مقالة منهجية

تحليل مجهري بالفيديو عالي السرعة لتشخيص الخط الأول لخلل الحركة الهدبوجي الأولي

DOI:

10.3791/63292

⸱

يناير 19, 2022

 ,  ,  , 
1Allergy Centre, Tampere University Hospital, 2Department of Pediatrics, Turku University Hospital, 3Turku Bioscience Center, University of Turku and Åbo Akademi University

في هذه المقالة

ملخص

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

يعد التحليل المجهري بالفيديو عالي السرعة أداة سهلة الأداء نسبيا وسريعة وفعالة من حيث التكلفة ، وفي أيدي ذوي الخبرة ، أداة موثوقة إلى حد كبير لتشخيص الخط الأول لخلل الحركة الهدبي الأولي ، والتي يجب أن تكون متاحة في كل مركز يشارك في التشخيص وعلاج أمراض الرئة الشديدة.

الملخص

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

خلل الحركة الهدبي الأولي (PCD) هو اضطراب خلقي موروث في الغالب في سمة جسمية متنحية. يسبب هذا الاضطراب اضطرابا في حركة الأهداب ، مما يؤدي إلى ضعف شديد في إزالة الغشاء المخاطي الهدبي (MCC). إذا لم يتم تشخيصها أو تشخيصها بعد فوات الأوان ، فإن الحالة تؤدي إلى تطور توسع الشعب الهوائية وأضرار جسيمة للرئتين في وقت لاحق من الحياة. معظم طرق تشخيص PCD تستغرق وقتا طويلا وتتطلب موارد اقتصادية واسعة النطاق لإنشائها. تحليل الفيديو المجهري عالي السرعة (HSVMA) هو الأداة التشخيصية الوحيدة لتصور وتحليل خلايا الجهاز التنفسي الحية مع ضرب الأهداب في المختبر. إنه سريع وفعال من حيث التكلفة ، وفي أيدي ذوي الخبرة ، موثوق به للغاية كأداة تشخيصية ل PCD. بالإضافة إلى ذلك ، لا تنطبق التدابير التشخيصية الكلاسيكية مثل المجهر الإلكتروني الناقل (TEM) على بعض الطفرات لأن التغيرات المورفولوجية غائبة.

تصف هذه الورقة عملية جمع الخلايا الظهارية التنفسية ، ومزيد من التحضير للعينة ، وعملية HSVMA. كما نصف كيف يمكن الحفاظ على الخلايا المصقولة بنجاح دون أذى أو ضرب عن طريق الاحتفاظ بها في وسط مغذي للتخزين والنقل إلى موقع التحقيق في الحالات التي لا تمتلك فيها العيادة المعدات اللازمة لإجراء HSVMA. كما تظهر مقاطع فيديو تحتوي على أنماط ضرب مرضية من المرضى الذين يعانون من طفرة في جين سلسلة ذراع الداينين الثقيلة 11 (DNAH11) ، والتي لا يمكن تشخيصها ب TEM. نتيجة ل HSVMA غير حاسم بسبب عدوى الشعب الهوائية العليا ، وكذلك تنظيف الأسنان بالفرشاة غير الناجحة مع تراكب خلايا الدم الحمراء. مع هذه المقالة ، نود أن نشجع كل وحدة تتعامل مع مرضى أمراض الرئة وأمراض الرئة النادرة على إجراء HSVMA كجزء من تشخيصاتهم الروتينية اليومية ل PCD أو إرسال العينات إلى مركز متخصص في أداء HSVMA.

المقدمة

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

خلل الحركة الهدبي الأولي (PCD) هو اضطراب وراثي وراثي نادر ، والذي يسبب اضطرابات في حركة أهداب الضرب. إذا لم يتم تشخيصه ، فإنه يؤدي إلى تلف شديد في الرئة في وقت لاحق من الحياة بسبب ضعف شديد في MCC. في الماضي ، قدر انتشاره في حدود 1: 4000 إلى 50000. نظرا للتحسن المطرد في التشخيص والوعي المتزايد بالحالة ، تشير التحديثات حول انتشار PCD إلى أنه قد يكون أكثر شيوعا وربما يتراوح بين 1: 4000 إلى 20000 بدلا من1.2. ومع ذلك ، لا يزال المرضى الذين يعانون من PCD يعانون من نقص التشخيص أو التشخيص في وقت متأخر جدا 1,3. لذلك ، يجب أن يكون الرضع الذين يعانون من أي من السيتوس الخلقي في مقابل و / أو سيلان الأنف في الفترة المحيطة بالولادة ، والضائقة التنفسية لحديثي الولادة ، وانسداد الأنف ، وصعوبات التغذية مشتبها بهم في PCD. في وقت لاحق من الحياة ، التهاب الأذن الوسطى المزمن ، والالتهاب الرئوي المتكرر ، والتهاب الجيوب الأنفية الأنفية ، والسعال الرطب المزمن النموذجي بسبب ضعف MCC هي الأعراض المميزة ل PCD ، والتي في تركيبة مع توسع الشعب الهوائية وضعف وظائف الرئة ، تستمر في مرحلة البلوغ2.

يمكن تشخيص المرضى المشتبه في إصابتهم ب PCD باستخدام أدوات تشخيصية مختلفة. وقد اعتبر TEM المعيار الذهبي لتشخيص الخط الأول في الماضي. ومع ذلك ، فإن ما يصل إلى 30٪ من حالات PCD لا تظهر بنية فائقة غير طبيعية1،3،4،5،6 ، مما يتطلب نهجا تشخيصيا مختلفا. لذلك ، يقترح عدد متزايد من المراكز والمبادئ التوجيهية للجمعية الأوروبية للجهاز التنفسي (ERS) مزيجا من أكسيد النيتريك الأنفي (nNO) و HSVMA كتشخيص الخط الأول1،7،9،10. HSVMA و nNO هي أيضا الخيارات الأكثر فعالية من حيث التكلفة في تحديد المريض المصاب ب PCD11. ومع ذلك ، حتى لو تم تضمين الاختبارات الجينية في التشخيص ، يجب أن يؤخذ في الاعتبار أنه لا يوجد حاليا اختبار قائم بذاته أو مجموعة من الاختبارات التي يمكن أن تستبعد PCD مع اليقين بنسبة 100٪ 8,9,10.

من بين خيارات التشخيص المتاحة ، يعد HSVMA هو الاختبار الوحيد الذي يركز على الخلايا التنفسية الحية المغلفة بالأهداب ويقيم نمط الضربات الهدبية (CBP) وتردد الضربات الهدبية (CBF). على النقيض من TEM ، تتوفر نتائج HSVMA بسرعة ، عادة في يوم الاختبار ، في حين أن نتائج TEM قد تصل بعد أشهر من أخذ العينة. يمكن تطبيق HSVMA لجميع الفئات العمرية ، في حين أن nNO يتطلب درجة عالية من الامتثال ؛ عادة ما تكون محاولات استخدامه تحت سن 5 سنوات غير ناجحة10. في أيدي ذوي الخبرة ، HSVMA لديه حساسية ممتازة وخصوصية لتشخيص PCD بنسبة 100 ٪ و 96 ٪ ، على التوالي12.

تصف هذه الورقة الإجراء خطوة بخطوة لأداء HSVMA ، بما في ذلك حصاد خلايا الجهاز التنفسي المغلفة بالأهداب من التوربينات السفلية للأنف ، والحفاظ على الخلايا المحصودة في وسط مغذي للخلايا لنقلها إلى موقع التحقيق ، وعملية تحليل الفيديو المجهري لتحديد CBF و CBP. بالإضافة إلى ذلك ، يتم عرض بعض مقاطع الفيديو من المرضى ، مقارنة CBPs العادية و CBFs مع وظيفة الأهداب غير الطبيعية (الفيديو 3 ، الفيديو 4 ، الفيديو 5 ، الفيديو 6 ، الفيديو 7 ، والفيديو 8).

الوصول مقيد. يرجى تسجيل الدخول أو بدء فترة تجريبية لعرض هذا المحتوى.

البروتوكول

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

بيان الأخلاقيات:

تمت الموافقة على هذه الدراسة من قبل لجنة الأخلاقيات المحلية (69/2017) وأجريت وفقا لإعلان هلسنكي.

1. جمع ونقل الخلايا الظهارية التنفسية

  1. الفرشاه
    1. قبل تنظيف الأسنان بالفرشاة ، قم بإعطاء دورة لمدة أسبوعين من حمض الأموكسيسيلين كلافولانيك الفموي للمريض للقضاء على الأغشية الحيوية التي تتداخل مع وظيفة الأهداب. تأكد من إنهاء المضاد الحيوي قبل 2 أيام من الإجراء.
    2. لتقليل تراكب المواد المخاطية على شرائط الخلايا الظهارية المصقولة ، اطلب من المريض أن ينفخ أنفه جيدا. اطلب من الآباء مساعدة أطفالهم الصغار على نفخ أنوفهم.
    3. للتنظيف بالفرشاة، استخدم فرشاة بين الأسنان بحجم 0.6 مم (انظر جدول المواد). حافظ على رأس المريض ثابتا بيد واحدة ، وباليد الأخرى ، قم بتنظيف التوربينات السفلية لكلا الخياشيم لجمع شرائط الخلايا الظهارية الكافية.
      ملاحظة: عادة ما تحدث مقاومة طفيفة عند إدخال الفرشاة بين الأسنان بعمق تحت التوربينات السفلية. يتم تنظيف الأنف بالفرشاة عن طريق الدوران السريع والانتقاء لمدة 2 ثانية تقريبا. قد يؤدي التنظيف بالفرشاة لفترة أطول ومكثفة إلى إصابة ظهارية شديدة ورعاف متتالي.
    4. إذا تم التخطيط لتنظير القصبات لأسباب أخرى غير PCD المشتبه به ، فقم بجمع عينات أثناء تنظير القصبات عن طريق تنظيف الكارينا أو ظهارة الشعب الهوائية أو عن طريق الخزعة13.
    5. قم بإسقاط شرائط الخلايا التي تم حصادها في أنبوب طرد مركزي دقيق سعة 1.5 مل يحتوي على وسيط النسر المعدل من دولبيكو المغذي للخلايا (DMEM).
      ملاحظة: عادة ما تسقط شرائط الخلايا الظهارية من الفرشاة بسهولة أكبر عن طريق قذف الفرشاة وقلبها على جدار الأنبوب.
    6. أغلق غطاء أنبوب جهاز الطرد المركزي الدقيق وأمسك الأنبوب بمصدر ضوء. هز الأنبوب لاكتشاف شرائط الخلايا والتكتلات التي تم حصادها.
  2. نقل العينة
    1. ضع أنابيب الطرد المركزي الدقيق في صندوق بوليسترين مغلق بإحكام وتأكد من إغلاق غطاء الأنابيب بشكل صحيح وتثبيت الأنابيب داخل الصندوق.
    2. إضافة حزمة باردة. ومع ذلك ، تجنب تجميد العينة.
      ملاحظة: درجة الحرارة المثلى للحفاظ على العينة قبل التحقيق هي حوالي 4-8 درجة مئوية (39.2-46.4 درجة فهرنهايت).
    3. تأكد من تحليل العينات المحفوظة خلال ال 24 ساعة القادمة.
      ملاحظة: في هذه التجارب، كان متوسط الوقت بين التنظيف بالفرشاة وHSVMA 3 ساعات.

2. تحليل مجهري فيديو عالي السرعة (HSVMA)

  1. الفحص المجهري بالفيديو للعينات
    1. بعد استلام أنابيب الطرد المركزي الدقيقة التي تحتوي على العينات، قم بتسخينها حتى 37 درجة مئوية (98.6 درجة فهرنهايت) لمحاكاة مثالية في بيئة تشبه الجسم الحي.
    2. إذا كان المجهر مجهزا بوحدة تسخين ، فضع الأنابيب تحت غطاء المحرك وقم بتسخينها هناك. بدلا من ذلك ، استخدم حاضنة لتسخين العينات.
    3. ابدأ تشغيل الكاميرا وبرنامج وحدة الفيديو على جهاز الكمبيوتر.
    4. باستخدام ماصة ، خذ كمية صغيرة من العينة وضع قطرتين في طبق كوفيت أو طبق زجاجي (انظر جدول المواد). قم بتغطية الكوفيت أو الطبق بغطاء وضعه تحت المجهر.
    5. لتقييم العينات، استخدم مجهرا للتداخل التفاضلي مزودا بمصدر ضوء بارد وكاميرا فيديو قادرة على التسجيل بسرعة عالية (200 إطار/ثانية على الأقل). استخدم عدسة غمر الزيت مع تكبير 100x ووضع قطرة من زيت الغمر على سطح البصرية.
      ملاحظة: يوصى باستخدام المجاهر ذات العدسة التي تقترب من الأسفل.
    6. اقترب من الجزء السفلي من الطبق باستخدام عدسة المجهر وابحث عن مجموعات الخلايا بدون خلايا دم حمراء وذات محتوى مخاط منخفض. بعد العثور على منطقة تمثيلية ذات أهمية (ROI) ، ركز على مجموعة محددة من أهداب الضرب مع أكبر حركات الأهداب وسجل تسلسل فيديو. سجل الخلايا مع ضرب الأهداب جانبيا ومن الأعلى. بعد ذلك ، ابحث عن مجموعة تمثيلية أخرى من الخلايا وكرر التسجيل.
      ملاحظة: يجب التحقيق في الخلايا المغلفة بالأهداب تحت تكبير 1000x ، ويجب تسجيل أهداب الضرب باستخدام كاميرا فيديو رقمية عالية السرعة (DHSV) تم ضبطها على معدل إطارات 200 / ثانية أو أكثر (256 / ثانية في هذا البروتوكول). نظرا لأن البيانات التي تم الحصول عليها من مقاطع الفيديو المسجلة تتطلب مساحة كبيرة على محرك الأقراص الثابتة ، يوصى باستخدام محرك أقراص ثابت SSD خارجي.
  2. تحليل تسلسلات الفيديو
    1. لتحديد CBF و CBP ، قم بتشغيل مقاطع الفيديو مرة أخرى إطارا تلو الآخر.
    2. لتحديد CBF ، اضبط معدل الإطارات على حركة بطيئة مع 15 إطارا / ثانية وعد 10 نبضات متتالية.
    3. سجل عدد الإطارات التي تمر خلال دورة واحدة من 10 دقات وأدخل النتيجة في Eq (1). تحديد التردد عن طريق حساب متوسط جميع دورات ضرب الأهداب المسجلة ومقارنة النتيجة بالقيم المرجعية للعمر (انظر الجدول 1)14.
      figure-protocol-1 (1)
      حيث X هو عدد الإطارات التي تمر خلال دورة من 10 نبضات.
    4. لتقييم CBP ، راقب ما إذا كانت حركة أهداب الضرب في نطاق كامل (انظر الشكل 1) ومتزامنة. اطلب من اثنين من المشغلين المستقلين تقييم CBP لمنع التحيز في الاختيار.
    5. الإبلاغ عن نتائج تحليل HSVMA لتكون إما متوافقة أو غير مرجحة أو غير حاسمة مع PCD.

الوصول مقيد. يرجى تسجيل الدخول أو بدء فترة تجريبية لعرض هذا المحتوى.

النتائج

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

يظهر الفيديو 1 والفيديو 2 تحكما طبيعيا حيث يكون CBF و CBP في النطاق الطبيعي (انظر الشكل 1). يمثل الفيديو 3 والفيديو 4 والفيديو 5 والفيديو 6 حالتين من مرضى PCD الذين يعانون من طفرة متماثلة الزيجوت في جين DNAH11 (c.2341G > A ؛ p. Glu781Lys)3. تم اختيار مقاطع الفيديو التمثيلية هذه لأن الأنماط الظاهرية للطفرات في جين DNAH11 جديرة بالم...

الوصول مقيد. يرجى تسجيل الدخول أو بدء فترة تجريبية لعرض هذا المحتوى.

المناقشة

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

هنا ، يتم وصف عملية تشخيص PCD باستخدام HSVMA ومناقشتها في ضوء تشخيص الخط الأول. على الرغم من سهولة إنشائها نسبيا ، وفعالة من حيث التكلفة11 ، وطريقة موثوقة في أيدي ذوي الخبرة12 ، فإن HSVMA ليس مقياسا تشخيصيا بدون مزالق. قد يكون CBF و CBP غير الطبيعيين ناتجين عن عدوى ثانوية ، مما يؤدي إلى التهاب الظهارة القصبية التنفسية15 ، وللسبب نفسه ، قد يكون لدى الأفراد المدخنين ترددات ضرب غير طبيعية16,17. ...

الوصول مقيد. يرجى تسجيل الدخول أو بدء فترة تجريبية لعرض هذا المحتوى.

الإفصاحات

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

ليس لدى المؤلفين ما يكشفون عنه.

شكر وتقدير

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

نود أن نعرب عن شكرنا الخاص لممرضة الأطفال السيدة يوهانا جوفانكوسكي على مساعدتها الممتازة في تنظيف الأسنان بالفرشاة. نود أيضا أن نعرب عن امتناننا الخاص للبروفيسور هيموت عمران (جامعة عيادة مونستر، المملكة المتحدة) لمنحه الإذن باستخدام الشكل التخطيطي للحركة الهدبية العادية من موقعه على الويب. وأخيرا، نود أن نشكر السيد آلان براون بكالوريوس (مع مرتبة الشرف)، PGCE، على التدقيق اللغوي للمخطوطة.

الوصول مقيد. يرجى تسجيل الدخول أو بدء فترة تجريبية لعرض هذا المحتوى.

المواد

قائمة المواد المستخدمة في هذه المقالة
الاسمالشركةرقم فهرسيالتعليقات
حمض أموكسيسيلين كلافولانيكأوريون أويج40 مجم / كجم مقسمة على جرعتين / يوم ، للبالغين 875/125 مجم 1 قرص × 2 / يوم
برنامج الكاميراHamamatsuHCI Image
حزمة باردةأيللحفظ والنقل
مجهر التداخل التفاضليكارل زايسمقلوب ، مجهر مراقب الخلية
رقمي عالي كاميرا فيديو السرعةHamamatsuOrca Flash 4.0 ، نوع الكاميرا الرقمية C11440
Dulbecco & acute ؛ s Modified EagleMedium ThermoFisher 10565018زراعة الخلايا القاعدية المتوسطة
أنبوب Eppendorfأنبوب Eppendorf301200861.5 مل
طبق ميكروويل زجاجيالقاع MatTekP35G-1.5-14-Cكوفيت للفحص
المجهري وحدةالتسخين Carl Zeiss / PeCon810-450001عناصر حضانة Carl Zeiss مع التحكم
في درجة الحرارة PeCon TempModule S1فرشاة ما بين الأسنان 0.6 ممDoft872267فرشاة بين الأسنان على سلك طويل بمقبض وغطاء قابل لإعادة الاستخدام في zipbag
ObjectiveCarl Zeiss100x / 1.46 ، & alpha ؛ هدف Plan-Apochromat DIC
صندوق صغير من البوليسترين مع غطاءأيللنقل

المراجع

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,
  1. Werner, C., Onnebrink, J. G., Omran, H. Diagnosis and management of primary ciliary dyskinesia. Cilia. 4 (1), 2(2015).
  2. Mirra, V., Werner, C., Santamaria, F. Primary ciliary dyskinesia: An update on clinical aspects, genetics, diagnosis and future treatment strategies. Frontiers in Pediatrics. 5, 135(2017).
  3. Schultz, R., Elenius, V., Lukkarinen, H., Saarela, T. Two novel mutations in the DNAH11 gene in primary ciliary dyskinesia (CILD7) with considerable variety in the clinical and beating cilia phenotype. BMC Medical Genetics. 21 (1), 237(2020).
  4. Knowles, M. R., et al. Mutations of DNAH11 in patients with primary ciliary dyskinesia with normal ciliary ultrastructure. Thorax. 67 (5), 433-441 (2012).
  5. Boon, M., et al. Primary ciliary dyskinesia: critical evaluation of clinical symptoms and diagnosis in patients with normal and abnormal ultrastructure. Orphanet Journal of Rare Diseases. 9, 11(2014).
  6. Kouis, P., et al. Prevalence of primary ciliary dyskinesia in consecutive referrals of suspected cases and the transmission electron microscopy detection rate: a systematic review and meta-analysis. Pediatric Research. 81 (3), 398-405 (2017).
  7. Marthin, J. K., Nielsen, K. G. Choice of nasal nitric oxide technique as first-line test for primary ciliary dyskinesia. European Respiratory Journal. 37 (3), 559-565 (2011).
  8. Jackson, C. L., Behan, L., Collins, S. A. Accuracy of diagnostic testing in primary ciliary dyskinesia. European Respiratory Journal. 47 (3), 837-848 (2016).
  9. Lucas, J. S., et al. European Respiratory Society guidelines for the diagnosis of primary ciliary dyskinesia. European Respiratory Journal. 49 (1), 1601090(2017).
  10. Shoemark, A., Dell, S., Shapiro, A., Lucas, J. S. ERS and ATS diagnostic guidelines for primary ciliary dyskinesia: similarities and differences in approach to diagnosis. European Respiratory Journal. 54 (3), 1901066(2019).
  11. Kouis, P. Cost-effectiveness analysis of three algorithms for diagnosing primary ciliary dyskinesia: a simulation study. Orphanet Journal of Rare Diseases. 14 (1), 142(2019).
  12. Rubbo, B., et al. Accuracy of high-speed video analysis to diagnose primary ciliary dyskinesia. Chest. 155 (5), 1008-1017 (2019).
  13. Friedman, N. R., Pachigolla, R., Deskin, R. W., Hawkins, H. K. Optimal technique to diagnose primary ciliary dyskinesia. The Laryngoscope. 110 (9), 1548-1551 (2000).
  14. Chilvers, M. A., Rutman, A., O´Callaghan, C. Functional analysis of cilia and ciliated epithelial ultrastructure in healthy children and young adults. Thorax. 58 (4), 333-338 (2003).
  15. Lucas, J. S., Paff, T., Goggin, P., Haarman, E. Diagnostic methods in primary ciliary dyskinesia. Paediatric Respiratory Reviews. 18, 8-17 (2016).
  16. Ballenger, J. J. Experimental effect of cigarette smoke on human respiratory cilia. New England Journal of Medicine. 263, 832-835 (1960).
  17. Stanley, P. J., Wilson, R., Greenstone, M. A., Mac William, L., Cole, P. J. Effect of cigarette smoking on nasal mucociliary clearance and ciliary beat frequency. Thorax. 41 (7), 519-523 (1986).
  18. Kobbernagel, H. E., et al. Efficacy and safety of azithromycin maintenance therapy in primary cilia dyskinesia (BESTCILIA): a multicentre, double-blind, randomised, placebo-controlled phase 3 trial. Lancet Respiratory Medicine. 8 (5), 493-505 (2020).
  19. Takeyama, K., Tamaoki, J., Chiyotani, A., Tagaya, E., Konno, K. Effect of macrolide antibiotics on ciliary motility in rabbit airway epithelium in-vitro. Journal of Pharmacy and Pharmacology. 45 (8), 756-758 (1993).
  20. Toskala, E., Haataja, J., Shirasaki, H., Rautliainen, M. Culture of cells harvested with nasal brushing: a method for evaluating ciliary function. Rhinology. 43 (2), 121-124 (2005).
  21. Pifferi, M., et al. Simplified cell culture method for the diagnosis of atypical primary ciliary dyskinesia. Thorax. 64 (12), 1077-1081 (2009).
  22. Hirst, R. A., et al. Culture of primary ciliary dyskinesia epithelial cells at air liquid interface can alter ciliary phenotype but remains a robust and informative, diagnostic aid. PLoS One. 9 (2), 89675(2014).
  23. Papon, J. F., et al. Quantitative analysis of ciliary beating in primary ciliary dyskinesia: a pilot study. Orphanet Journal of Rare Diseases. 7 (10), 78(2012).
  24. Smith, C. M., et al. Cilia FA: a research tool for automated, high-throughput measurement of ciliary beat frequency using freely available software. Cilia. 1 (8), 14(2012).
  25. Sampaio, P., et al. Ciliar Move: new software for evaluating ciliary beat frequency helps find novel mutations by a Portuguese multidisciplinary team on primary ciliary dyskinesia. European Respiratory Journal Open Research. 7 (1), 00792(2021).
  26. Mullowney, T., et al. Primary ciliary dyskinesia and neonatal respiratory distress. Pediatrics. 134 (6), 1160-1166 (2014).
  27. Leigh, M. W., et al. Standardizing nasal nitric oxide measurement as a test for primary ciliary dyskinesia. Annals of the American Thoracic Society. 10 (6), 574-581 (2013).

الوصول مقيد. يرجى تسجيل الدخول أو بدء فترة تجريبية لعرض هذا المحتوى.

إعادة الطباعة والأذونات

طلب إذن لإعادة استخدام النص أو الأشكال في مقالة JoVE هذه

طلب إذن

الوسوم

DNAH11

مقالات ذات صلة