يقدم هذا البروتوكول إنشاء توقف الدورة الدموية العميق منخفض الحرارة في الفئران ، والذي يمكن تطبيقه للتحقيق في متلازمة الاستجابة الالتهابية الجهازية ، وإصابة نقص التروية / التروية ، والإجهاد التأكسدي ، والتهاب الأعصاب ، وما إلى ذلك.
يتطلب اشتراك JoVE لعرض هذا المحتوى. تسجيل الدخول أو ابدأ نسخة تجريبية مجانية
مقالة منهجية
يقدم هذا البروتوكول إنشاء توقف الدورة الدموية العميق منخفض الحرارة في الفئران ، والذي يمكن تطبيقه للتحقيق في متلازمة الاستجابة الالتهابية الجهازية ، وإصابة نقص التروية / التروية ، والإجهاد التأكسدي ، والتهاب الأعصاب ، وما إلى ذلك.
يتم تطبيق توقف الدورة الدموية العميق منخفض الحرارة (DHCA) بشكل روتيني أثناء العمليات الجراحية لأمراض القلب الخلقية المعقدة ومرض قوس الأبهر. تهدف الدراسة الحالية إلى توفير طريقة لإنشاء DHCA في الفئران. لتقييم تأثير عملية DHCA على العلامات الحيوية ، تم استخدام نموذج فئران المجازة القلبية الرئوية ذات درجة الحرارة العادية (CPB) دون توقف الدورة الدموية كعنصر تحكم. كما هو متوقع ، أدت مدينة دبي الطبية إلى انخفاض كبير في درجة حرارة الجسم ومتوسط ضغط الدم الشرياني. أشار تحليل غازات الدم إلى أن DHCA زادت من مستويات حمض اللاكتيك ولكنها لم تؤثر على درجة الحموضة في الدم وتركيزات الهيموجلوبين والهيماتوكريت و Na + و Cl− و K + والجلوكوز. علاوة على ذلك ، بالمقارنة مع فئران CPB ذات درجة الحرارة العادية ، أظهرت نتائج المجهر الإلكتروني النافذ زيادة طفيفة في البلعمة الذاتية الحصين في فئران DHCA.
تم استخدام توقف الدورة الدموية العميق منخفض الحرارة (DHCA) في جراحة القلب منذ عام 19531. تتضمن سلطة مدينة دبي الطبية خفض درجة الحرارة الأساسية للمريض إلى مستويات منخفضة الحرارة بشكل عميق (15-22 درجة مئوية) قبل مقاطعة تدفق الدم إلى الجسم على مستوى العالم2. يمكن أن يوفر توقف الدورة الدموية مجال عمل غير دموي نسبيا. انخفاض حرارة الجسم العميق يقلل من عملية التمثيل الغذائي ، وخاصة في الدماغ وعضلة القلب ، وهي وسيلة فعالة للحماية من نقص التروية3. يتم تطبيق DHCA بشكل شائع أثناء العمليات الجراحية لأمراض القلب الخلقية المعقدة ، ومرض قوس الأبهر ، وحتى أورام الكلى أو الغدة الكظرية مع خثرة الوريد الأجوف 4,5. لذلك، يوفر إنشاء نماذج حيوانية لسلطة مدينة دبي الطبية مرجعا مهما لتحسين الإجراء والوقاية من المضاعفات في البيئات السريرية.
على الرغم من أنه يمكن إنشاء نماذج مع الأنياب6 والأرانب7 والحيوانات الأخرى ، فمن الأفضل استخدام الفئران بسبب قابليتها للتشغيل وتكلفتها المنخفضة. تم وصف نموذج الفئران DHCA لأول مرة في عام 2006 من قبل Jungwirth et al.8. وقد وجد أن مدة توقف الدورة الدموية كان لها تأثير على النتائج العصبية. منذ ذلك الحين ، تم التحقيق في نماذج الفئران DHCA على نطاق واسع. تم توضيح أن سلطة مدينة دبي الطبية يمكن أن تثير متلازمة الاستجابة الالتهابية الجهازية (SIRS)9. في دراسات لاحقة ، وجد علماء الصيدلة أن الالتهاب العصبي المرتبط ب DHCA الناجم عن SIRS يمكن تخفيفه بواسطة ريسفيراترول10 وتريبتوليد11. وجد فريقنا أيضا أن الالتهاب العصبي المرتبط ب DHCA يمكن تخفيفه عن طريق تثبيط البروتين12 المرتبط بالحمض النووي الريبي المحرض على البارد. في نظام القلب والأوعية الدموية ، يكون لديسموتاز الفائق تأثير وقائي للقلب على إصابات نقص التروية / التروية (I / R) خلال DHCA13. ووسعت هذه النتائج من فهم العمليات الفيزيولوجية المرضية المتعلقة بسلطة مدينة دبي الطبية وقدمت اتجاهات جديدة لتحسين نتائج سلطة مدينة دبي الطبية. ومع ذلك ، فإن النتائج المتعلقة بالتسمم الداخلي ، والإجهاد التأكسدي ، والالتهام الذاتي بعد DHCA غير حاسمة. تستخدم سلطة مدينة دبي الطبية نفس التكنولوجيا التشغيلية مثل المجازة القلبية الرئوية (CPB)14 ، لكن استراتيجية إدارتها مختلفة ، وتختلف خطوات إنشاء DHCA عبر فرق مختلفة8،9،10،11. تهدف الدراسة الحالية إلى توفير طريقة لإنشاء إجراء DHCA في الفئران.
الوصول مقيد. يرجى تسجيل الدخول أو بدء فترة تجريبية لعرض هذا المحتوى.
خضعت البروتوكولات لمراجعة مؤسسية وحصلت على موافقة من اللجنة المؤسسية لرعاية واستخدام الحيوانات ، مستشفى فوواي ، الأكاديمية الصينية للعلوم الطبية (FW-2021-0005). تم تنفيذ جميع الإجراءات التجريبية وفقا لدليل رعاية واستخدام المختبر الذي نشرته المعاهد الوطنية للصحة.
ملاحظة: تم الاحتفاظ بذكور فئران Sprague-Dawley (الوزن: 500-600 جم ، العمر: 12-14 أسبوعا) في ظروف مختبرية قياسية مع حرية الوصول إلى الطعام والماء. تم توزيع الفئران عشوائيا إلى مجموعتين (ن = 6 ، كل مجموعة): مجموعة DHCA ، ومجموعة CPB ذات درجة الحرارة العادية (مجموعة NtCPB).
1. العمل التحضيري
2. التخدير والقنية
3. بدء سلطة مدينة دبي الطبية
4. التبريد
5. توقف الدورة الدموية العميق منخفض الحرارة
6. الاحماء وإعادة التروية
7. الفطام عن CPB
الوصول مقيد. يرجى تسجيل الدخول أو بدء فترة تجريبية لعرض هذا المحتوى.
كمجموعة مراقبة ، أظهرت فئران درجة الحرارة العادية CPB (NtCPB) دون توقف الدورة الدموية متوسط ضغط الدم الشرياني (MAP) ودرجة حرارة الجسم خلال الإجراء بأكمله ، بينما انخفضت MAP لفئران DHCA أثناء السكتة القلبية (p < 0.01 ، الشكل 3A). انخفضت درجة حرارة فئران DHCA بسرعة خلال مرحلة التبريد وتعافت تدريجيا خلال مرحلة إعادة التدفئة. عند فطام الفئران عن دوائر DHCA ، عادت درجة حرارة فئران DHCA إلى وضعها الطبيعي (الشكل 3B).
تم التحقيق ف...
الوصول مقيد. يرجى تسجيل الدخول أو بدء فترة تجريبية لعرض هذا المحتوى.
القنية هي الإجراء الأساسي لإنشاء DHCA في الفئران. قبل القنية ، فإن نقع الشريان ب 0.5 مل من يدوكائين 2٪ سيجعل من السهل القنية. بعد القنية ، من الضروري استخدام الهيبارين ب 500 وحدة دولية / كجم من الهيبارين عبر الوريد الوداجي الخارجي لتجنب تكوين الخثرة الدقيقة17. لقد وجدنا مرارا وتكرارا أن هذه الجرعة من الهيبارين يمكن أن تحقق هدف وقت التخثر المنشط (ACT) >480 ثانية. فترة إعادة التدفئة هي الجزء الأصعب. استغرق الأمر أكثر من 60 دقيقة حتى ترتفع درجة الحرارة من 18 درجة مئوية إلى 34 درجة مئوية في ت...
الوصول مقيد. يرجى تسجيل الدخول أو بدء فترة تجريبية لعرض هذا المحتوى.
ليس لدى المؤلفين ما يكشفون عنه.
يشكر المؤلفون Liang Zhang للمساعدة في جمع بيانات الفيديو أثناء التجربة. تم دعم هذه الدراسة من قبل المؤسسة الوطنية للعلوم الطبيعية في الصين (رقم المنحة: 82070479) وصناديق البحوث الأساسية للجامعات المركزية (رقم المنحة: 3332022128).
الوصول مقيد. يرجى تسجيل الدخول أو بدء فترة تجريبية لعرض هذا المحتوى.
| الاسم | الشركة | رقم فهرسي | التعليقات |
|---|---|---|---|
| مبادل حراري | Xi' شركة Xijing للأجهزة الطبية المحدودة | Animal-M | |
| غشاء الأكسجين | Dongguan Kewei Medical Instrument Co.، Ltd. | مايكرو إم | |
| مراقب | تشنغدو Techman المحدودة | BL-420s | |
| مضخة الأسطوانة | تشانغتشو السوائل الرائدة المحدودة | BL100 | |
| SD الفئران | HFK العلوم البيولوجية المحدودة | / | |
| Sevoflurane | Maruishi Pharmaceutical Co. Ltd | H20150020 | |
| ماكينة حلاقة | هانغتشو Huayuan منتجات الأليفة المحدودة | / | |
| مبخر | SPACECABS | / | |
| جهاز التنفس | الصناعي شنغهاي Alcott Biotech Co.، Ltd | ALC-V8S | |
| خزان المياه | ماكيت الرعاية الحرجة AB | Jostra HCU20-600 |
الوصول مقيد. يرجى تسجيل الدخول أو بدء فترة تجريبية لعرض هذا المحتوى.