مقالة منهجية

التحضير البيولوجي والتقنية الميكانيكية لتحديد الخصائص اللزجة المرنة للألياف المناطقية

DOI:

10.3791/63171

⸱

ديسمبر 16, 2021

 ,  ,  , 
1Department of Basic Sciences, University of Health Sciences and Pharmacy, 2Department of Ophthalmology & Visual Sciences, Washington University School of Medicine, 3Department of Biomedical Engineering, The Ohio State University, 4Department of Cell Biology & Physiology, Washington University School of Medicine

في هذه المقالة

ملخص

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

يصف البروتوكول طريقة لدراسة مرونة لزوجة المصفوفة خارج الخلية واعتمادها على تكوين البروتين أو العوامل البيئية. نظام المصفوفة المستهدف هو منطقة الماوس. يتم إثبات أداء هذه الطريقة من خلال مقارنة السلوك اللزج المرن للألياف المناطقية من النوع البري مع تلك التي تفتقر إلى البروتين السكري المرتبط بالألياف الدقيقة -1.

الملخص

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

المرونة ضرورية لوظيفة الأنسجة مثل الأوعية الدموية والعضلات والرئتين. هذه الخاصية مشتقة في الغالب من المصفوفة خارج الخلية (ECM) ، وهي شبكة البروتين التي تربط الخلايا والأنسجة معا. كيف ترتبط الخصائص المرنة لشبكة ECM بتكوينها ، وما إذا كانت خصائص الاسترخاء في ECM تلعب دورا فسيولوجيا ، هي أسئلة لم تتم معالجتها بالكامل بعد. يكمن جزء من التحدي في البنية المعقدة لمعظم أنظمة إدارة المحتوى المؤسسي وصعوبة عزل مكونات إدارة المحتوى المؤسسي دون المساس بهيكلها. أحد الاستثناءات هو zonule ، وهو نظام ECM موجود في عين الفقاريات. تتكون المنطقة من ألياف طولها مئات إلى آلاف الميكرومترات التي تمتد عبر المساحة الخالية من الخلايا بين العدسة وجدار العين. في هذا التقرير ، نصف تقنية ميكانيكية تستفيد من البنية عالية التنظيم للمنطقة لتحديد خصائصها المرنة اللزجة وتحديد مساهمة مكونات البروتين الفردية. تتضمن هذه الطريقة تشريح عين ثابتة لفضح العدسة والمنطقة وتستخدم تقنية السحب التي تمتد الألياف المناطقية بالتساوي أثناء مراقبة توترها. هذه التقنية غير مكلفة نسبيا ولكنها حساسة بما يكفي للكشف عن التغيرات في الخصائص اللزجة المرنة للألياف المناطقية في الفئران التي تفتقر إلى بروتينات إقليمية محددة أو مع الشيخوخة. على الرغم من أن الطريقة المعروضة هنا مصممة في المقام الأول لدراسة تطور العين ومرضها ، إلا أنها يمكن أن تكون أيضا نموذجا تجريبيا لاستكشاف أسئلة أوسع نطاقا تتعلق بالخصائص اللزجة المرنة ل ECM المرنة ودور العوامل الخارجية مثل التركيز الأيوني ودرجة الحرارة والتفاعلات مع جزيئات الإشارة.

المقدمة

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

تحتوي عين الفقاريات على عدسة بصرية حية تساعد على تركيز الصور على شبكية العين1. يتم تعليق العدسة على المحور البصري بواسطة نظام من الألياف الدقيقة ذات التوجه الشعاعي ، كما هو موضح في الشكل 1A. في أحد الطرفين ، ترتبط الألياف بخط الاستواء للعدسة ، وفي الطرف الآخر ، بسطح الجسم الهدبي. تمتد أطوالها لمسافات تتراوح من 150 ميكرومتر في الفئران إلى 1 مم في البشر. بشكل جماعي ، تعرف هذه الألياف باسم zonule of Zinn2 ، أو المنطقة الهدبية ، أو ببساطة zonule. يمكن أن تؤثر صدمة العين والمرض وبعض الاضطرابات الوراثية على سلامة الألياف المناطقية3، مما يؤدي إلى فشلها في نهاية المطاف وما يصاحبها من فقدان للرؤية. في الفئران ، تحتوي الألياف على نواة تتكون في الغالب من بروتين الفيبريلين -2 ، وتحيط بها عباءة غنية بالفيبريلين-14. على الرغم من أن الألياف المناطقية فريدة من نوعها للعين ، إلا أنها تحمل العديد من أوجه التشابه مع ألياف ECM القائمة على الإيلاستين الموجودة في أماكن أخرى من الجسم. هذه الأخيرة مغطاة بعباءة فيبريلين-15 ولها أبعاد مماثلة للألياف المناطقية6. تم العثور على بروتينات أخرى ، مثل البروتينات المرتبطة بعامل النمو الكامن β (LTBPs) والبروتين السكري المرتبط بالألياف الدقيقة -1 (MAGP-1) ، بالاقتران مع كلا النوعين من الألياف 7،8،9،10،11. يتراوح معامل المرونة للألياف المناطقية بين 0.18-1.50 MPa12,13,14,15,16 ، مقارنة بالألياف القائمة على الإيلاستين (0.3-1.2 ميجا باسكال)17. تقودنا أوجه التشابه المعمارية والميكانيكية هذه إلى الاعتقاد بأن أي نظرة ثاقبة لأدوار البروتينات المرتبطة بالمناطق قد تساعد في توضيح أدوارها في الألياف المرنة الأخرى ECM.

الغرض الرئيسي من تطوير الطريقة الموصوفة هنا هو اكتساب نظرة ثاقبة حول دور بروتينات منطقة محددة في تطور أمراض العين الموروثة. النهج العام هو مقارنة الخصائص اللزجة المرنة للألياف المناطقية في الفئران من النوع البري مع تلك الخاصة بالفئران التي تحمل طفرات مستهدفة في الجينات التي تشفر البروتينات المناطقية. في حين تم استخدام العديد من الطرق سابقا لقياس الخصائص الميكانيكية المطاطية للألياف المناطقية ، فقد تم تصميمها جميعا لعيون الحيوانات الأكبر بكثير12،13،14،15،16. على هذا النحو النماذج ليست قابلة للجر وراثيا. سعينا إلى تطوير طريقة تجريبية أكثر ملاءمة للعيون الصغيرة والحساسة للفئران.

الطريقة التي طورناها لتقييم المرونة اللزجة للألياف المناطقية للفئران هي تقنية نشير إليها باسم فحص السحب 4,18 ، والذي يتم تلخيصه بصريا في الشكل 1. ويرد أدناه وصف مفصل لطريقة السحب وتحليل النتائج. نبدأ بوصف بناء الجهاز ، بما في ذلك الأجزاء المطبوعة ثلاثية الأبعاد (3D) المستخدمة في المشروع. بعد ذلك ، نقوم بتفصيل البروتوكول المستخدم للحصول على العيون وإعدادها للتجربة. أخيرا ، نقدم إرشادات خطوة بخطوة حول كيفية الحصول على بيانات لتحديد الخصائص اللزجة المرنة للألياف المناطقية. في قسم النتائج التمثيلية ، نشارك البيانات غير المنشورة سابقا التي تم الحصول عليها بطريقتنا حول الخصائص اللزجة المرنة للألياف المناطقية من الفئران التي تفتقر إلى MAGP-119 بالإضافة إلى مجموعة التحكم التي تم الحصول عليها من الحيوانات البرية المتطابقة مع العمر. وأخيرا ، نختتم بملاحظات عامة حول مزايا وقيود الطريقة ، واقتراحات للتجارب المحتملة التي قد توضح كيف تؤثر العوامل البيئية والكيميائية الحيوية على الخصائص اللزجة المرنة لألياف ECM.

الوصول مقيد. يرجى تسجيل الدخول أو بدء فترة تجريبية لعرض هذا المحتوى.

البروتوكول

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

تمت الموافقة على جميع التجارب على الحيوانات من قبل لجنة الدراسات الحيوانية بجامعة واشنطن والتزمت ببيان ARVO لاستخدام الحيوانات في أبحاث العيون والرؤية.

1. تصنيع الأجزاء المتخصصة وبناء الأجهزة

  1. تصنيع الأجزاء المتخصصة
    1. تصنيع المسبار. امسك شعرية زجاجية بزاوية كما هو موضح في اللوحة اليسرى من الشكل 2A. ضع لهبا من ولاعة السجائر على بعد حوالي 2 سم من أحد طرفيها واحتفظ بها هناك حتى تنحني النهاية بمقدار 90 درجة ، كما هو موضح في اللوحة اليمنى من الشكل 2A.
    2. نموذج تصنيع المنصة. باستخدام برنامج الرسم ثلاثي الأبعاد ، قم بتصميم منصة بقياس 30 × 30 × 5 مم وتحتوي على مسافات بادئة نصف كروية قطرها 2.0 و 2.5 و 3.0 مم ، كما هو موضح في الشكل 2B.
    3. تصنيع حامل التحقيق. باستخدام برنامج الرسم ثلاثي الأبعاد ، قم بتصميم حامل يحمل المسبار الشعري وإرفاقه بجهاز micromanipulator (انظر الشكل 2C).
      ملاحظة: يتوفر نموذج ملف 3D لتصنيع المنصة وتصنيع حامل التحقيق بتنسيق STL عند الطلب من المؤلف المقابل.
    4. تجميع عدسة سلبية. ضع عدسة أسطوانية سالبة (-75 مم في البعد البؤري وحوالي 50 مم في الارتفاع والطول) كما هو موضح في الشكل 1C والشكل 1D لتصحيح التشوه الناجم عن إضافة السائل إلى طبق Petri (إضافة السائل يشوه رؤية العين المشوهة عند تصويرها من الجانب).
    5. قم بلصق العدسة السالبة على إحدى القواعد ذات المشقوقين (انظر الشكل 2D لتحديد موضع العدسة على القاعدة).
    6. قم بتجميع الأجزاء المتبقية كما هو موضح في الشكل 2D.
    7. اضبط ارتفاع المنشور بحيث تحوم العدسة بالكاد فوق المقياس وشد المسمار في حامل العمود.
  2. بناء الأجهزة
    1. قم بتثبيت برنامج التسجيل المزود بالمقياس وبرنامج كاميرا المجهر وتطبيق وحدة التحكم في الميكرومتر الآلية على جهاز كمبيوتر.
    2. قم بتوصيل الميكرومتر المزود بمحرك بوحدة تحكم المحرك المؤازرة والأخير بالكمبيوتر. ابدأ تشغيل تطبيق وحدة التحكم في المحرك وقم بتحرير إعدادات المحرك.
      ملاحظة: تم اختيار إعدادات المحرك ، المدرجة أدناه ، بعد تجارب أولية كشفت أن الضغوط ارتخت على مقياس زمني يتراوح بين 10 و 20 ثانية. وبناء على هذا التحديد، اخترنا السرعة والتسارع اللذين سمحا للمحرك بإكمال إزاحة 50 ميكرومتر في وقت أصغر من وقت الاسترخاء، ولكن ليس قصيرا جدا لتجنب هز العينة. هنا اخترنا وقت الإزاحة من حوالي 5-10 ثانية.
    3. اضبط السرعة القصوى على 0.01 مم/ث والتسارع على 0.005 مم/ث2.
    4. قم بتثبيت الكاميرا في مجهر الفحص واختبر برنامج تصوير الكاميرا.
    5. ضع الميزان على مساحة المقعد المخصصة للجهاز.
    6. قم بلصق منصة مطبوعة ثلاثية الأبعاد (من الخطوة 1.1.2) إلى طبق بتري وأضف خرزة زجاجية 2-3 مم إلى أحد الآبار. ضع طبق بتري على الميزان بحيث تقع الخرزة بالقرب من وسط المقلاة.
    7. استبدل الميكرومتر اليدوي من الميكرومانيبولتر بالمحرك الآلي.
    8. المسمار اثنين من مسامير 4-40 في حامل التحقيق. قم بتوصيل حامل المسبار بالمتلاعب كما هو موضح في الشكل 1C.
    9. قم بإعداد مسبار كما هو موضح في الشكل 2A ، وضعه داخل حامل المسبار مع توجيه الجزء المنحني لأسفل ، وشد البراغي.
    10. ضع المتلاعب الدقيق على الطاولة بحيث يكون طرف المسبار فوق الخرزة على المنصة. قم بتثبيت المتلاعب الدقيق على الطاولة لمنع الحركة العرضية أثناء التجربة.
    11. ضع المجهر الجانبي على الطاولة بحيث تكون الخرزة في مركز مجال رؤيتها وفي بؤرة التركيز.

2. إعداد العينات والحصول على البيانات

  1. تثبيت العين وتشريحها
    1. الحفاظ على الفئران البرية والحيوانات الخالية من Magp1 على خلفية C57 / BL6J متطابقة. القتل الرحيم للفئران البالغة من العمر 1 شهر أو 1 سنة عن طريق استنشاق CO2 .
    2. قم بإزالة العينين باستخدام ملقط ناعم وثبت الكرات الأرضية المتناثرة عند 4 درجات مئوية بين عشية وضحاها بنسبة 4٪ من محلول ملحي بارافورمالدهيد / فوسفات (PBS ، درجة الحموضة 7.4). الحفاظ على ضغط إيجابي من 15-20 مم زئبق في العين أثناء عملية التثبيت ، كما هو موضح 6.
      ملاحظة: تجرى التجارب على ذكور الفئران، للسيطرة على الاختلافات المحتملة المتعلقة بالجنس في حجم الكرة الأرضية. يضمن الضغط الإيجابي بقاء الكرة الأرضية منتفخة ، مما يحافظ على الفجوة بين العدسة وجدار العين الممتد بواسطة الألياف المناطقية.
    3. اغسل العينين لمدة 10 دقائق في PBS. باستخدام مقص جراحي للعيون والعمل تحت المجهر المجسم، قم بعمل شق كامل السماكة في جدار العين بالقرب من رأس العصب البصري.
    4. قم بتمديد القطع إلى الأمام إلى خط الاستواء ، ثم حول المحيط الاستوائي للعين. احرص على تجنيب العمليات الهدبية الحساسة والألياف المناطقية المرتبطة بها.
    5. قم بإزالة الجزء الخلفي من الكرة الأرضية، مع تعريض السطح الخلفي للعدسة.
    6. استخدم الملقط لإزالة العين المشوهة من المحلول العازل ووضعها على مسح جاف للمهمة مع توجيه القرنية لأسفل. اسحب القرنية برفق على سطح المسح لتجفيفها.
    7. أضف 3 ميكرولتر من الغراء الفوري إلى آبار المنصة التي ستستوعب العين في طبق بتري.
    8. ضع الطبق على طبق المسرح من المجهر المجسم بحيث يكون البئر مع الغراء في الأفق.
    9. انقل العين من المسح إلى حافة البئر التي تحتوي على الغراء. بعد ذلك ، اسحب العين بعناية إلى البئر واضبط اتجاهها بسرعة بحيث يكون الجزء الخلفي من العدسة في الأعلى.
    10. جفف الجانب المكشوف من العدسة عن طريق نفخها بلطف بزاوية منديل جاف.
    11. ضع رباطا من الغراء الفوري على قاع طبق بتري 50 مم وقم بإسمنت المنصة عليه.
  2. قياس الاستجابة اللزجة المرنة المناطقية
    1. قم بتشغيل المقياس ، وابدأ تشغيل برنامج تسجيل المقياس وبرنامج الكاميرا. تأكد من أن برنامج التسجيل يمكنه الحصول على البيانات لمدة 30 دقيقة ، حيث يمكن أن تستمر بعض التجارب لفترة طويلة.
    2. قم بتشغيل وحدة تحكم المحرك المؤازرة وابدأ تشغيل تطبيق وحدة التحكم على الكمبيوتر. تأكد من تعيين وحدة التحكم للتحرك بزيادات 50 ميكرومتر باستخدام معلمات الحركة المشابهة لتلك الموضحة في الملاحظة في الخطوة 1.2.2.
    3. قم بإنشاء انحناء 90 درجة في قضيب شعري كما هو موضح في الخطوة 1.1.1.
    4. انزلق الشعيرات الدموية المنحنية في حامل المسبار الشعري وشد مسامير التأمين.
      ملاحظة: لتقليل جفاف العينة، نوصي بإكمال الخطوات من 1 إلى 4 قبل تشريح العين أو أثناءه.
    5. أضف حبة صغيرة (~ 1 مم) من الغراء المعالج للأشعة فوق البنفسجية إلى طرف الشعيرات الدموية.
    6. باستخدام التعديلات اليدوية على المتلاعب ، حرك طرف المسبار الشعري بحيث يكون مباشرة فوق مركز العدسة. تحقق مما إذا كان الجزء السفلي من غراء الأشعة فوق البنفسجية يظهر في الوسط فوق الجزء العلوي من العدسة عند النظر إليه من الأمام (عن طريق الفحص البصري) والجانب (من خلال كاميرا المجهر).
    7. أثناء النظر من خلال الكاميرا، اخفض طرف المسبار حتى يتلامس الغراء فوق البنفسجي مع العدسة ويغطي ثلث إلى نصف سطحها العلوي.
    8. استخدم مصدر ضوء منخفض الكثافة (~ 1 mW) ، اتجاهي ، قريب من الرؤية للأشعة فوق البنفسجية (380-400 نانومتر) لعلاج الغراء.
      ملاحظة: هذه المواصفات كافية لعلاج الغراء في بضع ثوان مع تقليل إمكانية تحفيز الترابط المتقاطع للبروتين. مصادر الأشعة فوق البنفسجية المزودة بأقلام الغراء التجارية للأشعة فوق البنفسجية تلبي هذه المواصفات.
    9. أضف محلول PBS إلى الطبق حتى يتم تغطية العين بالسائل على عمق لا يقل عن 2 مم.
    10. ضع العدسة الأسطوانية أمام مجهر الفحص وأقرب ما يمكن إلى طبق بتري دون لمسه.
    11. ابدأ تشغيل برنامج التسجيل وبرنامج مؤقت في وقت واحد. التقط صورة للعين / المسبار باستخدام الكاميرا.
    12. بعد 60 ثانية ، ابدأ إزاحة 50 ميكرومتر أخرى ، وبعد ذلك كل 60 ثانية حتى تكتمل التجربة ، أي حتى يتم كسر جميع الألياف. لاحظ أن الإشارة لن تعود إلى مستويات خط الأساس بسبب تبخر المخزن المؤقت أثناء التجربة. تصحيح الانجراف الناتج عن ذلك في القراءات أثناء تحليل البيانات، كما هو موضح في الخطوة 2.2.14.
    13. عند الانتهاء من التشغيل، احفظ بيانات تسجيل المقياس وقم بتصديرها إلى تنسيق متوافق مع جدول البيانات، على سبيل المثال، تنسيق .csv. احفظ صور العدسة التي تم جمعها أثناء التشغيل.
    14. استيراد البيانات إلى جدول بيانات. استخدم قراءة المقياس الأولى والأخيرة لاستيعاب الانجراف في قراءة الخلفية بمرور الوقت بسبب التبخر (انظر الشكل 3). اطرح القراءة المستوفاة من القراءة في كل نقطة زمنية.
      ملاحظة: في حالة استخدام جدول بيانات، يمكن إجراء الاستيفاء تلقائيا عن طريق إدخال الصيغة = B2 - $B$2 + ($B$2 - @INDIRECT("B"&COUNTA(B:B))))/(COUNTA(B:B)-2) * A2 في الخلية الموجودة على يسار قراءة المقياس الأول، ثم تحريك المؤشر إلى الزاوية السفلية اليمنى من الخلية وسحبه لأسفل إلى آخر قيمة بيانات. تفترض الصيغة أن البيانات منظمة في عمود مع ظهور أول نقطة بيانات في الخلية B2. إذا رغبت في ذلك ، يمكن تحليل البيانات التي تمت معالجتها في الخطوة 2.2.14 باستخدام النموذج اللزج المرن شبه المرن الذي طوره أحد المؤلفين المشاركين ، الدكتور ماثيو رايلي 4.

الوصول مقيد. يرجى تسجيل الدخول أو بدء فترة تجريبية لعرض هذا المحتوى.

النتائج

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

توفر تقنية السحب الموصوفة هنا نهجا مباشرا لتحديد الخصائص اللزجة المرنة للألياف المناطقية في الفئران. باختصار ، يتم الحفاظ على عين الفأر أولا عن طريق حقن مثبت عند الضغط الفسيولوجي داخل العين. يحافظ هذا النهج على التضخم الطبيعي للعين ويحافظ على الألياف مشدودة مسبقا بشكل صحيح (اعتبر التثبيت مقبولا بعد أن أثبتت التجارب الأولية أنه لم يغير مرونة أو قوة الألياف بشكل كبير). ثم تتم إزالة الجزء الخلفي من عين الفأر عن طريق تشريح لفضح العدسة والألياف المناطقية التي تعلقها. يتم تثبيت الجزء الأمامي من العين على منصة ووضعه داخل طبق بت...

الوصول مقيد. يرجى تسجيل الدخول أو بدء فترة تجريبية لعرض هذا المحتوى.

المناقشة

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

ال zonule هو نظام ECM غير عادي حيث يتم ترتيب الألياف بشكل متماثل ويمكن التلاعب بها بشكل متطابق عن طريق إزاحة عدسة العين على طول المحور البصري. يمكن أيضا الوصول إلى الفضاء بسهولة دون انقطاع خلوي ، مما يسمح بدراسة الألياف في بيئة قريبة من حالتها الأصلية. تستفيد تقنية السحب من عرض ECM هذا للتعامل مع الألياف الحساسة من الفئران ، وهو نظام قابل للسحب وراثيا ، وتحديد خصائصها الميكانيكية بدقة. وقد سمح لنا ذلك بفحص مساهمة بروتينات ECM الرئيسية (fibrillin-118 و LTBP-24 و MAGP-1 المذكورة هنا) في الخصائص المي...

الوصول مقيد. يرجى تسجيل الدخول أو بدء فترة تجريبية لعرض هذا المحتوى.

الإفصاحات

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

ليس لدى المؤلفين ما يكشفون عنه.

شكر وتقدير

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

تم دعم هذا العمل من قبل NIH R01 EY029130 (S.B.) و P30 EY002687 (S.B.) ، R01 HL53325 ومؤسسة Ines Mandl Research Foundation (R.P.M.) ، ومؤسسة Marfan ، ومنحة غير مقيدة لقسم طب العيون والعلوم البصرية في جامعة واشنطن من البحث لمنع العمى. كما حصل ج. ر. على منحة من جامعة العلوم الصحية والصيدلة لدعم هذا المشروع.

الوصول مقيد. يرجى تسجيل الدخول أو بدء فترة تجريبية لعرض هذا المحتوى.

المواد

قائمة المواد المستخدمة في هذه المقالة
الاسمالشركةرقم فهرسيالتعليقات
1 / 4-20 مسامير سداسية 3/4 بوصة بطولThorlabsSH25S075
1 / 4-20 الجوزمتجر لاجهزة الكمبيوتر
طابعة 3D SLAAnycubicPhoton
4-40 مسامير بطول 3/8 بوصة ، 2لمتجر
، OD 1.2 مم و 3 بوصات طويلة ، بدون خيوطWPI1B120-3
Cyanoacrylate (سوبر) مقياس رقمي للغراءLoctite
دقيق حتى 0.01 جرامVernierOHAUS Scout 220
ExcelMicrosoftSpreadsheet ولاعة
سجائر غاز
مجهر فحص / تشريحAmscopeSKU: SM-4NTPمسافة العمل ~ 15 سم
مناور دقيق ، اقتصادي 4 محاورWPIKite-L
ميكرومتر بمحركاتThorlabsZ812B
عدسة أسطوانية سلبيةThorlabsLK1431L1-75 مم أطباق
بتري ذات البعد البؤري ، حامل بريد 50 مم
، 3 بوصاتThorlabsPH3
Post ، 4 بوصاتThorlabsTR4
برنامج تسجيل مقياسVernierالمؤازر LoggePro
ThorlabsKDC101
برنامج التحكم في المحرك المؤازرThorlabsAPT
قاعدة مشقوقة ، 1مشقوقة من ThorlabsBA1S
، 2ThorlabsBA2
USB WPIM-10micromanipular
للمجهركود التخزين التعريفي Amscope: MD500
غراء منشط بالأشعة فوق البنفسجية مع مصدر الأشعة فوق البنفسجيةأمازون
شعيرات دموية الأجهزة وحدة تحكم في المحرك قواعد حامل لكاميرا

المراجع

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,
  1. Bassnett, S., Shi, Y., Vrensen, G. F. Biological glass: structural determinants of eye lens transparency. Philosophical Transactions of the Royal Society B Biological Sciences. 366 (1568), 1250-1264 (2011).
  2. Bassnett, S. Zinn's zonule. Progress in Retinal and Eye Research. 82, 100902(2021).
  3. Dureau, P. Pathophysiology of zonular diseases. Current Opinion in Ophthalmology. 19 (1), 27-30 (2008).
  4. Shi, Y., et al. Latent-transforming growth factor beta-binding protein-2 (LTBP-2) is required for longevity but not for development of zonular fibers. Matrix Biology. 95, 15-31 (2021).
  5. Ushiki, T. Collagen fibers, reticular fibers and elastic fibers. A comprehensive understanding from a morphological viewpoint. Archives of Histology and Cytology. 65 (2), 109-126 (2002).
  6. Bassnett, S. A method for preserving and visualizing the three-dimensional structure of the mouse zonule. Experimental Eye Research. 185, 107685(2019).
  7. Todorovic, V., Rifkin, D. B. LTBPs, more than just an escort service. Journal of Cellular Biochemistry. 113 (2), 410-418 (2012).
  8. Mecham, R. P., Gibson, M. A. The microfibril-associated glycoproteins (MAGPs) and the microfibrillar niche. Matrix Biology. 47, 13-33 (2015).
  9. Hubmacher, D., Reinhardt, D. P., Plesec, T., Schenke-Layland, K., Apte, S. S. Human eye development is characterized by coordinated expression of fibrillin isoforms. Investigative Ophthalmology & Visual Science. 55 (12), 7934-7944 (2014).
  10. Inoue, T., et al. Latent TGF-β binding protein-2 is essential for the development of ciliary zonule microfibrils. Human Molecular Genetics. 23 (21), 5672-5682 (2014).
  11. De Maria, A., Wilmarth, P. A., David, L. L., Bassnett, S. Proteomic analysis of the bovine and human ciliary zonule. Investigative Ophthalmology & Visual Science. 58 (1), 573-585 (2017).
  12. Wright, D. M., Duance, V. C., Wess, T. J., Kielty, C. M., Purslow, P. P. The supramolecular organization of fibrillin-rich microfibrils determines the mechanical properties of bovine zonular filaments. Journal of Experimental Biology. 202 (21), 3011-3020 (1999).
  13. Bocskai, Z. I., Sandor, G. L., Kiss, Z., Bojtar, I., Nagy, Z. Z. Evaluation of the mechanical behaviour and estimation of the elastic properties of porcine zonular fibres. Journal of Biomechanics. 47 (13), 3264-3271 (2014).
  14. Fisher, R. F. The ciliary body in accommodation. Transactions of the Ophthalmological Societies of the United Kingdom. 105, Pt 2 208-219 (1986).
  15. Michael, R., et al. Elastic properties of human lens zonules as a function of age in presbyopes. Investigative Ophthalmology & Visual Science. 53 (10), 6109-6114 (2012).
  16. van Alphen, G. W., Graebel, W. P. Elasticity of tissues involved in accommodation. Vision Research. 31 (7-8), 1417-1438 (1991).
  17. Green, E. M., Mansfield, J. C., Bell, J. S., Winlove, C. P. The structure and micromechanics of elastic tissue. Interface Focus. 4 (2), 20130058(2014).
  18. Jones, W., Rodriguez, J., Bassnett, S. Targeted deletion of fibrillin-1 in the mouse eye results in ectopia lentis and other ocular phenotypes associated with Marfan syndrome. Disease Models & Mechanisms. 12 (1), 037283(2019).
  19. Weinbaum, J. S., et al. Deficiency in microfibril-associated glycoprotein-1 leads to complex phenotypes in multiple organ systems. Journal of Biological Chemistry. 283 (37), 25533-25543 (2008).
  20. Comeglio, P., Evans, A. L., Brice, G., Cooling, R. J., Child, A. H. Identification of FBN1 gene mutations in patients with ectopia lentis and marfanoid habitus. British Journal of Ophthalmology. 86 (12), 1359-1362 (2002).

الوصول مقيد. يرجى تسجيل الدخول أو بدء فترة تجريبية لعرض هذا المحتوى.

إعادة الطباعة والأذونات

طلب إذن لإعادة استخدام النص أو الأشكال في مقالة JoVE هذه

طلب إذن

الوسوم

مقالات ذات صلة