologies | الكمية: 1 تكلفة الوحدة (بالدولار الأمريكي): n / a |
| موصل طرف الدبوس (لوحة عريضة فقط) | ED11523-ND | DigiKey | الكمية: 16 تكلفة الوحدة (بالدولار الأمريكي): 10 |
| صندوق تخزين مسبار | G2085 | Melmat | الكمية: 1 تكلفة الوحدة (دولار أمريكي): 2 |
| شفرة حلاقة | 4A807 | Grainger | الكمية: 1 تكلفة الوحدة (دولار أمريكي): 2 |
| SEM post | 16327 | lnf | الكمية: 1 تكلفة الوحدة (دولار أمريكي): 3 |
| إيبوكسي فضي (1 أونصة) + + | H20E / 1OZ | تقنية الايبوكسي | الكمية: 1 تكلفة الوحدة (بالدولار الأمريكي): 125 |
| أسلاك GND REF الفضية | 50-822-122 | كمية فيشر | : 1 تكلفة الوحدة (دولار أمريكي): 423.2 |
| صوديوم p-toulenesulphonate (pTS) - 100 جم | 152536 | Sigma-Aldrich | الكمية: 1 تكلفة الوحدة (دولار أمريكي): 59 |
| لحام | 24-6337-9703 | DigiKey | الكمية: 1 تكلفة الوحدة (دولار أمريكي): 60 |
| طرف لحام الحديد | T0054449899N-ND | Digikey | الكمية: 1 تكلفة الوحدة (دولار أمريكي): 13 |
| محطة | لحام WD1002N-ND | Digikey | الكمية: 1 تكلفة الوحدة (دولار أمريكي): 374 |
| SpotCure-B UV LED نظام | علاج N / A | FusionNet LLC | الكمية: 1 تكلفة الوحدة (دولار أمريكي): 895 |
| قضيب الفولاذ المقاوم للصدأ | غير | / الكمية | : 1 تكلفة الوحدة (دولار أمريكي): N / A |
| Stir Plate | n / A | Fisher | الكمية: 1 تكلفة الوحدة (بالدولار الأمريكي): غير متوفر / |
| مقص جراحي | 08-953-1B | كمية فيشر | : 1 تكلفة الوحدة (دولار أمريكي): 100 |
| TDT كفن (ZIF فقط) | Z3_ZC16SHRD_RSN | TDT | الكمية: 1 تكلفة الوحدة (دولار أمريكي): 3.5 |
| ملاقط تفلون | 50-380-043 | كمية فيشر | : 1 تكلفة الوحدة (دولار أمريكي): 47 |
| UV & نظارات السلامة للضوء | المرئي 92522 | كمية لوكتايت | : 1 تكلفة الوحدة (دولار أمريكي): 45 |
| إيبوكسي للأشعة فوق البنفسجية (8 أوقية) + + (صفيف فليكس فقط) | OG142-87 / 8OZ | تقنية الايبوكسي | الكمية: 1 تكلفة الوحدة (دولار أمريكي): 83 |
| ليزر الأشعة فوق البنفسجية | n / a | WER | الكمية: 1 تكلفة الوحدة (دولار أمريكي): 30 |
| قارب وزن (عبوة من 500) | 08-732-112 | فيشر | الكمية: 1 تكلفة الوحدة (دولار أمريكي): 58 |
| لوحة عريضة + | n / a | الدوائر المتقدمة | الكمية: 1 تكلفة الوحدة (دولار أمريكي): 3 |
| ZIF Active Headstage | ZC16 | Tucker-Davis Technologies | الكمية: 1 تكلفة الوحدة (دولار أمريكي): 925 |
| ZIF Passive Headstage | ZC16-P | Tucker-Davis Technologies | الكمية: 1 تكلفة الوحدة (دولار أمريكي): 625 |
| ZIF * | n / A | دوائر الساحل إلى الساحل | الكمية: 1 تكلفة الوحدة (دولار أمريكي): 9 |
Access restricted. Please log in or start a trial to view this content.
Request permission to reuse the text or figures of this JoVE article
Request Permission