تصف هذه الورقة النمذجة الإقفارية -reperfusion (I / R) في جنين فرخ لمدة 3 أيام باستخدام خطاف مخصص لإبرة العمود الفقري لفهم أفضل لتطوير I / R والعلاج. هذا النموذج بسيط وسريع وغير مكلف.
يتطلب اشتراك JoVE لعرض هذا المحتوى. تسجيل الدخول أو ابدأ نسخة تجريبية مجانية
مقالة منهجية
جيل من هوك الإقفارية-Reperfusion نموذج باستخدام الجنين الفرخ النامية لمدة ثلاثة أيام
* These authors contributed equally
في هذه المقالة
ملخص
الملخص
اضطرابات نقص التروية والتشويش (I/R)، مثل احتشاء عضلة القلب والسكتة الدماغية وأمراض الأوعية الدموية الطرفية، هي عدد قليل من الأسباب الرئيسية للمرض والوفاة. العديد من النماذج في المختبر وفي الجسم الحي متاحة حاليا لدراسة آلية I / R في الأمراض أو الأنسجة التالفة. ومع ذلك، حتى الآن، لم يتم الإبلاغ عن أي نموذج للكشف عن المخدرات، مما سيسمح بفهم أفضل لآليات البحث والتطوير والفحص الأسرع للأدوية. تصف هذه الورقة نمذجة I/R باستخدام خطاف مخصص لإبرة العمود الفقري في جنين فرخ لمدة 3 أيام لفهم آليات تطوير I/R وعلاجها. يمكن استخدام نموذجنا للتحقيق في الحالات الشاذة في مستويات الحمض النووي والحمض النووي الريبي والبروتين. هذه الطريقة بسيطة وسريعة وغير مكلفة. ويمكن استخدام النموذج الحالي بشكل مستقل أو بالاشتراك مع النماذج الموجودة في المختبر وفي الجسم الحي I /R.
المقدمة
تم ربط إصابة الأنسجة الإقفارية إلى عدد من الأمراض، بما في ذلك النوبات القلبية والسكتة الدماغية والصدمات النفسية وأمراض الأوعية الدموية الطرفية1،2،3،4،5. ويرجع ذلك في المقام الأول إلى عدم وجود فهم شامل لتطور المرض وعدم وجود نموذج بحثي فعال. تحدث الإصابة الإقفارية عندما يتم قطع إمدادات الدم إلى منطقة معينة من الأنسجة. ونتيجة لذلك ، تنخر الأنسجة الإقفارية في نهاية المطاف ، على الرغم من أن المعدل يختلف اعتمادا على الأنسجة. وبالتالي، قد تساعد استعادة إمدادات الدم على التخفيف من الضرر. ومع ذلك، فقد لوحظ، في بعض الحالات، أن التروية يسبب تلف الأنسجة أكثر من نقص التروية وحده لا 6،7،8. لذلك ، فهم الآليات الجزيئية والخلوية للتشويش الإقفاري مطلوب لتطوير تدخل علاجي فعال. حاليا، لا يعرف أي علاج فعال لإصابات I/R. وقد أدى هذا التفاوت إلى إنشاء نماذج تجريبية جديدة، تتراوح بين النماذج المختبرية والنماذج الحية، لمعالجة المشكلة القائمة9,10,11,12,13.
تستخدم أجنة الفرخ (Gallus gallus domesticus) على نطاق واسع في الأبحاث بسبب سهولة الوصول إليها ، ومقبولتها الأخلاقية ، وحجمها الكبير نسبيا (مقارنة بالأجنة الأخرى) ، وانخفاض التكلفة ، والنمو السريع14. استخدمنا جنين فرخ في 72 ساعة من التنمية لإنشاء في أوفو I / R عن طريق انسداد والإفراج عن الشريان الزئني الأيمن بمساعدة إبرة العمود الفقري. أطلقنا عليه اسم نموذج هوك-I/R الإقفارية-إعادة التروية (الشكل 1). النموذج المستخدمة في هذه الدراسة قادر على محاكاة بدقة جميع العمليات المصب، بما في ذلك المسارات التأكسدية والالتهابية، والتي ترتبط في كثير من الأحيان مع الضرر I/R15،16،17.
الوصول مقيد. يرجى تسجيل الدخول أو بدء فترة تجريبية لعرض هذا المحتوى.
البروتوكول
أصدرت اللجنة المؤسسية الأخلاقية الحيوانية في كلية ومستشفى لوكناو الطبية في إيرا تنازلا مكتوبا ينص على أنه لم تكن هناك حاجة إلى موافقة رسمية لإجراء هذه التجارب وفقا للجنة لغرض مراقبة والإشراف على التجارب على الحيوانات (CPCSEA). ومع ذلك، تم اتباع إجراءات التشغيل القياسية لتقليل أي احتمال للضائقة الجنينية.
1. إعداد المخزن المؤقت (الجدول 1)
- إعداد حل رينغر
- لإعداد الحل رينغر، حل 0.72 غرام من NaCl (123 mM)، 0.017 غرام من CaCl2 (1.53 mM)، 0.037 غرام من KCl (4.96 mM) في 70 مل من H2O المقطر العقيم، مع حجم نهائي قدره 100 مل. ضبط درجة الحموضة إلى 7.4. السماح لها تذوب تماما وautclave. ثم، فلتر من خلال مرشح 0.22 ميكرومتر، aliquot إلى كميات ذات استخدام واحد (حوالي 10 مل) وتخزينها في درجة حرارة الغرفة.
- إعداد المالحة العادية (0.9٪ كلوريد الصوديوم، NaCl).
- في 70 مل من H2O المقطر المعقم، حل 0.9 غرام من NaCl (154 mM). تشكل حجم إلى 100 مل. الأوتوكلاف لمدة 15 دقيقة عند 121 درجة مئوية. ضبط درجة الحموضة إلى 7.4 مع 0.1 N HCl أو 0.1 N NaOH إذا لزم الأمر. جعل 10 مل aliquots في أنبوب الطرد المركزي 15 مل معقمة وتخزينها في درجة حرارة الغرفة.
- إعداد الإيثانول بنسبة 70٪ (v/v).
- مزيج 70 مل من الإيثانول النقي (مول. wt. 46.07 غرام / لتر) إلى 30 مل من H2O العقيمة. إعداد حسب الحاجة أو تخزينها في درجة حرارة الغرفة. ليست هناك حاجة للتعقيم.
- إعداد 1x الفوسفات العازلة المالحة (1x PBS).
- إعداد 100 مل من برنامج تلفزيوني 1x بإضافة 0.144 غرام من Na2HPO4·7H2O (5.37 mM), 0.8 غرام من NaCl (136.8 mM), 0.2 غرام من KCl (26.8 mM), 0.2 غرام من KH2PO4 (14). 6 م م) إلى 70 مل من الماء المقطر. حل وتصنع وحدة التخزين إلى 100 مل وautclave لمدة 15 دقيقة في 121 درجة مئوية. جعل درجة الحموضة إلى 7.4، إضافة بضع قطرات من 0.1 N HCl أو 0.1 N NaOH، إذا لزم الأمر. جعل aliquots من 10 مل في أنبوب الطرد المركزي 15 مل معقمة وتخزينها في درجة حرارة الغرفة.
2. اليوم الأول
- ترتيب جميع الأدوات اللازمة لتعقيم البيض (70٪ الإيثانول، تنظيف مناديل، رف البيض، وعلامة OHP).
- تنظيف البيض لمدة 0 يوم مع الإيثانول 70٪ باستخدام مناديل ورق الأنسجة. استخدمي بويضة لمدة 0 يوم فقط، حيث أن البويضات القديمة قد لا تؤدي إلى جنين.
- اكتب التاريخ الحالي على البيض مع علامة OHP.
- ضع البيض في حاضنة البيض على درجة حرارة 36-37 درجة مئوية ومستوى رطوبة من 60٪ -65٪. احتضان البيض لمدة 24 ساعة القادمة.
3. اليوم الثاني
- ترتيب المعدات اللازمة لسحب 5-6 مل من الألبومين (مقص حافة حادة، 5 مل حقنة، 18 G إبرة، متخلص حقنة، وشريط لاصق).
- مسح مقص الجراحية مع الإيثانول 70٪ أو تعقيم باستخدام الأوتوكلاف بعد مسح لهم مع الإيثانول 70٪.
- الآن خذ البيضة من حاضنة البيض 37 درجة مئوية للطبقات.
- ضع البيضة على رف بيض نظيف.
- إرفاق قطعة صغيرة من شريط لاصق (الحجم: حوالي 1 بوصة طول × العرض) إلى حافة البيض.
- جعل ثقب صغير في حافة قشر البيض باستخدام مقص حافة حادة مدببة. أدخل حقنة سعة 5 مل بزاوية تقريبية تبلغ 75 درجة.
ملاحظة: تأتي حقنة 5 مل مع إبرة 24 G x 1 (معقمة)، ولكن من الجيد استبدال إبرة 24 G x 1 بإبرة 18 G x 1.5 (معقمة). الإبرة 18 G x 1.5 هو 1.25 × 38 ملم في العرض. لذلك، فإنه سيتم تسهيل إزالة الألبومين. - بعد إدخال الإبرة في كيس الصفار ، اسحب ببطء 5-6 مل من الألبومين.
ملاحظة: هذا يوفر الجنين مع سرير التي يمكن أن تنمو. سحب الألبوم يمنع تجاوز الألبومين أثناء إنشاء نافذة. وأخيرا، يتم التخفيف من خطر تلف الجنين أثناء النوافذ عن طريق القضاء على 5-6 مل من الألبومين. - بعد إزالة الألبومين، إعادة ختم الفتحة بشريط لاصق وترك البيض لاحتضان في 37 درجة مئوية لمدة 48 ساعة.
4. اليوم الرابع
- إعداد الحل رينغر، 0.9٪ المالحة العادية، و 1x برنامج تلفزيوني كما هو موضح في القسم 1 من البروتوكول. ثم، أوتوكلاف الحلول الثلاثة. بعد الالاستعباد التلقائي ، ضع الحل المعني في درجة حرارة الغرفة.
- أخرج البيضة من حاضنة البيض 37 درجة مئوية وقطع القشرة إلى شكل دائري. قبل قطع قشر البيض، قم بتغطية المنطقة ليتم قطعها بشريط لاصق.
ملاحظة: تغطي منطقة النافذة بشريط لاصق يمنع كسر قشر البيض إلى أماكن غير مرغوب فيها. ومع ذلك، إذا كنت اقتحام مكان غير مرغوب فيه، ختم المنطقة مع شريط لاصق. تغطية الأماكن التي سيتم قطعها بشريط لاصق يمنع قطع قذيفة من السقوط على كيس صفار. - خلق ثقب صغير في قشر البيض مع مقص حافة مدببة بحدة في المكان الذي يرغب في النوافذ والبدء في قطع فتحة دائرية. تعرف هذه العملية باسم الإطارات.
ملاحظة: تأكد من أن القطع الدائري كبير بما يكفي للسماح بسهولة الوصول إلى الجنين من أي اتجاه. إذا لزم الأمر، تغيير وضعية البويضة لاستيعاب وضع الجنين. - بعد ذلك، باستخدام مجهر جراحي للتكبير/التصغير ستيريو، حدد موقع الشريان الزفير الأيمن (RVA).
ملاحظة: تخضع أجنة الدجاج عادة لتوجس الصدر (جنبا إلى جنب مع ثني عنق الرحم، وما إلى ذلك) أثناء تطورها، بحيث يكون الجانب الأيسر من الرأس ضد الصفار في مرحلة 72 ساعة. أكثر caudally، حيث الشرايين الهوتيلين الخروج من الجسم، والجنين ليست ملتوية كثيرا، وهذا الجزء من الجسم يكمن الجانب البطني وصولا الى صفار. لذا ، بالنظر مباشرة ، فإن حق الجنين هو على يمين الباحث. - بمجرد تحديد موقع RVA، قم بإنشاء ثقبين صغيرين على الجانبين الأيسر والأيمن من RVA باستخدام إبرة 26 G (الشكل 2).
- ضع مسبار تصوير تدفق الدم دوبلر فوق RVA. تأكد من وضع مسبار تصوير تدفق الدم دوبلر 5 ± 1 مم من موقع نقص التروية ونحو النهاية البعيدة لل RVA. اتخاذ قراءة تدفق لمدة 2 دقيقة و 30 ق (أو أطول إذا رغبت في ذلك). وستكون هذه هي مرحلة القراءة normoxic.
- في غضون ذلك ، وذلك باستخدام الأنف plier والملقط مسنن ، العفن يدويا حافة الإبرة الشوكية في شكل هوك (الشكل 3). القيام بذلك عن طريق الانحناء حافة الإبرة الشوكية لحوالي 1 ملم. وهناك حجم أكبر تجعل من الصعب إدراج وإزالة إبرة العمود الفقري أثناء إجراء الإدخال / R.
- أدخل الإبرة الشوكية مباشرة أسفل الشريان الزاني الأيمن باستخدام ميكرومانيبولاتور.
ملاحظة: أدخل الإبرة الشوكية بحذر شديد لتجنب إتلاف ال RVA أو أي شرايين مجاورة. التقنية المثلى هي ضبط الخطاف المصمم خصيصا للإبرة الشوكية فوق الجانب الأيمن من ثقب RVA تماما ، يليه إدخال حافة الإبرة الشوكية المصممة خصيصا تدريجيا في كيس الصفار بمساعدة ميكرومانيبواتور تحت إشراف مجهر جراحي للتكبير ستيريو من خلال الثقب الأيمن. مرة واحدة في خطاف الإبرة الشوكية في كيس صفار, ضبط تدريجيا هوك تحت RVA بحيث يتم وضع حافة بالضبط تحت الثقب الأيسر. الآن هو الوقت المناسب لرفع الإبرة الشوكية. - الآن، بمساعدة من micromanipulator، رفع تدريجيا الشريان حتى تدفق الدم دوبلر يشير إلى انخفاض الحد الأدنى من 80٪ في تدفق الشرايين.
- بمجرد أن يتم تحقيق انخفاض بنسبة 80٪ أو أكثر في تدفق دوبلر، اترك الإبرة الشوكية مرفوعة (سحب الشريان إلى الأعلى) لمدة 5 دقائق. وستكون هذه هي فترة نقص التروية في RVA.
ملاحظة: من المهم مراقبة تدفق دوبلر خلال فترة نقص التروية. إذا تم العثور على قدر كبير من التقلبات، قم بإنهاء الاختبارات. - بعد فترة نقص التروية 5 دقائق، وإطلاق سراح تدريجيا الشريان لاستعادة مستويات تدفق الدم الطبيعية. تأكد من أن قراءة مقياس تدفق الدم دوبلر تعرض قيما مماثلة لتلك التي تم الحصول عليها أثناء normoxia. وستكون هذه هي فترة إعادة التروية في RVA (الشكل 4).
- بعد إجراء I / R ، ضع بضع قطرات (2-3) من برنامج تلفزيوني 1x على الجنين ومشاهدته لمدة 2-3 دقائق.
ملاحظة: استخدام برنامج تلفزيوني 1x يساعد على منع الجنين من الجفاف. - وأخيرا، إعادة ختم النافذة بشريط لاصق ووضع البيض مرة أخرى في حاضنة البيض لمدة 5 ساعات و 55 دقيقة.
- بعد 5 ساعات و 55 دقيقة، خذ البيضة من حاضنة البيض، وضعها على رف البيض، إعادة فتح النافذة، واتبع بروتوكول العلاج المصب.
5. العلاجات
- لعلاج الشرايين بالأدوية أو المنشطات أو المثبطات ، اقتطع RVA بعد ساعة واحدة من عملية I / R.
- بالنسبة للدراسات المصبية، قم أولا بإزالة الجنين من قشر البيض عن طريق وضعه على طبق بيتري معقم عيار 90 ملم.
- بمجرد إطلاق الجنين في طبق بيتري ، اقتطع RVA باستخدام القزحية العينية تحت إشراف مجهر جراحي للتكبير ستيريو.
- تأكد من أن بعد استئصال RVA يصل إلى 15 ± 1 مم (بعيدا عن الجذع) و5 ± 1 مم لكل منهما على الجانب الأيسر والأي من الشريان الأيمن و2 ± 1 مم باتجاه الجذع.
ملاحظة: يمكن استخدام مسطرة لقياس المساحة التي سيتم استئصالها (اختياري). - بعد استئصال RVA، وغسله مع برنامج تلفزيوني 1x في طبق بيتري عقيمة تحتوي على 1x PBS.
- بالنسبة للعلاجات المطلوبة، ضع الشريان في أنبوب طرد مركزي سعة 1.5 مل (معقم) مليء ب 500 ميكرولتر من محلول رينغر. ضع RVA في أنبوب الطرد المركزي وضعه في حاضنة 37 درجة مئوية لمدة 5 ساعة و 55 دقيقة.
ملاحظة: اعتمادا على العلاجات، إما استخدام الحل رينجر دون أي علاج، أو العلاج مع الحجم المطلوب وتركيز المخدرات، المنشط، أو المانع. - بعد 5 ساعة و 55 دقيقة من الحضانة، أخرج RVA من حاضنة المختبر 37 درجة مئوية، والمضي قدما في العلاجات المطلوبة.
الوصول مقيد. يرجى تسجيل الدخول أو بدء فترة تجريبية لعرض هذا المحتوى.
النتائج
تم استخدام تقنية تصوير تدفق الدم دوبلر لتقييم فعالية نموذجنا. باختصار، قارنا البيانات من مجموعة التحكم مع البيانات من مجموعة RVA لتحديد نجاح إنشاء لدينا. يصور الشكل 4A تدفقا نموذجيا مرتبطا بحيوان التحكم، بينما يصور الشكل 4B النتائج التي تم الحصول عليها من RVA. يمثل العدد 1-8 الأحداث المختلفة المقترنة بمراحل I/R. باختصار، العددية 1-3 تتوافق مع مرحلة normoxia، في حين أن الانخفاض الحاد في تدفق في النقطتين 3 و 4 يمثل الأحداث المرتبطة بانخفاض تدفق الدم في RVA. وبمجرد...
الوصول مقيد. يرجى تسجيل الدخول أو بدء فترة تجريبية لعرض هذا المحتوى.
المناقشة
الهدف من البحوث الإقفارية-reperfusion هو خلق استراتيجيات علاجية تمنع موت الخلايا وتعزيز الانتعاش29,30. للتغلب على القيود الحالية في أبحاث I / R ، قمنا بتصميم نموذج جنين هوك I / R لإنتاج نموذج I / R موثوق به وقابل للاستنساخ. على حد علمنا، لدينا هو أول نموذج I / R من أي وقت مضى خلق في جنين فرخ لمدة 3 أيام للتجارب الروتينية I / R، إلى جانب دراسة إشارات الإجهاد (على سبيل المثال، الإجهاد التأكسدي والالتهابي). ونظرا لفوائد الحجم وإمكانية الوصول في اليوم الثالث من
الوصول مقيد. يرجى تسجيل الدخول أو بدء فترة تجريبية لعرض هذا المحتوى.
الإفصاحات
ولا يعلن صاحبا البلاغ عن وجود مصالح متنافسة.
شكر وتقدير
ونود أن نعرب عن امتناننا لهاري شانكار على إسهاماته الهامة أثناء التصوير والتحرير، والسيد باقر حسين على الصوت، والسيد أصغر رضوي على تحرير الفيديو، والسيد محمد حيدر لتصوير الفيديو، والسيد محمد دانمركي صديقي للمساعدة خلال التجارب.
الوصول مقيد. يرجى تسجيل الدخول أو بدء فترة تجريبية لعرض هذا المحتوى.
المواد
| الاسم | الشركة | رقم فهرسي | التعليقات |
|---|---|---|---|
| (-80 درجة ؛ ج) فريزر | هاير ، أنبوب الطرد | الصيني | |
| 1.5 مل | TARSONS ، الهند | 500010X | |
| 100 مم طبق بتري (معقم) | Tarsons ، الهند | 460050 | |
| إبرة 18G (18G & times ؛ 1.5 (1.25 مرة; 38 مم) | رامسونز ، الهند | 13990 | |
| 1 مل حقنة | DISPO | VAN-26G | |
| إبرة (26 جم & مرات; 1/2 (10.45 × 13 مم) | ديسبو فان ، الهند | 30722D | |
| 37 درجة ؛ حاضنة بيض C مع نسبة مئوية قابلة للتعديل للرطوبة | Gentek ، الهند | GL-100 | |
| 37 درجة ؛ حاضنة المختبر C | SCIENCE TECH ، الهند | CB 101-14 | |
| 3-Methyladenine (3-MA) | Sigma Aldrich ، الولايات المتحدة الأمريكية | M9281 | |
| 3 مل ماصة المراعي | TARSONS ، الهند | 940050 | |
| 50 مل دورق | TARSONS ، الهند | - | |
| 5 مل حقنة | DISPO VAN ، الهند | IP53 | |
| 70٪ إيثانول | ميرك ميليبور ، الولايات المتحدة | 64-17-5 | |
| شريط لاصق / شريط تشيلو | شروق الشمس ، | الهند-Ambra1 | |
| بادئات | الأنظمة الحيوية التطبيقية ، فوستر سيتي ، الولايات المتحدة الأمريكية | Hs00387943_m1 | |
| IgG المضادة للفأر | ، الولايات المتحدة الأمريكية | 7076S | |
| مختبرات أبحاث المناعة | IgG Jackson المضادة للأرانب | 711-035-152 | |
| Atg7 | R & D Systems ، الولايات المتحدة الأمريكية | MAB6608 | |
| ATG7 الاشعال | Applied BioSystems ، فوستر سيتي ، الولايات المتحدة الأمريكية | Hs00893766_m1 | |
| الأوتوكلاف | Tarsons ، الهند | 550022 | |
| آلة الأوتوكلاف | محلية الصنع ، لكناو ، الهند | ||
| Proteintech ، الولايات المتحدة الأمريكية | 66665-1-IG | ||
| Beta Actin | ImmunoTag ، الولايات المتحدة الأمريكية | ITT07018 | |
| مصل الأبقار ألبومين | هيميديا ، مومباي ، الهند | TC194 | |
| كلوريد الكالسيوم | هيميديا ، مومباي ، الهند | GRM534 | |
| Catalase | ImmunoTag ، الولايات المتحدة الأمريكية | مناديل تنظيف ITT5155 | |
| كيمبرلي كلارك ، الهند | 370080 | ||
| Clocd Caspase3 | ImmunoTag ، الولايات المتحدة الأمريكية | ITT07022 | |
| ثنائي الصوديوم فوسفات الهيدروجين سباعي | هيميديا ، مومباي ، الهند | GRM39611 | |
| جهاز مقياس تدفق الدم دوبلر | ، المملكة المتحدة | moorVMS-LDF1 | |
| رف البيض | - | ||
| رف البيض | - | ||
| GAPDH | ImmunoTag ، الولايات المتحدة الأمريكية | M1000110 | |
| بادئات GAPDH | الأنظمة الحيوية التطبيقية ، فوستر سيتي ، الولايات المتحدة الأمريكية | Hs02758991_g1 | |
| Glycine | Himedia ، مومباي ، الهند | MB013 | |
| صينية الكلى | HOSPITO-LC3A | ||
| / B | تكنولوجيا إشارات الخلايا ، الولايات المتحدة الأمريكية | 4108S | |
| الميثانول | رانكيم ، مومباي ، الهند | M0252 | |
| Micromanipulator | Narishige ، اليابان | M-152 | |
| N-acetyl-L-cysteine (NAC) | Sigma Aldrich, الولايات المتحدة الأمريكية | A7250 | |
| Naringenin | Sigma Aldrich, الولايات المتحدة الأمريكية | 67604-48-2 | |
| NF-k & beta; | ثيرمو فيشر العلمي ، الولايات المتحدة الأمريكية | 51-0500 | |
| NLRP3 | ImmunoTag ، الولايات المتحدة الأمريكية | ITT07438 | |
| ذو طيات الأنف | محلي الصنع ، لكناو ، الهند | ملقط | |
| العين | Stoelting ، ألمانيا | 52106-40 | |
| قزحية العين | Tufft الأدوات الجراحية ، جايبور ، الهند | مقص صغير Vannas Age الصعب بزاوية 8 سم / 3 1/8 " | |
| OHP قلم تحديد | Camlin ، | ||
| ImmunoTag ، الولايات المتحدة الأمريكية | ITT08329 | ||
| مقص مدبب حاد | الحافة Stoelting ، ألمانيا | 52132-11 | |
| كلوريد البوتاسيوم | Himedia ، مومباي ، الهند | MB043 | |
| فوسفات البوتاسيوم أحادي القاعدة اللامائي | Himedia ، مومباي ، الهند | MB050 | |
| مثبط البروتياز | Abcam ، الولايات المتحدة | Ab65621 | |
| SOD-1 | ImmunoTag ، الولايات المتحدة الأمريكية | ITT4364 | |
| كلوريد الصوديوم | فيشر العلمي ، مومباي ، الهند | 27605 | |
| كبريتات دوديسيل الصوديوم | هيميديا ، مومباي ، الهند | GRM886 | |
| إبرة العمود الفقري 25GA ؛ 3.50 بوصة (90.51 × 90 مم) | رامسون ، الهند | GS-2029 | |
| مجهر جراحي ستيريو زووم | أوليمبوس ، اليابان | SZ2-STU3 | |
| مرتجع حقنة | BIOHAZARD | 882210 | |
| ملقط مسنن | Stoelting ، ألمانيا | 52102-30 | |
| تريس بیس | جي بيولوجيز ، الولايات المتحدة | RC1217 | |
| تريس حمض الهيدروكلوريك | هيميديا ، مومباي ، الهند | MB030 | |
| Tween 20 | G Biosciences ، الولايات المتحدة | RC1227 | |
| دجاج ليغورن الأبيض 0 يوم | بيض - | ||
| Z-Val-Ala-Asp (OMe) -FMK | MP Biomedicals، LLC ، الولايات المتحدة الأمريكية | FK009 |
المراجع
- Fauzia, E., et al. Chick Embryo: A Preclinical Model for Understanding Ischemia-Reperfusion Mechanism. Frontiers in Pharmacology. 21 (9), 1034(2018).
- Eltzschig, H. K., Eckle, T. Ischemia and reperfusion--from mechanism to translation. Nature Medicine. 17 (11), 1391-1401 (2011).
- Raza, S. S., et al. Neuroprotective effect of naringenin is mediated through suppression of NF-κB signaling pathway in experimental stroke. Neuroscience. 29 (230), 157-171 (2013).
- Raza, S. S., et al. Hesperidin ameliorates functional and histological outcome and reduces neuroinflammation in experimental stroke. Brain Research. 28 (1420), 93-105 (2011).
- Raza, S. S., et al. Silymarin protects neurons from oxidative stress associated damages in focal cerebral ischemia: a behavioral, biochemical and immunohistological study in Wistar rats. Journal of the Neurological Sciences. 15 (1-2), 45-54 (2011).
- Fan, L., Zhou, L. AG490 protects cerebral ischemia/reperfusion injury via inhibiting the JAK2/3 signaling pathway. Brain and Behavior. 11 (1), 01911(2021).
- Wu, M. Y., et al. Current Mechanistic Concepts in Ischemia and Reperfusion Injury. Cellular Physiology and Biochemistry. 46 (4), 1650-1667 (2018).
- Collard, C. D., Gelman, S. Pathophysiology, clinical manifestations, and prevention of ischemia-reperfusion injury. Anesthesiology. 94 (6), 1133-1138 (2001).
- Allen, D. D., et al. Cell lines as in vitro models for drug screening and toxicity studies. Drug Development and Industrial Pharmacy. 31 (8), 757-768 (2005).
- Schmeer, C., Gamez, A., Tausch, S., Witte, O. W., Isenmann, S. Statins modulate heat shock protein expression and enhance retinal ganglion cell survival after transient retinal ischemia/reperfusion in vivo. Investigative Ophthalmology and Visual Science. 49 (11), 4971-4981 (2008).
- Huang, K. Y., et al. A systematic review and meta-analysis of acupuncture for improving learning and memory ability in animals. BMC Complementary and Alternative Medicine. 16 (1), 297(2016).
- Sommer, C. J. Ischemic stroke: Experimental models and reality. Acta Neuropathologica. 133 (2), 245-261 (2017).
- Yang, W., Chen, J., Meng, Y., Chen, Z., Yang, J. Novel targets for treating ischemia-reperfusion injury in the liver. International Journal of Molecular Sciences. 19 (5), 1302(2018).
- Seabra, R., Bhogal, N. In vivo research using early life stage models. In Vivo. 24 (4), 457-462 (2010).
- Liu, H., et al. Adiponectin peptide alleviates oxidative stress and NLRP3 inflammasome activation after cerebral ischemia-reperfusion injury by regulating AMPK/GSK-3beta. Experiments in Neurology. 329, 113302(2020).
- Aboutaleb, N., Jamali, H., Abolhasani, M., Pazoki Toroudi, H. Lavender oil (Lavandula angustifolia) attenuates renal ischemia/reperfusion injury in rats through suppression of inflammation, oxidative stress and apoptosis. Biomedicine and Pharmacotherapy. 110, 9-19 (2019).
- Wallert, M., et al. alpha-Tocopherol preserves cardiac function by reducing oxidative stress and inflammation in ischemia/reperfusion injury. Redox Biology. 26, 101292(2019).
- Ashafaq, M., et al. Catechin hydrate ameliorates redox imbalance and limits inflammatory response in focal cerebral ischemia. Neurochemical Research. 37 (8), 1747-1760 (2012).
- Gallagher, S., Chakavarti, D. Immunoblot analysis. Journal of Visualized Experiments. 20 (16), 759(2008).
- Abt, M. A., Grek, C. L., Ghatnekar, G. S., Yeh, E. S. Evaluation of lung metastasis in mouse mammary tumor models by quantitative real-time PCR. Journal of Visualized Experiments. (107), e53329(2016).
- Lee, P. Y., Costumbrado, J., Hsu, C. Y., Kim, Y. H. Agarose gel electrophoresis for the separation of DNA fragments. Journal of Visualized Experiments. (62), e3923(2012).
- Wu, Y., et al. Cathelicidin aggravates myocardial ischemia/reperfusion injury via activating TLR4 signaling and P2X(7)R/NLRP3 inflammasome. Journal of Molecular and Cellular Cardiology. 139, 75(2020).
- Franke, M., et al. The NLRP3 inflammasome drives inflammation in ischemia/reperfusion injury after transient middle cerebral artery occlusion in mice. Brain Behaviour and Immunity. 92, 223(2021).
- Lawrence, T. The nuclear factor NF-kappaB pathway in inflammation. Cold Spring Harbor Perspectives in Biology. 1 (6), 001651(2009).
- Liu, H., et al. Pterostilbene attenuates astrocytic inflammation and neuronal oxidative injury after ischemia-reperfusion by inhibiting NF-kappaB phosphorylation. Frontiers in Immunology. 10, 2408(2009).
- Prakash, R., et al. Sivelestat-loaded nanostructured lipid carriers modulate oxidative and inflammatory stress in human dental pulp and mesenchymal stem cells subjected to oxygen-glucose deprivation. Materials Science and Engineering: C Materials for Biological Applications. 120, 111700(2021).
- Prakash, R., et al. Oxidative stress enhances autophagy in stem cells through Erk1/2 signaling pathway - implications for neurotransplantations. Stem Cell Reviews and Reports. , (2021).
- Ahmad, A., et al. Gelatin-coated polycaprolactone nanoparticle-mediated naringenin delivery rescue human mesenchymal stem cells from oxygen glucose deprivation-induced inflammatory stress. ACS Biomaterials Science and Engineering. 5 (2), 683-695 (2019).
- Guan, X., et al. The neuroprotective effects of carvacrol on ischemia/reperfusion-induced hippocampal neuronal impairment by ferroptosis mitigation. Life Science. 235, 116795(2019).
- Jin, Z., Guo, P., Li, X., Ke, J., Wang, Y., Wu, H. Neuroprotective effects of irisin against cerebral ischemia/ reperfusion injury via Notch signaling pathway. Biomedicine and Pharmacotherapy. 120, 109452(2019).
- Wainrach, S., Sotelo, J. R. Electron microscope study of the developing chick embryo heart. Zeitschrift fur Zellforschung und mikroskopische Anatomie. 55, 622-634 (1961).
- Joshi, V. C., Wilson, A. C., Wakil, S. J. Assay for the terminal enzyme of the stearoyl coenzyme A desaturase system using microsomes. Journal of Lipid Research. 18 (1), 32-36 (1977).
- Kain, K. H., et al. The chick embryo as an expanding experimental model for cancer and cardiovascular research. Development Dynamics. 243 (2), 216-228 (2014).
- Mann, R. A., Moore, K. L., Persaud, T. V. N. Limitations in the u~e of the early chick embryo 88 a teratological model. Teratology. 7, 22-23 (1973).
- Chen, T., Vunjak-Novakovic, G. In vitro models of ischemia-reperfusion injury. Regenerative English and Translation Medicine. 4 (3), 142-153 (2018).
- Ma, R., et al. Animal models of cerebral ischemia: A review. Biomedicine and Pharmacotherapy. 131, 110686(2020).
- Bromage, D. I., et al. Remote ischaemic conditioning reduces infarct size in animal in vivo models of ischaemia-reperfusion injury: a systematic review and meta-analysis. Cardiovascular Research. 113 (3), 288-297 (2017).
- Kalogeris, T., Baines, C. P., Krenz, M., Korthuis, R. J. Cell biology of ischemia/reperfusion injury. International Review of Cell and Molecular Biology. 298, 229-317 (2012).
- Hogers, B., DeRuiter, M. C., Baasten, A. M., Gittenberger-de Groot , A. C., Poelmann, R. E. Intracardiac blood flow patterns related to the yolk sac circulation of the chick embryo. Circ Res. 76 (5), 871-877 (1995).
- Rezzola, S., et al. angiogenesis-inflammation cross talk in diabetic retinopathy: novel insights from the chick embryo chorioallantoic membrane/human vitreous platform. Frontiers in Immunology. 11, 581288(2020).
الوصول مقيد. يرجى تسجيل الدخول أو بدء فترة تجريبية لعرض هذا المحتوى.
إعادة الطباعة والأذونات
