يتطلب اشتراك JoVE لعرض هذا المحتوى. تسجيل الدخول أو ابدأ نسخة تجريبية مجانية

مقالة منهجية

التربية الجماعية والدراسات الجزيئية في حشرات آفات Tortricidae

2.7K مشاهدة

⸱

DOI:

10.3791/63737

⸱

مارس 25, 2022

 ,  ,  , 
1Department of Applied Biological Science, Tokyo University of Agriculture and Technology

في هذه المقالة

ملخص

يصف هذا البروتوكول طريقة تربية حشرات الآفات التورتسيد في المختبرات. يتم تحديد إجراءات التمييز بين جنس الحشرات واستخراج الأحماض النووية لتسلسل الإنتاجية العالية باستخدام آفتين ممزقتين.

الملخص

Tortricidae (Lepidoptera) ، المعروف باسم tortrix أو عث الأسطوانة الورقية ، يضم العديد من الآفات الزراعية والحرجية ، والتي تسبب خسائر زراعية خطيرة. لفهم بيولوجيا عث الآفات هذه ، كان هناك طلب كبير على التقنيات الأساسية. هنا ، يتم تطوير طرق للتربية الجماعية والملاحظات والدراسات الجزيئية باستخدام اثنين من تورتريكس الشاي ، Homona magnanima و Adoxophyes honmai (Lepidoptera: Tortricidae). تم تربية الحشرات على نطاق واسع مع نظام غذائي اصطناعي شرائح والحفاظ عليها عن طريق زواج الأقارب لأكثر من 100 جيل من خلال النظر في خصائصها البيولوجية. الحشرات لديها إزدواج الشكل الجنسي المختلفة. وبالتالي من الصعب التمييز بين الجنس خلال مراحل النمو ، والتي حالت دون إجراء فحوصات لاحقة. وأبرز هذا العمل أنه يمكن تحديد جنس يرقات التورتريسيدات من خلال مراقبة الخصيتين أو تلطيخ أورسين اللاكتيك - الخليك لتصور كروموسوم W الخاص بالإناث. علاوة على ذلك ، باستخدام طرق تحديد الجنس ، مكنت هذه الدراسة من استخراج الأحماض النووية من الأجنة المحددة جنسيا وتطبيقها نحو تسلسل الإنتاجية العالية. هذه النصائح قابلة للتطبيق على حشرات الآفات الأخرى وستسهل المزيد من الدراسات المورفولوجية والجينية.

المقدمة

تمثل حشرات Lepidopteran أكثر من 10٪ من جميع الأنواع الحية الموصوفة1 ، وتسبب بعض أنواع الأنواع أضرارا جسيمة للنباتات وخسائر زراعية خطيرة 2,3. على الرغم من أن الدراسات الجزيئية والجينية قد تم تطويرها باستخدام الحشرات النموذجية مثل دودة القز Bombyx mori4,5 ، إلا أن حشرات الآفات لا تزال غير محققة ، ويرجع ذلك جزئيا إلى صعوبات تربية ومناولة 6,7. لذلك ، فإن الدراسات والتقنيات الأساسية ضرورية لفهم بيولوجيا حشرات الآفات غير النموذجية هذه.

يضم Tortricidae (Lepidoptera) ، المعروف باسم tortrix أو عث أسطوانة الأوراق ، العديد من الآفات الزراعية والحرجية8. من بين أنواع الحشرات ، فإن تورتريكس الشاي الشرقي Homona magnanima Diakonoff و tortrix الفاكهة الصيفية Adoxophyes honmai Yasuda هي آفات polyphagous خطيرة معروفة بإتلاف أشجار الشاي في شرق آسيا7. يضع النوعان مجموعات بيض مسطحة وبيضاوية تشبه المقياس (أو كتل البيض) تتكون من بيض رقيق وناعم وهش تغطيه إفرازات الأمهات. على الرغم من أن مراحل التكوين الجنيني حاسمة لتطور الحشرات وتحديد الجنس9 ، إلا أن هياكل البيض تمنع إجراء مزيد من التحليل من فهم بيولوجيا الحشرات. من المهم التغلب على الصعوبات لإجراء مزيد من الدراسة حول الآفات التي تبيض مثل هذه الكتلة البيضاء المعقدة.

هنا ، لفهم بيولوجيا tortricids ، تم تطوير طرق للتربية الجماعية ، والملاحظات ، والدراسات الجزيئية باستخدام A. honmai و H. magnanima. أولا ، تحافظ طرق التربية الجماعية على كل من tortricids على مدى 100 جيل عن طريق التنشئة. وقد سهل فصل البيض عن كتلة البيض المتسلسلة الشبيهة بالمقياس مراقبة التكوين الجنيني للتورتريسيدات باستخدام المذيبات القلوية والعضوية التي تم تطويرها سابقا من التقنيات المستخدمة في الذباب10. بالإضافة إلى ذلك ، أثبتت هذه الدراسة التمييز الجنسي للأجنة الصغيرة من خلال تطوير طرق تلطيخ الكروماتين الجنسي للإناث lepidopteran باستخدام orcein اللاكتيك الخليك11. من خلال الجمع بين هذه الطرق ، تم استخراج الأحماض النووية عالية الجودة والكمية من الأجنة المحددة للجنس ، والتي كان من الصعب تأسيسها6. تم استخدام الحمض النووي الريبي المستخرج لتسلسل الجيل التالي. بشكل جماعي ، تنطبق الطرق المعروضة هنا على حشرات lepidopteran الأخرى وأنواع الحشرات الأخرى.

الوصول مقيد. يرجى تسجيل الدخول أو بدء فترة تجريبية لعرض هذا المحتوى.

البروتوكول

1. جمع الحشرات والتربية الجماعية

  1. جمع الحشرات tortricid من الحقول التالية نشرت سابقا المراجع 8,12.
    ملاحظة: تجمع يرقات H. magnanima و A. honmai من أوراق الشاي التالفة (الشكل 1A) ؛ ينجذب البالغون باستخدام ضوء الأشعة فوق البنفسجية المحمول 4 واط (الطول الموجي 365 نانومتر ، انظر جدول المواد ، الشكل 1 ب).
  2. قم بتربية اليرقات التي تم جمعها (الشكل 1C ، D) بشكل فردي على قطعة من النظام الغذائي الاصطناعي في كوب 1/2 أوقية لمدة 2-3 أسابيع حتى إكلوزيون البالغين (الشكل 1E ، F). تأكد من جنس الشرانق والبالغين عن طريق السمات المورفولوجية (الشكل 1G ، I).
  3. تزاوج الذكور والإناث في صندوق بلاستيكي (30 سم × 20 سم × 5 سم) إلى كتل بيض البيض على ورق البارافين (الشكل 1J-L). ضع أنثى واثنين من الذكور في كوب بلاستيكي سعة 120 مل مع قطعة من ورق البارافين لإنشاء خط أمومي.
    ملاحظة: من المهم عمل تجاعيد على ورق البارافين. بالنسبة ل H. magnanima، يجب أن يكون ورق البارافين في أسفل العلبة. وفي الوقت نفسه ، بالنسبة ل A. honmai ، ضع ورقة على سقف العلبة لجمع البيض (الشكل 1L) لأن كتلة بيض H. magnanima oviposit على الجانب العلوي من أوراق الشاي ، لكن A. honmai يضع البيض على الجانب السفلي من الأوراق8. تم التحقق من الإجراءات أيضا في الأنواع الأخرى الممزقة ، ومن الأفضل وضع أوراق على كلا الجانبين إذا كانت بيئة وسلوك الأنواع المستهدفة غير واضحة.
  4. قطع كتل البيض (حوالي 100-200 بيضة لكل كتلة بيضة12 ، الشكل 1M) على ورقة البارافين مع مقص. ضع البيض في كوب 1/2 أوقية مع ورق ملقى لمدة 5-7 أيام.
    ملاحظة: يظهر الجنين الناضج كبسولة سوداء الرؤوس (الشكل 1N). تعزى فترات التكوين الجنيني بشكل متنوع إلى الأنواع الممزقة ، ولكن بشكل عام بعد 5 أيام من وضع البيض (dpo) ل H. magnanima و 4 dpo ل A. honmai عند 25 درجة مئوية مع رطوبة نسبية 60٪ ، 16 ساعة ضوء / 8 ساعات دورات مظلمة7.
  5. تخزين كتل البيض التي تظهر كبسولات الرأس الأسود في 4-8 درجة مئوية لمدة 7 أيام.
  6. شريحة ~ 60 غرام من الوجبات الغذائية الاصطناعية باستخدام مبشرة للتربية الجماعية. ضع كتلة البيض المملوءة بالأجنة الناضجة على النظام الغذائي الاصطناعي المقطع في وعاء بلاستيكي (23 سم × 16 سم × 8 سم). ضع أوراق البارافين على كتلة البيض مع الوجبات الغذائية المقطعة إلى شرائح (الشكل 10).
    ملاحظة: تعتبر الرطوبة النسبية أقل من 30٪ جافة ، في حين أن أكثر من 70٪ رطبة جدا. من الأفضل إنشاء ثقوب على غطاء الحاوية البلاستيكية لتمكين تهوية أفضل. املأ الثقوب بالقطن لمنع هروب اليرقات الصغيرة.
  7. للقضاء على الملوثات السطحية من البيض ، نقع كتلة البيض في 3 ٪ من الفورمالين و 0.2 ٪ من محلول كلوريد البنزالكونيوم لمدة 5 دقائق ، على التوالي12. للقضاء على الأمعاء أو البكتيريا داخل الخلايا ، استخدم نظاما غذائيا اصطناعيا مكملا ب 0.05٪ (ث / ث) هيدروكلوريد التتراسيكلين أو 0.06٪ (ث / ث) ريفامبيسين بدلا من اتباع نظام غذائي اصطناعي عادي (انظر جدول المواد).
    ملاحظة: هذه الخطوة اختيارية. من المهم أن يعجن Silk Mate 2S و 0.05٪ (ث / ث) هيدروكلوريد التتراسيكلين أو 0.06٪ (ث / ث) ريفامبيسين بالتساوي من أجل الاتساق.
  8. جمع الشرانق من الحاوية البلاستيكية وتمييز الجنس على أساس الخصائص المورفولوجية12 (الشكل 1G-I).
    ملاحظة: بشكل عام ، تقدم tortricids 5-6 instars حتى الجرو12. تستغرق يرقات H. magnanima و A. honmai 3 أسابيع و 2 أسابيع ، على التوالي ، بعد الفقس حتى الجرو.
  9. ضع 15 ذكرا و 10 إناث في صندوق بلاستيكي (30 سم × 20 سم × 5 سم ، الشكل 1K) للتزاوج مع 25 درجة مئوية ، 16 لتر / 8 د. جمع البيض كل 5-7 أيام وكرر الخطوات 1.4-1.9. لكل جيل.
    ملاحظة: إذا كانت هناك حاجة إلى جمع كتل البيض البيضية حديثا للتحليل اللاحق ، فقم بتعيين بداية الفترة المظلمة ونهايتها ، على سبيل المثال ، من الساعة 9 صباحا إلى الساعة 5 مساء. في هذه الحالة ، عادة ما يقوم H. magnanima و A. honami ببيض البيض بعد 5 ساعات (2 مساء).

2. فصل البيض ويرقات الفارات عن كتل البيض للتثبيت والتخلل والتلطيخ

  1. نقع كتلة البيض في 1000 ميكرولتر من محلول مائي هيبوكلوريت الصوديوم بنسبة 1.2٪ لمدة 10 دقائق أو في 1000 ميكرولتر من محلول مائي من هيدروكسيد البوتاسيوم 5 م لمدة 30 دقيقة لفصل البيض.
  2. اغسل البيض المنفصل في 1000 ميكرولتر من PBSt (137 mM NaCl ، 8.1 mM Na 2 HPO 4 ، 2.68 mM KCl ، 1.47 mM KH2PO 4 ، 0.05٪من Polyoxyethylene (20) Sorbitan Monolaurate [Tween-20] pH7.4 ، انظر جدول المواد) بعد التقريرالمنشور سابقا 7.
  3. نقع البيض في خليط من 500 ميكرولتر من الهيبتان 100 ٪ و 500 ميكرولتر من محلول 4 ٪ paraformaldehyde-PBSt (ث / v). امزج لمدة 10 دقائق عند 1500 دورة في الدقيقة باستخدام خلاط دوامة.
  4. نقع البيض في خليط من 500 ميكرولتر من الهيبتان 100٪ و 500 ميكرولتر من الميثانول 100٪. امزج لمدة 10 دقائق عند 1500 دورة في الدقيقة.
  5. اغسل البيض مرتين ب 1000 ميكرولتر من الميثانول بنسبة 100٪ وخزنه عند 4 درجات مئوية في الميثانول بنسبة 100٪ حتى إجراء المزيد من التجارب (الشكل 2A).
    ملاحظة: يمكن تخزين البيض لمدة 1 سنة على الأقل عند 4 درجات مئوية.
  6. نقع البيض بالتتابع في 99٪ ، 70٪ ، 50٪ من الإيثانول ، و PBSt لمدة 5 دقائق لكل منهما للتحلل المائي بعد التقريرالمنشور سابقا 7.
  7. اغسل البيض باستخدام PBSt ، واغمر البيض في 1 ميكروغرام / مل من محلول DAPI لمدة 5 دقائق ، ثم اغسل البيض باستخدام 1x PBS مرتين. نقع البيض في 20 ميكرولتر من محلول أورسين لاكتيك أسيتيك أسيتيك بنسبة 1.25٪ (ث / ث) (انظر جدول المواد)11 لتصور الهيتيروكروماتين حتى تظهر النوى لونا أحمر لامعا (وهذا يتراوح من 5-60 دقيقة) (الشكل 2B ، C).
    ملاحظة: تعتمد فترات تلطيخ أورسين اللاكتيك والخليك على درجة الحرارة والرطوبة. من الأفضل التحقق من التلطيخ المناسب باستخدام المجهر مع تكبير 4x-10x.
  8. انقل البيض الملون باستخدام ماصة إلى شريحة زجاجية. أرفق البيض الملون بكاشف مضاد للتلاشي (انظر جدول المواد) وزجاج غطاء7.
  9. استخراج يرقات H. magnanima و A. honmai (4-5 أيام بعد وضع البيض (dpo)) من كتل البيض باستخدام ملقط (الشكل 2D). تقسيم اليرقات على شريحة زجاجية (الشكل 2E).
  10. إصلاح أي أنسجة (على سبيل المثال ، العقدة تحت المريء ، العقد الصدرية ، نبيب malpighian ، إلخ) بمزيج من 1: 3 (v / v) 99.7٪ حمض الخليك / 100٪ ميثانول لمدة 5 دقائق. قم بتلطيخ تلك التي تحتوي على محلول أورسين لاكتيك أسيتيكبنسبة 1.25 ٪ (ث / ث) 11 حتى تلطخ النوى (قد يستغرق ذلك 5-60 دقيقة ، اعتمادا على درجة الحرارة والرطوبة).
  11. حدد جنس كل عينة من خلال ملاحظة وجود (أنثى) أو غياب (ذكر) من heterochromatin (كروموسوم W ، الشكل 2F ، G) تحت المجهر.
    ملاحظة: يتم تحديد الجنس عن طريق تصور كروماتين الجنس. تمثل كل خلية الكروماتين الجنسي كنقطة في الإناث 11,12 ، في حين أن الجزء المتبقي من أنسجة يرقات الفارات (غير الثابتة) يجب أن يكون مغمورا على الفور في مخزن تحلل الخلاياالمخزن المؤقت 12 (10 mM Tris-HCl ،100 mM EDTA ، و 1٪ SDS ، الرقم الهيدروجيني 8.0) أو كواشف استخراج الحمض النووي الريبي المحتوية على الفينول إما لاستخراج الحمض النووي أو الحمض النووي الريبي. قبل التشريح ، قم بتوزيع 20 ميكرولتر من الكواشف في أنابيب PCR سعة 0.2 مل مقدما (الشكل 3A). اغمر العينات وخزنها عند -80 درجة مئوية حتى مزيد من الاستخراج. يمكن تخزين العينات لمدة 3 أشهر على الأقل ، ولكن من الأفضل المضي قدما في التجارب النهائية لمنع تدهور الأحماض النووية.

3. استخراج الحمض النووي والحمض النووي الريبي من يرقات الفارات المحددة جنسيا

  1. تجمع 12 يرقات الفارات الذكور أو الإناث المحددة حسب الجنس (5 جنين dpo) وأضف إما المخزن المؤقت لتحلل الخلايا أو كواشف استخراج الحمض النووي الريبي (انظر الخطوة 2.11 وجدول المواد) في أنبوب واحد 1.5 مل.
    ملاحظة: اتبع الخطوات 3.2-3.7 لاستخراج الحمض النووي والخطوات 3.8-3.11 لاستخراج الحمض النووي الريبي.
  2. تجانس الأنسجة في 600 ميكرولتر من المخزن المؤقت لتحلل الخلايا (10 mM Tris-HCl و 100 mM EDTA و 1٪ SDS و pH 8.0) ، وطرد مركزي للعينات عند 10000 × g لمدة 5 دقائق عند 4 درجات مئوية.
  3. جمع supernatant (500 ميكرولتر) باستخدام ماصة وحضانت عند 50 درجة مئوية مع 1.5 ميكرولتر من Proteinase K (20 ملغ / مل ، انظر جدول المواد) لمدة 5 ساعات على كتلة حرارية.
  4. عالج العينات ب 1.0 ميكرولتر من محلول RNase 10 ملغم / مل (انظر جدول المواد) عند 37 درجة مئوية لمدة 30 دقيقة.
  5. أضف 200 ميكرولتر من محلول ترسيب البروتين (انظر جدول المواد) إلى الأنابيب7 ، متبوعا بجهاز طرد مركزي عند 17000 × جم لمدة 10 دقائق عند 4 درجات مئوية.
  6. امزج السوبرناتانت (500 ميكرولتر) مع 500 ميكرولتر من الأيزوبروبانول بنسبة 100٪ ، ثم جهاز طرد مركزي عند 20400 × جم لمدة 10 دقائق عند 4 درجات مئوية.
  7. اغسل الحمض النووي الحبيبي مرتين باستخدام 1000 ميكرولتر من الإيثانول بنسبة 70٪. ثم ، جافة في الهواء (5-10 دقائق في درجة حرارة الغرفة) ، قم بإذابة الحمض النووي في 30 ميكرولتر من المخزن المؤقت Tris-Cl 10 mM (الرقم الهيدروجيني 8.5).
  8. تجانس الأنسجة في 600 ميكرولتر من كواشف استخراج الحمض النووي الريبي وإضافة 240 ميكرولتر من الماء المقطر فائق النقاء إلى الأنبوب. جهاز طرد مركزي للأنابيب عند 12000 × g لمدة 15 دقيقة عند 4 درجات مئوية.
  9. امزج السوبرناتانت (600 ميكرولتر) مع 600 ميكرولتر من الأيزوبروبانول بنسبة 100٪ وانقل الخليط إلى عمود دوران السيليكا (انظر جدول المواد). جهاز الطرد المركزي للأنابيب عند 17900 × g لمدة 1 دقيقة عند 4 درجات مئوية.
  10. اغسل العمود ب 750 ميكرولتر من الإيثانول بنسبة 70٪ ، وقم بالطرد المركزي للعمود مرتين عند 17900 × g لمدة 1 دقيقة لكل منهما عند 4 درجات مئوية.
  11. قم بتحميل 15 ميكرولتر من الماء المقطر فائق النقاء إلى العمود. جهاز الطرد المركزي للأنابيب عند 17900 × g لمدة 1 دقيقة عند 4 درجات مئوية لتقوية الحمض النووي الريبي.
  12. حساب والتحقق من نوعية وكمية الحمض النووي والحمض النووي الريبي باستخدام مقياس الطيف الضوئي القائم على الأشعة فوق البنفسجية. تقييم نقاء الأحماض النووية باستخدام نسب A260/A280 (الأحماض النووية/البروتين) و A260/A230 (الأحماض النووية/الأملاح والملوثات الأخرى)13.
    ملاحظة: بالنسبة لاستخراج الحمض النووي الريبي، تم اتباع الإجراء12 المنشور سابقا، مما أدى إلى تلوث الفينول (الجدول 1). ينتج الحمض النووي المستخرج والحمض النووي الريبي من جنين واحد أو يرقات الفارات عينات منخفضة الكمية ومنخفضة الجودة. عادة ، ينتج عن استخراج الحمض النووي من 12 يرقات الطور 100-600 نانوغرام ، في حين أن استخراج الحمض النووي الريبي باستخدام الطريقة الحالية يولد 900-1500 نانوغرام ، كما هو موضح في الجدول 1.
    ملاحظة: الخطوات من 3.13 إلى 3.15 اختيارية لإجراء المزيد من الفحوصات لتسلسلات الإنتاجية العالية.
  13. احسب كميات الحمض النووي والحمض النووي الريبي باستخدام مقياس الطيف الضوئي القائم على التألق.
    ملاحظة: تم حساب نسبة كميات الحمض النووي الريبي (التركيز القائم على الأشعة فوق البنفسجية (ng/μL)/التركيز القائم على التألق (ng/μL)) لتقييم الجودة لمزيد من التطبيق التجريبي. فعلى سبيل المثال، عندما تكون التركيزات القائمة على الأشعة فوق البنفسجية والتألق 80 نانوغرام/لتر و60 نانوغرام/سولتر، على التوالي، ستكون النسبة 1.5 (80/60). وعادة ما تشير النسب التي تقل عن 1.5 إلى النقاء الكافي للتطبيقات النهائية باستخدام تسلسل الإنتاجية العالية13.
  14. تحليل جودة الحمض النووي الريبي باستخدام الرحلان الكهربائي للرقاقة الدقيقة14.
  15. استخدم الحمض النووي الريبي المؤهل لإعداد مكتبة الحمض النووي الريبي باستخدام مجموعة إعداد مكتبة الحمض النووي الريبي (انظر جدول المواد). تسلسل المكتبات باستخدام منصة مناسبة للمكتبات المعدة.

الوصول مقيد. يرجى تسجيل الدخول أو بدء فترة تجريبية لعرض هذا المحتوى.

النتائج

إنشاء الخطوط المضيفة وصيانتها
وتعزى صلاحية اليرقات المجمعة ميدانيا بشكل مختلف إلى الموقع الميداني والمواسم وظروف التربية (على سبيل المثال، 90٪ من قابلية البقاء في تايوان، تاويوان، كما هو موضح في Arai et al.12). ما يقرب من 30٪ -50٪ من الأزواج ستولد الجيل التالي كالمعتاد. بالنسبة ل H. magnanima و A. honmai ، تم الحفاظ على سلالات الأمهات عن طريق زواج الأقارب لأكثر من 100 جيل.

الملاحظات المورفولوجية وتحديد الجنس
العل...

الوصول مقيد. يرجى تسجيل الدخول أو بدء فترة تجريبية لعرض هذا المحتوى.

المناقشة

يضم Tortricid العديد من الآفات الزراعية والحرجية. قدمت هذه الدراسة طرقا لتربية التورتريكس على مر الأجيال، ومراقبة التكوين الجنيني وجنس الحشرات، وإجراء التحليل الجزيئي باستخدام الأجنة الناضجة.

واحدة من العقبات التي تحول دون دراسة الحشرات الآفات هي إنشاء طرق التربية. على وجه الخصوص ، يؤثر زواج الأقارب في بعض الأحيان على لياقة الأنواع بشكل سلبي. وقد لوحظ على نطاق واسع انخفاض اللياقة البدنية من قبل المولودين ، ويسمى اكتئاب زواج الأقارب ، في مختلف النباتات والحيوانات ، بما في ذلك الحشرات

الوصول مقيد. يرجى تسجيل الدخول أو بدء فترة تجريبية لعرض هذا المحتوى.

الإفصاحات

ليس لدى المؤلفين ما يكشفون عنه.

شكر وتقدير

يود المؤلفون الاعتراف بالدعم المقدم من زمالات أبحاث الجمعية اليابانية لتعزيز العلوم (JSPS) للعلماء الشباب [رقم المنحة 19J13123 و 21J00895].

الوصول مقيد. يرجى تسجيل الدخول أو بدء فترة تجريبية لعرض هذا المحتوى.

المواد

قائمة المواد المستخدمة في هذه المقالة
الاسمالشركةرقم فهرسيالتعليقات
1/2 أونصة كوبFP CHUPACP070009تربية الحشرات ؛ https://www.askul.co.jp/p/6010417/
1/2 أونصة غطاء كوبFP CHUPACP070011تربية الحشرات ؛ https://www.askul.co.jp/p/6010434/?int_id=recom_DtTogether
99.7٪ حمض الأسيتيكFUJIFILM Wako Chemicals Co. ، أوساكا ، اليابان36289تثبيت ؛ https://labchem-wako.fujifilm.com/jp/product/detail/W01ALF036289.html
تظهرتقنيات Agilent 2100 BioanalyzerAgilentالقياس الكمي للأحماض النووية؛ https://www.agilent.com/en/product/automated-electrophoresis/bioanalyzer-systems/bioanalyzer-instrument
مجموعة النانو Agilent RNA6000Agilent Technologies5067-1511القياس الكمي للأحماض النووية؛ https://www.agilent.com/cs/library/usermanuals/Public/G2938-90034_RNA6000Nano_KG
.pdf
محلول كلوريد البنزالكونيومNihon Pharmaceutical Co.، LtdNo.4987123116046التعقيم ؛ https://www.nihon-pharm.co.jp/consumer/products/disinfection.html
القطنAOUME8-1611-02تربية الحشرات ؛ https://item.rakuten.co.jp/athlete-med/10006937/?scid=af_pc_etc&sc2id=af_113_0_1
محلول DAPIDojindo ، طوكيو ، اليابان340-07971بقع ؛ https://www.dojindo.co.jp/products/D523/
فوسفات هيدروجينفوسفات فوجي فيلم واكو للكيماويات4.98748E + 12Na2HPO4 ؛ https://labchem-wako.fujifilm.com/jp/product/detail/W01W0119-0286.html
dsDNA HS القياس الكميInvitrogenQ33231القياس الكمي للأحماض النووية ؛ https://www.thermofisher.com/order/catalog/product/Q33230?SID=srch-srp-Q33230
Econospin RNA II العمودEpoch Life Science Inc.استخراج الحمض النووي الريبي EP-11201؛ http://www.epochlifescience.com/Product/SpinColumn/minispin.aspx
الإيثانولFUJIFILM Wako Chemicals Co. ، أوساكا ، اليابان4.98748E + 12التثبيت ؛ https://labchem-wako.fujifilm.com/jp/product/detail/W01W0105-0045.html
الإيثيلين ديامين - N ، N ، N '، N '، N'-حمض رباعي الأسيتيك ملح رباعي الصوديوم Tetrahydrate (4NA)FUJIFILM Wako Chemicals Co.4.98748E + 12عازلة تحلل الخلايا (EDTA) ؛ https://labchem-wako.fujifilm.com/jp/product/detail/W01T02N003.html
ورق زجاجيHEIKO2100010تربية الحشرات ؛ https://www.monotaro.com/p/8927/0964/?utm_id=g_pla& ؛
utm_medium = cpc & utm_source =
كتلة
حرارية Adw WSC-2620 PowerBLOCKATTO ، طوكيو ، اليابان4002620حضانة ؛ https://www.attoeng.site/
heptaneFUJIFILM Wako Chemicals Co. ، أوساكا ، اليابان4.98748E + 12التثبيت ؛ https://labchem-wako.fujifilm.com/jp/product/detail/W01W0108-0015.html
INSECTA LFNosan Co.، Ltdلم تظهرنظاما غذائيا اصطناعيا ؛ https://www.nosan.co.jp/business/fodder/ist.htm
ISOGENIINippon311-07361RNA ؛ https://www.nippongene.com/siyaku/product/extraction/isogen2/isogen2.html
isopropanolFUJIFILM Wako Chemicals Co.4.98748E + 12استخراج الأحماض النووية ؛ https://labchem-wako.fujifilm.com/jp/product/detail/W01W0232-0004.html
حمض اللاكتيكFUJIFILM Wako Chemicals Co.4.98748E + 12صبغ ؛ https://labchem-wako.fujifilm.com/jp/product/detail/W01W0112-0005.html
الميثانولFUJIFILM Wako Chemicals Co. ، أوساكا ، اليابان4.98748E + 12التثبيت ؛ https://labchem-wako.fujifilm.com/jp/product/detail/W01W0113-0182.html
MSV-3500 دوامةBiosanBS-010210-TAKخلاط فولتكس ؛ https://biosan.lv/products/-msv-3500-multi-speed-vortex/
مقياس ضوئي نانوي NP 80Implenغير معروضالقياس الكمي للأحماض النووية ؛ https://www.implen.de/product-page/implen-nanophotometer-np80-microvolume-cuvette-spectrophotometer/tech-specs/
حزمة طبيعية واسعةمن Inomata الكيميائية1859تربية الحشرات ؛ https://www.monotaro.com/g/03035766/?t.q=%E3%83%8A%E3%83%81%E3%83%A5%E3٪
83٪ A9٪ E3٪ 83٪ AB٪ E3٪ 83٪ 91٪
E3٪ 83٪ 83٪ E3٪ 82٪ AF ٪ E3٪ 83٪
AF ٪ E3٪ 82٪ A4٪ E3٪ 83٪ 89
مجموعة إعداد مكتبة NEBNext Ultra II RNA لإعداد مكتبة IlluminaNew England BioLabsE7770S؛ https://www.nebj.jp/products/detail/2039
شركةFUJIFILM Wako Chemicals Co.4.98748E + 12تلطيخ. https://labchem-wako.fujifilm.com/jp/product/detail/W01W0115-0094.html
بارافورمالدهايدفوجي فيلم واكو للكيماويات160-16061التثبيت. https://labchem-wako.fujifilm.com/jp/product/detail/W01W0116-1606.html
بولي أوكسي إيثيلين (20) سوربيتان مونولوراتفوجي فيلم واكو للكيماويات4.98748E + 12Tween-20 ؛ https://labchem-wako.fujifilm.com/jp/product/detail/W01W0116-2121.html
ضوء أسود محمول للأشعة فوق البنفسجية (4 واط ، 365 نانومتر الطول الموجي)Southwalker Co.، Ltd. ، Kanagawa ، اليابانلم تظهرمجموعة الحشرات ؛ http://www.southwalker.com/shopping/?pid=1364614057-467328
كلوريد البوتاسيومFUJIFILM Wako Chemicals Co.4.98748E + 12كيلو كولتر ؛ https://labchem-wako.fujifilm.com/jp/product/detail/W01W0116-0354.html
فوسفات ثنائي هيدروجين البوتاسيومشركة فوجي فيلم واكو للكيماويات4.98748E + 12KH2PO4 ؛ https://labchem-wako.fujifilm.com/jp/product/detail/W01W0116-0424.html
ProLong Diamond Antifade MountantInvitrogen ، MA ، الولايات المتحدة الأمريكيةP36965مضاد للتلاشي ؛ https://www.thermofisher.com/order/catalog/product/P36965
محلول البروتيناز KMerck71049-4CNاستخراج الحمض النووي ؛ https://www.merckmillipore.com/JP/ja/product/Proteinase-K-Solution-600-mAU-ml,EMD_BIO-71049
محلول ترسيب البروتينQiagen158912استخراج الحمض النووي ؛ https://www.qiagen.com/us/products/discovery-and-translational-research/lab-essentials/buffers-reagents/puregene-accessories/?cmpid=PC_DA_NON_
BIOCOMPARE_ProductListing_
0121_RD_MarketPlace_ProductC
Qubit V4InvitrogenQ33238القياس الكمي للأحماض النووية ؛ https://www.thermofisher.com/order/catalog/product/Q33238
ريفامبيسينFUJIFILM Wako Chemicals Co. ، أوساكا ، اليابان4.98748E + 12التعقيم ؛ https://labchem-wako.fujifilm.com/jp/product/detail/W01W0118-0100.html
طقم القياس الكمي RNA HSInvitrogenQ32855القياس الكمي للأحماض النووية ؛ https://www.thermofisher.com/order/catalog/product/Q32852
محلول RNaseNippon Gene313-01461استخراج الحمض النووي الريبي ؛ https://www.nippongene.com/siyaku/product/modifying-enzymes/rnase-a/rnase-s.html
Silk Mate 2SNosan Co.، Ltdلم تظهرنظاما غذائيا اصطناعيا ؛ https://www.nosan.co.jp/business/fodder/ist.htm
كلوريد الصوديومFUJIFILM Wako للكيماويات4.98748E + 12كلوريد الصوديوم ؛ https://labchem-wako.fujifilm.com/jp/product/detail/W01W0119-0166.html
كبريتات دوديسيل الصوديومFUJIFILM Wako للكيماويات4.98748E + 12عازلة تحلل الخلية (SDS) ؛ https://labchem-wako.fujifilm.com/jp/product/detail/W01W0119-1398.html
محلول مائي هيبوكلوريت الصوديومFUJIFILM Wako Chemicals Co. ، أوساكا ، اليابان4.98748E + 12فصل البيض ؛ https://labchem-wako.fujifilm.com/jp/product/detail/W01W0119-0220.html
التتراسيكلين هيدروكلوريدFUJIFILM Wako Chemicals Co. ، أوساكا ، اليابان4.98748E + 12تعقيم; https://labchem-wako.fujifilm.com/jp/product/detail/W01W0120-1656.html
تريس - حمض الهيدروكلوريك فوجيفيلم واكو للكيماويات4.98748E + 12عازل تحلل الخلية ؛ https://labchem-wako.fujifilm.com/jp/product/detail/W01W0120-1536.html
الماء المقطر فائق النقاءInvitrogen10977023استخراج الحمض النووي الريبي ؛ https://www.thermofisher.com/order/catalog/product/10977015
لم ثنائي استخراج جين

المراجع

  1. Gaston, K. J. The magnitude of global insect species richness. Conservation Biology. 5 (3), 283-296 (1991).
  2. Pogue, M. A world revision of the genus Spodoptera Guenée (Lepidoptera: Noctuidae). Memoirs of the American Entomological Society. 43, 1(2002).
  3. Matsuura, H., Naito, A. Studies on the cold-hardiness and overwintering of Spodoptera litura F. (Lepidoptera: Noctuidae): VI. Possible overwintering areas predicted from meteorological data in Japan. Applied Entomology and Zoology. 32 (1), 167-177 (1997).
  4. Mita, K., et al. The construction of an EST database for Bombyx mori and its application. Proceedings of the National Academy of Sciences of the United States of America. 100 (24), 14121-14126 (2003).
  5. Kawamoto, M., et al. High-quality genome assembly of the silkworm, Bombyx mori. Insect Biochemistry and Molecular Biology. 107, 53-62 (2019).
  6. Fukui, T., et al. In vivo masculinizing function of the Ostrinia furnacalis Masculinizer gene. Biochemical and Biophysical Research Communications. 503 (3), 1768-1772 (2018).
  7. Arai, H., Ishitsubo, Y., Nakai, M., Inoue, M. N. A simple method to disperse eggs from lepidopteran scale-like egg masses and to observe embryogenesis. Entomological Science. 25 (1), 12497(2022).
  8. vander Geest, L. P., Evenhuis, H. H. Tortricid pests: their biology, natural enemies and control. , Elsevier Science Publishers. Amsterdam. (1991).
  9. Kiuchi, T., et al. A single female-specific piRNA is the primary determiner of sex in the silkworm. Nature. 509 (7502), 633-636 (2014).
  10. Rand, M. D., Kearney, A. L., Dao, J., Clason, T. Permeabilization of Drosophila embryos for introduction of small molecules. Insect Biochemistry and Molecular Biology. 40 (11), 792-804 (2010).
  11. Kageyama, D., Traut, W. Opposite sex-specific effects of Wolbachia and interference with the sex determination of its host Ostrinia scapulalis. Proceedings of the Royal Society B. 271 (1536), 251-258 (2004).
  12. Arai, H., Lin, S. R., Nakai, M., Kunimi, Y., Inoue, M. N. Closely related male-killing and nonmale-killing Wolbachia strains in the oriental tea tortrix Homona magnanima. Microbial Ecology. 79 (4), 1011-1020 (2020).
  13. Schalamun, M., et al. Harnessing the MinION: An example of how to establish long-read sequencing in a laboratory using challenging plant tissue from Eucalyptus pauciflora. Molecular Ecology Resources. 19 (1), 77-89 (2019).
  14. Winnebeck, E. C., Millar, C. D., Warman, G. R. Why does insect RNA look degraded. Journal of Insect Science. 10 (1), 159(2010).
  15. Ivey, C. T., Carr, D. E., Eubanks, M. D. Effects of inbreeding in Mimulus guttatus on tolerance to herbivory in natural environments. Ecology. 85 (2), 567-574 (2004).
  16. Saccheri, I., et al. Inbreeding and extinction in a butterfly metapopulation. Nature. 392 (6675), 491-494 (1998).
  17. Crnokrak, P., Roff, D. A. Inbreeding depression in the wild. Heredity. 83 (3), 260-270 (1999).
  18. Keller, L. F., Waller, D. M. Inbreeding effects in wild populations. Trends in Ecology & Evolution. 17 (5), 230-241 (2002).
  19. Margaritis, L. H., Kafatos, F. C., Petri, W. H. The eggshell of Drosophila melanogaster. I. Fine structure of the layers and regions of the wild-type eggshell. Journal of Cell Science. 43 (1), 1-35 (1980).
  20. Sugimoto, T. N., Ishikawa, Y. A male-killing Wolbachia carries a feminizing factor and is associated with degradation of the sex-determining system of its host. Biology Letters. 8 (3), 412-415 (2012).

الوصول مقيد. يرجى تسجيل الدخول أو بدء فترة تجريبية لعرض هذا المحتوى.

إعادة الطباعة والأذونات

الوسوم

تحديد الجنسنظام غذائي اصطناعيصبغ الأورسين بحمض اللاكتيك والأسيتيكاستخلاص الحمض النووي الريبوزي منقوص الأكسجين (DNA)استخلاص الحمض النووي الريبوزي (RNA)تسلسل الجيل القادمصبغ الأجنة
التربية الجماعية والدراسات الجزيئية في حشرات آفات Tortricidae
تواصل معنا
أوصِ به للمكتبة

الخصوصية

شروط الاستخدام

السياسات

حقوق الطبع والنشر © 2026 MyJoVE Corporation. جميع الحقوق محفوظة.