يتطلب اشتراك JoVE لعرض هذا المحتوى. تسجيل الدخول أو ابدأ نسخة تجريبية مجانية

مقالة منهجية

عزل الشريان الرئوي وخلايا العضلات الملساء للتحقيق في استجابات الأوعية الدموية

4.7K مشاهدة

⸱

DOI:

10.3791/63686

⸱

يونيو 8, 2022

 ,  ,  ,  ,  ,  ,  ,  , 
1Department of Physiology, Faculty of Medical Science and Center of Excellence for Innovation in Chemistry, Naresuan University, 2Department of Pharmaceutical Chemistry and Pharmacognosy, Faculty of Pharmaceutical Sciences, Naresuan University, 3Cosmetics and Natural Products Research Center, Faculty of Pharmaceutical Sciences, Naresuan University, 4Snyder Institute for Chronic Diseases, Airways Inflammation Research Group, Department of Physiology and Pharmacology, University of Calgary

في هذه المقالة

ملخص

يمكن استكشاف الاستجابات الوعائية للدورة الدموية الرئوية الشريانية باستخدام الشريان الرئوي (IPA) وخلايا العضلات الملساء الوعائية (VSMCs). تصف هذه الدراسة عزل IPA بالتفصيل والبروتوكولات المستخدمة للتحقيق في استرخاء الأوعية استجابة للمحفزات الفسيولوجية.

الملخص

يمكن استخدام الشريان الرئوي (IPA) وخلايا العضلات الملساء الوعائية (VSMCs) المعزولة من رئتي الفئران لدراسة الآليات الأساسية لتضيق الأوعية واسترخاء الأوعية. بعد عزل IPA و VSMCs ، يمكن تقييم خصائص الاستجابات الوعائية في الحالات الفسيولوجية والمرضية في غياب العوامل الخارجية مثل الإشارات العصبية والهرمونات والسيتوكينات ، إلخ. وبالتالي ، فإن IPA و VSMCs بمثابة نماذج ممتازة لدراسة فسيولوجيا الأوعية الدموية / الفيزيولوجيا المرضية ، إلى جانب العديد من التحقيقات التجريبية ، مثل التعديل بواسطة العوامل الدوائية ، والتحليل الكهروفسيولوجي المشبك الرقعة ، وتصوير الكالسيوم ، وما إلى ذلك. هنا ، استخدمنا تقنية لعزل IPA للتحقيق في استجابات الأوعية الدموية في إعداد حمام الأعضاء. تم تركيب أجزاء IPA على غرفة حمام الأعضاء عبر أسلاك داخل اللمعان وتحفيزها بواسطة عوامل دوائية مختلفة. تم تسجيل التغيرات في نغمة الأوعية الدموية IPA (أي تضيق الأوعية واسترخاء الأوعية) ، باستخدام محول طاقة متساوي القياس وبرنامج تحليل البيانات الفسيولوجية. قمنا بتنفيذ العديد من البروتوكولات التجريبية ، والتي يمكن تكييفها للتحقيق في آليات استرخاء الأوعية / تضيق الأوعية لدراسة الأنشطة الدوائية للعقاقير الكيميائية النباتية أو الاصطناعية. ويمكن أيضا استخدام البروتوكولات لتقييم أدوار الأدوية في تعديل الأمراض المختلفة، بما في ذلك ارتفاع ضغط الدم الشرياني الرئوي. يسمح لنا نموذج IPA بالتحقيق في منحنى التركيز والاستجابة ، وهو أمر بالغ الأهمية في تقييم المعلمات الدوائية الديناميكية للأدوية.

المقدمة

الأوعية الدموية الرئوية هي نظام وعائي منخفض الضغط تتمثل وظيفته الرئيسية في توصيل الدم غير المؤكسج إلى منطقة تبادل الغاز في الرئتين. يتم ترتيب الشرايين الرئوية في الرئتين في فروع موازية لشجرة الشعب الهوائية ، مما يشكل في النهاية شبكة واسعة من الشعيرات الدموية المستمرة على عدة حويصلات هوائية ، وأخيرا ، تجتمع معا في الأوردة والأوردة. يتم التحكم في نغمة الأوعية الدموية للشريان الرئوي من خلال عدة عوامل، بما في ذلك التفاعل بين البطانة وخلايا العضلات الملساء الوعائية (VSMCs)1.

في هذه الدراسة ، نركز على الاسترخاء الوعائي المعتمد على البطانة والمستقلة للشريان داخل الرئة (IPA). فيما يتعلق باسترخاء الأوعية المعتمد على البطانة، يمكن للآليات المختلفة التي تحدث على سطح الخلايا البطانية أن تزيد من تركيز Ca2+ داخل الخلايا (على سبيل المثال، يرتبط الأسيتيل كولين [ACh] بمستقبلات المسكارينية [M3])، مما يؤدي إلى تكوين أكسيد النيتريك (NO) والبروستاسيكلين (PGl2) وعامل فرط الاستقطاب المشتق من البطانة (EDHF) (الشكل 1) ). NO هو عامل الاسترخاء الرئيسي المشتق من البطانة والذي يتم تصنيعه من L-arginine بواسطة سينثاز أكسيد النيتريك البطاني (eNOS)2 ، والذي ينفصل بعد ذلك عن الخلايا البطانية إلى VSMCs (الشكل 1) ويحفز إنزيم guanylyl cyclase (sGC) القابل للذوبان ؛ يغير هذا الإنزيم الجوانوزين ثلاثي الفوسفات (GTP) إلى أحادي فوسفات غوانوزين دوري (cGMP) ، مما ينشط بروتين كيناز G (PKG) ويقلل من مستويات Ca2+ الخلوية ، مما يسبب استرخاء الأوعية (الشكل 1). يتم تصنيع PGl2 بواسطة الخلايا البطانية عبر مسار سيكلو-أوكسيجيناز (COX) 3,4. يرتبط بمستقبلات البروستاسيكلين (IP) على VSMCs ويحفز إنزيم أدينيل سيكلاز (AC) ، الذي يحول بعد ذلك الأدينوسين ثلاثي الفوسفات (ATP) إلى أحادي فوسفات الأدينوسين الدوري (cAMP) (الشكل 1) 3,4. ينشط cAMP بروتين كيناز A (PKA) ، مما يقلل من مستويات Ca2+ الخلوية ويسبب استرخاء الأوعية5 (الشكل 1). يشارك مسار EDHF أيضا في استرخاء الأوعية المعتمد على البطانة من خلال العديد من الوسطاء البطانيين والأحداث الكهربائية. يؤدي تنشيط مسار EDHF إلى فرط استقطاب VSMCs ، وبالتالي إغلاق قنوات Ca 2 + التي تعمل بالجهد (VOCCs) ، وتقليل مستويات Ca2 + داخل الخلايا ، وتحفيز استرخاء الأوعية6. يحدث استرخاء الأوعية المستقل عن البطانة مباشرة على VSMCs عبر عدة آليات ، مثل تقليل مستوى Ca 2 + داخل الخلايا ، وتثبيط كيناز سلسلة ضوء الميوسين (MLCK) ، وتنشيط فوسفاتيز سلسلة ضوء الميوسين (MLCP) ، والحد من حساسية Ca2 + للآلات الانقباضية ل VSMCs. في هذه الدراسة ، نركز على استرخاء الأوعية الناجم عن فتح قنوات K + المختلفة ، وحصار المركبات العضوية المتطايرة ، وتثبيط إطلاق Ca 2 + من الشبكة الساركوبلازمية7 ، مما يؤدي إلى تقليل مستويات Ca 2 + داخل الخلايا ، وبالتالي تقليل فسفرة سلسلة ضوء VSMC myosin وربط الميوسين أكتين أو تكوين عبر الجسور ، على التوالي ، مما يؤدي في نهاية المطاف إلى استرخاء الأوعية.

إن تقنية تقييم قياسات تضيق الأوعية واسترخاء الأوعية في IPA المعزولة راسخة جيدا للقوارض ، لكن البيانات تختلف اعتمادا على البروتوكولات التجريبية. تصف هذه الدراسة الطريقة المستخدمة لتقييم التفاعلات الوعائية لمستحضرات IPA للفئران في المختبر ، والتي تم إجراؤها في غياب عوامل خارجية تعدل استجابة الأوعية الدموية في الجسم الحي ، مثل الإشارات العصبية والهرمونات والسيتوكينات وضغط الدم ، إلخ.

استخدمنا العديد من البروتوكولات التجريبية باستخدام المستخلص النباتي كمثال لدراسة التفاعلات الوعائية ل IPA. تم استخدام حاصرات مختلفة (الشكل 1) لتحديد آليات استرخاء الأوعية المعتمد على البطانة والمستقلة التي يسببها المستخلص النباتي. ومع ذلك ، يمكن تكييف نفس البروتوكولات لتقييم استجابات الأوعية الدموية ل IPA لأي أدوية أو مستخلصات أو مواد كيميائية نباتية تستخدم لعلاج الأمراض الرئوية المختلفة.

الوصول مقيد. يرجى تسجيل الدخول أو بدء فترة تجريبية لعرض هذا المحتوى.

البروتوكول

تمت الموافقة على التجارب التي أجريت في هذه الدراسة من قبل لجنة الأخلاقيات التابعة للجنة رعاية واستخدام الحيوانات بجامعة ناريسوان (NUACUC) ، رقم البروتوكول NU-AE620921 ، لرعاية واستخدام الحيوانات للأغراض العلمية.

1. تكوين الحلول الفسيولوجية

  1. قم بصياغة محلول كريبس عن طريق إذابة المواد الكيميائية في الماء المقطر لتحقيق التركيزات النهائية على النحو التالي: 122 mM NaCl ، 10 mM HEPES ، 5 mM KCl ، 0.5 mM KH 2 PO 4 ، 0.5 mM NaHPO4 ، 1 mM MgCl 2 ، 1.8 mM CaCl 2، و 11 mM glucose8. اضبط الرقم الهيدروجيني للمحلول على 7.3 مع 1 M NaOH وسخن مسبقا إلى 37 درجة مئوية قبل الاستخدام.
  2. قم بإعداد محلول كريبس البارد بالمثل كما هو مذكور في الخطوة 1.1. لاستخدامها كوسيلة عزل ل IPA ، كما هو موضح في الخطوة 2.

2. عزل الشريان الرئوي (IPA)

  1. تخدير ذكور فئران Wistar البالغة من العمر 8 أسابيع عن طريق حقن ثيوبنتال الصوديوم داخل الصفاق (100 مجم / كجم)9. تحقق من الفئران بحثا عن رد فعلها على المحفزات المؤلمة في النوم العميق باستخدام ملقط مثبت على أقدامها ، ثم تأكد من أن الفئران ليس لديها رد فعل سحب القدم قبل القتل الرحيم لها في الخطوة 2.2.
  2. قطع فتح الصدر الأوسط من الفئران وطرف القلب مع مقص (حجم 14 سم). ثم ، حدد موقع جذر الرئة بمقص (حجم 14 سم). حصاد الرئة بأكملها عن طريق القطع بالمقص وغمرها في محلول كريبس البارد10,11.
  3. يقطع فص واحد من الرئة بمقص (مقاس 11 سم) ويوضع على طبق بتري (مقاس 9 سم) مع توجيه الجانب الإنسي / الجذر للرئة لأعلى (الشكل 2A ، B). مراقبة وتحديد محاذاة الوريد والشعب الهوائية والشريان من أعلى إلى أسفل (الشكل 2B).
  4. قطع فتح الشعب الهوائية طوليا مع مقص (حجم 11 سم). ثم ، استخدم الملقط (حجم 11 سم) للاستيلاء على طرف الشعب الهوائية. تشريح بلطف وإزالة الشعب الهوائية والأوردة من الرئة. لاحظ أن IPA محاذاة دائما تشريحيا تحت الشعب الهوائية.
  5. بعد ذلك ، يمكن تصور IPA الرئيسي (الشكل 2C). استخدم الملقط (مقاس 11 سم) للاستيلاء على طرف IPA وتشريحه بعناية من أنسجة الرئة باستخدام مقص (حجم 11 سم).
  6. احتفظ ب IPA المعزول في محلول كريبس البارد حتى يتم إعداد مجموعة حمام الجهاز (درجة الحموضة 7.3 ودرجة الحرارة 4 درجة مئوية)1 1.

3. عزل خلايا العضلات الملساء الوعائية (VSMCs)

  1. عزل IPA كما هو موضح سابقا في الخطوة 2. قطع الفرع الرئيسي من IPA طوليا مع مقص (حجم 11 سم) وقطع إلى شرائح صغيرة (2 ملم) (الشكل 3A).
  2. اغمر شرائط IPA في وسط تفكك (DM) 10,12 يحتوي على 110 mM NaCl و 5 mM KCl و 0.5 mM KH 2 PO 4 و 0.5 mM NaH 2 PO4 و 10 mM NaHCO3 و 10 mM HEPES و 0.03 mM phenol red و 10 mM taurine و 0.5 mM EDTA و 2 mM MgCl 2 و 11 mM glucose و 0.16 mM CaCl 2، واضبط الرقم الهيدروجيني إلى 7.0 مع 1 M NaOH. احتضن الشرائط لمدة 1 ساعة عند 4 درجات مئوية في DM تحتوي على غراء 1 ملغم / مل ، و 0.04٪ ألبومين مصل البقر (BSA) ، و 0.4 mM 1,4- dithiothreitol (DTT) ، واحتضنها مرة أخرى عند 37 درجة مئوية لمدة 15 دقيقة. أضف 1 ملغم / مل كولاجيناز من النوع 1A في DM واحتضان المزيد عند 37 درجة مئوية لمدة 5 دقائق.
    ملاحظة: DM هو حل يستخدم للحفاظ على صلاحية الخلية. الغراء والكولاجيناز من النوع 1A هي إنزيمات تكسر بروتينات المصفوفة خارج الخلية لعزل الخلايا المفردة. BSA هو بروتين ألبومين في المصل يستخدم لتحقيق الاستقرار في الإنزيمات أثناء التخزين والتفاعلات الأنزيمية. DTT هو عامل اختزال يستخدم لتحقيق الاستقرار وتعزيز نشاط الإنزيمات أثناء عملية عزل الخلايا. التورين هو حمض الكبريتيك الأميني المستخدم لتحقيق الاستقرار في غشاء الخلية وسلامة الخلية.
  3. انقل الأنسجة إلى DM طازجة وتشتت عن طريق التتبع اللطيف باستخدام ماصة باستور الزجاجية (الشكل 3B). استمر في التتبع حتى تصبح VSMCs المعزولة مرئية في محلول الاستحمام تحت المجهر (الشكل 3C).
    ملاحظة: يمكن استخدام VSMCs المعزولة حديثا لدراسة فسيولوجيا الأوعية الدموية / الفيزيولوجيا المرضية ، إلى جانب العديد من التحقيقات التجريبية ، مثل التعديل بواسطة العوامل الدوائية ، والتحليل الكهروفسيولوجي المشبك بالتصحيح ، وتصوير الكالسيوم ، وما إلى ذلك. ومع ذلك ، تركز هذه الدراسة فقط على استرخاء الأوعية الدموية ل IPA المعزولة باستخدام تقنية حمام الأعضاء.

4. تقنية حمام الجهاز

  1. عزل IPA كما هو موضح سابقا في الخطوة 2. قطع الفرع الرئيسي من IPA إلى حلقات طولها ~ 2 مم (الشكل 2D)13.
  2. قم بتثبيت حلقات IPA في غرف حمام الأعضاء (الشكل 4) عن طريق ربطها بسلكين من الفولاذ المقاوم للصدأ قطرهما 40 ميكرومتر (الشكل 2E)11،13،14.
  3. قم بتوصيل أسلاك الفولاذ المقاوم للصدأ المثبتة بحلقات IPA بمحولات القوة متساوي القياس المتصلة بجهاز الحصول على البيانات ونظام الكمبيوتر المثبت بالبرنامج الفسيولوجي المناسب لتسجيل البيانات وتحليلها ، ثم ارفع توتر حلقة IPA برفق إلى 1 جم11.
  4. اسمح لأجزاء السفينة بالتوازن لمدة 45 دقيقة تقريبا عند توتر الراحة البالغ 1 جم. خلال فترة التوازن ، تأكد من تغيير محلول Krebs بانتظام كل 15 دقيقة. بعد هذه الفترة من التوازن ، اختبر جدوى الأوعية عن طريق قياس تضيق الأوعية إلى محلول K + (80 mM) عالي خارج الخلية يحتوي على 47.4 mM NaCl و 80 mM KCl و 10 mM HEPES و 0.5 mM KH 2 PO 4 و 0.5 mM NaHPO4 و 1.8 mM CaCl 2 و 1 mM MgCl2 و 11 mM glucose10,11.
  5. قم بتقييم وجود أو عدم وجود البطانة عن طريق حساب استجابة الاسترخاء للأسيتيل كولين (1 × 10−5 م) في الحلقات المتعاقد عليها مسبقا مع فينيليفرين (PE ، 1 × 10-5 م) (لاحظ أن تقلصات الأوعية الدموية تظل مستقرة لمدة ساعة واحدة بعد إضافة PE). ضع في اعتبارك الحلقات على أنها بطانة سليمة إذا كانت تحدد كميا للاسترخاء بنسبة تزيد عن 70٪ (الشكل 5A). إذا كان لديهم أقل من 10٪ من الاسترخاء ، ففكر في الحلقات على أنها13 بطانة عارية (الشكل 5B). قم بإزالة البطانة ميكانيكيا عن طريق فرك الوعاء بلطف بسلك صغير للحث على التعري.
  6. مرة أخرى قم بموازنة الحلقات الشريانية لمدة 30 دقيقة قبل بدء تجارب الاختبار.

5. استجابة مرخية للأوعية الدموية للمستخلصات النباتية

  1. تحقق من التأثير المرخي للمستخلص النباتي عن طريق التعاقد المسبق على حلقات IPA مع PE (1 × 10-5 م).
  2. ثم ، أضف بعناية المستخلص النباتي (1-1000 ميكروغرام / مل) بشكل تراكمي إلى حلقات البطانة السليمة والحلقات العارية للبطانة للحث على استرخاء الأوعية (الشكل 6A ، B) والحصول على منحنى استجابة يعتمد على التركيز (الشكل 6C).
  3. تأكد من أن تأثير ثنائي ميثيل سلفوكسيد (DMSO) المستخدم كمذيب يتم تقييمه أيضا بالمثل ليكون بمثابة عنصر تحكم سلبي (الشكل 6C).

6. آلية استرخاء الأوعية الناجم عن المستخلصات النباتية عن طريق البطانة

  1. تقييم آلية عمل المستخلص النباتي عن طريق سينثاز أكسيد النيتريك البطاني (eNOS) ، و cyclo-oxygenase (COX)13 ، ومسارات عامل فرط الاستقطاب المشتق من البطانة (EDHF) عن طريق احتضان حلقات IPA السليمة للبطانة لمدة 30 دقيقة مع المثبطات التالية (الشكل 7A): 1 × 10−4 M NG-nitro-L-arginine methyl ester (L-NAME ، مثبط eNOS) 9 ، 1 × 10−5 M indomethacin (مثبط COX)9 ، أو مزيج من 1 × 10−7 M apamin (مانع قناة بوتاسيوم صغير منشط بالكالسيوم) و 1 × 10−7 M charybdotoxin (مانع قناة البوتاسيوم المنشط بالكالسيوم وسيط وكبير التوصيل) ، قبل إحداث تقلصات IPA مع 1 × 10−5 M PE.
  2. ثم ، بعد الانقباضات إلى PE ، أضف تركيزات تراكمية (0.1-1000 ميكروغرام / مل) من المستخلص النباتي.
  3. عرض آثار المستخلصات النباتية كنسبة مئوية من الاسترخاء لحلقات IPA في وجود مثبطات مقارنة باستجابة حلقات IPA بدون مثبطات (الشكل 7B-D) وبناء منحنى التركيز والاستجابة.

7. آلية استرخاء الأوعية الدموية الناجمة عن المستخلصات النباتية عبر قنوات العضلات الملساء الوعائية K +

  1. حلقات IPA العارية قبل احتضان البطانة لمدة 30 دقيقة مع 1 × 10−3 M 4-aminopyridine (4-AP) ، مانع لقناة البوتاسيوم ذات بوابات الجهد (KV) (الشكل 8A) ، 1 × 10−5 M glibenclamide ، مانع لقناة البوتاسيوم الحساسة ل ATP (KATP) ، أو 1 × 10−7 M iberiotoxin ، مانع للتوصيل الكبير Ca 2 + قنوات K + المنشطة (KCa) ، قبل إحداث تقلصات IPA مع 1 × 10-5 M PE.
  2. ثم ، أضف تركيزات تراكمية من المستخلص النباتي.
  3. عرض آثار المستخلصات النباتية كنسبة مئوية من الاسترخاء لحلقات IPA مع مثبط مقارنة بحلقات IPA بدون مثبط (الشكل 8B-D) وبناء منحنى التركيز والاستجابة.

8. آلية استرخاء الأوعية الناجم عن المستخلصات النباتية عن طريق تثبيط تدفق الكالسيوم خارج الخلية (Ca2 +) في VSMCs

  1. حلقات IPA العارية بالبطانة قبل احتضانها لمدة 30 دقيقة في محلول كريبس الخالي من Ca 2+ الذي يحتوي على 1 mM من الإيثيلين جلايكول-مكرر (2-aminoethylether)-N,N,N',N'-حمض رباعي الأسيتيك (EGTA) (الشكل 9A).
  2. بعد ذلك ، استبدل محلول الاستحمام بمحلول Ca2+ free-80 mM K + لمدة 10 دقائق لإزالة الاستقطاب عن VSMCs ، والتي تفتح بعد ذلك المركبات العضوية المتطايرة (الشكل 9A).
  3. أضف بشكل تراكمي CaCl2 (0.01-10 mM) للحث على تضيق الأوعية في IPA وبناء منحنى التركيز والاستجابة (الشكل 9A).
  4. كرر هذا البروتوكول في نفس حلقات IPA ولكن احتضنها مسبقا بمستخلص نباتي أو 1 ميكرومتر نيكارديبين (مانع قناة Ca 2+ من النوع L) في Ca2+ يحتوي على محلول 80 mM K + لمدة 10 دقائق متبوعا بإضافة تراكمية ل CaCl28.
  5. وأخيرا، قارن الاستجابة الانقباضية بالحد الأقصى للانكماش الذي أثارته سابقا تحديات التحكم في CaCl2 (الشكل 9B).

9. آلية استرخاء الأوعية الناجم عن المستخلصات النباتية عن طريق تثبيط الكالسيوم داخل الخلايا (Ca2 +) من الشبكة الساركوبلازمية (SR)

  1. تعريض حلقات IPA العارية بالبطانة إلى حل 80 mM K + لمدة 5 دقائق تقريبا ، وإزالة الاستقطاب من VSMCs ، وفتح المركبات العضوية المتطايرة ، وفي النهاية توليد تحميل Ca2 + في SR (الشكل 10A).
  2. استبدل محلول الاستحمام لمدة 10 دقائق بمحلول كريبس الخالي من Ca2 + الذي يحتوي على 1 mM EGTA (الشكل 10A).
  3. ثم ، تحدى حلقات IPA باستخدام 1 × 10−5 M PE ، مما ينشط مسار phospholipase C / IP3 ، مما يؤدي في النهاية إلى إطلاق Ca2+ من SR واستحضار انكماش عابر ل IPA (الشكل 10A).
  4. كرر نفس البروتوكول للتأكد من الانقباضات العابرة بالمثل إلى PE.
  5. تحدى حلقات IPA مرة أخرى بمحلول 80 mM K + لمدة 5 دقائق تقريبا ، ثم استبدل محلول الاستحمام بمحلول Krebs الخالي من Ca2 + الذي يحتوي على 1 mM EGTA مع أو بدون المستخلص النباتي لمدة 10 دقائق.
  6. مرة أخرى ، تحدى حلقات IPA باستخدام 1 × 10-5 M PE.
  7. قارن تقلصات IPA الناجمة عن PE بين الحالة مع وبدون المستخلص النباتي (الشكل 10B).

10. التحليل الإحصائي

  1. عبر عن النتائج كمتوسط ± SEM. قارن هذه القيم باستخدام اختبار t الخاص بالطالب أو قم بتحليلها عن طريق تحليل التباين (ANOVA) متبوعا باختبار Tukey-Kramer اللاحق باستخدام برنامج إحصائي مناسب. ضع في اعتبارك الفروق عند p < 0.05 لتكون ذات دلالة إحصائية. هنا ، كان هناك n = 6 فئران / بروتوكول تجريبي.
    ملاحظة: يمكن تقييم تسجيل تضيق الأوعية واسترخاء الأوعية باستخدام برنامج مناسب مثبت على الكمبيوتر. على سبيل المثال ، يوضح الشكل 5A أنه عندما يتم تحفيز الأوعية الدموية بواسطة PE مما يسبب الانكماش ، يمكن ملاحظة ذلك من زيادة التوتر في التتبع الأصلي. سوف يستقر التتبع في 20-30 دقيقة ، والذي يعتبر انكماشا بنسبة 100٪. بعد ذلك ، يحفز ACh الأوعية الدموية ، مما يسبب الاسترخاء ، والذي يمكن ملاحظته من انخفاض التوتر في التتبع الأصلي. وبالتالي ، يتم حساب انخفاض التوتر كنسبة مئوية مقارنة بانكماش 100٪.

الوصول مقيد. يرجى تسجيل الدخول أو بدء فترة تجريبية لعرض هذا المحتوى.

النتائج

تم تطوير البروتوكول في هذه الدراسة لتحديد الظروف التجريبية المثلى لقياس الظواهر الفسيولوجية التي لوحظت في الاستجابات الوعائية لمستحضرات IPA المعزولة. تم إجراء التجارب التجريبية لوصف النتائج المحتملة التي تساعد على فهم التأثيرات الوعائية والأساس الميكانيكي للعمل المرخي للأوعية الدموية للمستخلص النباتي ، على النحو التالي.

تأثير Vasorelaxant من المستخلص النباتي
وكما هو مبين في الشكل 6A,B، في IPA السليم البطانة (E+)، أثار المستخلص النباتي استجابة تعتمد على التر...

الوصول مقيد. يرجى تسجيل الدخول أو بدء فترة تجريبية لعرض هذا المحتوى.

المناقشة

في هذه المخطوطة ، نصف تقنية عزل IPA و VSMCs الفئران. تم استخدام العديد من البروتوكولات التجريبية للتحقيق في الاستجابة الوعائية ل IPA في المختبر ، والتي يمكن استخدامها لتوصيف التأثير الدوائي والأساس الميكانيكي ل IPA للأوعية الدموية الناجم عن المستخلصات النباتية.

فيما يتعلق بعمل موسع الأوعية المعتمد على البطانة للمستخلص النباتي ، تم استخدام حاصرات مختلفة مثل L-NAME (eNOS) ، والإندوميتاسين (COX) ، والأبامين + charybdotoxin (EDHF). أظهرت البيانات التمثيلية كلا من النتائج الإيجابية (أي الا...

الوصول مقيد. يرجى تسجيل الدخول أو بدء فترة تجريبية لعرض هذا المحتوى.

الإفصاحات

ليس لدى المؤلفين ما يكشفون عنه.

شكر وتقدير

يود المؤلفون أن ينحبوا بالمجلس الوطني للبحوث في تايلاند ، ومركز التميز للابتكار في الكيمياء (PERCH-CIC) ، وشبكة البحوث الدولية (IRN61W0005) لتقديمهم الدعم المالي ، وقسم علم وظائف الأعضاء كلية العلوم الطبية ، جامعة ناريسوان ، لدعم مرفق البحوث.

الوصول مقيد. يرجى تسجيل الدخول أو بدء فترة تجريبية لعرض هذا المحتوى.

المواد

قائمة المواد المستخدمة في هذه المقالة
الاسمالشركةرقم فهرسيالتعليقات
1،4-dithiothreitol (DTT)Sigma-AldrichD0632
CAS NO. 348-12-3
4-aminopyridine (4-AP) AldrichChemicalA78403
CAS NO. 504-24-5
AcetylcholineSigma-AldrichA6625
CAS رقم 60-31-1
ApaminSigma-AldrichA9459
CAS NO. 24345-16-2
بقري مصل الألبومين (BSA)Sigma-AldrichA2153
CAS رقم 9048-46-8
كوريد الكالسيومAjax FinechemAJA960
CAS رقم 1707055184
CharybdotoxinSigma-AldrichC7802
CAS رقم 95751-30-7
نوع الكولاجيناز 1ASigma-AldrichC9891
CAS رقم 9001-12-1		من Clostridium histolyticum
D (+)- شركة الجلوكوز أحادي الهيدراتميليبورK50876942 924
سجل المستخلصات الكيميائية رقم 14431-43-7
ثنائي ميثيل سلفوكسيد (DMSO)سيجما ألدريتشD4540
سجل المستخلصات الكيميائية رقم 67-68-5
الإيثيلين جلايكول بيس (2-أمينوإيثيليثير) -N ، N ، N '، N '، N'-حمض تتراأسيتيك (EGTA)Sigma-AldrichE3889
CAS رقم 67-42-5
حمض الإيثيلين ديامين تترا أسيتيك (EDTA)سيجما ألدريتشE9884
CAS رقم 60-00-4
ملقط 11 سم.ملقط دوموكسل
قابل للصدأ 14 سم.Rustless Dumoxel-Glibenclamide
Sigma-AldrichG6039
CAS رقم 16673-34-0
GraphPad Prismالإصدار 5.0 (سان دييغو ، كاليفورنيا ، الولايات المتحدة الأمريكية)
HEPESSigma-AldrichH3375
CAS رقم 7365-45-9
IberiotoxinSigma-AldrichI5904
CAS رقم 1002546960		المؤتلف من Mesobuthus tamulus
IndomethacinSigma-AldrichI7378
CAS NO. 53-86-1
Labchartالإصدار 7.0 (A.D. Instrument ، Castle Hill ، أستراليا).
كلوريد المغنيسيومAjax Finechem296
CAS رقم 1506254995
ذكور فئران ويستارنومورا سيام الدولية المحدودة ، بانكوك ، تايلاند
NG-nitro-L-arginine ميثيل استر (L-NAME)Sigma-AldrichN5751
CAS رقم 51298-62-5
نيكارديبينسيجما ألدريتشN7510
رقم CAS 54527-84-3
حمام الأعضاء 15 مل.-ترتيب محدد من قبل الباحثين
PapainSigma-AldrichP4762
CAS NO. 9001-73-4		من البابايا اللاتكس الفينيل
الأحمرسيجما ألدريتشP5530
CAS رقم 34487-61-1
فينيليفرينسيجما ألدريتشP6126
CAS رقم 61-76-7
كلوريد البوتاسيومKemausKA383
CAS NO. 7447-40-7
ثنائي هيدروجين فوسفات البوتاسيومAldrich ChemicalEC231-913-4
CAS رقم 7778-77-0
S + A2: E36كلوريد الصوديومKemausKA465
CAS رقم 7647-14-5
مقص 11 سم.مقص سبال غير
14 سم.سبال بيكربونات الصوديوم المقاوم للصدأ
أياكس فاينكيم475
سجل المستخلصات رقم 912466
ثنائي هيدروجين فوسفات الصوديومألدريتش كيميكال33،198-8
سجل المستخلصات الكيميائية رقم 7558-80-7
هيدروكسيد الصوديومأياكس فينكيم482
رقم CAS رقم 1506196602
ثيوبنتال الصوديومAnesthalJPN3010002
CAS رقم 1C 314/47
تورينسيجما ألدريتشT0625
سجل المستخلصات الكيميائية رقم 107-35-7
حمام مائي WBU 45Memmert2766
رقم CAS. -
غير برنامج برنامج القابل للصدأ

المراجع

  1. Lyle, M. A., Davis, J. P., Brozovich, F. V. Regulation of pulmonary vascular smooth muscle contractility in pulmonary arterial hypertension: Implications for therapy. Frontiers in Physiology. 8, 614(2017).
  2. Cyr, A. R., Huckaby, L. V., Shiva, S. S., Zuckerbraun, B. S. Nitric oxide and endothelial dysfunction. Critical Care Clinics. 36 (2), 307-321 (2020).
  3. Ruan, K. -H. Advance in understanding the biosynthesis of prostacyclin and thromboxane A2 in the endoplasmic reticulum membrane via the cyclo-oxygenase pathway. Mini Reviews in Medicinal Chemistry. 4 (6), 639-647 (2004).
  4. Del Pozo, R., Hernandez Gonzalez, I., Escribano-Subias, P. The prostacyclin pathway in pulmonary arterial hypertension: A clinical review. Expert Review of Respiratory Medicine. 11 (6), 491-503 (2017).
  5. Morgado, M., Cairrão, E., Santos-Silva, A. J., Verde, I. Cyclic nucleotide-dependent relaxation pathways in vascular smooth muscle. Cellular and Molecular Life Sciences. 69 (2), 247-266 (2012).
  6. Schmidt, K., de Wit, C. Endothelium-derived hyperpolarizing factor and myoendothelial coupling: The in vivo perspective. Frontiers in Physiology. 11, (2020).
  7. Fan, G., Cui, Y., Gollasch, M., Kassmann, M. Elementary calcium signaling in arterial smooth muscle. Channels. 13 (1), 505-519 (2019).
  8. Wisutthathum, S., et al. Extract of Aquilaria crassna leaves and mangiferin are vasodilators while showing no cytotoxicity. Journal of Traditional and Complementary Medicine. 9 (4), 237-242 (2019).
  9. Kamkaew, N., Paracha, T. U., Ingkaninan, K., Waranuch, N., Chootip, K. Vasodilatory effects and mechanisms of action of Bacopa monnieri active compounds on rat mesenteric arteries. Molecules. 24 (12), 2243(2019).
  10. Chootip, K., Kennedy, C., Gurney, A. Characterization of P2 receptors mediating contraction of the rat isolated pulmonary vasculature. British Journal of Pharmacology. 131, 167(2000).
  11. Paracha, T. U., et al. Elucidation of vasodilation response and structure activity relationships of N2, N4-disubstituted quinazoline 2, 4-diamines in a rat pulmonary artery model. Molecules. 24 (2), 281(2019).
  12. Chootip, K., Gurney, A. M., Kennedy, C. Multiple P2Y receptors couple to calcium-dependent, chloride channels in smooth muscle cells of the rat pulmonary artery. Respiratory Research. 6 (1), 1-10 (2005).
  13. Wisutthathum, S., et al. Eulophia macrobulbon extract relaxes rat isolated pulmonary artery and protects against monocrotaline-induced pulmonary arterial hypertension. Phytomedicine. 50, 157-165 (2018).
  14. Kruangtip, O., et al. Curcumin analogues inhibit phosphodiesterase-5 and dilate rat pulmonary arteries. Journal of Pharmacy and Pharmacology. 67 (1), 87-95 (2015).

الوصول مقيد. يرجى تسجيل الدخول أو بدء فترة تجريبية لعرض هذا المحتوى.

إعادة الطباعة والأذونات

الوسوم

العضلات الملساء الوعائيةتقنية حمام الأعضاءآليات تضيق الأوعيةآليات استرخاء الأوعيةارتفاع ضغط الدم الرئويمنحنى الاستجابة للتركيزإزالة بطانة الأوعيةمحول طاقة القوة المتساوية القياس
عزل الشريان الرئوي وخلايا العضلات الملساء للتحقيق في استجابات الأوعية الدموية
تواصل معنا
أوصِ به للمكتبة

الخصوصية

شروط الاستخدام

السياسات

حقوق الطبع والنشر © 2026 MyJoVE Corporation. جميع الحقوق محفوظة.