Method Article

جيل من هوك الإقفارية-Reperfusion نموذج باستخدام الجنين الفرخ النامية لمدة ثلاثة أيام

DOI:

10.3791/63288

⸱

February 19th, 2022

 ,  ,  ,  ,  , 
1Laboratory for Stem Cell and Restorative Neurology, Department of Biotechnology, Era’s Lucknow Medical College Hospital, Era University, 2Era University, 3Department of Stem Cell Biology and Regenerative Medicine, Era University

In This Article

Summary

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

تصف هذه الورقة النمذجة الإقفارية -reperfusion (I / R) في جنين فرخ لمدة 3 أيام باستخدام خطاف مخصص لإبرة العمود الفقري لفهم أفضل لتطوير I / R والعلاج. هذا النموذج بسيط وسريع وغير مكلف.

Abstract

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

اضطرابات نقص التروية والتشويش (I/R)، مثل احتشاء عضلة القلب والسكتة الدماغية وأمراض الأوعية الدموية الطرفية، هي عدد قليل من الأسباب الرئيسية للمرض والوفاة. العديد من النماذج في المختبر وفي الجسم الحي متاحة حاليا لدراسة آلية I / R في الأمراض أو الأنسجة التالفة. ومع ذلك، حتى الآن، لم يتم الإبلاغ عن أي نموذج للكشف عن المخدرات، مما سيسمح بفهم أفضل لآليات البحث والتطوير والفحص الأسرع للأدوية. تصف هذه الورقة نمذجة I/R باستخدام خطاف مخصص لإبرة العمود الفقري في جنين فرخ لمدة 3 أيام لفهم آليات تطوير I/R وعلاجها. يمكن استخدام نموذجنا للتحقيق في الحالات الشاذة في مستويات الحمض النووي والحمض النووي الريبي والبروتين. هذه الطريقة بسيطة وسريعة وغير مكلفة. ويمكن استخدام النموذج الحالي بشكل مستقل أو بالاشتراك مع النماذج الموجودة في المختبر وفي الجسم الحي I /R.

Introduction

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

تم ربط إصابة الأنسجة الإقفارية إلى عدد من الأمراض، بما في ذلك النوبات القلبية والسكتة الدماغية والصدمات النفسية وأمراض الأوعية الدموية الطرفية1،2،3،4،5. ويرجع ذلك في المقام الأول إلى عدم وجود فهم شامل لتطور المرض وعدم وجود نموذج بحثي فعال. تحدث الإصابة الإقفارية عندما يتم قطع إمدادات الدم إلى منطقة معينة من الأنسجة. ونتيجة لذلك ، تنخر الأنسجة الإقفارية في نهاية المطاف ، على الرغم من أن المعدل يختلف اعتمادا على الأنسجة. وبالتالي، قد تساعد استعادة إمدادات الدم على التخفيف من الضرر. ومع ذلك، فقد لوحظ، في بعض ا....

Access restricted. Please log in or start a trial to view this content.

Protocol

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

أصدرت اللجنة المؤسسية الأخلاقية الحيوانية في كلية ومستشفى لوكناو الطبية في إيرا تنازلا مكتوبا ينص على أنه لم تكن هناك حاجة إلى موافقة رسمية لإجراء هذه التجارب وفقا للجنة لغرض مراقبة والإشراف على التجارب على الحيوانات (CPCSEA). ومع ذلك، تم اتباع إجراءات التشغيل القياسية لتقليل أي احتمال للضائقة الجنينية.

1. إعداد المخزن المؤقت (الجدول 1)

  1. إعداد حل رينغر
    1. لإعداد الحل رينغر، حل 0.72 غرام من NaCl (123 mM)، 0.017 غرام من CaCl2 (1.53 mM)، 0.037 غرام من KCl (4.96 mM) في 70 مل من H2O المقطر العقيم، مع حجم نهائي قدره 100 مل. ضبط درجة الحموضة إلى 7.4. السماح لها تذوب تماما وautclave. ثم، فلتر من ....

Access restricted. Please log in or start a trial to view this content.

Results

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

تم استخدام تقنية تصوير تدفق الدم دوبلر لتقييم فعالية نموذجنا. باختصار، قارنا البيانات من مجموعة التحكم مع البيانات من مجموعة RVA لتحديد نجاح إنشاء لدينا. يصور الشكل 4A تدفقا نموذجيا مرتبطا بحيوان التحكم، بينما يصور الشكل 4B النتائج التي تم الحصول عليها من RVA. يمثل العدد 1-8 الأحداث المختلفة المقترنة بمراحل I/R. باختصار، العددية 1-3 تتوافق مع مرحلة normoxia، في حين أن الانخفاض الحاد في تدفق في النقطتين 3 و 4 يمثل الأحداث المرتبطة بانخفاض تدفق الدم في RVA. وبمجرد.......

Access restricted. Please log in or start a trial to view this content.

Discussion

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

الهدف من البحوث الإقفارية-reperfusion هو خلق استراتيجيات علاجية تمنع موت الخلايا وتعزيز الانتعاش29,30. للتغلب على القيود الحالية في أبحاث I / R ، قمنا بتصميم نموذج جنين هوك I / R لإنتاج نموذج I / R موثوق به وقابل للاستنساخ. على حد علمنا، لدينا هو أول نموذج I / R من أي وقت مضى خلق في جنين فرخ لمدة 3 أيام للتجارب الروتينية I / R، إلى جانب دراسة إشارات الإجهاد (على سبيل المثال، الإجهاد التأكسدي والالتهابي). ونظرا لفوائد الحجم وإمكانية الوصول في اليوم الثالث من

Access restricted. Please log in or start a trial to view this content.

Disclosures

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

ولا يعلن صاحبا البلاغ عن وجود مصالح متنافسة.

Acknowledgements

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

ونود أن نعرب عن امتناننا لهاري شانكار على إسهاماته الهامة أثناء التصوير والتحرير، والسيد باقر حسين على الصوت، والسيد أصغر رضوي على تحرير الفيديو، والسيد محمد حيدر لتصوير الفيديو، والسيد محمد دانمركي صديقي للمساعدة خلال التجارب.

....

Access restricted. Please log in or start a trial to view this content.

Materials

List of materials used in this article
NameCompanyCatalog NumberComments
(-80 درجة ؛ ج) فريزرهاير ، أنبوب الطردالصيني
1.5 ملTARSONS ، الهند500010X
100 مم طبق بتري (معقم)Tarsons ، الهند460050
إبرة 18G (18G & times ؛ 1.5 (1.25 مرة; 38 مم)رامسونز ، الهند13990
1 مل حقنةDISPOVAN-26G
إبرة (26 جم & مرات; 1/2 (10.45 × 13 مم)ديسبو فان ، الهند30722D
37 درجة ؛ حاضنة بيض C مع نسبة مئوية قابلة للتعديل للرطوبةGentek ، الهندGL-100
37 درجة ؛ حاضنة المختبر CSCIENCE TECH ، الهندCB 101-14
3-Methyladenine (3-MA)Sigma Aldrich ، الولايات المتحدة الأمريكيةM9281
3 مل ماصة المراعيTARSONS ، الهند940050
50 مل دورقTARSONS ، الهند-
5 مل حقنةDISPO VAN ، الهندIP53
70٪ إيثانولميرك ميليبور ، الولايات المتحدة64-17-5
شريط لاصق / شريط تشيلوشروق الشمس ،الهند-Ambra1
بادئاتالأنظمة الحيوية التطبيقية ، فوستر سيتي ، الولايات المتحدة الأمريكيةHs00387943_m1
IgG المضادة للفأر، الولايات المتحدة الأمريكية7076S
مختبرات أبحاث المناعةIgG Jackson المضادة للأرانب711-035-152
Atg7R & D Systems ، الولايات المتحدة الأمريكيةMAB6608
ATG7 الاشعالApplied BioSystems ، فوستر سيتي ، الولايات المتحدة الأمريكيةHs00893766_m1
الأوتوكلافTarsons ، الهند550022
آلة الأوتوكلافمحلية الصنع ، لكناو ، الهند
Proteintech ، الولايات المتحدة الأمريكية66665-1-IG
Beta ActinImmunoTag ، الولايات المتحدة الأمريكيةITT07018
مصل الأبقار ألبومينهيميديا ، مومباي ، الهندTC194
كلوريد الكالسيومهيميديا ، مومباي ، الهندGRM534
CatalaseImmunoTag ، الولايات المتحدة الأمريكيةمناديل تنظيف ITT5155
كيمبرلي كلارك ، الهند370080
Clocd Caspase3ImmunoTag ، الولايات المتحدة الأمريكيةITT07022
ثنائي الصوديوم فوسفات الهيدروجين سباعيهيميديا ، مومباي ، الهندGRM39611
جهاز مقياس تدفق الدم دوبلر، المملكة المتحدةmoorVMS-LDF1
رف البيض-
رف البيض-
GAPDHImmunoTag ، الولايات المتحدة الأمريكيةM1000110
بادئات GAPDHالأنظمة الحيوية التطبيقية ، فوستر سيتي ، الولايات المتحدة الأمريكيةHs02758991_g1
GlycineHimedia ، مومباي ، الهندMB013
صينية الكلىHOSPITO-LC3A
/ Bتكنولوجيا إشارات الخلايا ، الولايات المتحدة الأمريكية4108S
الميثانولرانكيم ، مومباي ، الهندM0252
MicromanipulatorNarishige ، اليابانM-152
N-acetyl-L-cysteine (NAC)Sigma Aldrich, الولايات المتحدة الأمريكيةA7250
NaringeninSigma Aldrich, الولايات المتحدة الأمريكية67604-48-2
NF-k & beta;ثيرمو فيشر العلمي ، الولايات المتحدة الأمريكية51-0500
NLRP3ImmunoTag ، الولايات المتحدة الأمريكيةITT07438
ذو طيات الأنفمحلي الصنع ، لكناو ، الهندملقط
العينStoelting ، ألمانيا52106-40
قزحية العينTufft الأدوات الجراحية ، جايبور ، الهندمقص صغير Vannas Age الصعب بزاوية 8 سم / 3 1/8 "
OHP قلم تحديدCamlin ،
ImmunoTag ، الولايات المتحدة الأمريكيةITT08329
مقص مدبب حادالحافة Stoelting ، ألمانيا52132-11
كلوريد البوتاسيومHimedia ، مومباي ، الهندMB043
فوسفات البوتاسيوم أحادي القاعدة اللامائيHimedia ، مومباي ، الهندMB050
مثبط البروتيازAbcam ، الولايات المتحدةAb65621
SOD-1ImmunoTag ، الولايات المتحدة الأمريكيةITT4364
كلوريد الصوديومفيشر العلمي ، مومباي ، الهند27605
كبريتات دوديسيل الصوديومهيميديا ، مومباي ، الهندGRM886
إبرة العمود الفقري 25GA ؛ 3.50 بوصة (90.51 × 90 مم)رامسون ، الهندGS-2029
مجهر جراحي ستيريو زوومأوليمبوس ، اليابانSZ2-STU3
مرتجع حقنةBIOHAZARD882210
ملقط مسننStoelting ، ألمانيا52102-30
تريس بیسجي بيولوجيز ، الولايات المتحدةRC1217
تريس حمض الهيدروكلوريكهيميديا ، مومباي ، الهندMB030
Tween 20G Biosciences ، الولايات المتحدةRC1227
دجاج ليغورن الأبيض 0 يومبيض -
Z-Val-Ala-Asp (OMe) -FMKMP Biomedicals، LLC ، الولايات المتحدة الأمريكيةFK009
المركزي تقنية إشارات الخلايا ، الولايات المتحدة الأمريكية حقيبة Beclin-1 مختبرات India-ORP-150

References

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,
  1. Fauzia, E., et al. Chick Embryo: A Preclinical Model for Understanding Ischemia-Reperfusion Mechanism. Frontiers in Pharmacology. 21 (9), 1034(2018).
  2. Eltzschig, H. K., Eckle, T. Ischemia and reperfusion--from mechanism to translation. Nature Med....

Access restricted. Please log in or start a trial to view this content.

Reprints and Permissions

Request permission to reuse the text or figures of this JoVE article

Request Permission

Tags

Ischemia ReperfusionChick Embryo ModelIn Ovo ModelHook Ischemia ModelDoppler Blood FlowRight Vitelline ArteryWestern BlottingAutophagy MarkersInflammatory CytokinesApoptosis Pathways

Related Articles