يصف هذا البروتوكول طريقة جديدة لتوصيل الأدوية المضادة للفيروسات القهقرية عن طريق الفم التي نجحت في قمع تكرار الحمض النووي الريبي لفيروس نقص المناعة البشرية -1 في الفئران المتوافقة مع البشر.
يتطلب اشتراك JoVE لعرض هذا المحتوى. تسجيل الدخول أو ابدأ نسخة تجريبية مجانية
مقالة منهجية
العلاج التوافقي المضاد للفيروسات القهقرية عن طريق الفم في الفئران المصابة بفيروس نقص المناعة البشرية -1
في هذه المقالة
ملخص
الملخص
تستمر جائحة فيروس نقص المناعة البشرية (HIV-1) في الانتشار بلا هوادة في جميع أنحاء العالم ، ولا يوجد حاليا لقاح متاح ضد فيروس نقص المناعة البشرية. على الرغم من أن العلاج التوليفي المضاد للفيروسات القهقرية (cART) قد نجح في قمع تكاثر الفيروس ، إلا أنه لا يمكن القضاء تماما على المستودع من الأفراد المصابين بفيروس نقص المناعة البشرية. ستتطلب استراتيجية العلاج الآمنة والفعالة لعدوى فيروس نقص المناعة البشرية طرقا متعددة الجوانب ، وبالتالي فإن التقدم في النماذج الحيوانية لعدوى فيروس العوز المناعي البشري -1 أمر محوري لتطوير أبحاث علاج فيروس نقص المناعة البشرية. تلخص الفئران المتوافقة مع البشر السمات الرئيسية لعدوى فيروس العوز المناعي البشري -1. يمكن أن يصاب نموذج الفأر المتوافق مع البشر بفيروس نقص المناعة البشرية -1 ويمكن التحكم في تكاثر الفيروس باستخدام أنظمة cART. علاوة على ذلك ، يؤدي انقطاع cART إلى انتعاش فيروسي سريع في الفئران المتوافقة مع البشر. ومع ذلك ، يمكن أن يكون إعطاء cART للحيوان غير فعال أو صعب أو سام ، والعديد من أنظمة cART ذات الصلة سريريا لا يمكن استخدامها على النحو الأمثل. إلى جانب كونها غير آمنة للباحثين ، فإن إعطاء cART عن طريق إجراء حقن يومي مكثف شائع الاستخدام يؤدي إلى الإجهاد عن طريق التقييد البدني للحيوان. أدت طريقة cART الفموية الجديدة لعلاج الفئران البشرية المصابة بفيروس العوز المناعي البشري -1 الموصوفة في هذه المقالة إلى قمع viremia دون مستوى الكشف ، وزيادة معدل استعادة CD4 + ، وتحسين الصحة العامة في الفئران المصابة بفيروس نقص المناعة البشرية -1.
المقدمة
تحسن العمر المتوقع للأفراد المصابين بفيروس العوز المناعي البشري المزمن (HIV) تحسنا كبيرا مع العلاج التوليفي المضاد للفيروسات القهقرية (cART)1,2. نجح cART في تقليل تكاثر فيروس العوز المناعي البشري -1 وزيادة عدد الخلايا التائية CD4 + إلى وضعها الطبيعي في غالبية المشاركين المصابين بفيروس العوز المناعي البشري -1 المصابين بعدوى مزمنة3 ، مما يؤدي إلى تحسين الصحة العامة وتقليل تطور المرضبشكل كبير 4. ومع ذلك، يتم إنشاء المستودع الكامن لفيروس العوز المناعي البشري-1 حتى عندما يبدأ العلاج المضاد للفيروسات القهقرية أثناء العدوى الحادة 5,6,7....
الوصول مقيد. يرجى تسجيل الدخول أو بدء فترة تجريبية لعرض هذا المحتوى.
البروتوكول
تم الحصول على أنسجة الجنين البشري مجهولة المصدر تجاريا. تم إجراء البحوث على الحيوانات وفقا للبروتوكولات المعتمدة من قبل جامعة كاليفورنيا ، لوس أنجلوس ، ولجنة أبحاث الحيوان (UCLA) (ARC) وفقا لجميع الإرشادات الفيدرالية والولائية والمحلية. على وجه التحديد ، تم إجراء جميع التجارب وفقا للتوصيات والمبادئ التوجيهية لإسكان ورعاية المختبر التابعة للمعاهد الوطنية للصحة (NIH) وجمعية تقييم واعتماد رعاية المختبر (AALAC) الدولية بموجب بروتوكول UCLA ARC رقم 2010-038-02B. تم إجراء جميع العمليات الجراحية تحت الكيتامين (100 مجم / كجم) / زيلازين (5 مجم / كجم) وتخدير الأيزوفلوران (2-3 مجلد) وتم بذل كل الجهود لتقليل آلام الحيوانات وعدم الراحة.
1. الفئران ....
الوصول مقيد. يرجى تسجيل الدخول أو بدء فترة تجريبية لعرض هذا المحتوى.
النتائج
بافتراض أن الفأر الذي يبلغ متوسط وزنه 25 جراما يستهلك 4 جم من الطعام يوميا ، فإن جرعة الدواء اليومية من خلال المدخول الفموي تتوافق مع 2.88 مجم / كجم TFV و 83 مجم / كجم FTC و 768 مجم / كجم من RAL. لاختبار ما إذا كان النظام الغذائي الأمثل ساما ويؤثر على الصحة العامة مقارنة بالحقن اليومي ل cART ، تمت مراقبة وزن الفئران أسبوعيا قبل وأثناء cART من خلال الحقن الفموي أو تحت الجلد. لم تكن هناك فروق كبيرة في الوزن قبل إعطاء cART في كل مجموعة (الشكل 1). ومع ذلك ، انخفض وزن الفأر باستمرار أثناء الحقن ا.......
الوصول مقيد. يرجى تسجيل الدخول أو بدء فترة تجريبية لعرض هذا المحتوى.
المناقشة
تم تطوير طريقة إعطاء cART عن طريق الفم هنا للفئران المصابة بفيروس نقص المناعة البشرية -1 من خلال الجمع بين ثلاثة أدوية مضادة للفيروسات القهقرية داخل أغذية عالية المغذيات. بالمقارنة مع الإعطاء عن طريق الحقن اليومية ، فإن التسليم عن طريق الفم أسهل في الاستخدام ، ويحد من تكرار الإدارة ، ويقلل من التعامل مع الحيوانات ، ويقلل من الإجهاد ، ويحسن السلامة55. حتى هذه اللحظة ، استخدمت دراسات قليلة فقط على الفئران المتوافقة مع البشر24،37،<.......
الوصول مقيد. يرجى تسجيل الدخول أو بدء فترة تجريبية لعرض هذا المحتوى.
الإفصاحات
SK هو مؤسس شركة CDR3 Inc. يعلن المؤلفون الباقون أن البحث قد أجري في غياب أي علاقات تجارية أو مالية يمكن تفسيرها على أنها تضارب محتمل في المصالح.
شكر وتقدير
نود أن نشكر الدكتور روماس غيليزيوناس وجيف موري والأشخاص في غيلياد على توفير الأدوية المضادة للفيروسات القهقرية المستخدمة في هذه الدراسة. تم تمويل هذا العمل من قبل NCI 1R01CA239261-01 (إلى المطبخ) ، ومنح المعاهد الوطنية للصحة P30AI28697 (UCLA CFAR Virology Core ، و Gene and Cell Therapy Core ، و Humanized Mouse Core) ، U19AI149504 (PIs: Kitchen & Chen) ، CIRM DISC2-10748 ، NIDA R01DA-52841 (to Zhen) ، NIAID R2120200174 (PIs: Xie & Zhen) ، IRACDA K12 GM106996 (Carrillo). تم دعم هذا العمل أيضا من قبل معهد الإيدز بجامعة كاليفورنيا في لوس أنجلوس ، وصندوق جيمس ب. بندلتون الخيري ، ومؤسسة عائلة مكارثي.
....الوصول مقيد. يرجى تسجيل الدخول أو بدء فترة تجريبية لعرض هذا المحتوى.
المواد
| الاسم | الشركة | رقم فهرسي | التعليقات |
|---|---|---|---|
| طبق بتري 60 مم | Thermo Scientific Nunc | 150288 | لنقل الغذاء |
| ART APC مضاد للإنسان CD8 الأجسام المضادة | Biolegend | 344722 | لقياس التدفق الخلوي |
| BD LSRFortessa | BD biosciences | لجمع بيانات التدفق | |
| الميكروبيدات CD34 | Miltenyi Biotec | 130-046-702 | لأنابيب الطرد المركزي لتوليد الفئران NSG-BLT |
| فالكون | 14-432-22 | لإذابة ART | |
| DietGel Boost | ClearH2O | 72-04-5022 | لصنع طعام ART |
| Elvitegravir | Gilead | موهوب من Gilead | |
| Emtricitabine | Gilead | موهوب من Gilead | |
| FITC مضاد للجسم CD3 المضاد للإنسان | Biolegend | 317306 | لقياس التدفق الخلوي |
| برنامج | Flowjo FlowJo | لتحليل بيانات قياس التدفق | |
| الخلوي التمهيدي إلى الأمام HIV-1: 5′-CAATGGCAGCAATTTCACCA-3′; | IDT | مخصص | للحمل الفيروسي RT-PCR |
| HIV-1 المسبار: 5 & prime ؛ - [6-FAM] CCCACCAACAGGCGGCT TAACTG [Tamra-Q] -3 & prime ؛ | IDT | مخصص | للحمل الفيروسي RT-PCR |
| HIV-1 التمهيدي العكسي: 5 & prime ؛ -GAATGCCAAATTCCTGCTTGA-3 & prime ؛ | IDT | مخصص | للحمل الفيروسي RT-PCR |
| أنسجة الجنين البشري | Advanced Bioscience Resources، Inc | ||
| الفئران ، سلالة NOD. Cg-Prkdcscid Il2rgtm1Wjl / SzJ | مختبر جاكسون | 5557 | لبناء الفئران المتوافقة مع البشر |
| Pacific Blue المضادة للإنسان CD45 | Biolegend | 304022 | لقياس التدفق الخلوي |
| PerCP المضاد للجسم المضاد CD4 | Biolegend | 300528 | لقياس التدفق |
| QIAamp مجموعات الحمض النووي الريبي الفيروسي | Qiagen | 52904 | لقياس الحمل الفيروسي |
| Raltegravir | Merck | موهوبة من Merck | |
| كاشطات الخلايا المعقمة | 179693 علمية حرارية | لنقل طعام | |
| ART TaqMan RNA-To-Ct 1-Step Kit | للأنظمة الحيوية التطبيقية | 4392653 | للكشف عن الحمل الفيروسي في البلازما |
| تينوفوفير ديسوبروكسيل فومارات | جيلعاد | موهوب من جلعاد | |
| Trimethoprim-Sulfamethoxazole | Pharmaceutical Associates | NDC 0121-0854-16 | للحفاظ على تعقيم الطعام ART. تحتوي كل ملعقة صغيرة سعة 5 مل على 200 مجم سلفاميثوكسازول ، USP 40 مجم Trimethoprim ، USP NMT 0.5٪ كحول |
المراجع
- Antiretroviral Therapy Cohort Collaboration. Life expectancy of individuals on combination antiretroviral therapy in high-income countries: a collaborative analysis of 14 cohort studies. Lancet. 372 (9635), 293-299 (2008).
- May, M. T., et al.
الوصول مقيد. يرجى تسجيل الدخول أو بدء فترة تجريبية لعرض هذا المحتوى.
إعادة الطباعة والأذونات
الوسوم
العلاج المضاد للفيروسات القهقرية المركبالفئران المؤنسنة لفيروس نقص المناعة البشرية النوع الأولالإعطاء الفموي للعلاج المضاد للفيروسات القهقرية المركبتثبيط التضاعف الفيروسياستعادة خلايا CD4نموذج حيواني لفيروس نقص المناعة البشريةالتوصيل عبر هلام النظام الغذائيالحقن تحت الجلدبروتوكول تحضير الدواءخلايا CD4 في الدم المحيطي
