نقدم نموذجا للنزيف داخل البطيني الوليدي باستخدام جراء الفئران التي تحاكي علم الأمراض الذي يظهر في البشر.
يتطلب اشتراك JoVE لعرض هذا المحتوى. تسجيل الدخول أو ابدأ نسخة تجريبية مجانية
مقالة منهجية
نمذجة النزف داخل البطيني الوليدي من خلال الحقن داخل البطيني للهيموغلوبين
في هذه المقالة
ملخص
الملخص
النزف داخل البطيني الوليدي (IVH) هو نتيجة شائعة للولادة المبكرة ويؤدي إلى إصابة الدماغ واستسقاء الرأس الوضعي (PHH) والعجز العصبي مدى الحياة. بينما يمكن علاج PHH عن طريق إجراءات تحويل السائل النخاعي المؤقتة والدائمة (CSF) (الخزان البطيني والتحويلة البطينية الصفاقية ، على التوالي) ، لا توجد استراتيجيات دوائية لمنع أو علاج إصابة الدماغ التي يسببها IVH واستسقاء الرأس. هناك حاجة إلى نماذج حيوانية لفهم الفيزيولوجيا المرضية ل IVH بشكل أفضل واختبار العلاجات الدوائية. في حين أن هناك نماذج موجودة من IVH الوليدي ، فإن تلك التي تؤدي بشكل موثوق إلى استسقاء الرأس غالبا ما تكون محدودة بسبب ضرورة الحقن ذات الحجم الكبير ، مما قد يعقد نمذجة علم الأمراض أو إدخال تباين في النمط الظاهري السريري الذي لوحظ.
وقد ورطت الدراسات السريرية الحديثة الهيموغلوبين والفيريتين في التسبب في تضخم البطين بعد IVH. هنا ، نقوم بتطوير نموذج حيواني مباشر يحاكي النمط الظاهري السريري ل PHH باستخدام الحقن داخل البطيني صغير الحجم لمنتج تكسير الدم الهيموجلوبين. بالإضافة إلى تحفيز تضخم البطين واستسقاء الرأس بشكل موثوق ، يؤدي هذا النموذج إلى إصابة المادة البيضاء والالتهاب وتسلل الخلايا المناعية في المناطق المحيطة بالبطينين والمادة البيضاء. تصف هذه الورقة هذه الطريقة البسيطة ذات الصلة سريريا لنمذجة IVH-PHH في الفئران الوليدية باستخدام الحقن داخل البطيني وتقدم طرقا لتحديد حجم البطين بعد الحقن.
المقدمة
ينشأ IVH الوليدي من المصفوفة الجرثومية ، وهو موقع الانقسام الخلوي السريع المجاور للبطينين الجانبيين للدماغ النامي. هذا الهيكل الوعائي للغاية عرضة لعدم استقرار الدورة الدموية المرتبط بالولادة المبكرة. يتم إطلاق الدم في البطينين الجانبيين في نزيف المصفوفة الجرثومية (GMH) -IVH عندما تمزق الأوعية الدموية الهشة داخل المصفوفة الجرثومية. في حالة الصف الرابع IVH ، قد يساهم احتشاء النزف حول البطين أيضا في إطلاق منتجات الدم داخل الدماغ. 1 قد يسبب الجمع بين GMH-IVH PHH ، خاصة بعد النزف عالي الدرجة (الصفان الثالث والرابع)1. يمكن علاج PHH بوضع تحويلة البطين الصفاقي ، لكن وضع التحويلة لا يعكس إصابة الدماغ التي قد تحدث من IVH. على الرغ....
الوصول مقيد. يرجى تسجيل الدخول أو بدء فترة تجريبية لعرض هذا المحتوى.
البروتوكول
ملاحظة: تمت الموافقة على جميع بروتوكولات الحيوانات من قبل لجنة رعاية واستخدام الحيوان التابعة للمؤسسة. راجع جدول المواد للحصول على تفاصيل حول جميع المواد والكواشف والمعدات والبرامج المستخدمة في هذا البروتوكول.
1. تحضير محاليل الهيموجلوبين والسائل الدماغي الشوكي
- قم بإعداد محلول CSF اصطناعي معقم (aCSF) عن طريق إضافة 500 ميكرولتر من محلول aCSF إلى أنبوب دقيق سعة 1.5 مل وتخزينه على الثلج.
- تحضير محلول هيموجلوبين معقم 150 مجم / مل بإضافة 75 مجم من الهيموجلوبين إلى 500 ميكرولتر من السائل الدماغي النخاعي في أنبوب دقيق سعة 1.5 مل وتخزينه على ثلج.
2. تحضير ا....
الوصول مقيد. يرجى تسجيل الدخول أو بدء فترة تجريبية لعرض هذا المحتوى.
النتائج
تم تأكيد نجاح الحقن بالوسائل الإشعاعية والكيميائية المناعية. أصيبت الحيوانات التي خضعت لحقن الهيموغلوبين بتضخم البطين الحاد المعتدل عند تقييمها عن طريق التصوير بالرنين المغناطيسي (الشكل 2 أ) ، مع بطينين جانبيين أكبر بكثير عند 24 ساعة و 72 ساعة بعد حقن الهيموجلوبين مقارنة بالحيوانات المحقونة ب aCSF (الشكل 2B ، C). على الرغم من عدم وجود فرق كبير في حجم البطين الجانبي بين الحيوانات المحقونة بالهيموجلوبين والحيوانات المحقونة ب aCSF بعد 38 يوما من ال.......
الوصول مقيد. يرجى تسجيل الدخول أو بدء فترة تجريبية لعرض هذا المحتوى.
المناقشة
يسمح نموذج IVH هذا باستخدام حقن الهيموغلوبين بدراسة أمراض IVH بوساطة الهيموجلوبين على وجه التحديد. بالنسبة للدراسات التكميلية ، يمكن أيضا توصيل الهيموجلوبين بسهولة في المختبر ولا يربك المقايسات الكيميائية الحيوية للبروتينات التي تصنعها الخلايا الدبقية الصغيرة / الضامة الموجودة في الدم الكامل.
تشمل النظريات الرائدة في IVH-PHH الانسداد الميكانيكي لدوران السائل الدماغي الشوكي ، وتعطيل الأهداب المبطنة لجدران البطانة العصبية ، والالتهاب ، والتليف ، وسمية الحديد10. ا.......
الوصول مقيد. يرجى تسجيل الدخول أو بدء فترة تجريبية لعرض هذا المحتوى.
الإفصاحات
يعلن المؤلفون أنه ليس لديهم تضارب في المصالح.
شكر وتقدير
تلقت JMS تمويلا من NIH / NINDS R01 NS110793 و K12 (برنامج التطوير الوظيفي لأبحاث جراح الأعصاب). تلقت BAM تمويلا من NIH / NINDS K08 NS112580-01A1 ، وجائزة المنطقة ذات الأولوية لأبحاث علم الأعصاب بجامعة كنتاكي ، وجائزة مبتكر جمعية استسقاء الرأس .
....الوصول مقيد. يرجى تسجيل الدخول أو بدء فترة تجريبية لعرض هذا المحتوى.
المواد
| الاسم | الشركة | رقم فهرسي | التعليقات |
|---|---|---|---|
| 0.3 مل حقنة الأنسولين | BD Microfine + حقنة الأنسولين | 230-4533 | 0.3-0.5 مل ستعمل الsynringes |
| 1.5 مل microtube | USA Scientific | 1615-5500 | رقم الدفعة K194642H -3 511 |
| 4.7T MRI | Agilent / Varian | 4.7T / 33 سم | Agilent / Varian DirectDrive 4.7-T (200 ميجاهرتز) نظام التصوير بالرنين المغناطيسي |
| 6-0 خياطة أحادية الشعيرات | ETHICON | 667G | |
| 9.4T التصوير بالرنين المغناطيسي | Bruker | BioSpec 94/20 | المستخدم في هذا البروتوكول بدون المسبار |
| المبرد الميزان التحليلي | CCURIS Instruments | W3200-320 | |
| CSF الاصطناعي (aCSF) | Tocris Bioscience | 3525 | رقم الدفعة: 72A |
| Betadine | Purdue Products LP | 301005-00 | NDC 67618-150-09 |
| كاربروفين (عن طريق الحقن) | Zoetis Inc. | مختبرات PI 4019448 | Rimadyl |
| Ethanol | Decon | 2701 | |
| وسادة تسخين | Sunbeam | E12107-819 | UL 612A ، Z-1228-001 |
| الهيموجلوبين | MP Biomedicals | 100714 | رقم القطعة SR02321 |
| Isoflurane | Piramal للرعاية الحرجة | NDC 66794-017-25 | |
| مبخر الأيزوفلوران | VETEQUIP | 911103 | |
| ضوء للتركيبة التجسيمية | Dolan-Jenner الصناعات | الألياف Lite MI-150 | |
| مضخة حقنة الحقن الدقيق | العالمية أدوات الدقة | MICRO21 | المغناطيسي 184034 التسلسلي T08K |
| Bruker BioSpin | Paravision 360 3.2 | ||
| Oxygen | Airgas Healthcare | UN1072 | رقم القطعة S1432080XA02 |
| فئران | Sprague Dawleyمختبرات نهر تشارلز | رمز الإجهاد: 001 | |
| أداة تجسيمية | KOPF Instuments | موديل 900LS كسولة سوزان | |
| قضيب قطني معقم | فيشربراند | 23-400-118 | |
| شفرة جراحية | covetrus | # 10 | |
| مضاد حيوي ثلاثي موضعي | مرهم مضاد حيوي ثلاثي | NDC 51672-2120-1 | |
| برنامج قياس حجم البطين | ITK-SNAP | ITK-SNAP 4.0.0 بيتا |
المراجع
- Robinson, S. Neonatal posthemorrhagic hydrocephalus from prematurity: Pathophysiology and current treatment concepts: A review. Journal of Neurosurgery: Pediatrics. 9 (3), (2012).
- Hasselager, A. B., Børch, K., Pryds, O. A.
الوصول مقيد. يرجى تسجيل الدخول أو بدء فترة تجريبية لعرض هذا المحتوى.
إعادة الطباعة والأذونات
