البطانة هي بنية ديناميكية متكاملة تلعب دورا مهما في العديد من الوظائف الفسيولوجية مثل تكوين الأوعية الدموية والإرقاء والالتهاب والاتزان الداخلي. تلعب البطانة أيضا دورا مهما في الفيزيولوجيا المرضية مثل تصلب الشرايين وارتفاع ضغط الدم والسكري. تشكل الخلايا البطانية البطانة الداخلية للدم والأوعية اللمفاوية وتظهر عدم تجانس في التركيب والوظيفة. قامت مجموعات مختلفة بتقييم وظائف الخلايا البطانية المشتقة من الدم المحيطي البشري مع التركيز على الخلايا السلفية البطانية المشتقة من الخلايا الجذعية المكونة للدم أو الخلايا البطانية الناضجة (أو الخلايا المكونة للمستعمرة البطانية). توفر هذه الخلايا موردا ذاتيا للعلاجات ونمذجة الأمراض. قد توفر الخلايا الغريبة مصدرا بديلا للعلاجات بسبب توافرها وتجانسها باستخدام متشابهة وراثيا تربى في ظروف مماثلة. ومن ثم ، تم تقديم بروتوكول قوي لعزل وتوسيع الخلايا البطانية المتكاثرة للغاية من الدم المحيطي للخنازير. يمكن استخدام هذه الخلايا في العديد من التطبيقات مثل هندسة أنسجة القلب والأوعية الدموية ، والعلاج بالخلايا ، ونمذجة الأمراض ، وفحص الأدوية ، ودراسة بيولوجيا الخلايا البطانية ، والثقافات المشتركة في المختبر للتحقيق في استجابات الالتهاب والتخثر في زراعة الأعضاء.
يتطلب اشتراك JoVE لعرض هذا المحتوى. تسجيل الدخول أو ابدأ نسخة تجريبية مجانية
مقالة منهجية
توصيف الخلايا البطانية لنمو الدم (BOEC) من الدم المحيطي للخنزير
في هذه المقالة
الملخص
المقدمة
البطانة هي بنية ديناميكية معقدة للغاية ومكون حيوي لجدار الأوعية الدموية. يبطن السطح الداخلي للأوعية الدموية لتوفير واجهة مادية بين الدورة الدموية والأنسجة المحيطة. من المعروف أن هذا الهيكل غير المتجانس يؤدي وظائف مختلفة مثل تكوين الأوعية ، والالتهاب ، وتنظيم الأوعية ، والإرقاء1،2،3،4. الخلايا البطانية للوريد السري البشري هي نوع من الخلايا يدرس على نطاق واسع لتقييم وظائف الخلايا البطانية. ومع ذلك ، فإن تباين الدفعة الخاصة بالمريض ، والنمط الظاهري غير المتسق ، والحد الأدنى من كفاءة الانقسام تشير إلى الحاجة إلى تحديد مصدر الخلية الذي يمكن أن يحسن كل هذه الميزات5.
يمكن أن يكون الحصول على مجموعة متجانسة من الخلايا البطانية الأولية أمرا صعبا من الناحية الفنية ، ولا تمتلك الخلايا البطانية الأولية قدرة تكاثرية عالية6. ومن ثم ، لدراسة تجديد الأوعية الدموية وتقييم العمليات الفيزيولوجية المرضية ، حاولت مجموعات مختلفة الحصول على أنواع مختلفة من الخلايا البطانية المشتقة من الدم المحيطي وتقييمها ، على سبيل المثال ، الخلايا السلفية البطانية البطانية (EPCs) أو الخلايا البطانية لنمو الدم (BOECs)6،7،8،9. تنشأ EPCs المبكرة على شكل مغزل من الخلايا الجذعية المكونة للدم (HSCs) ولها قوة نمو محدودة وقدرة وعائية محدودة على إنتاج خلايا بطانية ناضجة. علاوة على ذلك ، فهي تشبه إلى حد كبير الخلايا الوحيدة الالتهابية. بالإضافة إلى ذلك ، لا تزال قدرتها على التمايز إلى خلايا بطانية وظيفية ومتكاثرة وناضجة قابلة للنقاش6،7،9،10. يمكن أن تؤدي الثقافة المستمرة لخلايا الدم أحادية النواة المحيطية (PBMCs) إلى ظهور مجموعة ثانوية من الخلايا تعرف باسم EPCs متأخرة النمو أو BOECs أو الخلايا المكونة للمستعمرة البطانية (ECFCs)6،7،9،10. في عام 2018 ، اعترف Medina et al. بقيود EPCs ، وغموض تسميتها ، إلى جانب الافتقار العام للتوافق مع العديد من أنواع الخلايا المتميزة التي يتم تجميعها باستمرار تحت EPCs11. في المقابل ، أصبحت BOECs معترف بها لدورها في إصلاح الأوعية الدموية ، والصحة والمرض ، والعلاج الخلوي. ستعتمد الدراسة الإضافية والاستخدام العلاجي لهذه الخلايا على بروتوكولات لاشتقاق هذه الأنواع من الخلايا باستمرار من الخلايا السلفية المنتشرة.
يمكن استخدام الخلايا الأولية مثل BOECs كبديل للحصول على خلايا بطانية ناضجة تكاثريةللغاية 6. BOECs متميزة ظاهريا عن EPCs المبكرة وتظهر ميزات بطانية نموذجية مثل مورفولوجيا الحصى والتعبير عن تقاطعات adherens و caveolae12. وجد التنميط الجيني بواسطة Hebbel et al.13،14،15 أن BOECs أو ECFCs هي الخلايا البطانية الحقيقية لأنها تعزز تكوين الأوعية الدموية الدقيقة والأوعية الكبيرة. وبالتالي ، يمكن استخدام BOECs كأداة لتقييم العمليات الفيزيولوجية المرضية والتنوع الجيني16. كما أنها تعتبر مصدرا ممتازا للخلايا للعلاج الخلوي لتجديد الأوعية الدموية17. ومن ثم ، فإن وجود بروتوكول موحد لاشتقاق هذه الخلايا شديدة التكاثر باستمرار أمر ضروري.
بينما توفر BOECs أداة قوية لدراسة التباين الفيزيولوجي المرضي والجيني البشري ، فإن مصدرا أكثر تجانسا ل BOECs قد يوفر نتائج تجريبية وعلاجية أكثر قوة وموثوقية. يمكن تحقيق التجانس الفائق باستخدام مصادر الخلايا الغريبة المستمدة من الحيوانات المتشابهة وراثيا التي تربى في ظروف مماثلة18. في حين أن مصادر الخلايا الغريبة المنشأ عرضة لإثارة استجابة مناعية للمضيف ، يتم تطوير استراتيجيات التعديل المناعي بهدف توليد ومنتجات حيوانية متوافقة مع المناعة ، بما في ذلك الخلايا. الخنازير ، على وجه الخصوص ، هي مصدر وفير للدم المحيطي وتستخدم عادة لدراسة الأجهزة الطبية والعلاجات الأخرى بسبب أوجه التشابه التشريحية والفسيولوجية مع البشر. ومن ثم ، فإن هذه الدراسة تعمل على تحسين بروتوكول عزل وتوسيع BOECs شديدة التكاثر من الدم المحيطي الخنازير. البروتوكول المفصل أدناه هو طريقة مباشرة وموثوقة للحصول على عدد كبير من BOECs من كمية صغيرة نسبيا من الدم. يمكن توسيع الثقافات من خلال عدة ممرات لتوليد ملايين الخلايا من عينة دم واحدة.
الوصول مقيد. يرجى تسجيل الدخول أو بدء فترة تجريبية لعرض هذا المحتوى.
البروتوكول
تمت الموافقة على جميع الدراسات على الحيوانات من قبل اللجان المؤسسية المعنية لرعاية واستخدام الحيوان (IACUC) في كلية الطب في ويسكونسن ومايو كلينك.
ملاحظة: في هذه الدراسة ، تم استخدام الخنازير المحلية المتقاطعة يوركشاير / لاندريس / دوروك (Sus domesticus) ، ذكورا وإناثا ، 40-80 كجم ، 3-6 أشهر من العمر.
1. جمع الدم المحيطي الخنازير
- تحضير المواد.
- خفف محلول الهيبارين إلى 100 وحدة / مل في محلول ملحي معقم.
- أضف 3-4 مل من محلول الهيبارين إلى كل من أنبوبين مخروطيين سعة 50 مل وحقنتين سعة 60 مل.
- اسحب محلول الهيبارين غير المخفف (1000 وحدة / مل) في أنبوب تمديد.
- قم بتوصيل إبرة 19 جم بأحد طرفي أنبوب التمديد المملوء بالهيبارين ومحقنة 60 مل تحتوي على الهيبارين بالطرف الآخر.
- تخدير خنزير وفقا للسياسات المؤسسية
- تطبيق الحقن العضلي للأتروبين (0.05 ملغ/ كغ)، تيلتامين/زولازيبام (2-5 ملغ/كغ)، زيلازين (2 ملغ/كغ) للحث على التخدير.
ملاحظة: يتم تحقيق التخدير الكافي بمجرد أن يكون الحيوان فاقدا للوعي وتكون عضلات الفك السفلي غير صلبة. - ضع الحيوان في وضع الاستلقاء وضع المناشف الملفوفة على كلا الجانبين لتوفير الاستقرار.
- ضع مرهما للعيون على العينين لمنع الجفاف أثناء التخدير.
- توفير الدعم الحراري أثناء التخدير بما في ذلك البطانيات و / أو وسادات التدفئة و / أو طاولة الإجراءات الساخنة.
- تطبيق الحقن العضلي للأتروبين (0.05 ملغ/ كغ)، تيلتامين/زولازيبام (2-5 ملغ/كغ)، زيلازين (2 ملغ/كغ) للحث على التخدير.
- نظف منطقة الفخذ الفخذي بمحلول فرك البيتادين.
- ثقب الوريد الفخذي أو الشريان بإبرة 19 G وببطء (~ 1-2 مل / ثانية) سحب 50 مل من الدم في المحقنة.
ملاحظة: يمكن أن يؤدي الرسم بسرعة كبيرة إلى تلف الخلايا. - ترك الإبرة في مكانها ، قم بثني أنبوب التمديد على الفور وافصل المحقنة سعة 60 مل
- انقل الدم ببطء إلى أنبوب مخروطي يحتوي على الهيبارين سعة 50 مل.
- قم بتغطية الأنبوب المخروطي سعة 50 مل بإحكام ، ثم قلبه برفق عدة مرات للخلط ، وضعه على الثلج.
- قم بتوصيل المحقنة المتبقية التي تحتوي على الهيبارين سعة 60 مل بأنبوب التمديد ، وقم بفك أنبوب التمديد ، واسحب ببطء 50 مل إضافية من الدم إلى المحقنة.
- قم بإزالة الإبرة على الفور من الشريان أو الوريد واسحب الدم المتبقي ببطء من أنبوب التمديد إلى المحقنة.
- افصل المحقنة سعة 60 مل من أنبوب التمديد وانقل الدم ببطء إلى الأنبوب المخروطي المتبقي المحتوي على الهيبارين سعة 50 مل.
- قم بتغطية الأنبوب المخروطي سعة 50 مل بإحكام ، ثم قلبه برفق عدة مرات للخلط ، وضعه على الثلج.
- تطبيق الارقاء الضغط على منطقة الفخذ الخنزير.
- استعادة الخنزير وفقا للسياسات المؤسسية. راقب الحيوان باستمرار حتى يستعيد وعيه الكافي للحفاظ على الاستلقاء القصي والعودة إلى منطقة السكن / تربية الكلاب العادية.
2. عزل الخلايا أحادية النواة
- تمييع الدم 1: 1 مع محلول ملحي مخزن بالفوسفات (PBS) في أربعة أنابيب مخروطية سعة 50 مل.
ملاحظة: يجب إجراء هذا العمل في غطاء زراعة الخلايا باستخدام تقنية معقمة لتجنب تلويث ثقافة الخلية. - أضف 25 مل من محلول تدرج الكثافة الجاهز للاستخدام بدرجة حرارة الغرفة إلى ثمانية أنابيب مخروطية سعة 50 مل.
- ببطء شديد ماصة 25 مل من الدم / محلول ملحي على طول الجزء الداخلي من كل محلول تدرج الكثافة يحتوي على أنبوب مخروطي سعة 50 مل عن طريق تثبيت الأنبوب بزاوية حادة على طرف الماصة.
ملاحظة: يجب أن يوضع محلول الدم برفق فوق محلول تدرج الكثافة ويحافظ على واجهة محددة جيدا. - أجهزة الطرد المركزي الأنابيب لمدة 30 دقيقة عند 560 × جم ودرجة حرارة الغرفة (RT).
ملاحظة: للحصول على أفضل النتائج ، قم بتعطيل فرامل الطرد المركزي إن أمكن. - استخدم ماصة رقيقة لجمع الطبقة المنتفخة بعناية (طبقة غائمة من الخلايا أحادية النواة فوق محلول تدرج الكثافة وأسفل البلازما الشفافة) من كل أنبوب وتوزيعها بالتساوي في أنبوبين مخروطيين جديدين سعة 50 مل. تخلص من محلول تدرج الكثافة الذي يحتوي على أنابيب.
ملاحظة: اجمع أكبر قدر ممكن من معطف بافي مع جمع أقل قدر ممكن من محلول تدرج الكثافة والبلازما.
3. غسل وطلاء الخلايا
- معطف لوحة 6 بئر مع الفبرونيكتين.
- اصنع محلولا من الفبرونيكتين البشري في البلازما عن طريق تخفيفه إلى 1 مجم / مل في الماء المعقم. قم بتخزين القسامات في درجة حرارة -20 درجة مئوية.
- اصنع 3.6 مل من محلول عامل من الفبرونيكتين عن طريق تخفيف 600 ميكرولتر من محلول مخزون الفبرونيكتين في 3 مل من برنامج تلفزيوني.
- انقل 600 ميكرولتر من محلول عمل الفبرونيكتين إلى كل بئر من صفيحة ذات 6 آبار واهزها برفق حتى تغطى بالتساوي.
- انتظر 30 دقيقة حتى يقوم الفبرونيكتين بتغطية الآبار وشفط المحلول برفق من كل بئر.
- أثناء انتظار معطف الفبرونيكتين ، اغسل الخلايا أحادية النواة
- قم بتعبئة الأنابيب بما يصل إلى 45 مل من PBS
- جهاز طرد مركزي لمدة 5 دقائق عند 560 × جم و 4 درجات مئوية مع فرامل منخفضة. نضح الطافي من كلا الأنبوبين.
- أعد تعليق كل خلية بيليه في 25 مل من PBS.
- كرر لغسل مرة ثانية.
- أعد تعليق كل حبيبة خلية في 5 مل من PBS وأضف 15 مل من محلول كلوريد الأمونيوم 0.8٪ إلى كل أنبوب.
ملاحظة: هذه الخطوة هي تحلل خلايا الدم الحمراء المتبقية. - احتضان على الجليد لمدة 10 دقائق.
- اغسل الخلايا كما كان من قبل عن طريق تعبئة الأنابيب ب PBS وأجهزة الطرد المركزي لمدة 5 دقائق عند 560 × جم و 4 درجات مئوية مع فرامل منخفضة. نضح الطافي من كلا الأنبوبين.
- أعد تعليق كل حبيبة خلية في 25 مل من PBS وكرر الغسيل مرة ثانية.
- إعادة تعليق كل حبيبة خلوية في 6 مل من وسط زراعة EGM-2 المكمل بمصل بقري جنيني بنسبة 10٪ (FBS) ومحلول مضاد حيوي / مضاد حيوي يحتوي على 10000 وحدة / مل من البنسلين و 10 مجم / مل من الستربتومايسين و 25 ميكروغرام / مل من الأمفوتريسين.
ملاحظة: يتكون وسط استزراع EGM-2 من وسط استزراع EBM-2 مكمل ب 200 ميكرولتر من الهيدروكورتيزون ، 2 مل من عامل نمو الخلايا الليفية البشرية (hFGF-B) ، 500 ميكرولتر من عامل نمو بطانة الأوعية الدموية (VEGF) ، 500 ميكرولتر من التناظرية المؤتلفة لعامل النمو الشبيه بالأنسولين (R3 IGF-1) ، 500 ميكرولتر من حمض الأسكوربيك ، 500 ميكرولتر من عامل نمو البشرة البشري (hEGF) ، 500 ميكرولتر من الجنتاميسين / الأمفوتريسين ، و 500 ميكرولتر من الهيبارين لكل 500 مل. - انقل 2 مل من معلق الخلية برفق إلى كل بئر من الصفيحة ذات 6 آبار المطلية بالفبرونيكتين واهزها برفق حتى تغطى بالتساوي.
ملاحظة: الهدف هو زرع أكبر عدد ممكن من الخلايا لزيادة عدد المستعمرات البطانية التي ستتشكل.
4. ثقافة الخلية
- احتضان الخلايا عند 37 درجة مئوية ، 5٪ CO2 ، و 100٪ رطوبة.
- في اليوم التالي ، أضف برفق 1 مل من وسط الاستزراع الطازج إلى كل بئر.
ملاحظة: من المهم أن تكون لطيفا حتى لا تزعج الخلايا الملتصقة بشكل فضفاض بطلاء الفبرونيكتين. - في اليوم التالي، قم بإجراء تغيير نصف وسط الاستزراع عن طريق استنشاق 1.5 مل من وسط الاستزراع برفق من كل بئر واستبداله ب 1.5 مل من وسط الاستزراع الطازج.
- في كل يوم من الأيام ال 5 التالية، قم بإجراء تغيير وسط استزراع كامل برفق لكل بئر (2 مل من وسط الاستزراع الطازج لكل بئر).
- بعد ذلك ، قم بتغيير وسط الثقافة برفق ثلاث مرات في الأسبوع.
- تصور بانتظام ثقافات الخلايا تحت المجهر الضوئي منخفض الطاقة (4x الهدف).
ملاحظة: ستبدأ مستعمرات الخلايا البطانية الملتصقة بنمو الدم (BOEC) في الظهور في الآبار بعد 7-10 أيام من الطلاء. سيتم التخلص من أنواع الخلايا غير الملتصقة بتغييرات متوسطة ، وستتبدد أنواع الخلايا الملتصقة الأخرى تدريجيا مع نمو مستعمرات BOEC. - قم بتمرير BOECs إلى قارورة T-75 المطلية بالفبرونيكتين عندما تكون ~ 70٪ -80٪ متقاربة واستمر في تغيير وسط الثقافة ثلاث مرات في الأسبوع.
ملاحظة: يمكن التحكم في كثافة البذر عن طريق تمرير المستعمرات في قارورة T25 بدلا من ذلك. لا تتطلب الممرات اللاحقة طلاء الفبرونيكتين ، ويمكن تقليل التغييرات المتوسطة للثقافة إلى مرتين في الأسبوع. - يمكن استخدام الخلايا من الممرات 1-3 للتجارب أو نقلها إلى وسط تجميد وتخزينها في النيتروجين السائل لاستخدامها في المستقبل.
الوصول مقيد. يرجى تسجيل الدخول أو بدء فترة تجريبية لعرض هذا المحتوى.
النتائج
لوحظ مورفولوجيا الخلايا المستزرعة منذ بداية المزرعة حتى لوحظت مستعمرات BOEC (الشكل 1). بدأت مجموعة أقل من الخلايا الملتصقة في الالتصاق بأطباق الاستزراع والنمو ، بينما تمت إزالة الخلايا غير الملتصقة مع تغيرات وسط الثقافة (الشكل 1 ب). ظهرت المستعمرات لأول مرة في اليوم 6 كمجموعة من الخلايا الشبيهة بالبطانة تتكاثر شعاعيا للخارج من نقطة مركزية (الشكل 1 د). مع تقدم الثقافة ، أصبحت مستعمرات الخلايا أكثر كثافة وأظهرت مورفولوجيا مرصوفة بالحص...
الوصول مقيد. يرجى تسجيل الدخول أو بدء فترة تجريبية لعرض هذا المحتوى.
المناقشة
BOECs هي أداة قوية يمكن استخدامها في مختلف الأساليب العلمية والعلاجية7،8،16. تم استخدام BOECs لتحليل التعبير الجيني EC لتوضيح العوامل الرئيسية المسؤولة عن تطور أمراض الأوعية الدموية والسرطان5،19،20،21. كما تم استخدام BOECs في التطبيقات العلاجية مثل تجديد الأوعية الدموية وتوصيل الجينات...
الوصول مقيد. يرجى تسجيل الدخول أو بدء فترة تجريبية لعرض هذا المحتوى.
الإفصاحات
ليس لدى المؤلفين ما يكشفون عنه.
شكر وتقدير
يرغب المؤلفون في الاعتراف بالتمويل المقدم من NIH / NHLBI R00 HL129068.
الوصول مقيد. يرجى تسجيل الدخول أو بدء فترة تجريبية لعرض هذا المحتوى.
المواد
| الاسم | الشركة | رقم فهرسي | التعليقات |
|---|---|---|---|
| 19 جرام إبرة | Covidien | 1188818112 | |
| 50 مل أنابيب مخروطية | Corning | 352098 | |
| 6 ألواح آبار | BD Falcon | 353046 | |
| 60 مل محاقن | Covidien | 8881560125 | |
| محلول كلوريد الأمونيوم (0.8٪) | Stemcell Technologies | 07850 | |
| محلول مضاد حيوي / مضاد للفطريات (100x) | Gibco | 15240-062 | |
| أجهزة الطرد المركزي | الحرارية العلمية | 75-253-839 | |
| EGM-2 ثقافة متوسطة | لونزا ووكرزفيل | CC-3162 | |
| أنبوب التمديد | شركة حنا للتوريد الصيدلاني. | 03382C6227 | |
| مصل الأبقار الجنينية (FBS) | أطلس بيولوجيز | F-0500-A | |
| Ficoll-Paque 1077 | Cytiva | 17144003 | محلول التدرج الكثافة |
| حقن الصوديوم الهيبارين (1,000 وحدة / مل) | فايزر | 00069-0058-01 | |
| فيبرونيكتين البلازما البشرية | جيبكو | 33016-015 | |
| آيس | N / A | N / A | |
| محلول ملحي مخزن بالفوسفات (PBS) | مجموعة ماصات Gibco | 10010-023 | |
| Eppendorf | 2231300004 | ||
| مياه معقمة | Gibco | 15230-162 | |
| ماصة رقيقة | Celltreat Scientific | 229280 |
المراجع
- Aird, W. C. Phenotypic heterogeneity of the endothelium: II. Representative vascular beds. Circulation Research. 100 (2), 174-190 (2007).
- Aird, W. C. Phenotypic heterogeneity of the endothelium: I. Structure, function, and mechanisms. Circulation Research. 100 (2), 158-173 (2007).
- Pober, J. S., Tellides, G. Participation of blood vessel cells in human adaptive immune responses. Trends in Immunology. 33 (1), 49-57 (2012).
- Navarro, S., et al. The endothelial cell protein C receptor: its role in thrombosis. Thrombosis Research. 128 (5), 410-416 (2011).
- Hasstedt, S. J., et al. Cell adhesion molecule 1: a novel risk factor for venous thrombosis. Blood. 114 (14), 3084-3091 (2009).
- Ormiston, M. L., et al. Generation and culture of blood outgrowth endothelial cells from human peripheral blood. Journal of Visualized Experiments: JoVE. (106), e53384(2015).
- Lin, Y., Weisdorf, D. J., Solovey, A., Hebbel, R. P. Origins of circulating endothelial cells and endothelial outgrowth from blood. Journal of Clinical Investigation. 105 (1), 71-77 (2000).
- Martin-Ramirez, J., Hofman, M., Biggelaar, M. V. D., Hebbel, R. P., Voorberg, J. Establishment of outgrowth endothelial cells from peripheral blood. Nature Protocols. 7 (9), 1709-1715 (2012).
- Gulati, R., et al. Diverse origin and function of cells with endothelial phenotype obtained from adult human blood. Circulation Research. 93 (11), 1023-1025 (2003).
- Hebbel, R. P. Blood endothelial cells: utility from ambiguity. The Journal of Clinical Investigation. 127 (5), 1613-1615 (2017).
- Medina, R. J., et al. Endothelial progenitors: A consensus statement on nomenclature. Stem Cells Translational Medicine. 6 (5), 1316-1320 (2018).
- Medina, R. J., et al. Molecular analysis of endothelial progenitor cell (EPC) subtypes reveals two distinct cell populations with different identities. BMC Medical Genomics. 3, 18(2010).
- Jiang, A., Pan, W., Milbauer, L. C., Shyr, Y., Hebbel, R. P. A practical question based on cross-platform microarray data normalization: are BOEC more like large vessel or microvascular endothelial cells or neither of them. Journal of Bioinformatics and Computational Biology. 5 (4), 875-893 (2007).
- Pan, W., Shen, X., Jiang, A., Hebbel, R. P. Semi-supervised learning via penalized mixture model with application to microarray sample classification. Bioinformatics. 22 (19), 2388-2395 (2006).
- Hirschi, K. K., Ingram, D. A., Yoder, M. C. Assessing identity, phenotype, and fate of endothelial progenitor cells. Arteriosclerosis, Thrombosis, and Vascular Biology. 28 (9), 1584-1595 (2008).
- Fernandez, L. A., et al. Blood outgrowth endothelial cells from hereditary haemorrhagic telangiectasia patients reveal abnormalities compatible with vascular lesions. Cardiovascular Research. 68 (2), 235-248 (2005).
- Critser, P. J., Yoder, M. C. Endothelial colony-forming cell role in neoangiogenesis and tissue repair. Current Opinion in Organ Transplantation. 15 (1), 68-72 (2010).
- Zhao, Y., et al. Isolation and culture of primary aortic endothelial cells from miniature pigs. Journal of Visualized Experiments: JoVE. (150), e59673(2019).
- Chang Milbauer, L., et al. Genetic endothelial systems biology of sickle stroke risk. Blood. 111 (7), 3872-3879 (2008).
- Wei, P., et al. Differential endothelial cell gene expression by African Americans versusCaucasian Americans: a possible contribution to health disparity in vascular disease and cancer. BMC Medicine. 9 (1), 2(2011).
- Hasstedt, S. J., et al. Cell adhesion molecule 1: a novel risk factor for venous thrombosis. Blood, The Journal of the American Society of Hematology. 114 (14), 3084-3091 (2009).
- Milbauer, L. C., et al. Blood outgrowth endothelial cell migration and trapping in vivo: a window into gene therapy. Translational Research. 153 (4), 179-189 (2009).
- Matsui, H., et al. Ex vivo gene therapy for hemophilia A that enhances safe delivery and sustained in vivo factor VIII expression from lentivirally engineered endothelial progenitors. Stem Cells. 25 (10), 2660-2669 (2007).
- De Meyer, S. F., et al. Phenotypic correction of von Willebrand disease type 3 blood-derived endothelial cells with lentiviral vectors expressing von Willebrand factor. Blood. 107 (12), 4728-4736 (2006).
- Bodempudi, V., et al. Blood outgrowth endothelial cell-based systemic delivery of antiangiogenic gene therapy for solid tumors. Cancer Gene Therapy. 17 (12), 855-863 (2010).
- Dudek, A. Z., et al. Systemic inhibition of tumour angiogenesis by endothelial cell-based gene therapy. British Journal of Cancer. 97 (4), 513-522 (2007).
- Moubarik, C., et al. Transplanted late outgrowth endothelial progenitor cells as cell therapy product for stroke. Stem Cell Reviews and Reports. 7 (1), 208-220 (2011).
- Pislaru Sorin, V., et al. Magnetic forces enable rapid endothelialization of synthetic vascular grafts. Circulation. 114 (1), 314(2006).
- Satyananda, V., et al. New concepts of immune modulation in xenotransplantation. Transplantation. 96 (11), 937-945 (2013).
- Klymiuk, N., Aigner, B., Brem, G., Wolf, E. Genetic modification of pigs as organ donors for xenotransplantation. Molecular Reproduction and Development. 77 (3), 209-221 (2010).
- Ryczek, N., Hryhorowicz, M., Zeyland, J., Lipiński, D., Słomski, R. CRISPR/Cas technology in pig-to-human xenotransplantation research. International Journal of Molecular Sciences. 22 (6), 3196(2021).
- Cooper, D. K., Koren, E., Oriol, R. Genetically engineered pigs. Lancet. 342 (8872), 682-683 (1993).
- Cozzi, E., White, D. J. G. The generation of transgenic pigs as potential organ donors for humans. Nature Medicine. 1 (9), 964-966 (1995).
- Phelps, C. J., et al. Production of alpha 1,3-galactosyltransferase-deficient pigs. Science. 299 (5605), New York, N.Y. 411-414 (2003).
الوصول مقيد. يرجى تسجيل الدخول أو بدء فترة تجريبية لعرض هذا المحتوى.
إعادة الطباعة والأذونات
