الحقن داخل الجسم الزجاجي في عين الأغنام

ملخص

تم إجراء الحقن داخل الجسم الزجاجي في عين الأغنام بهدف تقديم العلاج الجيني بوساطة فيروسية إلى شبكية العين.

الملخص

هناك عدة طرق لتوصيل العوامل العلاجية إلى شبكية العين ، بما في ذلك داخل الجسم الزجاجي (IVT) ، تحت الشبكية ، فوق المشيمية ، حول العين ، أو الإدارة الموضعية. يتضمن توصيل الدواء IVT حقنا في الخلط الزجاجي للعين ، وهي مادة هلامية تملأ الغرفة الخلفية للعين وتحافظ على شكل كرة العين. على الرغم من أن طريق IVT أقل استهدافا بشكل محدد من الولادة تحت الشبكية ، إلا أنه أقل توغلا ويستخدم على نطاق واسع في الإعدادات السريرية لمجموعة من أمراض العين.

لقد أثبتنا سابقا فعالية التوصيل داخل الجسم الزجاجي لمنتج العلاج الجيني بوساطة الفيروس الغدي (AAV9). CLN5) في الأغنام مع شكل CLN5 يحدث بشكل طبيعي من داء الشحمي العصبي السيرويد (NCL). تلقت الأغنام المصابة العلاج الجيني IVT في عين واحدة ، مع العين الأخرى غير المعالجة بمثابة عنصر تحكم داخلي. تم الحفاظ على بنية الشبكية ووظيفتها في العين المعالجة لمدة تصل إلى 15 شهرا بعد العلاج ، في حين أظهرت العين غير المعالجة انخفاضا تدريجيا في الوظيفة وضمورا شديدا أثناء فحص ما بعد الوفاة. بناء على دراسات الأغنام ، تم مسح منتج العلاج الجيني CLN5 كدواء جديد تجريبي مرشح (IND) من قبل إدارة الغذاء والدواء الأمريكية في سبتمبر 2021. توضح هذه الورقة بالتفصيل البروتوكول الجراحي لتوصيل IVT لناقل فيروسي علاجي إلى عين الأغنام.

المقدمة

يمكن استخدام عدة طرق لتوصيل العوامل العلاجية إلى شبكية العين ، بما في ذلك داخل الجسم الزجاجي (IVT) ، أو تحت الشبكية ، أو فوق المشيمية ، أو حول العين ، أو الموضعية. يتضمن كل طريق من طرق الإدارة التغلب على الحواجز مثل حاجز الدم والشبكية أو الأغشية الداخلية والخارجية المحددة وله معدلات متفاوتة من الفعالية اعتمادا على الدواء الذي يتم تسليمه وهدف الشبكية المحدد ^1,2.

يتضمن توصيل الدواء IVT حقنا في الخلط الزجاجي للعين ، وهي مادة هلامية تحتل الغرفة الخلفية للعين. تتمثل الوظيفة الأساسية لخلط الجسم الزجاجي في الحفاظ على شكل كرة العين والحفاظ على أنسجة العين ، مثل العدسة والشبكية ، في مكانها. ....

البروتوكول

تمت الموافقة على جميع البروتوكولات التجريبية من قبل لجنة أخلاقيات الحيوان بجامعة لينكولن وتتماشى مع إرشادات المعاهد الوطنية الأمريكية للصحة لرعاية الحيوانات واستخدامها في الأبحاث وقانون رعاية الحيوان النيوزيلندي (1999). تم تشخيص أغنام بوردرديل عند الولادة¹⁴ وتم الاحتفاظ بها في مزارع أبحاث جامعة لينكولن. تلقت ثلاث نعاج متماثلة الزيجوت (CLN5-^/-) تبلغ من العمر 3 أشهر حقنة IVT واحدة في العين اليسرى ، مع عمل العين اليمنى غير المعالجة كعنصر تحكم داخلي. تمت مقارنة بيانات تخطيط كهربية الشبكية وعلم الأمراض ببيانات التحكم التاريخية الصحية والمتأثرة. كان الناقل الفيروسي المستخدم في هذه الدراسة عبارة عن فيروس مرتبط بالغدي مكمل ذاتيا من النمط الم....

النتائج

تم إثبات فعالية توصيل IVT لناقل العلاج الجيني CLN5 في تخفيف ضعف الشبكية وانحطاطها في الأغنام باستخدام CLN5 NCL من قبل مجموعة البحث¹⁵ هذه. تلقت الأغنام المصابة حقنة IVT واحدة 100 ميكرولتر من CLN5 معبأة في ناقل AAV من النمط المصلي 9 (AAV9) (AAV9. CLN5) في عين واحدة ، مع العين المقابلة بمثابة عنصر تحكم داخلي غير معالج. تم تقييم الرؤية شهريا من العمر عند الحقن (3 أشهر) إلى المرحلة النهائية من المرض (18 شهرا). تم إجراء تحليل ما بعد الوفاة لأنسجة الشبكية على العيون المعالجة وغير المعالجة ، بالإضافة إلى .......

المناقشة

الحقن داخل الجسم الزجاجي هي واحدة من أكثر العمليات الجراحية شيوعا في طب العيون البشري وقد أثبتت فعاليتها في تقديم العلاجات الجينية بوساطة AAV إلى شبكية الأغنام. لقد أثبتنا سابقا فعالية AAV9. قدم العلاج الجيني CLN5 داخل الجسم الزجاجي في تخفيف ضعف الشبكية وانحطاطها في الأغنام باستخدام CLN5 NCL¹⁵. ومن المأمول أن تكون ترجمة هذا الطريق من الإدارة لمرضى NCL من البشر مفيدة أيضا.

بروتوكول حقن IVT صغير الحجم في عين الغنم واضح نسبيا وغير جراحي ، وقابل للتكرار بسهولة ، ويسهل على غ.......

المواد

قائمة المواد المستخدمة في هذه المقالة

الاسم	الشركة	رقم فهرسي	التعليقات
1 مل حقنة أمان منخفضة المساحة الميتة مع إبرة 0.5 بوصة متصلة بشكل دائم	فيشر العلمية ، أوكلاند ، نيوزيلندا	05-561-28	حقنة أمان Covidien Monoject Tuberculin أو أنبوب مماثل
للطرد المركزي الدقيق سعة 1.5 مل	أنابيب الأوتوكلاف Sigma Aldrich	HS4323	للتعقيم قبل الاستخدام
آلة التخدير مع مقعد الغاز والشاشة & nbsp ؛	Hyvet Anesthesia, كرايستشيرش, نيوزيلندا
قطرات العين بالمضادات الحيوية	تيفا فارما المحدودة ، أوكلاند ، نيوزيلندا		الاسم التجاري: Chlorafast (0.5٪ كلورامفينيكول)
BrightMount بالإضافة إلى وسيط تركيب مضاد للبهتان	Abcam ، كامبريدج ، المملكة المتحدة	ab103748
DAPI (4 & prime ؛ ، 6-diamidino-2-phenylindole dihydrochloride)	Sigma Aldrich ، سانت لويس ، ميسوري ، الولايات المتحدة	10236276001
مهدئ	ديازيبامIlium ، Troy Laboratories Pty Ltd ، تاورانجا ، نيوزيلندا		5 مجم / مل
أنابيب القصبة الهوائية	Flexicare Medical Ltd ، ماونتن الرماد ، معيار المملكة المتحدة		، مكبل. الأحجام 7 أو 7.5 أو 8 حسب حجم الأغنام
منظار العين	الرؤوس الطبية المحدودة ، تاورانجا ، نيوزيلندا	KP151 / 14	Nopa Barraquer-Colibri (10 مم)
الستارة الجراحية المصنوعة	من Amtech Medical Ltd ، Whanganui ، نيوزيلندا	DI583	أو ما شابه ذلك   ؛
نصائح التصفية	Interlab ، أوكلاند ، نيوزيلندا		10 و 200 و 1,000 & micro ؛ L
محلول الفورمالديهايد (37٪)	فيشر ساينتفيك ، أوكلاند ، نيوزيلندا	AJA809-2.5PL	اصنع ما يصل إلى 10٪ في الماء المقطر مع 0.9٪ كلوريد الصوديوم
الماعز المضاد للأرانب Alexa Fluor 594	Invitrogen Carlsbad ، CA ، الولايات المتحدة الأمريكية	؛ A-11012	استخدم عند تخفيف 1: 500
مخدر إيزوفلوران	Attane ، باير لصحة ، أوكلاند ، نيوزيلندا
الكيتامين هيدروكلوريد مخدر / مسكن	PhoenixPharm Distributors Ltd ، أوكلاند ، نيوزيلندا		100 مجم / مل
منظار الحنجرة (بيطري)	KaWe Medical ، شفرة	Miller C الدنماركية
إبر   ؛	Capes Medical Ltd ، تاورانجا ، نيوزيلندا	302025	BD تحت الجلد ، أو ما شابه ذلك
Boehringer Ingelheim (NZ) Ltd غير	الستيرويدية المضادة للالتهابات	49402/008	الاسم التجاري: Metacam 20 (20 مجم / مل meloxicam)
ملقط غير مسنن	Capes Medical Ltd ، تاورانجا ، نيوزيلندا	AB864 / 16	أو ما شابه ذلك   ؛
الأسنان hemostat	Capes Medical Ltd, Tauranga, New Zealand	AA150 / 12	أو ما شابه
مصل الماعز العادي	Thermo Fisher Scientific ، كرايستشيرش ، نيوزيلندا	16210072
الأكسجين (الطبي)	BOC Gas ، كرايستشيرش ، نيوزيلندا		اسطوانة D2 ، رمز الغاز 180
محلول ملحي مخزن بالفوسفات   ؛	ثيرمو فيشر العلمي ، كرايستشيرش ، نيوزيلندا	10010023	المعقم والمفلتر
	Capes Medical Ltd ، تاورانجا ، نيوزيلندا	005835	الاسم التجاري: البيتادين (10٪ بوفيدون اليود)
الأرانب المضادة للبقرة البروتين الحمضي الليفي الدبقي (GFAP)	داكو ، جلوستروب ، الدنمارك	Z0334	استخدم عند تخفيف 1: 2،500
النمط المصلي للفيروس المرتبط بالغدة التكميلي ذاتيا 9 ، الذي يحتوي على محفز عمل بيتا الدجاج (CBh) والعوض المحسن بالكودون CLN5	جامعة نورث كارولينا ناقلات كور ، نورث كارولاينا ، الولايات المتحدة الأمريكية.	scAAV9 / CBh-oCLN5opt
كلوريد الصوديوم 0.9٪ محلول IV	Capes Medical Ltd ، تاورانجا ، نيوزيلندا	AHB1322	الاسم التجاري: محلول ملحي   ؛
المضادات الحيوية تحت الجلد	Intervet Schering Plough Animal Health Ltd ، ويلينجتون ، نيوزيلندا		الاسم التجاري: Duplocillin LA (150،000 وحدة دولية / مل من البنسلين البروكايين و 115،000 وحدة دولية / مل البنسلين البنسلين)
مقص منحني حاد حاد جراحي   ؛	الرؤوس الطبية المحدودة ، تاورانجا ، نيوزيلندا	SSSHBLC130
حقنة Terumo Luer Lock	Amtech Medical Ltd ، Whanganui ، نيوزيلندا	SH159 / SH160	محاقن معقمة ؛ 10 مل لرسم الأدوية الحثية ، 20 مل لرسم
مسحوق مطهر Virkon	الملحي EBOS Group Ltd ، كرايستشيرش ، نيوزيلندا	28461115

، مقاس 2من ، أوكلاند ، نيوزيلندا عدم محلول بوفيدون اليود