يتطلب اشتراك JoVE لعرض هذا المحتوى. تسجيل الدخول أو ابدأ نسخة تجريبية مجانية

مقالة منهجية

نموذج زرع قلب الفئران غير المتجانسة باستخدام قلوب المتبرعين بموت الدورة الدموية

1.5K مشاهدة

⸱

DOI:

10.3791/63844

⸱

مايو 18, 2022

 ,  ,  ,  ,  , 
1Division of Cardiothoracic Surgery, Department of Surgery, Virginia Commonwealth University, 2Pauley Heart Center, Virginia Commonwealth University Health System, 3Department of Surgery, McGuire Veterans Administration Medical Center, 4Department of Pharmacotherapy and Outcome Science, School of Pharmacy, Virginia Commonwealth University, 5Division of Cardiology, Department of Internal Medicine, Virginia Commonwealth University

في هذه المقالة

ملخص

هنا ، نصف التحضير والتفاصيل الفنية لزراعة القلب غير المتجانس في الفئران باستخدام قلب متبرع بموت الدورة الدموية.

الملخص

الهدف من هذا البروتوكول هو إنشاء نموذج لزراعة القلب غير المتجانسة للفئران مع التبرع بقلوب المتبرعين بعد موت الدورة الدموية (DCD). هناك نوعان من الإعدادات لهذا البروتوكول: إعداد المتبرع بالقلب وإعداد المستلم. في إعداد المتبرع بالقلب ، يتم تخدير فئران Sprague Dawley وتنبيبها في القصبة الهوائية والتهوية. يتم قنية الشريان السباتي الأيمن لتوصيل الهيبارين والعامل الشللي فيكورونيوم بروميد. تبدأ عملية DCD عن طريق إنهاء التهوية. بعد 20 دقيقة ، يتعرض القلب ويتم تثبيت الشريان الأورطي البعيد عن الفرع العضدي. في غضون 25 دقيقة من إنهاء جهاز التنفس الصناعي ، يتم ترشيح محلول جامعة ويسكونسن (UW) المثلج من خلال القسطرة السباتية لتنظيف القلب. يتم شراء القلب عن طريق تقسيم الشريان الأورطي والشريان الرئوي والأوردة الأجوف والأوردة الرئوية وتخزينها في محلول UW للزرع. في إعداد المتلقي ، يتم تخدير فأر لويس بالأيزوفلوران. يتم إعطاء البوبرينورفين بطيء الإطلاق تحت الجلد لتسهيل التعافي السلس بعد الجراحة. من خلال شق البطن في خط الوسط ، يتم عزل الشريان الأورطي تحت الكلوي والوريد الأجوف السفلي وتثبيتها بمشبك وعائي غير رضحي. يتم خياطة الشريان الأورطي القلبي والشريان الرئوي للمتبرع بالشريان الأورطي البطني والوريد الأجوف المتلقي ، على التوالي ، مع تشغيل 8-0 البرولين. تتم إزالة المشبك الوعائي لإعادة إنفاذ القلب. جدار البطن مغلق ويتم استرداد الفئران. بعد فترة زمنية محددة (24 ساعة إلى أسبوعين) ، يتم تخدير الجرذ المتلقي ، ويتعرض القلب المزروع ، ويتم إدخال قسطرة طرف بالون في البطين الأيسر عبر القمة لتسجيل الضغط المتطور و dP / dt باستخدام نظام الحصول على البيانات. يتم جمع أنسجة القلب لعلم الأنسجة أو المناعة أو التحليل الجزيئي. سيسمح نموذج زراعة قلب الفئران المتبرع ب DCD بمزيد من الدراسات حول مناهج حماية القلب لتحسين نتائج زراعة القلب من المتبرعين ب DCD.

المقدمة

يعد النموذج الحيواني الصغير لزراعة القلب (HTx) أمرا بالغ الأهمية لإجراء البحوث التي تدرس الحالات الفيزيولوجية المرضية التي تؤثر على القلب المزروع. سمح HTx غير المتجانس في نموذج الفئران ، كما وصفه أوتو وليندسي ، للباحثين بدراسة التغيرات الفيزيولوجية المرضية التي لوحظت في ظروف نقص التروية وإعادة التروية1. تقليديا ، تم شراء قلوب المتبرعين للزرع من المتبرعين بالقلب النابض ، والمعروف أيضا باسم التبرع بعد موت الدماغ (DBD). ومع ذلك ، كانت هناك زيادة غير متناسبة في عدد المرضى الذين يحتاجون إلى HTx2. في الآونة الأخيرة ، تم استخدام قلوب المتبرعين بموت الدورة الدموية ، والمعروفة أيضا باسم المتبرعين بالتبرع بعد الموت الدوري (DCD) ، للزرع في البيئاتالتجريبية 3. يتمثل الفرق الرئيسي بين قلوب المتبرعين DBD و DCD في أنه في الأخير ، تتعرض القلوب لفترات متفاوتة من نقص التروية ، مما يحول دون استخدامها في ممارسة HTx الروتينية.

الأدبيات الموصوفة سابقا حول الفئران غير المتجانسة HTx استخدمت فقط ظروف المتبرع بالقلبالنابض 4،5،6. تتطلب زراعة القلب DCD غير المتجانسة تعديلات طفيفة ، والتي بدونها لن ينبض القلب المزروع7. يهدف هذا البروتوكول إلى مشاركة القراء تقنية محسنة ل DCD HTx في الفئران. نقص تروية عضلة القلب العالمي فطري في التبرع بأعضاء DCD. تمت دراسة إعداد تجريبي يحاكي نقص تروية عضلة القلب العالمي فقط في إعداد خارج الجسم الحي 5. قد لا تنطبق نتائج الدراسات خارج الجسم الحي على عمل DCD HTx نظرا لوجود اختلافات كبيرة بين نماذج نقص التروية العالمية في الجسم الحي (DCD) ونماذج نقص التروية العالميةخارج الجسم الحي 5. قد لا تكون النتائج ، أو عدم وجودها ، من التدخلات للتخفيف من نقص تروية عضلة القلب المعاد تروية في نماذج خارج الجسم الحي قابلة للتكرار في نموذج DCD HTx. وبالتالي ، من الضروري محاكاة DCD HTx البشري في نموذج حيواني ، يمكن أن يكون للنتائج التي يمكن أن يكون لها قيمة انتقالية أعلى. سيسمح نموذج DCD HTx الموصوف هنا للباحث بمحاكاة DCD HTx السريري عن كثب وتوفير الفرصة للتخفيف من إصابة إعادة التروية من خلال التدخلات في كل من قلب المتبرع والمتلقي. عند تعافي الجرذ المتلقي ، يمكن دراسة وظيفة القلب المزروع ، وعلم الأنسجة المرضية ، والمناعة على فترات متفاوتة من وقت الزرع.

الوصول مقيد. يرجى تسجيل الدخول أو بدء فترة تجريبية لعرض هذا المحتوى.

البروتوكول

أجريت جميع التجارب على وفقا للمبادئ التوجيهية المؤسسية ودليل رعاية واستخدام المختبر ، الذي نشرته المعاهد الوطنية للصحة (منشور المعاهد الوطنية للصحة رقم 86-23 ، تمت مراجعته عام 2011)8. تمت الموافقة على الإجراءات التالية من قبل اللجنة المؤسسية لرعاية واستخدامه بجامعة فرجينيا كومنولث. تم تنفيذ جميع الإجراءات وفقا لإرشادات OSHA (إدارة السلامة والصحة المهنية) والتقنيات المعقمة الموصىبها 9. تم إيواء فئران Sprague Dawley تحت رطوبة خاضعة للرقابة عند درجة حرارة 23 درجة مئوية و 12 ساعة من دورات الظلام / الضوء.

1. إعداد المختبر

ملاحظة: خصص مساحة مخصصة لإجراء جراحات البقاء على قيد الحياة المعقمة للقوارض باستخدام مجهر تشغيلي. الحفاظ على درجة الحرارة المحيطة لغرفة العمليات دافئة ؛ يعد استخدام وسادات الاحترار للجراحة وعملية التعافي أمرا ضروريا للحفاظ على درجة حرارة جسم الفئران المتلقية.

  1. احتفظ بالإمدادات الأساسية (جدول المواد) ، بما في ذلك المحاقن ، والمحلول الملحي العادي 0.9٪ (كلوريد الصوديوم) ، وعوامل التخدير (الأيزوفلوران ، والكيتامين / الزيلازين) ، والهيبارين ، وبروميد الفيكورونيوم ، ومحلول الحفظ ، ودلو الثلج ، وعامل المسكن (البوبرينورفين البطيء الإطلاق) مخزنة ومتاحة بسهولة.
  2. ضع بدقة أدوات الجراحة المجهرية (الشكل 1 أ ، ب) في المجال الجراحي. احتفظ بمجموعة أدوات التعقيم السريع متاحة بسهولة لتنظيف الأدوات الأساسية الملوثة على الفور.

2. في الجسم الحي إعداد المتبرع DCD للفئران

  1. تخدير الجرذ للتنبيب الرغامي والقنية السباتية. تخدير فأر Sprague Dawley (8-12 أسبوعا) في غرفة الأيزوفلوران 3٪ ، ثم تخديره بالكيتامين / الزيلازين (100/10 مجم / كجم ، في العضل).
  2. لفضح القصبة الهوائية والشريان السباتي الأيمن ، ضع فأر مخدر بالكامل ضعيفا ونظف الجزء الأمامي من الرقبة والصدر بالكحول ومحلول بوفيدون. قم بعمل شق على شكل حرف V مع ذروة V بالقرب من فك الفئران في خط الوسط ويشير كل طرف من أطراف V إلى الكتف المقابل. افصل الجلد عن الأنسجة تحت الجلد واقلب الجلد على الصدر لكشف عضلات حزام الرقبة (الشكل 2 أ).
    1. قم بتنبيب الجرذ عن طريق فصل عضلات حزام خط الوسط (القص القصي والقص الورمي) بالملقط لفضح القصبة الهوائية (الشكل 2 ب). أطوق القصبة الهوائية بحرير 5-0 وافتحها عن طريق تقسيم الأنسجة العضلية جزئيا بين حلقات القصبة الهوائية.
    2. أدخل 14 جم من الأوعية الدموية في القصبة الهوائية وقم بتثبيتها بالحرير 5-0 (الشكل 2 ج). قم بتوصيل الأوعية الدموية بجهاز التنفس الصناعي (1 مل / كجم عند 90 نفسا / دقيقة).
    3. بالنسبة لقنية الشريان السباتي الأيمن ، حدد الشريان السباتي المشترك (يقع موازيا للجانب الأيمن من القصبة الهوائية وعليها مباشرة) ، وعزله بعناية إلى طول الرقبة بالكامل ، واربط الطرف البعيد (الجمجمة) بحرير 5-0.
    4. قم بتوصيل hemostat بالطرف الحر من ربطة العنق للجر لتسهيل قنية الشريان السباتي.
    5. قم بتعبئة الجانب القريب من الشريان السباتي (باتجاه قاعدة الرقبة) وتثبيته باستخدام تمرق الأوعية الدموية. تحت مجهر التشغيل ، استخدم مقص القزحية الدقيقة لفتح الشريان السباتي عن طريق تقسيمه جزئيا إلى الأمام على الطرف البعيد. قم بتقنيد الشريان السباتي بوعائية 22 جم وثبته برباط حريري 5-0 (الشكل 2 د).
    6. قم بتوصيل محول محبس التدفق ثلاثي الاتجاهات بالأوعية الدموية لسهولة توصيل الأدوية أو محلول شلل القلب إلى الشريان السباتي ، وقم بتوصيله بمستشعر الضغط لمراقبة معدل ضربات القلب والضغط أثناء عملية DCD (الشكل 2 د). يجب ملاحظة ارتجاع الدم النابض عند تحرير المشبك الوعائي القريب.
    7. بمجرد تأمينه، قم بتوصيل قسطرة الشريان السباتي بمستشعر الضغط، وقم بتوصيل الهيبارين (1,000 وحدة / كجم) وبروميد الفيكورونيوم (4 ملغم/كجم).
    8. بدء عملية DCD: دع بروميد الفيكورونيوم يدور لمدة 1 دقيقة. راقب أي علامات على ضائقة ، وقم بتخدير إضافي إذا لزم الأمر. أوقف جهاز التنفس الصناعي (نقص الأكسجة / نقص التروية) لبدء عملية DCD. لاحظ عدم وجود نشاط تنفسي.
      ملاحظة: يبدأ الوقت الإقفاري DCD من وقت سحب دعامة جهاز التنفس الصناعي. في الفئران ، تم تحديد 25 دقيقة من نقص التروية على أنها أقصى مدة زمنية تؤدي إلى إصابة كبيرة ولكن قابلة للعكس7. ستظهر تتبع الضغط أنه من لحظة انقطاع دعم التهوية عند ~ 3.5 دقيقة ، ينخفض الضغط الجهازي إلى أقل من 50 مم زئبق ، وهو ضغط يعتبر غير كاف لاختراق القلب بشكل فعال (الشكل 3).
  3. شراء قلب المتبرع: خصص ~ 4-7 دقائق لشراء القلب وإدارة شلل القلب البارد. لتحقيق وقت نقص التروية المستهدف وهو 25 دقيقة ، ابدأ شراء القلب بعد 18-21 دقيقة بعد إنهاء دعم التنفس الصناعي.
    ملاحظة: تعديل مدة وقت الاشتراء استنادا إلى خبرة الشخص الذي يقوم بعملية الاشتراء.
    1. قسم جدار البطن على طول الهامش الساحلي بدءا من مستوى الخنجري ، ثم قسم القفص الصدري الموازي لعظم القص على كلا الجانبين حتى الترقوة لإجراء استئصال الصدر الأمامي الثنائي (الشكل 4 أ). استخدم مجهر التشغيل تحت تكبير منخفض (5x) لتسهيل هذه الخطوة.
    2. اقلب جدار الصدر المقسم الملقي على الترقوة باتجاه الرأس وثبته بمرق (الشكل 4 ب).
    3. قم بتطويق الوريد الأجوف السفلي (IVC) بحرير 5-0 ، ثم قسمه جزئيا بمقص دقيق بالقرب من قبة الكبد (الشكل 4 ج). يسمح IVC المفتوح جزئيا بخروج شلل القلب لأنه يمتد إلى الجانب الأيمن من القلب.
    4. قم بتشريح المستوى بين الشريان الأورطي الصاعد والشريان الرئوي (PA) ، ثم اعزل الجذع الرئوي عن طريق الجيوب الأنفية المستعرضة باستخدام ملقط منحني غير حاد إلى تشعبه. قسم الشريان الرئوي بعناية بالقرب من نقطة التشعب باستخدام مقص صغير (الشكل 4 ج).
    5. تطويق قوس الأبهر بتشريح حاد. هذا للسماح بالوصول إلى مشبك وعائي صغير بزاوية قائمة ليتم وضعه عبر قوس الأبهر البعيد إلى أصل الشريان غير المسمى.
    6. عند علامة 25 دقيقة من إنهاء جهاز التنفس الصناعي ، قم بتثبيت قوس الأبهر وتوصيل شلل القلب يدويا (10 مل من محلول جامعة ويسكونسن عند 4 درجات مئوية ، أكثر من 2-3 دقائق) من خلال القسطرة السباتية (الشكل 4 د).
    7. باستخدام مقص دقيق ، قسم الشريان الأورطي الصاعد بعيدا قبل قوس الأبهر (الشكل 4E).
    8. اربط IVC باتجاه القلب بحرير 5-0 وقسمه بعيدا.
    9. اربط الأوردة الرئوية والوريد الأجوف العلوي (SVCs) مع 5-0 حرير (الشكل 4F). نظرا لأن هذه الأربطة تحتوي على كمية كبيرة من الأنسجة ، يفضل ربطة عنق اليد على ربطة عنق الأداة. اسحب القلب برفق لأسفل باتجاه البطن باستخدام مسحة من القطن لتسهيل ربط الوريد الرئوي دون تجميع الزوائد الأذينية في ربطة العنق.
    10. قسم الأوردة الرئوية بمقص القزحية الدقيقة ، واجمع القلب ، وضعه في محلول ملحي طبيعي بارد مثلج (الشكل 4G).

3. في الجسم الحي زرع القلب غير المتجانس DCD الفئران

  1. تخدير المتلقي في غرفة الأيزوفلوران (تحريض 3٪) ، وقص الشعر على البطن ، وتنظيف المنطقة ببوفيدون والكحول. لا تتخثر المتلقي. سيؤدي ذلك إلى نزيف مفرط من مفاغرة وفشل الكسب غير المشروع.
  2. ضع الفئران على وسادة تدفئة. ضع مسبارا بين الجرذ ووسادة التدفئة لمراقبة درجة الحرارة. حافظ على درجة حرارة جسم الفئران عند 38 درجة مئوية. ضع أنبوبين للطرد المركزي معقما مسبقا سعة 50 مل مملوءين بالمحلول الملحي الدافئ أو الخرز الزجاجي على جانبي بطن الفئران لتسهيل الحفاظ على دفء الفئران.
  3. على الرغم من الخطوات المذكورة أعلاه ، إذا انخفضت درجة حرارة الجسم إلى أقل من 37.5 درجة مئوية ، فقم بزيادة درجة حرارة الغرفة (RT) ، وقم بتغطية جميع المناطق المكشوفة من الجسم باستخدام رقائق الألومنيوم المعقمة لترك مساحة كافية لإجراء جراحة البطن.
  4. تحفيز التخدير العام مع 3٪ الأيزوفلوران عبر مخروط الأنف وانخفض تدريجيا إلى 2٪.
  5. افتح البطن على طول الخط (الشكل 5 أ) وكشف مساحة العمل عن طريق وضع ضاعات جدار البطن (الشكل 5 ب).
  6. باستخدام أدوات تطبيق ذات أطراف قطنية معقمة ، حرك القولون الموسع أو الممتلئ وضعه في شاش رطب دافئ على يسار المشغل ، مع الري بشكل دوري بمحلول ملحي دافئ (38 درجة مئوية) (الشكل 5 ج). يوفر تحريك القولون جانبا مساحة أكبر لقلوب DCD لأنها شديدة الصلابة وتتطلب مساحة إضافية لاستيعابها في البطن.
  7. افتح خلف الصفاق في خط الوسط مع تشريح حاد باستخدام مسحات من القطن. كشف الشريان الأورطي تحت الكلوي و IVC.
  8. باستخدام مشبك وعائي متعدد الزوايا للأطفال غير الرضحي ، قم بعزل 3-5 مم من الشريان الأورطي تحت الكلوي و IVC للمفاغرة (الشكل 5 د).
  9. أدخل الشريان الأورطي بإبرة 30 جم مثبتة على حقنة 1 سم3 مملوءة بمحلول ملحي عادي ممزوج ب 100 وحدة من الهيبارين. اغسل 0.2-0.3 مل من المحلول (الشكل 5E). ربت على المحلول الزائد باستخدام قضيب طرف القطن المعقم ، حيث قد يتم امتصاص الهيبارين ويسبب نزيفا من خطوط الخياطة.
  10. باستخدام مقص دقيق ، افتح الشريان الأورطي على طول المحور الطويل ليتناسب مع حجم الشريان الأورطي المتبرع. لا يتم فتح IVC في هذه المرحلة ، ولا تحاول إنشاء مستوى بين IVC والشريان الأورطي. هذا سيؤدي إلى النزيف.
  11. يعد التوجيه الصحيح لقلب المتبرع أثناء مفاغرة أمرا بالغ الأهمية (الشكل 5F). قم بتوجيه قلب المتبرع من أجل مفاغرة بحيث يكون السطح الأمامي للبطين الأيمن مواجها للسقف ، وتشير القمة إلى يمين المشغل ، ويكون الشريان الأورطي المتبرع أقل قليلا من الشريان الرئوي. ينتج عن هذا الاتجاه توتر أقل على مفاغرة الشريان الرئوي.
    1. مفاغرة الأبهر: استخدم مفترة إبرة مدببة وملاقط دقيقة لمفاغرة الأوعية الدموية الدقيقة. أداء مفاغرة مع 8-0 خياطة أحادية الشعيرات على إبرة مدببة مقاس 4 مم محملة على حامل إبرة بطرف 0.3 مم مع إزالة قفل سائق الإبرة ، لمنع صدمة الأنسجة العرضية عند القفل وفتحها.
    2. ضع خياطة البقاء في موضع الساعة 6 على مفاغرة الأبهر. يتم ذلك لتوفير خط خياطة متماثل ومرقئ. بعد ذلك ، ابدأ مفاغرة عند موضع الساعة 12 مع الخارج إلى الداخل على الشريان الأورطي المتبرع ومن الداخل إلى الخارج على الشريان الأورطي المتلقي (الشكل 6 أ ، ب). احتفظ ب 5-7 سم فقط من خياطة العمل واقطع الباقي.
    3. تحرك عكس اتجاه عقارب الساعة، وسافر في مسافات قصيرة باتجاه موضع موضع الساعة 6، ثم أكمل مفاغرة بطريقة عداد الساعة حتى موضع الساعة 12 عن طريق قلب القلب إلى اليسار (الشكل 6ج).
    4. تحقق من وجود أي خط خياطة فضفاض قبل الربط.
      ملاحظة: يجب أن يكون مفاغرة الأمان متماثلا ويجب أن يقترب من الجزء الداخلي للمتبرع والمتلقي دون فجوات.
    5. مفاغرة الشريان الرئوي: حرر الشريان الرئوي من الشريان الأورطي ووجهه من أجل مفاغرة الوريد الوريدي دون التقلبات. جهز حجم دم المتلقي لملء قلب المتبرع وتجنب انخفاض ضغط الدم عن طريق حقن 3-5 مل من محلول ملحي طبيعي تحت الجلد (مؤخرة العنق).
    6. راقب نمط الجهاز التنفسي للفئران وخفض الأيزوفلوران من 2.0٪ إلى 1.5٪ حيث أن مفاغرة الشريان الرئوي على وشك الانتهاء.
    7. افتح رأسية IVC فيما يتعلق بمفاغرة الأبهر باستخدام مقص القزحية الدقيقة (الشكل 6C). استخدم 0.2-0.3 مل من المحلول الملحي لغسل IVC. سيكون هناك عدد قليل من الجلطات الدموية التي شوهدت ؛ اغسلهم بعناية.
    8. على عكس مفاغرة الأبهر ، ابدأ مفاغرة الرئة دون خياطة البقاء. سوف يعيق التعرض. ابدأ من موضع الساعة 12 مع تحريك الإبرة من الخارج إلى الداخل على الشريان الرئوي المتبرع ومن الداخل إلى الخارج على IVC المتلقي. اربط الخيط وأكمل مفاغرة الجدار الخلفي أولا في اتجاه عقارب الساعة.
    9. بمجرد الوصول إلى موضع الساعة 6 ، استمر في الخياطة في اتجاه عقارب الساعة حتى يتم الوصول إلى موضع الساعة 12 ، ثم اربطه بالطرف القصير للخياطة من ربطة العنق السابقة. احرص على عدم انقباض مفاغرة لأن أي تضيق سيحد من التصريف الوريدي من القلب. في المتوسط ، يستغرق إكمال كلا المفاغرة 30 دقيقة أو أقل.
    10. ضع قطعا صغيرة من الإرقاء القابل للامتصاص فوق مفاغرة لاحتواء النزيف من فتحات الإبرة.
    11. قم بفك الأوعية وإضافة المزيد من مرقئ الدم القابل للامتصاص فوق فتحات الإبرة حسب الحاجة (الشكل 6E). يبدأ القلب المزروع في النبض مع الرجفان العرضي قبل أن يستأنف التنفس الإيقاعي. اترك الإرقاء القابل للامتصاص في مكانه لمدة 5 دقائق طالما أن القلب ينبض ولا يوجد نزيف علني.
    12. بمجرد الرضا عن الإرقاء (~ 3-5 دقائق) ، استخدم أدوات تطبيق ذات طرف قطني معقم لإزالة المرقئ الزائد القابل للامتصاص ، والري بالمحلول الملحي ، وإعادة الأمعاء مرة أخرى إلى تجويف البطن (الشكل 6F). ضع الثرب فوق مفاغرة للمساعدة في الإرقاء.
    13. أغلق جدار البطن في طبقتين باستخدام 5-0 أحادي كريل على إبرة قطع 13 مم عن طريق إغلاق linea alba أولا ثم إغلاق الجلد (الشكل 6G ، H).

4. التعافي والمراقبة

  1. عند الانتهاء من إغلاق البطن ، اقلب الجرذ على بطنه على وسادة دافئة للتعافي. استمر في تناول الأيزوفلوران عبر مخروط الأنف بنسبة 1٪ لمدة 5 دقائق ، ثم توقف.
  2. بمجرد أن يصبح التنفس التلقائي منتظما ، انقل الجرذ إلى قفص استرداد نظيف وضعه على وسادة دافئة لمواصلة عملية الشفاء. ستؤدي الحركات المفاجئة للفئران إلى خطر النزيف أو التواء في مفاغرة. يسهل المسكن طويل المفعول الذي يتم إعطاؤه قبل بدء الجراحة بشكل كبير عملية الشفاء السلسة.

5. شراء وزرع القلب النابض للتحكم

  1. شراء قلوب المتبرع بالقلب النابض (CBD) كعنصر تحكم لتقييم جودة قلب المتبرع في حالة عدم وجود نقص التروية.
    ملاحظة: يخضع المتبرع باتفاقية التنوع البيولوجي لجميع الخطوات التي تم وصفها لقلب DCD ، باستثناء إنهاء دعم التنفس الصناعي. يتم شراء قلوب CBD أثناء النبض ودعمها بالكامل على جهاز التنفس الصناعي. يؤدي إعطاء شلل القلب إلى إيقاف القلب ، ويتم الانتهاء من الشراء والزرع بنفس الطريقة الموضحة لقلوب DCD.

6. تقييم وظائف القلب المزروعة:

  1. في فترة زمنية محددة مسبقا من وقت زراعة القلب (24 ساعة إلى 14 يوما) ، قم بتخدير الجرذ المتلقي (3٪ استنشاق إيزوفلوران) ، وضعه على وسادة دافئة ، وافتح شق البطن لكشف القلب المزروع.
  2. ضع قسطرة ذات طرف بالون عبر قمة البطين الأيسر لقياس الضغط المتطور (DP) ، والحد الأقصى + dP / dt ، والحد الأدنى −dP / dt.
    ملاحظة: هنا تم استخدام محطة PowerLab كنظام للحصول على البيانات لتسجيلات ضغط الدم.

الوصول مقيد. يرجى تسجيل الدخول أو بدء فترة تجريبية لعرض هذا المحتوى.

النتائج

بعد 24 ساعة إلى 14 يوما من زراعة القلب غير المتجانس ، يمكن إعادة فتح البطن ، ويمكن تعريض القلب لقياس الضغط الذي يحدثه البطين الأيسر. يتم إدخال قسطرة ذات طرف بالون في البطين الأيسر لقلب DCD (أو CBD) لقياس الضغط المتطور (DP) ، والحد الأقصى + dP / dt ، والحد الأدنى −dP / dt. يوضح الشكل 7 مثالا على DP المتوقع و + dP / dt و −dP / dt لقلب DCD مقارنة بقلب CBD بعد 24 ساعة من الزرع. بالمقارنة مع قلوب اتفاقية التنوع البيولوجي ، انخفض DP لقلوب DCD بشكل كبير ، وساءت + dP / dt (max) و −dP / dt (min).

...

الوصول مقيد. يرجى تسجيل الدخول أو بدء فترة تجريبية لعرض هذا المحتوى.

المناقشة

بالنسبة لفأر DCD غير متجانس ناجح HTx ، من الأهمية بمكان إنشاء إعداد دقيق ومدروس للتجربة. يأخذ الإعداد التفصيلي في الاعتبار عدة عوامل ، بما في ذلك 1) اختيار الفئران الصغيرة كمتبرعين DCD ، 2) استخدام الأيزوفلوران كعامل تخدير مفضل ، 3) التوصيل الفعال لشلل القلب إلى قلب المتبرع ، 4) تخزين قلب المتبرع في محلول مثلج ، 5) الحد من تشريح البطن دون المساس بالأوعية القطنية لتعريض الشريان الأورطي تحت الكلوي والوريد الأجوف فقط ، 6) الحفاظ على درجة حرارة جسم المتلقي أثناء الجراحة وبعدها ، 7) استخدام ...

الوصول مقيد. يرجى تسجيل الدخول أو بدء فترة تجريبية لعرض هذا المحتوى.

الإفصاحات

مؤلفو هذه المخطوطة ليس لديهم تضارب في المصالح للإفصاح عنهم.

شكر وتقدير

تم دعم هذا العمل من خلال منحة مراجعة الجدارة الممنوحة للدكتور محمد كودر (1I01 BX003859) وأموال من مركز بولي للقلب لمحمد كودر والدكتور ستيفانو تولدو.

الوصول مقيد. يرجى تسجيل الدخول أو بدء فترة تجريبية لعرض هذا المحتوى.

المواد

قائمة المواد المستخدمة في هذه المقالة
الاسمالشركةرقم فهرسيالتعليقات
5-0 خياطة نايلون خيوط بولي أميد أحاديةAros الجراحيةSP17A05N-45
5-0 خياطة الحريرالتخصصات الجراحيةSP116
8-0 خياطة أحادية الشعيراتAros الجراحيةT06A08N14-13
الأوتوكلافSterisAmsco Lab 250
BD حقنة الأنسولين بإبرة قابلة للفصل 1 مل محاقنفيشر العلمية14-820-28
حقنة BD مع أطراف Luer-Lok (بدون إبرة) 10 مل محاقنفيشر Scientific14-823-16E
حل التخزين البارد بجامعة بيلزرجسر تو لايف نورثبروك إلينوي الولايات المتحدة الأمريكيةأدينوزين 1.34 جم / لتر ، ألوبيورينول 0.136 جم / لتر ، جلوتاثيون 0.922 جم / لتر ، حمض اللاكتوبيونيك (مثل اللاكتون) 35.83 جم / لتر ، كبريتات المغنيسيوم سباعي الهيدرات 1.23 جم / لتر ، خماسي الكسر 50 جم / لتر ، هيدروكسيد البوتاسيوم 5.61 جم / لتر ، فوسفات البوتاسيوم أحادي القاعدة 3.4 جم / لتر ، رافينوز بنتاهيدرات 17.83 جم / لتر
بوبرينورفين SR LabZoopharm LLC
Debakey المشبك الوعائي متعدد الزوايا للأطفالAesculapF341T
Exel International Disposable Safelet IV القسطرة 14 جمفيشر Scientific14-841-10
Exel International Disposable Safelet IV قسطرة 22 جرامفيشر ساينتفيك14-841-20
قسطرة فوغارتي مقاس 4FEdwands Lifesciences120404F
ملقط بأطراف منحنيةجراحية دقيقة و شركة Scientific Instruments CorporationASSI.228
مضخة تسخين GaymarBraintree Scientific ، Braintree ، MA ، الولايات المتحدة الأمريكيةTP700
Germinator-500Braintree Scientific
Heparin Sodium Injection ، USP 1,000 U / mLPfizerNDC 0069-0137-01
مقص دقيق من قزحية مع أطراف مستقيمةدقيقة & شركة Scientific InstrumentsCorporation ASSI.5253
Isoflurane USPPatterson VeterinaryNDC 14043070406
كيتامين حمض الهيدروكلوريك 100 مجم / ملهنري شاينNDC 6745710810
ليدوكائين هيدروكلوريد 2٪أسبن بيطري07-892-4325
ماكيسون الطبية العامة 6IN Q-TIPS 2STER WOOD 100 / PACKفيشر NC0650323 العلميمعقم أدوات تطبيق طرف القطن
مقص دقيق ، زاوية قائمة وأطراف منحنيةبرينتري ScientificSC-MS 154
جراحي دقيق وجراحي شركة الأدوات العلميةASSI. BSL158مع إزالة آلية القفل
الملحيالعادي باكستر
PowerLabAD Instruments ، دنفر ، نظامالحصول على البيانات
الصوديوم / حمض الهيدروكلوريك ضبطالمحلول على درجة الحموضة 7.4
ذكور فئرانDawley ، 8 & ndash ؛ 16 أسبوعا من العمر ، < 400 جرام في الوزن
مجهر جراحيليكاموديل M525 F40
جراحيإيثيكونقابل للامتصاص hemostat
مسبار درجة الحرارة ثيرما مقاوم للماء من النوع T عالي الدقة الحرارية مترThermoworksTHS-232-107
ملاقط بنقطة عالية الدقةExcelta17-456-109
Vecuronium broomidePHR1627 مخفف سيجما ألدريتشفي PBS ل 100 مجم / مل
VenteliteHarvard Apparatus ، هوليستون ، ماساتشوستس ، الولايات المتحدة الأمريكية
زيلازين 100 مجم / ملPivetal AnasedNDC 04606675002
جراحية حامل إبرة إمدادات التسريب محطة هيدروكسيد Sprague

المراجع

  1. Ono, K., Lindsey, E. S. Improved technique of heart transplantation in rats. Journal of Thoracic and Cardiovascular Surgery. 57 (2), 225-229 (1969).
  2. Colvin, M., et al. OPTN/SRTR 2019 annual data report: Heart. American Journal of Transplantation. 21, Supplement 2 356-440 (2021).
  3. Smith, D. E., et al. Early experience with donation after circulatory death heart transplantation using normothermic regional perfusion in the United States. Journal of Thoracic and Cardiovascular Surgery. (21), 01316-01317 (2021).
  4. Lesnefsky, E. J., Chen, Q., Tandler, B., Hoppel, C. L. Mitochondrial dysfunction and myocardial ischemia-reperfusion: Implications for novel therapies. Annual Review of Pharmacology and Toxicology. 57, 535-565 (2017).
  5. Quader, M., et al. The commonalities and differences in mitochondrial dysfunction between ex vivo and in vivo myocardial global ischemia rat heart models: Implications for donation after circulatory death research. Frontiers in Physiology. 11, 681(2020).
  6. Wyss, R. K., et al. Mitochondrial integrity during early reperfusion in an isolated rat heart model of donation after circulatory death-consequences of ischemic duration. Journal of Heart and Lung Transplantation. 38 (6), 647-657 (2019).
  7. Quader, M., et al. Refining murine heterotopic heart transplantation: A model to study ischemia and reperfusion injury in donation after circulatory death hearts. Animal Models and Experimental Medicine. 4 (3), 283-296 (2021).
  8. National Research Council. Guide for the Care and Use of Laboratory Animals. Eighth Edition. , The National Academies Press. Washington (NIH Publication, Rockville MD. 86(2011).
  9. Jagger, J., Detmer, D. E., Cohen, M. L., Scarr, P. R., Pearson, R. D. Reducing blood and body fluid exposures among clinical laboratory workers. Meeting the OSHA standards. Clinical Laboratory Management Review. 6 (5), 415-417 (1992).
  10. Abbott, C. P., Lindsey, E. S., Creech, O., Dewitt, C. W. A technique for heart transplantation in the rat. Archives of Surgery. 89, 645-652 (1964).
  11. Ruzza, A., et al. Heterotopic heart transplantation in rats: improved anesthetic and surgical technique. Transplantation Proceedings. 42 (9), 3828-3832 (2010).
  12. Shan, J., et al. A modified technique for heterotopic heart transplantation in rats. Journal of Surgical Research. 164 (1), 155-161 (2010).
  13. Wang, D., Opelz, G., Terness, P. A simplified technique for heart transplantation in rats: Abdominal vessel branch-sparing and modified venotomy. Microsurgery. 26 (6), 470-472 (2006).
  14. Yellon, D. M., Hausenloy, D. J. Myocardial reperfusion injury. New England Journal of Medicine. 357 (11), 1121-1135 (2007).
  15. Quader, M., Mezzaroma, E., Wickramaratne, N., Toldo, S. Improving circulatory death donor heart function: A novel approach. Journal of Thoracic and Cardiovascular Surgery Techniques. 9, 89-92 (2021).

الوصول مقيد. يرجى تسجيل الدخول أو بدء فترة تجريبية لعرض هذا المحتوى.

إعادة الطباعة والأذونات

الوسوم

زراعة غير متجانسة الموقعنموذج قلب DCDمحلول جامعة ويسكونسنمشبك وعائيتروية القلبقسطرة ذات طرف بالونينسيج القلبتحليل جزيئي

تم نشر هذه المقالة

الفيديو قريباً

تواصل معنا
أوصِ به للمكتبة

الخصوصية

شروط الاستخدام

السياسات

حقوق الطبع والنشر © 2026 MyJoVE Corporation. جميع الحقوق محفوظة.